Name: 2-Foton Mikroskop kullanarak Fare Thymus in situ Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-25T19:52:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: Keşfedin fare timus dokusunda 2-foton mikroskopi ile hücre göçünü görüntüleme yöntemini. Bu teknik, T hücre gelişimi ve seçilim mekanizmalarını in vivo çalışmak için değerli bir protokol sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz, teknik yardım için Matt Paul ve Jimmy Wu teşekkür ederim.

Evlatlık Transferi Yenidoğanlarda kemik iliği 50-100ul 1:1 nihai bir donör-to-host oranı ile, yaşamın ilk 3-7 gün boyunca 2-4 kez kullanarak bir insülin enjektörü ile enjekte edilir. Sternum ve kaburga kafesinin altında bir enjeksiyon yerinde, ancak bağırsak ve mide üzerinde yöneltin. Ponksiyon diyafram dikkatli periton, yeteri kadar nüfuz iğne takın. Bazı kemik iliği enjeksiyonu sırasında kaybolan için nadir değildir. Cilt, daha sonra iğne yavaşça kaldırarak, genişletmek ve izin gibi enjekte olarak yavru kavrama gevşeme kaybını azaltmak. Thymus, diseksiyonu Orta hat üzerinden bir kesi yapmak ve göğüs kafesi ortaya çıkarmak için cildi kesmek veya yırtılma. Sternum üzerinde tutun ve periton ve diyafram kesti. Göğüs boşluğu ortaya çıkarmak için göğüs kafesi kenarlarına kadar kesin. Timus, kalp üstünde yatıyor. Şimdiye kadar timus yapısını korumak için, timus teşrih doku çevresindeki tutun. Diseksiyonu sırasında kuruma onu tutmak için PBS ile timus durulayın. Timik kapsül yüzeyinde hafifçe uzak aşırı doku tease ve iki lob iki eşit parçaya böler. Görüntüleme için Doku Hazırlama Hayır bir kare lamel tutkal timus veteriner doku yapıştırıcısı kullanın. Pipetteman yapıştırıcı mikrolitrelik bir kısmını koymak için kullanın. Timus yaklaşık uzunluğu ve genişliği tutkal sürün. Sabit lamel karşı timus ve yerine sürükleyin. İki-Foton Görüntüleme Doku,% 95 oksijen ve% 5 karbon dioksit ile perfüze ve 37 ısındı fenol kırmızısı ° C olmadan DMEM batmış İki foton uyarma DEVRESEL_ÖDEME dedektörleri kullanarak Spectra-Fizik Maitai 900nm için ayarlanmış lazer, ve CFP, GFP, YFP ve Texas Red emisyon ışık ayrıldı, bir 495, 515, 560 dikroik aynalar ve toplanan kullanılarak elde edilmiştir.

<ol><li>Kyewski, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seeding+of+thymic+microenvironments+defined+by+distinct+thymocyte-stromal+cell+interactions+is+developmentally+controlled%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled.</a> J Exp Med. 166, 520-538 (1987).</li>
<li>Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymic+microenvironments+for+T+cell+differentiation+and+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection.</a> Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).</li>
<li>Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+Migration+of+Positively+Selected+Thymocytes+Visualized+in+Real+Time%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Timus İki foton görüntüleme, yaşam, sağlam organları etkileşimleri ve timus içinde seçim olayların altında yatan göçler incelemek için bize sağlar.

2-foton mikroskop kullanarak fare thymus in situ görüntüleme

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

İki foton Mikroskobu (TPM) timus derinliklerine görüntü sağlar ve timosit gelişimi için önemli olan olayları belgelemek. Timositleri bir kalabalığın içinde bireylerin göç takip etmek, biz timositleri yüzde birinden daha az yayg ifade floresan protein transgenik bir donörden elde edilen yenidoğan kimeralar üretir. Bu kısmi hematopoetik kimeralar oluşturmak için, yenidoğan alıcılar yaş 3-7 gün arasında kemik iliği ile enjekte edilir. 4-6 hafta sonra, fare kurban ve timus dikkatle diseke ve görüntülü olacak doku mimarisi korunarak bissected. Timus TPM tarafından ex vivo görüntüleme için hazırlık lamel üzerine yapıştırılır. Görüntüleme sırasında timus,% 95 oksijen ve% 5 karbon dioksit ile perfüze ve 37 ısındı fenol kırmızısı ° C olmadan DMEM tutulur Bu yaklaşımı kullanarak, biz, farklı T hücre repertuarının üretimi için gerekli olan olayları incelemek.

