Name: Miyeloid Hücreler ve CAR T Hücreleri Arasındaki Etkileşimlerin İn Vitro ve İn Vivo Olarak İncelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: Öğrenin, manto hücreli lenfoma bağlamında insan immünsüpresif makrofajların CAR T hücreleri üzerindeki etkisini incelemek için basitleştirilmiş in vitro ve in vivo modelleri. Bu yöntemler, makrofaj hedefli immünoterapilerin test edilmesini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Aşağıdaki protokol, Mayo Clinic'in Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB), Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi (IBC) ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi protokolü A00001767 kapsamındaki Karşılaştırmalı Tıp Anabilim Dalı'nın yönergelerini takip etmektedir.
1. İn vitro çalışma için insan klasik monositlerinin hazırlanması
<ol>
	<li>Periferik kan mononükleer hücrelerini (PBMC'ler) daha önce tarif edildiği gibi sağlıklı kan donörlerinden izole edin9. Kısaca, tam kanı PBS'de 1: 1 hacim oranında% 2 FBS ile seyreltin, ardından yoğunluk gradyan ortamında PBMC izolasyonu yapın.</li>
	<li>İnsan klasik monositlerini (CD14+CD16-) üreticinin talimatlarına göre negatif manyetik boncuk seçimi ile hasat edilen PBMC'lerden izole edin (Malzeme Tablosu). Kısaca, uygun sayıda PBMC'yi izolasyon tamponu ile yıkayın ve üreticinin talimatlarına göre belirtilen hacimdeki hücreleri yeniden süspanse edin. Klasik monositler dışındaki hücreleri bir antikor kokteyli ve manyetik mikro boncuklarla etiketleyin. Sütunlarda monosit olmayanları korurken, akıştan klasik monositleri toplayın. NOT: Tüm PBMC'lerin %5'inin klasik monositler olduğunu varsayalım ve PBMC'lerin başlangıç hücre sayısını buna göre ayarlayın. Kalan PBMC'leri adım 1.7'de monosit popülasyonunun saflık onayı için saklayın. Klasik monositler her zaman önceden kriyoprezervasyon yapılmadan taze PBMC'lerden izole edilmelidir.</li>
	<li>Bir hücre sayacı (Malzeme Tablosu) kullanarak izole edilmiş monositlerin sayısını sayın ve hücreleri 5 dakika boyunca 4 ° C'de 300 x g'da döndürün. Son konsantrasyon olarak 1 x 106 hücre / mL'ye ulaşmak için hücre izolasyon tamponundaki hücreleri yeniden askıya alın. 100 μL hücre süspansiyonu alın ve düz tabanlı 96 oyuklu bir plakaya aktarın.</li>
	<li>Akış sitometrisi ile klasik monosit popülasyon saflığını doğrulamak için 1 x 105 PBMC'yi negatif geçit kontrolü ile aynı plakaya aktarın. Hücreleri 3 dakika boyunca 4 ° C'de 300 x g'da döndürün. 1.5-1.12 adımlarında izole edilmiş monositleri buz üzerinde tutun.</li>
	<li>Hücreleri 200 μL FACS tamponu ile yeniden süspanse ederek yıkayın ve hücreleri 3 dakika boyunca 4 ° C'de 300 x g'da döndürün. Süpernatanları dikkatlice boşaltın.</li>
	<li>Her numune için, 0.3 μL canlı/ölü reaktif (405 nm'de uyarma), 0.5 μL APC konjuge anti-insan CD1410 (1 ng/μL) ve 0.5 μL PE konjuge anti-insan CD1611 (1 ng/μL; Malzeme Tablosu). NOT: Boyamayı tutarlı tutmak için, toplam numune sayısına göre birden fazla numune için bir ana karışım yapın. Her kuyucuğa 50 μL boyama solüsyonu aktarın.</li>
	<li>Her bir oyuğa 50 μL boyama solüsyonu ekleyin ve kabarcıkları önlemek için hücreleri hafifçe karıştırın. Hücreleri karanlıkta oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin.</li>
	<li>Her bir oyuğa 200 μL FACS tamponu ekleyin ve hücreleri 3 dakika boyunca 4 ° C'de 300 x g'da döndürün. Süpernatanları dikkatlice boşaltın.</li>
	<li>Her bir oyuğa 200 μL FACS tamponu ekleyerek yıkayın ve hücreleri 3 dakika boyunca 4 ° C'de 300 x g'da döndürün. Süpernatanları dikkatlice boşaltın ve hücreleri 200 μL FACS tamponunda yeniden süspanse edin. Numuneleri bir akış sitometresinde çalıştırın (Malzeme Tabloları).</li>
	<li>Kapı CD14 + CD16- nüfus. İdeal bir saflık için CD14 + CD16- </li></ol><ol><li></li><li> </li><li><li><li> </li></ol><ol><li> </li><li></li><li><li></li><li></li><li> </li><li></li><li><li></li><li></li><li></li><li> <ol><li></li></ol></li><li> </li><li> </li><li> </li><li></li><li><li></li><li></li><li></li><li></li><li> </li></ol><ol><li> </li><li><li></li><li></li><li> </li><li></li><li></li><li> <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68013/68013eq01v2.jpg" style="margin: auto;"></li><li> </li></ol><ol><li> </li><li></li><li><li><li></li><li></li><li> </li><li></li><li></li><li><li><li> </li></ol><ol><li> </li><li></li><li><li><li></li><li></li><li></li><li> </li><li></li><li> </li><li><li><li></li><li><li><li><li></li><li> </li><li> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/68013/68013eq02.jpg" style="margin: auto;"> </li><li> </li><li></li><li></li><li> </li></ol><ol><li> </li><li></li><li></li><li> </li><li></ol>

