Name: Floresan ve Radyoaktif İzleyicilerle Mikro Kabarcıkların Üretilmesi ve Etiketlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Öğrenin, lipid mikro kabarcıkların üretimi ve tek adımlı radyoetiketleme yöntemiyle %95'in üzerinde etiketleme verimliliği elde edin. Bu yöntem, fizikokimyasal özellikleri koruyarak kanser görüntüleme ve tedavi uygulamaları için izlenebilir mikro kabarcıklar oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Reaktiflerin hazırlanması
<ol>
	<li>Amonyum asetat tamponu hazırlayın (0.1 M, pH 5.5)<ol>
		<li>Analitik bir terazi kullanarak, 770,8 mg amonyum asetat bir tartım kağıdına tartın. Tartılan miktarı 250 mL'lik temiz bir cam kabın içine aktarın.</li>
		<li>Behere dereceli bir pipetle ölçülen 90 mL çift damıtılmış su (ddH2O) ekleyin. Bir karıştırma çubuğu ekleyin ve amonyum asetatı çözmek için beheri manyetik bir karıştırma plakasına yerleştirin. Hafif bir girdap oluşturan, ancak çözelti sıçraması olmayan bir hızda karıştırın.</li>
		<li>pH 4 ve 7 standartlarını kullanarak bir pH metreyi cihaz talimatlarına göre kalibre edin. Kalibre edildikten sonra, pH probunu amonyum asetat tamponuna yerleştirin.</li>
		<li>Çözeltiye 104 μL asetik asit ekleyin, çözünmesi için karıştırın ve pH'ı ölçün. NOT: Bu noktada pH 5.5'e yakın olmalıdır.</li>
		<li>Bir mikropipet kullanarak 5-10 μL'lik artışlarla 10 N sodyum hidroksit (veya tampon çok bazik hale gelirse hidroklorik asit) ekleyerek tamponun pH'ını ayarlayın. Karıştırın, pH'ı ölçün ve gerektiği kadar tekrarlayın. Eklenen baz/asit hacmini not edin.</li>
		<li>Toplam 100 mL tampon oluşturmak için yeterli miktarda ddH2Oekleyin. NOT: Örneğin, pH ayarlaması sırasında 45 μL 10 N sodyum hidroksit kullanılmışsa, behere 9.851 mL ddH2Oeklenecektir (100 mL [hedef hacim] - 90 mL [adım 1.1.2] - 0.104 mL [adım 1.1.4] - 0.045 mL [adım 1.1.5] = 9.851 mL).</li>
		<li>Kapaklı bir saklama kabına aktarmadan önce tamponu son bir kez iyice karıştırın.</li>
		<li>pH metreyi cihaz talimatlarına göre temizleyin. DİKKAT: Konsantre sulu sodyum hidroksit ve hidroklorik asit cilt reaksiyonlarına neden olabilir ve eldiven kullanılarak kullanılmalıdır.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Hidrasyon tamponu (PGG) hazırlayın<ol>
		<li>Fosfat tamponlu salini (PBS) bir şırıngaya aspire edin ve ucunu bir polietersülfon 0.2 μm gözenek boyutu şırınga filtresi ile donatın. PBS'yi temiz, plastik, kapaklı bir santrifüj tüpüne filtreleyin. NOT: Alternatif membran malzemelerinin (örneğin, poliviniliden florür) 0,2 μm gözenekli şırınga filtreleri, membran PBS ve amonyum asetat ile uyumlu olduğu sürece kullanılabilir.</li>
		<li>Hidrasyon tamponunu (PGG olarak da adlandırılır) yapmak için filtrelenmiş PBS, propilen glikol ve gliserolü mikropipet aracılığıyla 8:1:1 hacimsel oranda birleştirin. Propilen glikol ve gliserol eklerken, reaktifi PBS'ye yavaşça pipetlemeden önce pipet ucunun yüzeyinden kalan propilen glikol veya gliserol damlacıklarını aspire edin ve silin. PBS'de berrak bir sicim benzeri viskoz bulanıklık görülecektir. NOT: Önce bir santrifüj tüpüne PBS eklemek için bir p1000 mikropipet kullanılması önerilir, ardından propilen glikol ve gliserol kullanılır, çünkü son iki reaktif viskozdur. Bu nedenle, pipet ucunda sıvı hareketi artık görülmeyene ve pipet