Name: Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Öğrenin, stereotaksik cihaz kullanarak çocukluk çağı beyin tümörleri için ortotopik hasta kaynaklı ksenogreft modelleri oluşturmayı. Bu yöntem, tümör davranışını ve tedavi yanıtlarını incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mueller, S., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+brain+tumors%3A+current+treatment+strategies+and+future+therapeutic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Pediatric brain tumors: current treatment strategies and future therapeutic approaches.</a> Neurotherapeutics. 6 (3), 570-586 (2009).</li>
<li>Packer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tumors+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Brain tumors in children.</a> Arch Neurol. 56 (4), 421-425 (1999).</li>
<li>Paugh, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+molecular+genetic+profiling+of+pediatric+high-grade+gliomas+reveals+key+differences+with+the+adult+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Integrated molecular genetic profiling of pediatric high-grade gliomas reveals key differences with the adult disease.</a> J Clin Oncol. 28 (18), 3061-3068 (2010).</li>
<li>MacDonald, T. J., Aguilera, D., Kramm, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+high-grade+glioma+in+children+and+adolescents%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Treatment of high-grade glioma in children and adolescents.</a> Neuro Oncol. 13 (10), 1049-1058 (2011).</li>
<li>Rutka, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+brain+tumours+in+children+%3A+Present+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22J+Korean+Neurosurg+Soc%22%5BJournal%5D)">Malignant brain tumours in children : Present and future perspectives.</a> J Korean Neurosurg Soc. 61 (3), 402-406 (2018).</li>
<li>Cho, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+genomic+analysis+of+medulloblastoma+identifies+a+molecular+subgroup+that+drives+poor+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Integrative genomic analysis of medulloblastoma identifies a molecular subgroup that drives poor clinical outcome.</a> J Clin Oncol. 29 (11), 1424-1430 (2011).</li>
<li>Thomas, A., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medulloblastoma%3A+optimizing+care+with+a+multidisciplinary+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Multidiscip+Healthc%22%5BJournal%5D)">Medulloblastoma: optimizing care with a multidisciplinary approach.</a> J Multidiscip Healthc. 12, 335-347 (2019).</li>
<li>Pajtler, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+classification+of+ependymal+tumors+across+all+CNS+compartments%2C+histopathological+grades%2C+and+age+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Molecular classification of ependymal tumors across all CNS compartments, histopathological grades, and age groups.</a> Cancer Cell. 27 (5), 728-743 (2015).</li>
<li>Thorp, N., Gandola, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+ependymoma+in+children%2C+adolescents+and+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of ependymoma in children, adolescents and young adults.</a> Clin Oncol. 31 (3), 162-170 (2019).</li>
<li>Upton, D. H., Ziegler, D. S., Tsoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+orthotopic+patient-derived+xenograft+models+of+pediatric+intracranial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of orthotopic patient-derived xenograft models of pediatric intracranial tumors.</a> Methods Mol Biol. 2806, 75-90 (2024).</li>
<li>Smith, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenografts+of+pediatric+brain+tumors%3A+a+St.+Jude+resource%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenografts of pediatric brain tumors: a St. Jude resource.</a> Acta Neuropathol. 140 (2), 209-225 (2020).</li>
<li>Akter, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+tumor+models+of+primary+brain+tumors%3A+Challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical tumor models of primary brain tumors: Challenges and opportunities.</a> Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 1875 (1), 188458(2021).</li>
<li>Stribbling, S. M., Ryan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell-line-derived+subcutaneous+tumor+model+in+preclinical+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">The cell-line-derived subcutaneous tumor model in preclinical cancer research.</a> Nat Protoc. 17 (9), 2108-2128 (2022).</li>
<li>He, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+models+recapitulate+heterogeneity+of+molecular+signatures+and+drug+response+in+pediatric+high-grade+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Patient-derived models recapitulate heterogeneity of molecular signatures and drug response in pediatric high-grade glioma.</a> Nat Commun. 12 (1), 4089(2021).</li>
<li>Tsoli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+experience+in+the+development+of+patient-derived+xenograft+models+of+diffuse+intrinsic+pontine+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">International experience in the development of patient-derived xenograft models of diffuse intrinsic pontine glioma.</a> J Neurooncol. 141 (2), 253-263 (2019).</li>