<ol><li>Yun, K., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Who+wins+the+combat%2C+CAR+or+TCR%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Who wins the combat, CAR or TCR.</a> Leukemia. 37 (10), 1953-1962 (2023).</li>
<li>Neelapu, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axicabtagene+Ciloleucel+CAR+T-Cell+Therapy+in+Refractory+Large+B-Cell+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+J+Med%22%5BJournal%5D)">Axicabtagene Ciloleucel CAR T-Cell Therapy in Refractory Large B-Cell Lymphoma.</a> New England J Med. 377 (26), 2531-2544 (2017).</li>
<li>Shah, N. N., Fry, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+resistance+to+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of resistance to CAR T cell therapy.</a> Nat Rev Clin Oncol. 16 (6), 372-385 (2019).</li>
<li>Kiss, M., Caro, A. A., Raes, G., Laoui, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Reprogramming+of+Monocytes+in+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Fronti+Oncol%22%5BJournal%5D)">Systemic Reprogramming of Monocytes in Cancer.</a> Fronti Oncol. 10, (2020).</li>
<li>Rodriguez-Garcia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cell-mediated+depletion+of+immunosuppressive+tumor-associated+macrophages+promotes+endogenous+antitumor+immunity+and+augments+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">cell-mediated depletion of immunosuppressive tumor-associated macrophages promotes endogenous antitumor immunity and augments adoptive immunotherapy.</a> Nat Commun. 12 (1), (2021).</li>
<li>Kankeu Fonkoua, L. A., Sirpilla, O., Sakemura, R., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cell+therapy+and+the+tumor+microenvironment%3A+Current+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncolyt%22%5BJournal%5D)">CAR T cell therapy and the tumor microenvironment: Current challenges and opportunities.</a> Mol Ther Oncolyt. 25, 69-77 (2022).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elutriated+lymphocytes+for+manufacturing+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Elutriated lymphocytes for manufacturing chimeric antigen receptor T cells.</a> J Trans Med. 15 (1), (2017).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+cells+in+peripheral+blood+mononuclear+cell+concentrates+inhibit+the+expansion+of+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Myeloid cells in peripheral blood mononuclear cell concentrates inhibit the expansion of chimeric antigen receptor T cells.</a> Cytotherapy. 18 (7), 893-901 (2016).</li>
<li>Sterner, R. M., Cox, M. J., Sakemura, R., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+crispr%2Fcas9+to+knock+out+gm-csf+in+car-t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using crispr/cas9 to knock out gm-csf in car-t cells.</a> J Vis Exp. (149), e59629(2019).</li>
<li>Ali, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1+blockade+and+CDK4%2F6+inhibition+augment+nonoverlapping+features+of+T+cell+activation+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">PD-1 blockade and CDK4/6 inhibition augment nonoverlapping features of T cell activation in cancer.</a> J Exp Med. 220 (4), e20220729(2023).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+and+Metabolomic+Characterization+of+SARS-CoV-2-Infected+Cynomolgus+Macaque+at+Early+Stage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Proteomic and Metabolomic Characterization of SARS-CoV-2-Infected Cynomolgus Macaque at Early Stage.</a> Front Immunol. 13, 954121(2022).</li>
<li>Ruella, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+immunosuppressive+tumor+microenvironment+of+Hodgkin+lymphoma+using+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Dis%22%5BJournal%5D)">Overcoming the immunosuppressive tumor microenvironment of Hodgkin lymphoma using chimeric antigen receptor T cells.</a> Cancer Dis. 7 (10), 1154-1167 (2017).</li>
<li>Sakemura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Clinically+Relevant+Reporter+for+Chimeric+Antigen+Receptor+T-cell+Expansion+Trafficking%2C+and+Toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a Clinically Relevant Reporter for Chimeric Antigen Receptor T-cell Expansion Trafficking, and Toxicity.</a> Cancer Immunol Res. 9 (9), 1035-1046 (2021).</li>