ucu reaktiften çıkarıldığında hava alınmayacak şekilde mikropipet aracılığıyla yavaşça aspire edilmelidirler. Hacimsel işaretlere sahip mikropipet uçları, bu tür işaretlerle uyumlu reaktif hacimlerini seçmek için ideal olarak kullanılmalıdır (örneğin, 1 mL veya 5 mL PGG yapmak ve sırasıyla propilen glikol ve gliserolün tam aspirasyonunu görselleştirmek için mikropipet ucundaki 0,1 mL veya 0,5 mL işaretini kullanmak). Mikropipet ucunun yüzeyini silerken, uç açıklığından silmeyin, sadece yanlardan silin.</li>
		<li>Reaktifler homojen bir şekilde çözülene kadar pipet ucu solüsyon içinde olacak şekilde yukarı ve aşağı pipetleyin. Solüsyonun içine herhangi bir hava kabarcığı girmemesine dikkat edin.</li>
		<li>Hidrasyon tamponunun tam bir karışımını daha da sağlamak için santrifüj tüpünü kapatın ve yavaşça yukarı ve aşağı döndürün. Girdap yapmayın.</li>
		<li>Gözlenemeyen hava kabarcıklarını gidermek için tüpü 20-30 s (minimum sıcaklık 4 °C, maksimum RT) boyunca 1000 x g'dan daha düşük bir sıcaklıkta döndürün.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Hidrasyon/radyoetiketleme tamponu (AA-PGG) hazırlayın<ol>
		<li>Şırınga filtresi 0.1 M, pH 5.5 amonyum asetat tamponu (adım 1.1'den itibaren) ve PBS'yi adım 1.2.1'e göre ayrı tüplere koyun.</li>
		<li>Filtrelenmiş amonyum asetat tamponunu, filtrelenmiş PBS'yi, propilen glikolü ve gliserolü bir p1000 mikropipet aracılığıyla 5: 3: 1: 1 amonyum asetat tamponunda bir santrifüj tüpüne birleştirin: PBS: propilen glikol: gliserol hacimsel oranı listelenen sırayla. AA-PGG yapmak için 1.2.2.2.5-1.2.5 adımlarına göre aspirasyon, karıştırma ve santrifüjleme talimatlarını izleyin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Anlık ince tabaka kromatografisi (iTLC) eluenti<ol>
		<li>0,1 g'a kadar etilendiamintetraasetik asit (EDTA) tartın ve kapaklı bir şişeye aktarın. ddH2O'da% 2 w / v EDTA çözeltisi yapılacak şekilde çözün (örneğin, 50 mg EDTA için 2.5 mL ddH2O ekleyin).</li>
		<li></ol></li></ol><ol><li></li><li> </li><li> </li><li><li> </li><li> </li><li> </li><li><li> </li><li><li> </li><li><li><li><li> </li></ol><ol><li><li><li><li> </li><li> </li><li> </li><li><li><li> </li></ol><ol><li><li> </li><li><li></li><li><li></li><li> </li><li></li><li></li><li><li> </li><li><li> </li><li><li><li><li> </li><li><li><li> </li><li> <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67431/67431eq1v5.jpg" style="margin: auto;"> </li><li><li><li></ol><ol><li> </li><li><ol><li><li> </li></ol></li><li><li> </li></ol><ol><li> </li><li> </li><li> </li><li><ol><li><li></li></ol></li><li></li><li><li><li><li> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67431/67431eq2v2.jpg" style="margin: auto;"> </li></ol><ol><li><ol><li></li><li><li></li><li></li><li></li><li><li><li></ol></li><li> <ol><li></li><li><li><li><ol><li><li></ol></li><li> </li></ol></li><li> <ol><li><li> </li></ol></li><li> <ol><li></li><li><li> </li><li><li> </li><li><li><li><li> <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67431/67431eq03.jpg" style="margin: auto;"></li></ol></li><li> <ol><li><li><li><li><li> </li><li><li> </li></ol></li></ol><ol><li><ol><li> </li><li><li></ol></li><li><ol><li> </li><li><li></ol></li><li><ol><li></li><li><li><li> </li><li><ol><li> </li></ol></li></ol></li></ol>