<li>Brabetz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biobank+of+patient-derived+pediatric+brain+tumor+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A biobank of patient-derived pediatric brain tumor models.</a> Nat Med. 24 (11), 1752-1761 (2018).</li>
<li>Khan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+of+polyamine+synthesis+and+uptake+in+diffuse+intrinsic+pontine+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Dual targeting of polyamine synthesis and uptake in diffuse intrinsic pontine gliomas.</a> Nat Commun. 12 (1), 971(2021).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+evaluation+of+protein+synthesis+inhibitor+omacetaxine+in+pediatric+brainstem+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Preclinical evaluation of protein synthesis inhibitor omacetaxine in pediatric brainstem gliomas.</a> Neurooncol Adv. 6 (1), vdae029(2024).</li>
<li>Ung, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-loaded+gold+nanoarchitectures+as+a+therapeutic+strategy+against+diffuse+intrinsic+pontine+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-loaded gold nanoarchitectures as a therapeutic strategy against diffuse intrinsic pontine glioma.</a> Cancers (Basel). 13 (6), 1278(2021).</li>
<li>Ehteda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+of+the+epigenome+via+FACT+complex+and+histone+deacetylase+is+a+potent+treatment+strategy+for+DIPG%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dual targeting of the epigenome via FACT complex and histone deacetylase is a potent treatment strategy for DIPG.</a> Cell Rep. 35 (2), 108994(2021).</li>
<li>Mayoh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+drug+screening+of+primary+tumor+cells+identifies+therapeutic+strategies+for+treating+children+with+high-risk+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">High-throughput drug screening of primary tumor cells identifies therapeutic strategies for treating children with high-risk cancer.</a> Cancer Res. 83 (16), 2716-2732 (2023).</li>
<li>Lin, G. L., Monje, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Protocol+for+rapid+post-mortem+cell+culture+of+diffuse+intrinsic+pontine+glioma+%28DIPG%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Protocol for rapid post-mortem cell culture of diffuse intrinsic pontine glioma (DIPG).</a> J Vis Exp. (121), e55360(2017).</li>
<li>Whitehouse, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+loss+of+tumorigenicity+in+a+patient-derived+orthotopic+xenograft+mouse+model+of+ependymoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">In vivo loss of tumorigenicity in a patient-derived orthotopic xenograft mouse model of ependymoma.</a> Front Oncol. 13, 1123492(2023).</li>
<li>Hermans, E., Hulleman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenograft+models+of+pediatric+brain+tumors%3A+In+a+mature+phase+or+still+in+its+infancy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenograft models of pediatric brain tumors: In a mature phase or still in its infancy.</a> Front Oncol. 9, 1418(2019).</li>
<li>Kim, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4 (11), 1670-1680 (2009).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Paxinos+and+Franklin%27s+the+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">Paxinos and Franklin's the Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 5th edn, Academic Press. (2019).</li>
<li>Tsoli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+genomics%2C+high+throughput+drug+screening%2C+and+personalized+xenograft+models+as+a+novel+precision+medicine+paradigm+for+high+risk+pediatric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Integration of genomics, high throughput drug screening, and personalized xenograft models as a novel precision medicine paradigm for high risk pediatric cancer.</a> Cancer Biol Ther. 19 (12), 1078-1087 (2018).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+and+interactions+of+tumor+microenvironment+components+in+medulloblastoma+with+implications+for+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Chromosomes+Cancer%22%5BJournal%5D)">Roles and interactions of tumor microenvironment components in medulloblastoma with implications for novel therapeutics.</a> Genes Chromosomes Cancer. 63 (4), e23233(2024).</li>
<li>Kondapaneni, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+mechanobiology+at+multiple+length+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Adv%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma mechanobiology at multiple length scales.</a> Biomater Adv. 160, 213860(2024).</li>
<li>Mahmoudian, E., Jahani-Asl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+brain+tumor+stem+cell+culture+from+patient+brain+tumors+and+imaging+analysis+of+patient-derived+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Establishing brain tumor stem cell culture from patient brain tumors and imaging analysis of patient-derived xenografts.</a> Methods Mol Biol. 2736, 177-192 (2024).</li>
