6 Ekim 2023
Bugüne kadar, tüm ana merkezi sinir sisteminde yerleşik hücre tiplerinin aynı fareden eşzamanlı izolasyonu için protokoller karşılanmamış bir taleptir. Protokol, nöroinflamasyon sırasında karmaşık hücresel ağları araştırmak ve aynı anda gerekli fare sayılarını azaltmak için naif ve deneysel otoimmün ensefalomiyelit farelerinde uygulanabilir bir prosedürü göstermektedir.
Multipl skleroz gibi otoimmün hastalıklarda moleküler ve hücresel mekanizmaları araştırmak için tekrarlanabilir ve sofistike hücre izolasyon protokollerinin oluşturulması karşılanmamış bir ihtiyaçtır. CNS'de yerleşik hücreleri izole etmek ve analiz etmek için mevcut teknolojilerin çoğu, yalnızca bir hücre tipine veya yalnızca doğum sonrası farelere odaklanmak gibi ciddi eksiklikler göstermektedir. Tüm ana CNS'de yerleşik hücre tiplerinin bir CNS replikasyonundan eşzamanlı izolasyonu için mevcut protokol, sağlıklı farelere ve deneysel otoimmün ensefalomiyelitli olanlara uygulanabilen, tek bir hücre süspansiyonundan ex vivo olan karmaşık nöronal ağları ve yeni enflamatuar yolları analiz etme imkanı sunar.
Ek olarak, fare sayıları azalır Sağlıklı ve EAE farelerinde dört ana CNS'de yerleşik hücre tipinin tümünün eşzamanlı izolasyonu için protokolümüz, yeni enflamatuar yolları inceleyen araştırma grupları için yararlı bir araç olarak kullanılabilir ve karmaşık biyomoleküler mekanizmaların ve hücresel ağların çok daha doğru bir analizine olanak tanır. Protokolümüz yardımıyla cevaplanabilecek yeni bilimsel sorular, EAE'de nöroinflamasyon, nörodejenerasyon ve remisyon gibi hastalık seyrinin farklı aşamalarında dinamik araştırmalardır. Ayrıca, hücre-hücre etkileşimleri ve biyokimyasal yollar bireysel düzeyde incelenebilir.
Benzer şekilde, ekili hücrelerle fonksiyonel testler yapılabilir. EAE zaman noktası başına bir CNS homojenatından multi-omik analiz için EAE kursunun dinamik çalışmalarına odaklanmayı amaçlıyoruz.
Bu çalışma, tek bir fareden tüm ana merkezi sinir sistemi (CNS) rezidan hücre tiplerinin eşzamanlı izolasyonu için yeni bir protokol sunar, bu hem naif hem de deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modellerinde uygulanabilir. Bu yöntem, mevcut hücre izolasyon teknolojilerinin sınırlamalarını gidermeyi amaçlamaktadır, böylece araştırmacılar nöroinflamasyon sırasındaki karmaşık hücresel etkileşimleri araştırırken kullanılan fare sayısını en aza indirir.
Simultaneous isolation of all principal CNS-resident cell types from adult EAE mice enables comprehensive interrogation of neuroinflammatory mechanisms in a single experiment. This approach supports high-content, multiomic analyses while reducing animal usage, directly impacting early discovery and target validation in neuroimmunology portfolios. The protocol enhances predictive confidence for pathway de-risking and translational biomarker development in autoimmune CNS disease models.
This protocol integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling simultaneous multi-cell-type analyses from EAE and healthy mice, supporting both hypothesis-driven and exploratory research.