<li>Sterner, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GM-CSF+inhibition+reduces+cytokine+release+syndrome+and+neuroinflammation+but+enhances+CAR-T+cell+function+in+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">GM-CSF inhibition reduces cytokine release syndrome and neuroinflammation but enhances CAR-T cell function in xenografts.</a> Blood. 133 (7), 697-709 (2019).</li>
<li>Smith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Three-Dimensional+Skin+Disease+Model+to+Assess+Macrophage+Function+in+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Meth%22%5BJournal%5D)">A Novel Three-Dimensional Skin Disease Model to Assess Macrophage Function in Diabetes.</a> Tissue Eng Meth. 27 (2), 49-58 (2021).</li>
<li>Nowak, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-inflammatory+monocyte+profile+in+patients+with+major+depressive+disorder+and+suicide+behaviour+and+how+ketamine+induces+anti-inflammatory+M2+macrophages+by+NMDAR+and+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Pro-inflammatory monocyte profile in patients with major depressive disorder and suicide behaviour and how ketamine induces anti-inflammatory M2 macrophages by NMDAR and mTOR.</a> EBioMedicine. 50, 290-305 (2019).</li>
<li>Ajith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mouse+Model+as+a+Novel+Approach+in+the+Assessment+of+Human+Allogeneic+Responses+in+Organ+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Humanized Mouse Model as a Novel Approach in the Assessment of Human Allogeneic Responses in Organ Transplantation.</a> Front Immunol. 12, 687715(2021).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Exp Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
<li>Hickman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+Exposure+Times+for+Irreversible+Euthanasia+with+Carbon+Dioxide+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Animal+Sci%22%5BJournal%5D)">Minimal Exposure Times for Irreversible Euthanasia with Carbon Dioxide in Mice and Rats.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 61 (3), 283-286 (2022).</li>
<li>Zhou, R., Mei, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhou%2C+R+%22Neural+Development%3A+Methods+and+Protocols%22">Neural Development: Methods and Protocols</a>. , Humana Press. Totowa, NJ. (2013).</li>
<li>Gutierrez-Ruiz, O. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+DOCK8+regulates+lysosome-mediated+pancreatic+tumor+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of DOCK8 regulates lysosome-mediated pancreatic tumor cell invasion.</a> Cell Rep. 42 (9), 113042(2023).</li>
<li>Kirkiles-Smith, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Humanized+Mouse+Model+to+Study+the+Role+of+Macrophages+in+Allograft+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Development of a Humanized Mouse Model to Study the Role of Macrophages in Allograft Injury.</a> Transplantation. 87 (2), 189-197 (2009).</li>
<li>Chuprin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+models+for+immuno-oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse models for immuno-oncology research.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (3), 192-206 (2023).</li>
<li>Yun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+immunosuppressive+features+of+monocytes+suppress+CAR-T19+through+IL-1+pathway+modulation+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intrinsic immunosuppressive features of monocytes suppress CAR-T19 through IL-1 pathway modulation in mantle cell lymphoma.</a> Mol Ther Oncol. 33 (2), 200985(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,5 mL şırınga</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL mikrosantrifüj tüpü</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>1415-2508&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konik tüp</td><td>Corning Yaşam Bilimleri</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>24-kuyu transwell plaka (0.4 &mu; m)</td><td>Corning Yaşam Bilimleri</td><td>3397</td><td></td></tr><tr><td>50 mL konik tüp</td><td>Corning Yaşam Bilimleri</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7-konjuge anti-insan CD206</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>321119</td><td>Akış antikoru</td></tr><tr><td>APC konjuge anti-insan CD14</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>325607</td><td>Akış