<li>Oudin, A., Moreno-Sanchez, P. M., Baus, V., Niclou, S. P., Golebiewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging-guided+intracranial+resection+of+glioblastoma+tumors+in+patient-derived+orthotopic+xenografts+leads+to+clinically+relevant+tumor+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging-guided intracranial resection of glioblastoma tumors in patient-derived orthotopic xenografts leads to clinically relevant tumor recurrence.</a> BMC Cancer. 24 (1), 3(2024).</li>
<li>Bauer, S., Wiest, R., Nolte, L. P., Reyes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+MRI-based+medical+image+analysis+for+brain+tumor+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">A survey of MRI-based medical image analysis for brain tumor studies.</a> Phys Med Biol. 58 (13), R97-R129 (2013).</li>
<li>Lasocki, A., Gaillard, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-contrast-enhancing+tumor%3A+A+new+frontier+in+glioblastoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22AJNR+Am+J+Neuroradiol%22%5BJournal%5D)">Non-contrast-enhancing tumor: A new frontier in glioblastoma research.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 40 (5), 758-765 (2019).</li>
<li>Nichelli, L., Zaiss, M., Casagranda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APT+weighted+imaging+in+diffuse+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22BJR+Open%22%5BJournal%5D)">APT weighted imaging in diffuse gliomas.</a> BJR Open. 5 (1), 20230025(2023).</li>
<li>Genovesi, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenograft+models+of+medulloblastoma+lack+a+functional+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenograft models of medulloblastoma lack a functional blood-brain barrier.</a> Neuro Oncol. 23 (5), 732-742 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anestezik ajan (örn. İzofluran)</td><td>Merck</td><td>792632</td><td></td></tr><tr><td>%100 Etanol</td><td>Merck</td><td>459844</td><td></td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Steril suyla seyrelterek %100 etanolden %70 etanol yapın</td></tr><tr><td>%80 etanol</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Steril suyla seyrelterek %100 etanolden %80 etanol yapın</td></tr><tr><td>Yapışkan mikroskop slaytları</td><td>Merck</td><td>Z681156</td><td></td></tr><tr><td>Analjezik (Buprenorfin 0,3mg/mL)</td><td>Jurox Hakkında</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Karbon filtre kutusu</td><td>Veteriner Ekipmanı</td><td>931401</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüpler 15 mL (Falcon)</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüpler 50 mL (Falcon)</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>DMSO'nun</td><td>Merck</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>Kulak çubukları</td><td>Kopf</td><td>1921</td><td></td></tr><tr><td>ECM hidrojeli (Matrigel, Corning)</td><td>Merck</td><td>E1270 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Göz Merhemi (Poly Visc)</td><td>ChemistDirect&nbsp;</td><td>719986</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Buzağı Serumu</td><td>Merck</td><td>F0926</td><td></td></tr><tr><td>cam mikro şırınga</td><td>Hamilton</td><td>7002</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol mendiller</td><td>Medisa</td><td>SUL_LWMS-1</td><td></td></tr><tr><td>KI67 antikoru</td><td>Abcam</td><td>AB209897</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>211-2130</td><td></td></tr><tr><td>Mikromatkap ucu&nbsp; 0,028 inç</td><td>Kopf</td><td>8170</td><td></td></tr><tr><td>Mikroenjeksiyon ünitesi</td><td>Kopf</td><td>5004</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Merck</td><td>P4474</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 10 mL</td><td>Corning</td><td>CLS4488</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 1mL&nbsp;</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 200uL</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 20uL</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>3123000098</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 25 mL</td><td>Corning</td><td>CLS4489</td><td></td></tr><tr><td>Pipet ucu 1 mL</td><td>Corning</td><td>CLS4868</td><td></td></tr><tr><td>Pipet ucu 200uL</td><td>Corning</td><td>CLS4860</td><td></td></tr><tr><td>Polisorbat 20 deterjan (F10SC)</td><td>Sağlık ve Hijyen</td><td>G3070 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Nabız oksimetresi (MouseSTAT)</td><td>Kent Bilimsel</td><td>DPT2-MSE</td><td></td></tr><tr><td>Riyot (Povidon-İyot)</td><td>Merck</td><td>Y0000466</td><td></td></tr><tr><td>Neşter (tek kullanımlık)</td><td>Medisa</td><td>SUL_SCALPEL</td><td></td></tr><tr><td>Cilt Yapıştırıcısı Vetbond</td><td>Medisa</td><td>3M_1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvan stereotaktik enstrümanı dijital ekran konsolu ile&nbsp;</td><td>Kopf</td><td>940</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik Matkap&nbsp;</td><td>Kopf</td><td>1474</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık izleme sistemi&nbsp;</td><td>Harvard Aparatı</td><td>55-7020</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi</td><td>Merck</td><td>93595</td><td></td></tr></tbody></table>