Mikro kabarcıklar, bir protein, polimer veya çoğu durumda bir lipid kabuğu ile stabilize edilmiş bir gaz çekirdeğine sahip mikron boyutunda supramoleküler teranostik ajanlardır (Şekil 1A). Kan dolaşımına enjekte edildiğinde, mikro kabarcıklar, gaz çekirdeklerinin 1,2 çözünmesinden önce dakikalar süren zaman dilimleri boyunca ultrason tarafından tespit edilebilen gaz/sıvı arayüzlerini korur. Sonuç olarak, mikro kabarcıkların ilk klinik kullanımı gerçek zamanlı ultrason görüntüleme kontrast maddeleriydi3. Terapötik odaklı ultrasonun (FUS) icadı, mikro kabarcık klinik yardımcı programlarını genişletti. Düşük frekanslı FUS ile uyarıldığında, mikro kabarcıklar salınır ve geçici vasküler geçirgenlikten fokal doku ablasyonunakadar değişen hedeflenmiş, ayarlanabilir mekanik kuvvetler üretir 4,5. Sonuç olarak, son 20 yılda, kan-beyin bariyeri (BBB) açılması, tümör (örneğin, pankreas, beyin ve karaciğer metastatik kanseri) ilaç ve görüntüleme probu dağıtımı, nörodejeneratif hastalık tedavisi ve kanser ablasyonuiçin mikrokabarcık-FUS araştırılmıştır 6,7,8,9,10,11.
Mikro kabarcıkların teranostik cephaneliği yeni ve heyecan verici yönlerde ilerlemeye devam ediyor. Konvansiyonel mikro kabarcık-FUS dağıtım uygulamaları, ticari mikro kabarcıkların yanı sıra terapötik veya görüntüleme kargosunun birlikte uygulanmasına dayanır. Mikro kabarcık kabuğu/biyolojik etkileşimlerini anlayarak, ısmarlama ticari olmayan mikro kabarcık formülasyonlarını keşfederek ve kargonun doğrudan mikro kabarcık kabuğunayüklendiği hepsi bir arada teranostik mikro kabarcıklar üreterek mikro kabarcık-FUS dağıtım yeteneklerini geliştirmeye artan bir ilgi vardır 12,13,14. Aslında, lipid mikro kabarcık ilaç dağıtım çalışmalarının yaklaşık% 40'ı bu tür kabuk yüklü mikro kabarcıkları kullanır15. Görüntüleme ve ilaç dağıtımının ötesinde, mikrokabarcık-FUS ayrıca kanser radyoterapisinin16 arttırılmasında ve sonodinamik tedavi17,18 yoluyla aksi takdirde iyi huylu kabuk yüklü ajanların antineoplastik etkilerinin aktive edilmesinde umut vaat etmiştir.
Mikro kabarcık kanseri uygulamalarındaki bu geleneksel ve genişletilmiş talimatlar, mikro kabarcık kabuklarını radyoaktif izleyicilerle etiketleyerek daha stratejik olarak geliştirilebilir. Hepsi bir arada kargo yüklü mikro kabarcıklar alanında, bu tür radyoetiketleme 1) bu yüklü mikro kabarcık kabuklarının hedef içi ve dışı biyolojik dağılımının altın standart, nicel değerlendirmesini kolaylaştırır, 2) hedefe yönelik teslimatı en üst düzeye çıkarmak için mikro kabarcık bileşimlerinin optimal seçimini bildiren farmakokinetik yapı-aktivite ilişkilerini türetir ve 3) stratejik ve uygun görüntü kılavuzlu uygulama ve tedavi planlamasına rehberlik eder (örneğin, doku hedeflerinin türleri, dozimetri, hedef dışı güvenlik endişelerini azaltmak için ilaç seçimi, geleneksel ortak tedavi paradigmalarına kıyasla fayda) hepsi bir arada kargo yüklü sistemlerin15,19. Klinik öncesi bir aşamada, mikro kabarcık kabuğu kaderinin böyle bir anlayışı, daha geniş mikro kabarcık-FUS etki mekanizmalarını da aydınlatabilir. Örneğin, mikro kabarcık kabuklarından hedef hücrelere lipid transferinin FUS özellikli sonoporasyonu etkilediği gösterilmiştir12,20. Bu tür bir transferin anlaşılması ve optimize edilmesi, sonoporasyonun dahil olduğu preklinik ve klinik mikrokabarcık-FUS tedavilerini (in vitro transfeksiyon, ilaç dağıtımı, tümör ablasyonu, radyasyon duyarlılığı ve sonodinamik tedavi 20,21,22,23,24,25). İkili ultrason ve radyogörüntüleme olanakları, geleneksel çift ajan tasarımları yerine tek bir ajandan FUS damar açma ve tedavi izlemesini (örneğin, BBB açma kinetiği) de mümkün kılacaktır26. Aynı şekilde, lipid mikro kabarcık radyoetiketleme, mikro kabarcık-FUS + radyofarmasötik ortak dağıtım platformlarına hepsi bir arada tek ajanlı mikro kabarcık-FUS / radyoterapi alternatifi olarak hizmet edebilir27.
