Kapillaroskopi Kullanılarak Farelerde Çivi Yatağı Mikrovasküler Morfolojisinin İnvaziv Olmayan Görüntülenmesi

Laboratuvarımızın ilgi alanlarından biri de nörodejeneratif hastalıklarda vasküler disfonksiyondur. Amacımız, kapillaroskopi ile periferik mikrovasküler patolojiyi tespit etmek ve izlemek, santral sinir sistemi hastalıklarındaki potansiyel rolü hakkında fikir sahibi olmaktır. Hayvanlarda mikrovasküler disfonksiyonu tespit etmek genellikle invazivdir, ex vivo olarak gerçekleştirilir veya pahalıdır. Bu protokol ile araştırmacılar tırnak yatağı mikrovaskülatürünü kolayca ve ucuz bir şekilde değerlendirebilir ve klinik tırnak kıvrımı kapillaroskopi bulgularını hayvan modellerine çevirebilir. Aynalama periferik mikro damar sistemini, tırnak yatağını görselleştirmek için yeni bir konum sunuyoruz. Tırnak kıvrımı kapillaroskopisi ile karşılaştırıldığında, tırnak yatağı kapillaroskopisi, mikrovasküler morfoloji ve yapının daha iyi gözlemlenmesi için daha geniş bir alan sağlar.

[Öğretim Görevlisi] Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi prosedür için ameliyat masasına yerleştirin. Daha sonra korneanın kurumasını önlemek için her iki göze kayganlaştırıcı göz jeli veya steril ilaçsız oftalmik merhem sürün. Daha sonra, hayvanı bir burun konisi kullanarak anestezi altında tutarak, bir aplikatör kullanarak tüm pençeye bol miktarda tüy dökücü krem uygulayın. Pençe ve tırnak yatağı bölgelerinin tam olarak kaplandığından emin olun. Kremi iki dakika beklettikten sonra, tüy dökücü kremi temiz bir mendille dikkatlice temizleyin ve pençeyi ılık steril suda yıkayın. Kürkün çıkarılmasından 24 saat sonra, kapillaroskopi ekipmanını 21,5 ila 22,5 santigrat derece arasında tutulan sıcaklık kontrollü bir odaya kurun. Kapilleroskopu USB bağlantısı üzerinden bir dizüstü bilgisayara bağlayın. Dizüstü bilgisayarda Debut video yazılım uygulamasını açın. Fare uygun şekilde uyuşturulduktan sonra, her iki göze de kayganlaştırıcı göz jeli veya steril ilaçsız oftalmik merhem uygulayın. Kontrastı artırmak ve damar görselleştirmesini iyileştirmek için pençenin altına beyaz laboratuvar bandı veya benzer bir arka plan malzemesi yerleştirin. Şimdi arka pençeyi volarlar tarafı yukarı bakacak şekilde laboratuvar bandı platformuna, objektifin altına yerleştirin. Bir aplikatör kullanarak mikroskop objektifi altında tırnakları ayırmak için ayak parmaklarını nazikçe açın. Optimum damar görüntüleme için tırnak yataklarının net bir şekilde ayrıldığından emin olun. Kapilleroskop tarafından neyin büyütüldüğünü görselleştirin ve net bir görüntü elde etmek için X ve Y aşaması ayarlayıcılarını ve büyütme tekerleğini ayarlayarak tırnak yatağına odaklanın. Parlamayı azaltmak ve odaklanmayı iyileştirmek için, tam tırnak kaplaması sağlayarak pençeye cömertçe daldırma yağı uygulayın. Arka pençenin ikinci basamağının tırnağına odaklanın, çünkü bu en büyük çividir ve farelerde görüntülenmesi en kolay olanıdır. Tekne ağını odaklamak için X ve Y kademe ayarlayıcılarını ve büyütme çarkını ayarlayın. Parlamayı en aza indirmek ve tırnak damarı ağını görünür hale getirmek için hedefi ayarlayın. Bir video kaydetmek için kırmızıya basın Kayıt İlk düğme. Her videoyu uygun proje klasörüne kaydedin ve her videoyu uygun şekilde etiketleyin. Ardından, ImageJ yazılımını açın ve görüntüyü yüklemek için dosyayı yazılım arayüzüne sürükleyin. Parlaklığı ve kontrastı ayarlamak için görüntüyü, ardından Ayarla ve Parlaklık/Kontrast'ı seçin. Bu araç, damar morfolojisini daha iyi görselleştirmek için görüntülerin kontrastını değiştirmeye yardımcı olur. Görüntü ayarlandıktan sonra, Parlaklık/Kontrast aracında Ayarla'ya tıklayın. Son olarak, Dosya, Farklı Kaydet'e gidin ve görüntüyü kaydetmek için Tiff'i seçin. Çivi yataklı vasküler morfoloji kapillaroskopi yöntemi kullanılarak başarılı bir şekilde görüntülendi. Tipik fare tırnağı damar sistemi, afferent bir damar, bir efferent damar ve her ikisini birbirine bağlayan bir kılcal damar ağından oluşuyordu. Çivili kılcal ağ, SV129 / S6 arka planında ve bir C57 / B6J arka planında vahşi tip farelerde gösterildiği gibi, farklı fare suşları arasında tutarlıydı.