stereotaksik cihaz kullanılarak beyin tümörleri İçin ortotopik hasta kaynaklı ksenogreft modellerinin oluşturulması

Establishment of Orthotopic Patient-derived Xenograft Models for Brain Tumors using a Stereotaxic Device

Stereotaksik bir cihaz kullanılarak yapılan ortotopik enjeksiyonlar, beyin tümörü modellerinin geliştirilmesi için gerekli hale gelmiştir. Bu teknik, nöro-onkoloji araştırmalarında tutarlı ve güvenilir veriler üretmek için çok önemli olan tümör hücrelerinin kesin ve tekrarlanabilir bir şekilde yerleştirilmesine izin verir. Ortotopik enjeksiyonların başarılı bir şekilde uygulanması, büyük ölçüde, tipik olarak bir stereotaksik çerçeve, hassas hareketler için bir dijital mikromanipülatör, bir enjeksiyon şırıngası ve hayvanı hareketsiz hale getirmek için bir anestezi sistemi içeren stereotaksik ekipmanın doğru kurulumuna dayanır (Şekil 1A,B). Bir cam mikroşırınganın kullanılması, tipik olarak 2-5 μL arasında küçük hacimlerde intrakraniyal enjeksiyonu mümkün kılar. Enjeksiyonu bloke edebilecek biyolojik materyalin birikmesini önlemek için uygun bakım ve sık yıkama şarttır (Şekil 1C).
Farelerde stereotaksik ekipman kullanılarak beyin tümörü hücrelerinin intrakraniyal enjeksiyonu prosedürü birkaç önemli adımı içerir. İlk olarak, fare işlem boyunca hareketsiz ve rahat kalması için uyuşturulur. Hayvanın uyuşturulduğunu gösteren tipik ipuçları, ayak parmağını sıkıştırmaya bağlı hareket ve reflekslerin yanı sıra düzenli bir solunum paterninin varlığını içerir. Daha sonra, fare stereotaksik bir çerçeveye yerleştirilir ve başını sabit bir pozisyonda sabitler (Şekil 2A). Kafatasındaki bregma ve lambda gibi yer işaretleri kullanılarak, enjeksiyon için kesin koordinatlar belirlenir. Saçlı deride küçük bir kesi yapılır ve seçilen koordinatlarda kafatasının içinden bir çapak deliği açılır (Şekil 2B). Stereotaksik kola bağlı bir mikroenjeksiyon iğnesi, tümör hücrelerini istenen beyin bölgesine (korteks, beyincik veya beyin sapı; Şekil 2C). İğne konumunun dikkatli bir şekilde izlenmesi ve ayarlanması, doğru hedefleme sağlar. Enjeksiyondan sonra iğne yavaşça çekilir ve kesi kapatılır (Şekil 2D). Mühürlü yaranın intrakraniyal enjeksiyonu takiben iki hafta içinde iyileşmesi beklenir.
İntrakraniyal enjeksiyonu takiben, hayvanların genel refahı ve genellikle tümör ilerlemesini gösteren nörolojik semptomların gelişimi için dikkatli bir izleme gerekir (Ek Tablo 1). Tipik olarak, hayvanlar enjeksiyondan sonraki 1. hafta boyunca (en yüksek ağırlıklarının 'una kadar) hafif bir kilo kaybı yaşayabilir, bu da tipik olarak enjeksiyon bölgeleri 2. haftanın sonunda tamamen kapatıldığında stabilize olur. Genel olarak, hayvanlar kiloda sabit bir artış sergiler ve tümör ilerlemesi