Yenidoğan kimeralar üretimi yanı sıra 2-Foton Mikroskopi diseksiyonu ve ex vivo görüntüleme için timus hazırlanması için adım adım talimatlar sunuyoruz.

2-Foton Mikroskop kullanarak Fare Thymus in situ Görüntüleme

İki foton mikroskobisi (TPM), timusun derinliklerini görüntülememize ve timosit gelişimi için önemli olan olayları belgelememize olanak tanır. ...'yı takip etmek için

İki foton görüntüleme, tek bir hücrenin çevresiyle etkileşime girerken gerçekleştirdiği migrasyonu takip etmemize olanak tanıdığı için immünoloji için faydalıdır. Timik bölgedeki migrasyonu takip ederek ve iki foton mikroskobisi kullanarak, pozitif ve negatif seleksiyon mekanizmalarını karakterize edebiliriz.Merhaba, ben California Üniversitesi Berkeley'deki Dr. Ellen Roby'nin laboratuvarından Ina Lottie. Ben de yine Ellen Roby'nin laboratuvarından Paul Herzmark. Bugün size timus dokusunun in situ görüntülemesini nasıl yaptığımızı göstereceğiz ve ben de timusu görüntülemek için iki fotonlu mikroskobumuzu nasıl kullandığımızı anlatacağım.Şimdi size iki foton görüntülemeye kadar olan adımları göstereceğim. Bu süreç; kemik iliğinden hematopoetik kök hücrelerin izolasyonu, kemik iliği hücrelerinin yenidoğanlara adaptif transferi, timusun diseksiyonu ve ikiye bölünmesi ile dokunun iki foton lazer tarama mikroskopisi ile görüntüleme için hazırlanması prosedürlerini içermektedir. Hadi başlayalım.Timusu görüntüleme için hazırlamadan önce, öncelikle yenidoğan bir fareye kemik iliği hücrelerini adaptif olarak transfer etmeliyiz. Bu kemik iliği hücreleri, GFP'yi yaygın olarak eksprese eden tr

in-situ-imaging-of-the-mouse-thymus-using-2-photon-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

İki foton görüntüleme ve bir bağışıklık yanıtı 1 sırasında bazal koşullar altında lenf nodu içinde lenfosit motilite ve hücresel etkileşimleri ortaya çıkardı. Burada, T hücreleri, lenf düğümleri izolasyon ve görüntüleme motilite CD4 + T hücreleri eksplante lenf nodu evlatlık transferi göstermektedir.

Farelerde Periferik lenf nodu diseksiyonu ve 2-Foton Görüntüleme

Biz sürekli fare mikroglia görselleştirme ve dolaşımdaki monositler için bir yöntem...

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo</emNöro-inflamasyon Modelleri murin mikroglia> Görüntüleme

Biz roman laboratuar araçları ve timus intravital görüntü elde etmek için protokoller geliştirdik. Bizim tekniği T hücre gelişimi oluşur timus içinde "nişler" belirlenmesinde yardımcı olacaktır.

2-Foton Mikroskopi kullanarak Fare Thymus intravital Görüntüleme

Canlı hayvanda hızlandırılmış görüntüleme, sağlam beyindeki yapısal yeniden yapılanma hakkında değerli bilgiler sağlar. Burada, canlı fare korteksindeki floresan etiketli sinaptik yapıların iki foton mikroskobu ile transkraniyal görüntülenmesine izin veren inceltilmiş bir kafatası preparatını tanıtıyoruz.