antikoru</td></tr><tr><td>APC konjuge anti-insan CD3</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>344811</td><td>Akış antikoru</td></tr><tr><td>autoMACS Durulama Solüsyonu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>Classcial monosit izolasyon tamponu&nbsp;</td></tr><tr><td>Bazal Membran Matrisi</td><td>Corning Yaşam Bilimleri</td><td>CLS356237</td><td>Çözündürülmüş bazal membran matrisi</td></tr><tr><td>Hücre kültürü ortamı</td><td></td><td></td><td>%10 insan AB serumu %1 penisilin-streptomisin-glutamin X-VIVO'da 15 Serumsuz Hematopoietik Hücre Ortamı</td></tr><tr><td>Klasik monosit izolasyon kiti, insan</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-117-337</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX Sistemi&nbsp; B5-R3-V5</td><td>Beckman Coulter</td><td>C04652 (İngilizce)</td><td>Akış sitometresi</td></tr><tr><td>D-lusiferin</td><td>Altın Biyoteknoloji</td><td>ŞANS-1G</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (Dulbecco'nun fosfat tamponlu salini)</td><td>Gibco</td><td>14190250&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Göz merhemi</td><td>Termo Fisher</td><td>19-090-832</td><td></td></tr><tr><td>FACS arabelleği</td><td></td><td></td><td>PBS'de %2 FBS %1 sodyum azid</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Corning Yaşam Bilimleri</td><td>35-011-CV</td><td></td></tr><tr><td>Düz tabanlı 96 oyuklu plaka</td><td>Corning Yaşam Bilimleri</td><td>CLS3997</td><td></td></tr><tr><td>Isıyla inaktive edilmiş havuzlanmış insan AB serumu&nbsp;</td><td>Yenilikçi Araştırma</td><td>4931</td><td></td></tr><tr><td>İnsan TruStain FcX (Fc Reseptör Bloke Edici Solüsyon)</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran sıvı&nbsp; &nbsp;</td><td>Piramal İlaç Sınırlı</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spektrum İn Vivo Görüntüleme Sistemi</td><td>PerkinElmer Ödülü</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>JeKo-1 hücre hattı kültür ortamı</td><td></td><td></td><td>%10 FBS RPMI-1640 ortamında %1 penisilin-streptomisin-glutamin</td></tr><tr><td>Canlı/ölü Düzeltilebilir Aqua Ölü Hücre Leke Kiti, 405 nm uyarımı için</td><td>Davetli</td><td>L34966 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>LS sütunu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Negatif boncuk seçimi</td></tr><tr><td>Lenfoprep</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>07811</td><td>Yoğunluk gradyan ortamı</td></tr><tr><td>MACS BSA Stok Çözümü</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>Classcial monosit izolasyon tamponu&nbsp;</td></tr><tr><td>Fare-anti-insan CD206 antikoru, AF546&nbsp ile konjuge edilmiştir;</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>SC-376232</td><td></td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid&nbsp; Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) fareleri</td><td>Jackson Laboratuvarı&nbsp;</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>PE konjuge anti-insan CD16</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>302007</td><td>Akış antikoru</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin-Glutamin (100x), Sıvı</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>PerCP-konjuge anti-insan CD163</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>333625</td><td>Akış antikoru</td></tr><tr><td>AF647 ile konjuge tavşan-anti-insan iNOS antikoru&nbsp;</td><td>Protein teknolojisi</td><td>CL647-18985</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan GM-CSF'si</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>78015</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 orta</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>SepMate-50 IVD</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>85450</td><td>PBMC izolasyonu yoğunluk gradyan santrifüjü ile&nbsp;</td></tr><tr><td>Sodyum Azid, %5 (a/h)</td><td>Ricca Kimya</td><td>7144.8-16</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü ile işlenmiş 48 oyuklu plaka</td><td>Corning Yaşam Bilimleri</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>Vi-cell XR Hücre Canlılığı Analiz Cihazı</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>Hücre sayacı</td></tr><tr><td>X-VIVO 15 Serumsuz Hematopoietik Hücre Ortamı</td><td>Lonza</td><td>04-418Soru</td><td></td></tr></tbody></table>