Mikro kabarcıkların kırılganlığı, bu tür etiketleme için önemsiz bir zorluktur. Mevcut tüm radyoetiketleme stratejileri, mikro kabarcık stabilitesini ve boyutunu bozduğu bilinen saflaştırma metodolojileri ile sınırlıdır, bazıları ise etkisiz ve kararsız radyoetiketlemeözelliğine sahiptir 28,29,30,31,32. Saflaştırma gereksinimleri ayrıca daha uzun protokollere yol açar. Kısa ömürlü radyoizotopların kullanımıyla birleştiğinde (örneğin, 18F t1/2 1.8 h,28,29 99mTc t1/2 6 h,3268Ga t1/2 1 h31), bu, radyoizotop bozunması ile ilgili verimsizlikler yaratır ve radyogörüntüleme ve tedavi planlama zaman dilimlerini sınırlar. Toplu olarak, bu sınırlamalar, kısaltılmış ve temsili olmayan radyogörüntüleme, yanlış farmakokinetik veriler ve verimsiz tümör radyoizotop iletiminin elde edilmesini riske atar.  
Bu raporda, porfirinin güçlü ve stabil metal şelasyon yeteneklerinden yararlanılarak bu sınırlamaların üstesinden gelinmektedir. Porfirinler, yüksek oranda konjuge düzlemsel bir halkaya ve çeşitli metalleri barındırabilen merkezi bir koordinasyon bölgesine sahip organik, heterosiklik makromoleküllerdir. Bu, bakır-64 (t1/2 12.7 h), pozitron emisyon tomografisi (PET) olan bir radyofarmasötik ve γ sayma fizibiliteleri33 gibi daha uzun ömürlü radyoizotopları içerir. Bir lipid omurgasına konjuge edildiğinde, porfirinler supramoleküler yapılara kolayca dahil edilebilir ve daha sonra hız, yüksek şelasyon verimliliği ve serum stabilitesi ile bakır-64 ile etiketlenebilirken, ana etiketlenmemiş partiküllerin özelliklerini korurken33,34. Ayrıca, porfirinler, partikül bozulması üzerine eski haline getirilen nano ve mikropartiküllerde modüler kendi kendine söndürme ile floresan olarak aktiftir; hem toplu hem de mikroskobik kabuk kaderi analizini kolaylaştıran PET ve γ sayımına tamamlayıcı bir okuma (Şekil 1A)15.
Bir şelatör olarak porfirin-lipid kullanılarak, bu özellikler, mevcut mikro kabarcık radyoetiketleme yöntemleriyle ilişkili sınırlamaların üstesinden gelen yeni bir tek kaplı, saflaştırma içermeyen mikro kabarcık radyoetiketleme metodolojisi (Şekil 1B, C) oluşturmak için kullanıldı. Bu protokol %&gt;95 bakır-64 şelasyon verimliliğine ulaşır, etiketleme sonrası saflaştırma gerektirmez ve mikro kabarcık fizikokimyasal özelliklerini korur. Aktivasyonlarından önce lipid mikro kabarcıklarının "topraklanmış" imalatına kolayca entegre edilebilir (Şekil 1B). Çok yönlüdür ve farklı asil lipid zincir uzunluğu (C16 ila C22), yük (nötr ve anyonik) ve porfirin-lipid bileşimleri (%1 mol, mol, 0) ile özel ve ticari mikro kabarcık formülasyonlarında başarıyla uygulanabilir ve hem radyo hem de floresan aktiviteye sahip mikro kabarcıklar oluşturur. Uyarlanabilirliği porfirinin ötesine de uzanabilir. Tek kap protokolü, ticari olarak temin edilebilen alternatif şelatörleri (örneğin, dietilentriamin pentaasetat (DTPA)-lipid) ve floroforları (örneğin, DiI) kullanacak şekilde değiştirilebilir. Ayrıca, "spiking" yaklaşımıyla önceden hazırlanmış mikro kabarcık formülasyonlarını etiketlemek için de değiştirilebilir. Buna göre, bu yöntem, mekanik, görüntüleme ve terapötik mikrokabarcık-FUS uygulamalarını ilerletmek için yararlı olan, özelleştirilmiş, izlenebilir (radyo, floresan veya çift radyo/floresan aktif) mikro kabarcıkların üretilmesini sağlar. Aşağıdaki protokol, lipid mikro kabarcıklarının üretimini, tek hazneli radyoetiketleme protokolünün uygulanmasını, gerekli radyoetiketleme ve fizikokimyasal özellik karakterizasyonunu ve potansiyel modifikasyonları özetlemektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67431/67431fig01v4.jpg"> 
Şekil 1: Mikro kabarcık üretimi ve radyoetiketleme protokolü. (A) Pirofeoforbid-a-lipid formundaki porfirin-lipid, bu protokol içinde multimodal bir şelatör görevi görür. Bakır-64 (i) şelatlı bir monomer olarak, PET ve görüntüleme yeteneklerine sahiptir. Floresansı partikül formunda söndürülür (mikro kabarcıklar (ii) ve çözünme sonrası nanoprogenleri (iii)) ve partikül bozulması (iv) ile söndürülmez. (B) Yerden yukarıya lipid mikro kabarcıkları oluşturmak için bu raporda açıklanan lipit film hidrasyonu/aktivasyon protokolü ve (C) lipid süspansiyon oluşumu ile mikro kabarcık aktivasyonu arasında tek kap radyo etiketlemenin entegrasyonu. Bu rakam Rajora ve ark.15'in izniyle uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67431/67431fig1v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>64CuCl2</td><td>Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi, Mallinckrodt Radyoloji Enstitüsü</td><td>N/A</td><td>Küçük hacimli sipariş (< 10 ve mikro; L) 0.1 N HCl Asetik asit içinde çözülür</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>&ge; % 95 saflıkta</td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amonyum asetat</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Saflık: &ge; %98</td></tr> <tr><td>Denge - analitik</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>0,1 mg'a kadar ölçüm yapabilen</td></tr><tr><td>Banyo sonikatörü</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>69 oC'ye kadar ısıtılabilir</td></tr><tr><td>CC diyafram açıklığı - 30 mikron</td><td>Beckman Coulter</td><td>A36391</td><td>Partikül çapı aralığı: 0.6-18 um</td></tr><tr><td>CC elektrolit</td><td>Beckman Coulter</td><td>8546719</td><td>Isoton II seyreltici</td></tr><tr><td>CC Yazılımı</td><td>Beckman Coulter</td><td>Multisizer 4e</td><td></td></tr><tr><td>Uyumlu mikrosantrifüj tüplü santrifüj filtre üniteleri (0,5 mL 30.000 MWCO)</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC503096</td><td>Amicon Ultra - 0,5 mL</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri - 15 mL kapaklı</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Saflık: &ge; %99,8&nbsp;</td></tr><tr><td>Coulter sayacı</td><td>Beckman Coulter</td><td>B43905</td><td>Multisizer 4e Coulter Sayacı</td></tr><tr><td>Kapak kızakları</td><td>VWR</td><td>48393081</td><td>VWR mikro kapak camı</td></tr><tr><td>CuCl2</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Oksitlenmediğinden emin olun</td></tr><tr><td>CuCl2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Küvet-litre, 1 cm yol uzunluğu</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Küvetleri - CC ölçümleri için 10 mL plastik</td><td>Beckman Coulter</td><td>A35471</td><td>Coulter Counter Accuvette ST</td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>, ultra saf su arıtma sistemi</td></tr><tr><td>DiI (1,1'-Dioktadesil-3,3,3',3'-Tetrametilindokarbosiyanin Perklorat)</td> aracılığıyla elde edilebilir. Herhangi bir <td>şirket</td><td></td><td>Toz formu</td></tr><tr><td>Doz kalibratörü</td><td>Bakır-64</td><td></td> okuyabilen herhangi bir şirket <td></td></tr><tr><td>DPPA (1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfat (sodyum tuzu))Avanti</td> <td>Polar Lipids</td><td>830855P</td><td>Toz form</td></tr><tr><td>DPPC (1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfokolin)</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>850355P</td><td>Toz form</td></tr><tr><td>DPPE-MPEG (1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-N-[metoksi(polietilen glikol)-5000] (amonyum tuzu))Avanti</td> <td>Polar Lipidler</td><td>880200P</td><td>Toz formu</td></tr><tr><td>DTPA-lipid (1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-N-dietilentriamin pentaasetik asit (amonyum tuzu))</td><td>Avanti Polar Lipidler</td><td>790106P</td><td>Toz form</td></tr><tr><td>EDTA (Etilendiamintetraasetik asit)</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gama sayacı</td><td>Bakır-64</td>Gama sayma tüpü itme kapaklarını okuyabilen <td>herhangi bir şirket</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Globe Scientific</td><td>22-171-665</td><td>Flanşlı 12 mm borular için tapa kapakları</td></tr><tr><td>Gama sayma tüpleri</td><td>Sarstedt</td><td>55.1579</td><td>5 mL, 75 x 12 mm, PS</td></tr><tr><td>Cam beher - 250 mL</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>100 oC'ye kadar sıcaklıklara dayanabilir</td></tr><tr><td>Cam kurutma fırını</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>80 oC'ye kadar ısıtılabilir</td></tr><tr><td>Cam mikrolitre şırıngalar - 25, 50, 100, 1000 ve mikro; L</td><td>Organik çözücülerle uyumlu</td><td>herhangi bir şirket</td><td></td></tr><tr><td>Cam sintilasyon şişeleri - 20 mL</td><td>VWR</td><td>66022-081</td><td>VWR&reg; Sintilasyon Şişeleri, Borosilikat Cam, Vidalı Kapaklı, Kağıt hamuru folyo