Name: Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Öğrenin meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve farelere ortotopik implantasyonu yöntemini. Bu protokol, sistemik tümör yanıtlarını ve kas yorgunluğu mekanizmalarını araştırmak için hızlı, güçlendirilmiş hayvan deneyleri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

<ol><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2020%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 3 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models%3A+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discov. 4 (9), 998-1013 (2014).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+grafts+derived+from+women+with+breast+cancer+authentically+reflect+tumor+pathology%2C+growth%2C+metastasis+and+disease+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes.</a> Nat Med. 17 (11), 1514-1520 (2011).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+renewable+tissue+resource+of+phenotypically+stable%2C+biologically+and+ethnically+diverse%2C+patient-derived+human+breast+cancer+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A renewable tissue resource of phenotypically stable, biologically and ethnically diverse, patient-derived human breast cancer xenograft models.</a> Cancer Res. 73 (15), 4885-4897 (2013).</li>
<li>Yoshida, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+patient-derived+tumor+xenograft+models+and+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Applications of patient-derived tumor xenograft models and tumor organoids.</a> J Hematol Oncol. 13 (1), 1-16 (2020).</li>
<li>Wilson, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+cancer+xenograft+model+implicates+peroxisome+proliferator-activated+receptor+signaling+as+driver+of+cancer-induced+muscle+fatigue%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Human breast cancer xenograft model implicates peroxisome proliferator-activated receptor signaling as driver of cancer-induced muscle fatigue.</a> Clin Cancer Res. 25 (7), 2336-2347 (2019).</li>
<li>Wilson, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+reprogramming+by+breast+cancer+regardless+of+treatment+history+or+tumor+molecular+subtype%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Breast+Cancer%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle reprogramming by breast cancer regardless of treatment history or tumor molecular subtype.</a> NPJ Breast Cancer. 6 (1), 18(2020).</li>
<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD%2FLtSz-scid+IL2R%CE%B3null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2Rγnull mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> J Immunol. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+models+of+human+breast+cancer%3A+Protocols+for+in+vitro+and+in+vivo+applications+in+tumor+biology+and+translational+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived models of human breast cancer: Protocols for in vitro and in vivo applications in tumor biology and translational medicine.</a> Curr Protoc Pharmacol. 14, Unit14.23(2013).</li>
<li>Whittle, J. R., Lewis, M. T., Lindeman, G. J., Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models+of+breast+cancer+and+their+predictive+power%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models of breast cancer and their predictive power.</a> Breast Cancer Res. 17 (1), 17(2015).</li>
<li>Fleming, J. M., Miller, T. C., Meyer, M. J., Ginsburg, E., Vonderhaar, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+regulation+of+human+breast+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Local regulation of human breast xenograft models.</a> J Cell Physiol. 224 (3), 795-806 (2010).</li>
<li>Okano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+achieves+better+engraftment+and+faster+growth+than+subcutaneous+implantation+in+breast+cancer+patient-derived+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mammary+Gland+Biol+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation achieves better engraftment and faster growth than subcutaneous implantation in breast cancer patient-derived xenografts.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 25 (1), 27-36 (2020).</li>
<li>Ryu, A. H., Eckalbar, W. L., Kreimer, A., Yosef, N., Ahituv, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+antibiotics+in+cell+culture+with+caution%3A+Genome-wide+identification+of+antibiotic-induced+changes+in+gene+expression+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Use antibiotics in cell culture with caution: Genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene expression and regulation.</a> Sci Rep. 1 (1), 7533(2017).</li>
<li>Amens, J. N., Bahçecioglu, G., Zorlutuna, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+system+effects+on+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Immune system effects on breast cancer.</a> Cell Mol Bioeng. 14 (4), 279-292 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL tüberkülin şırınga</td><td>BD</td><td>305945</td><td>steril</td></tr><tr><td>1x fosfat tamponlu salin, pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>steril</td></tr><tr><td>2.0 mL yuvarlak tabanlı mikrosantrifüj tüpü</td><td>Eppendorf</td><td>0030123620</td><td>steril</td></tr><tr><td>26 G iğne, & frac12; içinde.</td><td>BD</td><td>305111</td><td>steril</td></tr><tr><td>5.0 mL mikrotüp</td><td>Eppendorf</td><td>0030119401</td><td></td></tr><tr><td>steril 8+ haftalık NSG (NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>#005557</td><td></td></tr><tr><td>Alkol hazırlama pedleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td>steril</td></tr><tr><td>Bazal membran özü (Matrigel)</td><td>Cultrex</td><td>3632-005-02</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler, 6 inç.</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-553</td><td></td></tr><tr><td>Orta Tırtıksız Uçlu Steril Kavisli Forseps, 152 mm</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>50-365-845</td><td>steril</td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS C Tüpleri</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Isıtıcılı Octo ayrıştırıcı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-427</td><td></td></tr><tr><td>10 numaralı neşter bıçakları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-162</td><td>steril</td></tr><tr><td>Dokumasız gazlı bez süngerler, 4x4 inç</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-028-558</td><td>steril</td></tr><tr><td>RPMI 1640 1x + L-Glutamin</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>steril</td></tr><tr><td>Tümör ayrışma kiti, insan</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-929</td><td></td></tr></tbody></table>

meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

High-Throughput Dissociation and Orthotopic Implantation of Breast Cancer Patient-Derived Xenografts