miyeloid hücreler ve car t hücreleri arasındaki etkileşimlerin İn vitro ve İn vivo olarak İncelenmesi

Studying Interactions between Myeloid Cells and CAR T Cells In Vitro and In Vivo

Bu protokolün amacı, etkileşimlerin karmaşık doğası ve dinamikleri ve sınırlı mevcut ksenogreft modelleri nedeniyle insan immünosupresif makrofajları ve CART hücreleri arasındaki etkileşimleri incelemek için hem in vitro hem de in vivo modeller oluşturmaktır. Protokolü takiben, izole edilmiş insan klasik monositleri, M2 benzeri fenotipler elde etmek ve fonksiyonel olarak immünosupresif hale gelmek için farklılaştırılır.
İzole edilmiş insan klasik monositlerinin saflığını doğr...

Miyeloid Hücreler ve CAR T Hücreleri Arasındaki Etkileşimlerin İn Vitro ve İn Vivo Olarak İncelenmesi

Chimeric antigen receptor T (CART) cell therapy has led to remarkable clinical successes treating hematological malignancies. However, most patients ...

studying-interactions-between-myeloid-cells-car-t-cells-vitro

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu video, kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücresi aktivitesini doğrulamak için bir in vitro testi göstermektedir. CD19 antijeni ve sitoplazmik lusiferaz eksprese eden B hücreli lenfoma hücreleri, CD19'a özgü CAR T hücreleri ile birlikte kültürlenir. Bir tümör üzerinde CD19'a CAR bağlanması, CAR T hücrelerinin tümör hücresi sitotoksisitesine neden olan sitokinleri ve toksinleri serbest bırakmasına neden olur. CAR T hücresi aktivitesi, tümör hücrelerinde salınan sitokin ve azalmış lusiferaz...

Tümöre Özgü CAR T Hücrelerinin Anti-Tümör Aktivitesini Değerlendirmek için İn Vitro Test

Burada, bir protokol saf CD4 T hücre (T hücre) etkinleştirme, yayılması ve GM-CSF kemik iliği (BM) tarafından indüklenen Th1 farklılaşma vivo içinde belirlenmesi için mevcut-dendritik hücreler (DC) türetilmiş. Ayrıca, bu iletişim kuralını BM ve T-hücre izolasyon, DC üretimi ve DC ve T hücreli evlat edinen transfer açıklar.