meydana gelene kadar genel sağlığı iyi korurlar. Nörolojik semptomların tezahürü, beyin tümörünün tipi, enjeksiyon bölgesi ve hayvan suşu gibi faktörlere bağlı olarak değişir. Örneğin, kortikal gliomlar veya ependimomlar ilerleyici kilo kaybı ve potansiyel ön beyin büyümesi ile ortaya çıkabilirken, beyin sapı gliomları ve medulloblastomlar, özellikle bağışıklığı baskılanmış hayvanlarda ataksi ve baş eğme gibi semptomlar gösterebilir (Şekil 3A). Ek olarak, beyin sapı tümörleri olan hayvanlarda, özellikle NSG veya NOD/SCID suşlarında daire çizme davranışı gözlenebilir. Nörolojik semptomların ilerlemesi genellikle kademeli kilo kaybı ile aynı zamana denk gelir. Uzun ağızlı su şişeleri sağlamak veya yumuşak yiyecekler (duygusal gıda peletleri) veya tohumlar sunmak gibi uygun bakım sonrası önlemler, hayvanların refahını desteklemek için çok önemlidir. Deneysel son noktaya ve ardından hayvanların insancıl ötenazisine ulaştıktan sonra, enjeksiyon bölgesinde genişleme ve / veya hemorajik alanların varlığı dahil olmak üzere beyindeki potansiyel değişiklikler ortaya çıkabilir (Şekil 3B).
Kaplan-Meier grafikleri, beyin tümörü hayvan modellerinin sağkalım sonuçlarını göstermek için yaygın olarak kullanılır. İntrakraniyal enjeksiyon veya antikanser tedavilerini takiben zaman içinde hayatta kalma olasılığının görsel bir tasvirini sunarlar. Bu grafikler, klinik öncesi araştırma ortamlarında sağkalım verilerini analiz etmek ve sunmak için çok önemli araçlar olarak hizmet eder15,27. Beyincikte farklı hücre yoğunluklarında intrakraniyal medulloblastoma hücre kültürü D425 enjeksiyonları gerçekleştirdik. İntrakraniyal olarak enjekte edilen tüm hayvanlarda tümörler gelişti. Sonuçlarımız, daha yüksek hücre yoğunluklarının, özellikle fare başına 50.000 ve 100.000 hücrenin, fare başına 10.000 hücreden daha hızlı aşılandığını gösterdi (Şekil 4). Ayrıca, bu farklı konumlarda genel sağkalımı ve tümör büyüme paternini ve immünohistokimyasal özellikleri karşılaştırmak için hasta kaynaklı yüksek dereceli glioma (HGG) hücrelerini korteks ve beyin sapına intrakraniyal olarak enjekte ettik. Konumdan bağımsız olarak, tüm hayvanlara intrakraniyal olarak gelişmiş tümörler enjekte edildi. HGG hücrelerinin kültürlenmesi, 1.1 ila 1.10 adımlarında ayrıntılı olarak açıklanan protokol izlenerek gerçekleştirilmiştir. İntrakraniyal enjeksiyon için hücrelerin hazırlanması 2.1 ila 2.6 adımlarında tarif edildiği gibi gerçekleştirilirken, intrakraniyal enjeksiyon prosedürü 4.1 ila 4.1627 adımlarında belirtilen yönteme bağlı kalmıştır. Kortekse enjekte edildiğinde, HGG hücreleri intrakraniyal enjeksiyondan yaklaşık 25 gün sonra medyan sağkalım göstermiştir (Şekil 5A). Hayvanlar, 5.1 ila 5.4 adımlarında