Bu çalışma, farelerde hasta kaynaklı meme kanseri ksenogreftlerinin ortotopik implantasyonu için etkili ve cerrahi olmayan bir yaklaşımı özetlemektedir. Meme tümör dokusu, insana özgü enzimler ve mekanik ajitasyon kullanılarak ayrıştırıldı, Matrigel: RPMI 1640'ın 1: 1 v / v oranında yeniden süspanse edildi ve NSG farelerinin kasık meme yağ yastıklarına orttopik olarak enjekte edildi (Şekil 1 ve Şekil 2). PDX modellerinin aslına uygunluğunu sağlamak için, orijinal hasta tümör örneğinin pasajlı tümörlerle uyumu, yerleşik histopatolojik ve genomik tekniklerle doğrulandı. Reseptör ekspresyonu, östrojen reseptörü (ER), progesteron reseptörü (PR) ve insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 (HER2) dahil olmak üzere standart meme kanseri reseptörlerinin immünohistokimya (IHC) boyaması kullanılarak profillendi (Şekil 3). Hücresel morfoloji, kesitli tümör kesitlerinin hematoksilen ve eozin (H&amp;E) boyaması ve boyanmış kesitlerin uzman patolog yorumu kullanılarak değerlendirildi. Genetik manzaranın korunması ve insan hücrelerinin tutulması, toplu RNA dizilimi ve kısa tandem tekrar (STR) kimlik doğrulaması kullanılarak doğrulandı (Şekil 4 ve Tablo 1). Ek olarak, patojen testi, immün yetmezliği olan farelerin kullanımı göz önüne alındığında önemli bir doğrulama adımı olan hastada veya pasajlı tümör örneklerinde herhangi bir kontaminasyon tespit etmedi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67607/67607fig1.jpg"> 
Şekil 1: Protokole genel bakış. Tümör ayrışması ve enjeksiyon iş akışının temsili. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67607/67607fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
NSG fareleri, kasık meme yağ yastıkçığı alanından kürkü tamamen çıkarmak için saat yönünde ve saat yönünün tersine değişen hareketlerle uygulanan bir tüy dökücü krem kullanılarak enjeksiyona hazırlandı (Şekil 2A). Fazla tüy dökücü krem açıkta kalan karın derisinden steril gazlı bez ile silindi ve bölge alkollü ped ile dezenfekte edildi (Şekil 2B). Ayrışmış tümör hücreleri yüklü steril bir iğne, dördüncü inguinal meme başı meme yağ yastıkçıklarına yaklaşık 45 derecelik bir açıyla 0.5-1 mm kaudal olarak yerleştirildi (Şekil 2C). Tümör hücreleri kontrollü bir şekilde dördüncü inguinal meme başı meme yağ yastıkçıklarına enjekte edildi (Şekil 2D). Tümör büyümesi başlangıçta yağ yastıkçıklarının dijital palpasyonu ile tespit edildi. Daha sonra, tümör hacmi ilerlemesi manyetik rezonans görüntüleme (MRG) kullanılarak kantitatif olarak izlendi (Şekil 2E). Hem vücut ağırlığı (Şekil 2F) hem de tümör hacimleri (Şekil 2G), ağırlıktaki dalgalanmaları ve tümör hacimlerinin ilerlemesini izlemek için haftalık olarak ölçüldü. Tümörler, erken sonlandırmayı gerektirecek ülserasyon gibi yaraları izlemek için görsel olarak incelendi. PDX'in inguinal meme yağ yastıkçıklarında başarılı bilateral aşılanması Şekil 2H'de gösterilmiştir ve tümörlerin eksizyonunu takiben yağ yastıkçıkları Şekil 2I'de gösterilmiştir.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67607/67607fig2.jpg"> 
Şekil 2: Farelerin hazırlanması, PDX enjeksiyonu ve tümör ilerlemesinin izlenmesi. (A) Meme yağ yastıkçıkları iyice epilasyon yapıldı. (B) Hedef enjeksiyon alanlarının net bir şekilde görülebilmesi ile enjeksiyon bölgesinin sunumu. (C) Şırınganın yağ pedi üzerindeki konumu, iğne uzunluğuna bağlı olarak tipik olarak kaudal ila yağ pedi. Beyaz ok, yerleştirme sırasında iğne için hedef alanı gösterir. (D) Sol dördüncü kasık meme ucu meme yağ yastığına ayrışmış hücre enjeksiyonunun tasviri. İğne, enjeksiyon için gösterildiği gibi yaklaşık 45 derecelik bir açıyla tutulmalıdır. (E) Enjeksiyon bölgesinde bilateral olarak aşılanmış tümörlerin temsili MRG görüntüsü. Tümörler yeşil renkle vurgulanmıştır. (F) Tümör hücresi enjeksiyonunu takiben vücut ağırlıklarının gram cinsinden temsili ilerlemesi (n = 5). Koyu mavi çizgi, önemli ölçüde sıfırdan farklı olan basit doğrusal regresyonu temsil eder (p &lt; 0.0001); Fareler ortalama olarak 22 mg kazandı.Gün-1<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67607/67607fig2large.jpg" target="_blank"></a>&amp;E<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67607/67607fig3.jpg"> &amp;E&amp;E&amp;E<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67607/67607fig3large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:font-size="7px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td></td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr><tr><td></td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td></td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr></tbody></table><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67607/67607fig4.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67607/67607fig4large.jpg" target="_blank"></a>