Vivo fare modeli ölçü saf CD4 T Hücre aktivasyonu, yayılması ve kemik iliği türevi dendritik hücreler tarafından indüklenen Th1 farklılaşma

Burada, üretim ve retroviral iletim ve kullanımı karşı kurulan syngeneic A20 B hücreli lenfoma veya lymphodepleting olmadan BALB/c farelerde tedavi olarak fare CD19 araba T hücrelerinin önceden klinik test için bir iletişim kuralı mevcut önceden Klima.

Syngeneic fare B hücreli lenfoma manken CD19 araba T hücrelerinin önceden klinik değerlendirme için

Burada, antitümör T hücre etkinlik fenotipik ve fonksiyonel analiz için izin veren bir tüp bebek ortak kültür yöntemi yinelemeli olarak meydan tümör hedefli T hücreleri, açıklayın.

Vitro tümör hücre Rechallenge içinde akıllı Chimeric antijen reseptör T hücre antitümör işlevi değerlendirilmesi için

Biz güvenilir şemerik antijen reseptörü oluşturmak için bir yaklaşım tarif (CAR) T hücreleri ve in vitro ve in vivo onların farklılaşma ve fonksiyon test.

İmal İmmünoterapi için İmkanerik Antijen Reseptör (CAR) T Hücreleri

Bu protokol, retroviral vektör üretimini ve murin T hücresi transdüksiyonunu kolaylaştırarak fare CAR-T hücrelerinin verimli bir şekilde üretilmesini kolaylaştırır.

Murin kimerik antijen reseptörü (CAR)-T hücrelerinin verimli üretimi

Bu protokol, kantitatif analiz ile belirli çevresel koşullar altında primer murin T hücresi izolasyonu ve T hücresi göçünün hızlandırılmış mikroskobu için bir yöntem sağlar.

Primer Murin CD8 + T Hücreleri için Gerçek Zamanlı İn Vitro Migrasyon Testi

Mevcut protokol, önceden tedavi edilmiş tümör hücreleri ile allojenik bir ko-kültür sisteminde insan T hücresi stimülasyonunun ex vivo analizine izin veren deneysel bir iş akışını açıklamaktadır.

Önceden İşlem Görmüş Tümör Hücrelerinin Allojenik Ko-Kültür Ortamında İnsan T Hücresi Aktivitesinin Analizi

Burada, tek hücre düzeyinde hücre öldürmeyi incelemek için bir T hücresini ve bir kanser hedef hücresini kapsülleyen çift emülsiyon damlacıkları oluşturmak için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, büyük bir T hücresi popülasyonu içinde hem sitotoksik moleküllerin hem de hedef hücre apoptozunun ikili miktar tayinine izin verir.

Kimerik Antijen Reseptörü T hücrelerini Tek Hücre Düzeyinde Değerlendirmek için Damlacık Bazlı Sitotoksisite Testi

Bu protokol, birincil T hücrelerinin yetiştirilmesi için temel adımları tanımlar; bunların izolasyonu, aktivasyonu, genişlemesi ve mRNA elektroporasyonu ile geçici transfeksiyonu dahildir. Ayrıca, fenotip, aktivasyon belirteçleri, canlılık ve kimerik antijen reseptörü (CAR) ekspresyonunun akış sitometrik analizi için bir iş akışı ve antikor paneli önerilmektedir.

Birincil insan T hücrelerinin izolasyonu, yetiştirilmesi ve geçici transfeksiyonu için kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri üretmek

Öğrenin, manto hücreli lenfoma bağlamında insan immünsüpresif makrofajların CAR T hücreleri üzerindeki etkisini incelemek için basitleştirilmiş in vitro ve in vivo modelleri. Bu yöntemler, makrofaj hedefli immünoterapilerin test edilmesini kolaylaştırır.

Miyeloid Hücreler ve CAR T Hücreleri Arasındaki Etkileşimlerin İn Vitro ve İn Vivo Olarak İncelenmesi

Daha fazla video keşfet