belirtildiği gibi izlendi. Bu hayvanlar herhangi bir nörolojik semptom göstermedi, ancak ilerleyici kilo kaybı gösterdi. Hayvanlara, adım 5.5'te belirtilen insancıl son noktaya ulaştıklarında insancıl bir şekilde ötenazi yapıldı. Beyinler, 6.1 ila 6.5 adımlarında ayrıntılı olarak açıklanan protokol izlenerek toplandı ve daha fazla analiz için gönderildi27. İmmünohistokimyasal analiz, artmış vaskülarizasyon kanıtı (Şekil 5B) ve birçok proliferatif Ki67 hücresi (Şekil 5C) ile büyük, yüksek çekirdekli bir tümör kitlesi ortaya çıkardı. Beyin sapına enjekte edildiğinde, HGG hücreleri intrakraniyal enjeksiyondan yaklaşık 26 gün sonra medyan sağkalım göstermiştir (Şekil 5D). İmmünohistokimyasal incelemede 4. ventrikül/üst pons bölgesinde büyük tümör kitlesi ve lateral ventriküle leptomeningeal infiltrasyon izlendi (Şekil 5E). Daha ileri immünohistokimyasal analiz, beyin sapında ve diğer infiltre alanlarda birçok proliferatif hücreyi gösterdi (Şekil 5F). Bu deney, aynı tümör hücrelerinin farklı anatomik bölgelere enjekte edilmesinin, büyüme paterninde bazı farklılıklar gözlenmesine rağmen, tümör büyüme hızını etkilemediğini vurgulamaktadır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig1.jpg"> 
Şekil 1: Beyin tümörü hücrelerinin intrakraniyal enjeksiyonu için stereotaksik kurulumun temsili görüntüleri. (A) Anestezik aparat tipik olarak BSC başlığının yanına yerleştirilir ve hem indüksiyon odasına hem de stereotaksik aparata anestezinin ikili olarak uygulanmasını gerektirir. (B) Cam mikroşırınga yıkama istasyonu ve stereotaksik tutucu; Şırınga, her intrakraniyal enjeksiyondan sonra tuzlu su, etanol ve ardından su ile yıkamayı gerektirir. (C) BSC başlığının içinde, anestezik odayı, delme makinesini, stereotaksik cihazı, stereotaksik koordinat konsolunu, pamuk uçları, neşter, cımbız, pipet ve uçları gösteren stereotaksik kurulum. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig2.jpg"> 
Şekil 2: Bağışıklığı baskılanmış bir farede gerçekleştirilen intrakraniyal enjeksiyonun temsili görüntüleri. (A) Anestezik bir koni içine yerleştirilmiş anestezi uygulanmış hayvan. (B) Deri kesisi ve ardından kulak çubukları ile cildin her iki tarafa sabitlenmesi. (C) Enjeksiyon için delinmiş deliğin üzerine yerleştirilmiş cam mikroşırınga. (D) Deri, yapıştırıldıktan sonra bir Mohawk stili oluşturur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig3.jpg"> 
Şekil 3: Beyin tümörü hücrelerinin aşılanmasını takiben gözlenen potansiyel nörolojik semptomlar. (A) Beyin sapına DMG hücrelerinin intrakraniyal enjeksiyonunu takiben baş eğimi sergileyen hayvan. (B) Sağ kortikal hemisferin enjeksiyon tarafı ile genişlemesi tümör oluşumunu ortaya çıkarır. Hayvana ependimoma hücreleri enjekte edildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig4.jpg"> 