İki-Foton<em&gt; In vivo</em&gt; Bir inceltilmiş-kafatası Hazırlık kullanarak Fare Cortex dendritik dikenler Görüntüleme

Lazer fare gözün ön odasında timik implantlar mikroskobu tarama timositleri boyuna intravital gerçek zamanlı izleme göstermek için protokol hedefidir. Kornea saydamlığını ve vaskülarizasyon greft sürekli progenitör hücre işe alım ve olgun T hücreli çıkış kaydetmek için izin verir.

Gerçek zamanlı timositleri mikroskobu tarama lazer göz ön odasında Vivo içinde Takibi

Bu çalışmada, biz iki fotonlu intravital görüntüleme ve hücre etkileşim fare trakeal mukoza grip virüsü ile enfeksiyon sonra çözümlemesi için bir protokol mevcut. Bu iletişim kuralı bağışıklık hücre dynamics sırasında solunum yolu enfeksiyonları eğitim araştırmacılar için ilgili olacaktır.

İki fotonlu Intravital mikroskobu kullanılarak grip virüsü enfeksiyonu sırasında trakeal mukozasında görüntüleme hücre etkileşimi

Morfolojik değişiklikler, aktivasyon sonrasında bağışıklık duyarlı fibroblast hücrelerinde ortaya çıkar ve hücresel işe alma değişiklikleri teşvik. Genetik olarak tasarlanan fibroblast spesifik protein 1 (FSP1)-CRE ile birlikte 2-foton görüntülemenin kullanılması; tdtomato floxed-dur-floxed (TB/TB) fare hattı ve yeşil floresan etiketlenmiş lipopolisakkarid-fitc, biz dermal fibroblastlar ve morfolojik değişiklikler içinde lipopolisakkarid son derece spesifik alımı göstermek olabilir vivo.

İn vivo Iki renkli 2-foton görüntüleme genetiği etiketlenmiş Reporter hücrelerinin cilt içinde

Bu protokol, açık cerrahi riskini önlemek ve kör perkütan enjeksiyonların doğruluğunu artırmak için farelerde intratimik enjeksiyon için oluşturulan girişimsel bir radyoloji prosedürünü tanımlamaktadır.

Farelerde İntratimik Enjeksiyon için Minimal İnvaziv, Doğru ve Etkili Bir Teknik

Burada, nakledilen farenin sol akciğerini iki foton mikroskobu kullanarak intravitalal olarak görüntülemek için bir protokol sunuyoruz. Bu, murin akciğer naklini takiben hücresel dinamikleri ve etkileşimleri gerçek zamanlı olarak incelemek için değerli bir araçtır.

Nakledilen Fare Akciğerinin İntravital İki Foton Mikroskobu

Bu protokol, floresan polistiren mikrosferler kullanılarak in vivo iki foton mikroskopi görüntüleme için optimize edilmiş kronik kraniyal pencere ve mikrovasküler embolizm fare fare modeli için adım adım yaklaşımın ayrıntılı bir açıklamasını içerir.

Floresan Polistiren Mikrosferleri Kullanarak In Vivo İki Foton Mikroskopi İçin Mikrovasküler Embolizm Fare Modeli

Bu çalışma, farelerin ön pençe derisindeki düşük eşikli mekanoreseptör (LTMR) akson terminallerinin görselleştirilmesi için in vivo iki fotonlu görüntüleme yaklaşımını sunmaktadır. Bireysel aksonların tekrarlanan, yüksek çözünürlüklü görüntülemesi kullanılarak, bu yöntem gelişim sırasında ve yetişkinlerde deri duyusal devresinin yapısı ve işlevini incelemek için yeni bir platform sağlar.

Fare Derisindeki Dokunma Duyusal Akson Morfolojisinin İntravital İki Fotonlu Görüntülemesi

Keşfedin fare timus dokusunda 2-foton mikroskopi ile hücre göçünü görüntüleme yöntemini. Bu teknik, T hücre gelişimi ve seçilim mekanizmalarını in vivo çalışmak için değerli bir protokol sunar.

2-Foton Mikroskop kullanarak Fare Thymus in situ Görüntüleme

Daha fazla video keşfet