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Patient-derived xenografts (PDXs) provide a clinically relevant method for recapitulating tumor-involved cell types and the tumor microenvironment, which ...

high-throughput-dissociation-orthotopic-implantation-breast-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, insan kaynaklı melanom hücreleri, bağışıklığı baskılanmış bir farenin yan bölgesine deri altından implante ediliyor. PDX modeli, in vivo koşullarda gözlenen tümör heterojenliğini ve melanom agresifliğini daha iyi özetleyen melanom hücrelerinin klinik öncesi araştırmasına izin verir.

Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellemesi: Melanom Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Yeşil floresan protein ve lusiferaz muhabir ifade lentiviral parçacıklar ile hasta edilen ksenograftlan (PDXs) sabit etiketlenmesi için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, birinci bölgede PDXs büyümesini izlemek, hem de in vivo görüntüleme sistemleri kullanarak kendiliğinden ve deney metastazları sağlar.

Tümör Büyüme ve metastaz Çalışmaları İzlenebilir Muhabirleri ile Meme Kanseri Hasta kaynaklı ksenogratflarının Etiketleme

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Burada bir tümörün genomik yapısına dayalı olarak seçilen hedefe yönelik tedavilerin etkinliğini test etmek için bir protokol sayılacağız. Protokol, yapısal DNA düzenlemelerinin tanımlanması ve doğrulanması, hastaların tümörlerinin farelere engraftasyonu ve ilgili ilaçlara verilen yanıtların test edilmesi olarak tanımlanmaktadır.

Yapısal DNA Alterasyon Analizi ve Hasta Kaynaklı Ksenogreftler Kullanılarak Kanserde Hedefli Tedavilerin Test Edilmesi

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Kemik metastazı modellerinde metastaz düzgün bir şekilde veya %100 insidansla gelişmez. Doğrudan intraosseöz tümör hücresi enjeksiyonu akciğerin embolizasyonu ile sonuçlanabilir. Primer kemik tümörlerini ve kemik metastazlarını, kemik içine solid tümör grefti implantasyonu kullanılarak modelleyen, tekrarlanabilir engraftman ve büyümeye yol açan tekniğimizi sunuyoruz.

Primer Kemik Tümörleri ve Kemik Metastazlarının Solid Tümör Grefti İmplantasyonu ile Modellenmesi

Ortotopik pediatrik beyin tümörü modellerinin geliştirilmesi, kanser hücrelerini hassas bir şekilde implante etmek için stereotaksik bir cihaz kullanarak titiz bir hassasiyet gerektirir. Burada sunulan metodoloji, beyin tümörü hücrelerinin hazırlanması, intrakraniyal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi ve beyin tümörü aşılanmasını değerlendirmek için ameliyat sonrası bir izleme sisteminin uygulanmasında yer alan adımları özetlemektedir.

Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması

Bu protokolün amacı, araştırmacılara intrakraniyal implantasyonlar için son derece tekrarlanabilir bir teknik sunmaktır.

Farelerde glioblastoma hasta kaynaklı ksenograft hücre hatlarının stereotaktik intrakranial implantasyonu

Öğrenin meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve farelere ortotopik implantasyonu yöntemini. Bu protokol, sistemik tümör yanıtlarını ve kas yorgunluğu mekanizmalarını araştırmak için hızlı, güçlendirilmiş hayvan deneyleri sağlar.

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Daha fazla video keşfet