astarlı</td></tr><tr><td>Cam şişeler - 0.5 dram</td><td>VWR</td><td>66011-020</td><td>VWR Flakon 1/2 dram, siyah fenolik vidalı kapaklı ve polivinil yüzlü hamur astarlı</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7757-1L</td><td>Saflık:&nbsp; &ge; %99,0&nbsp;</td></tr><tr><td>Dereceli pipet/tabanca</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıcak/karıştırma plakası</td><td></td><td></td><td>Otomatik sıcaklık kontrolü için sıcaklık probu ile donatılmıştır</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit - 0,1 N</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iTLC plakaları</td><td>Agilent</td><td>A120B12</td><td>&nbsp; iTLC-SA kromatografi kağıdı</td></tr><tr><td>Laboratuvar dokuları</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medya vakum filtrasyon ünitesi</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>0.22 mikron gözenek boyutu, PES membran, 500 mL huni kapasitesi</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Saflık:&nbsp; &ge;% 99.8, HPLC sınıfı, ACS spesifikasyonlarını karşılar</td></tr><tr><td>Steril olmayan mikrosantrifüj tüpleri - 1.5 mL</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri steril - 1,5 mL</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetler - p1000, p200, p20, p10</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td> kalibre <td>edildiğinden emin olun</td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td>Superfrost Plus Mikroskop Slaytları Önceden Temizlenmiş İğneler</td></tr><tr><td>- 18 G</td><td></td><td></td><td>Steril</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8537-500ML</td><td>DPBS, modifiye, kalsiyum klorür ve magnezyum klorür içermeyen, sıvı, steril filtreli, hücre kültürü</td></tr><tr><td>PFP</td><td>FluoroMed</td><td>APF-N40HP</td><td>Saflık:&nbsp; &ge; %99,8</td></tr> <tr><td>PFP hattı</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>1/4 inç çapında plastik hortum kesilmiş yaklaşık 50 cm uzunluğunda</td></tr><tr><td>PFP regülatörü</td><td>Swagelok</td><td>SS-1RF4 ve SS-4HC-1-4</td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH standartları 4 ve 7</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P1000, p200, p10 için pipet uçları - steril olmayan</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P1000, p200, p10 için pipet uçları - steril</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastik şırınga - 1 mL</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Steril</td></tr><tr><td>Propilen glikol</td><td>BioShop</td><td>PRO888.500</td><td>Saflık:&nbsp; &ge; %99,5</td></tr> <tr><td>Piro-lipid</td><td>N/A</td><td></td><td>Şirket içi üretilmiştir</td></tr><tr><td>Kauçuk uçlu forseps</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>İnce uçlu ve düz/kare kenarların karışımı önerilir</td></tr><tr><td>Makas</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit - 1 N</td> Herhangi <td>bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit - 10 N</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spektroflorometre</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>410 nm uyarma ve 600-850 nm emisyon kapasitesine sahiptir</td></tr><tr><td>Spektroflorometri yazılımı</td><td>Horiba</td><td>FluorEssence</td><td></td></tr><tr><td>Spektrometresi</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Şırınga - 1 mL</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Tek kullanımlık, plastik, steril</td></tr><tr><td>Şırınga filtreleri - 0.2 mikron gözenek boyutu</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Membran malzemesi: PES veya amonyum asetat / asetik asit ve PBS ile uyumlu</td></tr><tr><td>Test tüpü - 10 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vakum kurutucu / vakum</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vialmix</td><td>Lantheus Tıbbi Görüntüleme</td><td>515030-0508</td><td>Protokolde mekanik flakon çalkalayıcı olarak anılır</td></tr><tr><td>Tartmak Kağıt</td><td>Herhangi bir şirket</td><td></td><td>Ürünü kaybetmemek için, tartı kağıdını 3x3 cm'lik kareler halinde kesmeniz önerilir</td></tr></tbody></table>