Şekil 4: Medulloblastoma kültürü D425'in farklı hücre yoğunluklarında aşılanması. Medulloblastom hücreleri, 2 μL ECM hidrojel, 50.000 hücre ve 100.000 hücre içinde 10.000 hücre yoğunluğunda stereotaksik ekipman kullanılarak intrakraniyal olarak enjekte edildi. Hayvanlar ilerleyici kilo kaybı açısından izlendi ve kaydedilen en yüksek ağırlıklarının altına ulaştıklarında insancıl bir şekilde ötenazi yapıldı. 10.000 hücre enjekte edilen hayvanlar için medyan sağkalım 29 gün iken, 50.000 ve 100.000 hücre daha yüksek hücre yoğunluğu enjekte edilenler için medyan sağkalım sırasıyla 17.5 gün ve 15 gün idi. Bu çalışmada enjekte edilen tüm hayvanlarda başarılı bir şekilde tümör gelişti. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig5v2.jpg"> 
Şekil 5: Korteks ve beyin sapında intrakraniyal olarak HGG hücreleri enjekte edilen NSG hayvanlarının temsili sağkalım eğrileri ve histolojik analizi. Yaklaşık 100.000 HGG hücresi (pasaj 3), stereotaksik ekipman kullanılarak 2 μL ECM hidrojele enjekte edildi. Hayvanlar ilerleyici kilo kaybı açısından izlendi ve kaydedilen en yüksek ağırlıklarının altına ulaştıklarında insancıl bir şekilde ötenazi yapıldı. Bu beyin tümörü alt tipi için herhangi bir nörolojik semptom gözlenmedi. (A) Kortekse enjekte edilen HGG hücreleri olan hayvanların medyan sağkalımı, enjeksiyondan yaklaşık 25 gün sonradır (N = 2). (B) Korteksin H&amp;E boyaması, kırmızı kan hücrelerinin varlığı ile gösterilen, artmış vaskülarizasyon ile yüksek çekirdekli bir bölgeyi gösterir. (C) Korteksteki tümör aşılı alan, KI67 boyaması ile gösterildiği gibi yüksek düzeyde proliferatif hücreler gösterir. (D) Beyin sapına enjekte edilen HGG hücreleri ile hayvanların medyan sağkalımı, enjeksiyondan yaklaşık 26 gün sonradır (N = 2). Bu çalışmada enjekte edilen tüm hayvanlarda başarılı bir şekilde tümör gelişti. (E) Beyin sapının H&amp;E boyaması, lateral ventriküldeki leptomeninglerde gözlenen tümör infiltrasyonu ile yüksek çekirdekli bir bölgeyi gösterir. (F) Beyin sapındaki tümör aşılı alan, KI67 boyaması ile gösterildiği gibi yüksek düzeyde proliferatif hücreler gösterir. Ana görüntülerdeki siyah ölçek çubuğu 2 mm'yi gösterirken, büyütülmüş eklenen görüntüler 20 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig5v2large.jpg" target="_blank">μm'yi gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 1: Hayvanların post-intrakraniyal enjeksiyonlarının incelenmesi ve antikanser ajanlarla potansiyel tedavi için kullanılan izleme formu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/Supplementary%20Table%201_RE.xlsx" target="_blank">Bu tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması

The development of clinically relevant and reliable models for central nervous system (CNS) tumors has been pivotal in advancing the field of ...

establishment-orthotopic-patient-derived-xenograft-models-for-brain

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Lusiferaz modifiye insan beyin tümörü xenografts atimik farelerde tümör büyümesi ve biyoparlaklık görüntüleme kullanarak tedaviye yanıt daha sonraki izleme ile intrakranyal kurulmuş olabilir. Sağkalım analizi ile birlikte, biyoparlaklık izleme, beyin tümörlerinin tedavisi için düşünülen tedavilerin klinik öncesi test için önemli bir araştırma aracı.

Biyoparlaklık Görüntüleme kullanarak Tümör Büyüme ve Terapi yanıt sonraki Analizi ile İntrakranial Beyin Tümörü Xenografts kurulması

Bu makalenin amacı, kemoradyoterapi çalışmaları için ortotopik glioblastoma modelinin kullanımı tanımlamaktır. Bu makale implante, hücre işleme rağmen gitmek ve bir intrakraniyal modeli kullanarak farenin radyoterapi olacaktır.

Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Biz çıplak farelerin ve sonraki seri beyinlerine insan glioblastoma multiforme hücrelerinin hassas, stereotaktik implantasyon için tümleşik bir yöntem...

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Bu video, intrakraniyal enjeksiyon yapılarak fare beynine tümör hücrelerinin implantasyonunu göstermektedir.

İntrakraniyal Ortotopik Model: Fare Beynine Kanser Hücrelerini İmplante Etme Prosedürü

Malign gliomalar, farklı klinik ve moleküler özelliklere sahip heterojen bir yüksek infiltive glial neoplazm grubunu oluşturur. Primer ortotopik ksinograftlar preklinik hayvan modellerinde malign glioma alt tiplerinin histopatolojik ve moleküler özelliklerini rekapitulate eder.

Primer Ortotopik Glioma Xenografts Infiltratif Büyüme ve İsocitrat Dehidrogenaz I Mutasyonu Rekapitulate

Biz, tümörün büyüme sırasında oynayan normal biyo-fiziksel kısıtlamalar tekrarıdır intravital iki foton mikroskopi için farelerde kortikal glioblastoma ortotopik bir model oluşturduk. Tümörün yukarıdaki kafatasını yerine bir kronik cam pencere, iki-foton mikroskobu ile zamanla tümörün ilerlemesinin takibini sağlar.

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

Beyin de in vitro veya ektopik analizler tarafından temsil edilmeyen nitelikleri ile benzersiz bir sitedir. Tekrarlanabilir bulunduğu yere ve büyüme özelliklerine sahip Ortotopik fare modelleri güvenilir bir stereotaksik tespit aracı ve bir düşük basınç şırınga pompası kullanılarak kafatası içine uygulanan enjeksiyonları ile oluşturulabilir.

Oluşturma Anatomik Doğru ve İnsan Beyin Tümörleri Reproducible İntrakraniyal Ksenograftlar

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Orthotopic insan Glioblastoma Multiforme Xenografts fare modelleri sitotoksik bağışıklık hücrelerinin stereotaksik evlat edinen Transfer

Santral sinir sistemi metastazı PDX modelleri, insan metastazının fenotipik ve moleküler özelliklerini temsil eder ve bu da onları klinik öncesi çalışmalar için mükemmel modeller haline getirir. Burada PDX modellerinin nasıl oluşturulacağı ve klinik öncesi çalışmalar için en iyi kullanılan aşılama yolları açıklanmaktadır.

Santral Sinir Sistemi Metastazının Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Kurulması ve Kullanılması

Burada, genetiği değiştirilmiş fare modeli tümörlerinden türetilen hücrelerin intrakraniyal enjeksiyonu ile kurulan GBM için klinik öncesi bir ortotopik fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, insan GBM'sinin hastalık özelliklerini gösterir. Translasyonel çalışmalar için, fare beyin tümörü in vivo MRG ve histopatoloji ile izlenir.

Glioblastoma multiforme'un Translasyonel Ortotopik Modelleri

Bu protokolün amacı, araştırmacılara intrakraniyal implantasyonlar için son derece tekrarlanabilir bir teknik sunmaktır.

Farelerde glioblastoma hasta kaynaklı ksenograft hücre hatlarının stereotaktik intrakranial implantasyonu

Öğrenin, stereotaksik cihaz kullanarak çocukluk çağı beyin tümörleri için ortotopik hasta kaynaklı ksenogreft modelleri oluşturmayı. Bu yöntem, tümör davranışını ve tedavi yanıtlarını incelemeye yardımcı olur.

Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması

Daha fazla video keşfet