floresan ve radyoaktif İzleyicilerle mikro kabarcıkların Üretilmesi ve etiketlenmesi

Fabricating and Labeling Microbubbles with Fluorescent and Radioactive Tracers

Radyoaktif işaretli mikro kabarcıklar üretilirken ölçülebilir temel sonuçlar, radyokimyasal saflık ve radyo-etiketleme verimliliğidir. Bu protokol, her birini karakterize etmek için sırasıyla iTLC ve doğrulanmış bir santrifüj prosedürü kullanır. Şekil 2A , konakçı lipidin toplam lipidin %1, mol veya 0'lük bileşimlerde piro-lipid ile ikame edildiği ticari mikro kabarcık taklit formülasyonlarında ortalama %≥95'lik radyokimyasal saflıkların ve verimliliklerin elde edildiğini göstermektedir. %1...

Floresan ve Radyoaktif İzleyicilerle Mikro Kabarcıkların Üretilmesi ve Etiketlenmesi

Microbubbles are lipid-shelled, gas-filled particles that have evolved from vascular ultrasound contrast agents into revolutionary cancer therapy ...

fabricating-labeling-microbubbles-with-fluorescent-radioactive

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Tandem kabarcık üretimi için altın nokta çiftleri ve yakındaki tek hücreli modelleme için fibronektin kaplı adalar üretmek üzere bir mikroakışkan çip üretildi. Elde edilen akış alanı, parçacık görüntü hızı ile karakterize edildi ve hücre zarı porasyonu, zar deformasyonu ve hücre içi kalsiyum yanıtı dahil olmak üzere çeşitli biyoetkileri incelemek için kullanıldı.

Tek hücreli Seviyesinde Kavitasyon Kabarcık (ler) -Hücre Etkileşim ve Sonuç biyoetkiler incelenmesi için yüzey Desenlendirme ile mikroakışkan Sistemi

Sunulan protokoller, aktivasyon mekanizmaları ve biyoeffeksleri de dahil olmak üzere ultrason tetiklenen ilaç dağıtım uygulamaları için tasarlanmış floresan etiketli mikrobubbles'ın yanıtını karakterize etmek için kullanılabilir. Bu makale, ilgili uzunluk ve zaman ölçeklerini yakalamak için gerçekleştirilen bir dizi in vitro ve in vivo mikroskopi tekniğini kapsamaktadır.

Ultrason Tetiklenen İlaç Salınımı için Floresan Etiketli Mikrobubbles'ın Karakterizasyonu için Çok Zamanlı Mikroskopi Yöntemleri

Tümör ilerlemesini ve metastazı değerlendirmek için yeşil floresan protein eksprese eden pankreas kanseri hücrelerini (PANC-1 GFP) Ortotopik olarak Balb-c Ola Hsd-Fox1nu farelerinin pankreasına implante etmek için bir prosedür burada sunulmaktadır.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Yeşil floresan protein ve lusiferaz muhabir ifade lentiviral parçacıklar ile hasta edilen ksenograftlan (PDXs) sabit etiketlenmesi için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, birinci bölgede PDXs büyümesini izlemek, hem de in vivo görüntüleme sistemleri kullanarak kendiliğinden ve deney metastazları sağlar.

Tümör Büyüme ve metastaz Çalışmaları İzlenebilir Muhabirleri ile Meme Kanseri Hasta kaynaklı ksenogratflarının Etiketleme

Laparoskopik pancreatoduodenctomy (LPD) mide boşalma ve daha kısa hastanede yatmak erken postoperatif seferberlik, daha az da dahil olmak üzere açık pancreatoduodenectomy avantajları gecikmeli sunabilir. Ancak, LPD Teknik olarak zor ve iyi standart değil, özellikle pankreas anastomoz ile ilgili. LPD sırasında pankreas anastomoz için standart bir tekniği tarif: Blumgart pancreaticojejunostomy değiştirilmiş.

Değiştirilmiş Blumgart Pancreaticojejunostomy ile laparoskopik Pancreatoduodenectomy

Anöploidi sonunda karmaşık karyotypes içeren hücre döngüsü tutuklandı hücreleri üreten genom istikrarsızlık yol açar. Bu kağıt aneuploid hücreleri bölmek için ateşkes karmaşık karyotypes ile izole etmek için basit ve uygun bir yöntem sağlar.

Üretimi ve yalıtım karmaşık Karyotypes içeren hücrelerin hücre döngüsü tutuklandı

Bu iletişim kuralı, prostat kanseri hücreleri, sonraki kastrasyon içi Prostatik enjeksiyon göstermek için hedeftir. Orthotopic önceden klinik androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri hastalığı klinik tümör microenvironment ve immün bir ana bilgisayar bağlamında incelemek için kritik modellerdir.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Burada, hücresel düzeyde protein fosforilasyon olayların orta-yüksek performans analizi için bir protokol sunulmuştur. Fosfo akış sitometresi sinyal aberasyonları karakterize, tanımlamak ve biyolojik doğrulamak ve Özellikler değerlendirmek için güçlü bir yaklaşımdır.

Fosfo akış sitometresi ile floresan hücre barkodlama tek hücre Analizi ve biyomarker keşif sinyal

Burada, floresan peptidler yerli protein yerine parçalanabilir substrat olarak kullanıldığı bir değiştirilmiş zymographic teknik için detaylı bir iletişim kuralı mevcut. Elektroforez floresan peptid zymograms Biyolojik örneklerin daha önceki zymographic teknikleri geniş proteaz tespiti sağlar.

Floresan peptid Zymography tarafından proteaz aktivitesinin algılama

Multiplex floresan immünhistokimya, bozulmamış formalin-sabit, parafin katıştırılmış (FFPE) dokusu içinde birden fazla hücre türlerinin görselleştirilmesini sağlayan gelişmekte olan bir teknolojidir. Sunulan başarılı bir 7-renk Multiplex antikor ve reaktifler optimize etmek için talimatlar, slaytlar, tasarım ve ortak sorunları önlemek için ipuçları hazırlanması sağlamak için yönergeler vardır.

Manuel Multiplex floresan Immünhistokimya 'da optimizasyon, tasarım ve kaçınarak tuzaklar

Öğrenin, lipid mikro kabarcıkların üretimi ve tek adımlı radyoetiketleme yöntemiyle %95'in üzerinde etiketleme verimliliği elde edin. Bu yöntem, fizikokimyasal özellikleri koruyarak kanser görüntüleme ve tedavi uygulamaları için izlenebilir mikro kabarcıklar oluşturur.

Floresan ve Radyoaktif İzleyicilerle Mikro Kabarcıkların Üretilmesi ve Etiketlenmesi

Daha fazla video keşfet