Sıçan Optik Sinirine Enjeksiyon için Transkonjonktival Yaklaşım

Bu araştırma, tip 1 nörofibromatozisli hastalarda optik sinire tedavi sağlamak için daha etkili yöntemler geliştirmeyi amaçlamaktadır. Protokolümüz, deneysel çalışma için sıçan optik sinirine erişmek için daha iyi teknikler keşfetmeye odaklanmaktadır. Bu protokol, minimal invaziv olma avantajını sunarak kutanöz insizyon ihtiyacını ortadan kaldırır.

[Gösterici] Başlamak için, dişli forseps kullanarak inferotemporal kadrandaki konjonktivayı kavrayın. Radyal konjonktival bir insizyon oluşturmak için Westcott makasını kullanın ve ardından inferonazal kadranda tendon fasyasını açın. Üstteki orbital dokuyu çıkarmak için künt diseksiyon kullanın. Dişli forseps kullanarak gözü nazal olarak döndürün. Optik siniri izole etmek için asistanın inferotemporal kadrana bir omurilik kancası takmasını sağlayın. Forseps veya pamuk uçlu bir aplikatör ile künt diseksiyon kullanarak, optik siniri ve kılıfı ortaya çıkarmak için kalan orbital dokuyu ve tendon fasyasını çıkarın. 10 mikrolitre veya 1 mililitre şırıngaya bağlı 33 gauge bir iğne kullanarak optik sinir kılıfını delin. Malzemenin doğrudan sinire enjekte edildiğinden emin olmak için doğrudan görselleştirme altında optik sinire değişen konsantrasyonlarda adeno-ilişkili virüs EGFP veya Hindistan mürekkep boyası enjekte edin. İnsizyon bölgesini kaplamak için konjonktivayı limbusa yeniden yaklaştırın. Bu şekil, bir transkonjonktival enjeksiyon tekniği kullanılarak sıçan optik sinirine başarılı ve başarısız adeno-ilişkili virüs EGFP iletiminin sonuçlarını göstermektedir. Başarılı optik sinir enjeksiyonu, sinir dokusu içinde yaygın bir yeşil floresan sinyali ile sonuçlandı ve bu da adeno-ilişkili virüs EGFP vektörünün etkili bir şekilde penetrasyonunu gösterdi. Başarısız enjeksiyon, sadece optik sinirin dış kenarı boyunca yeşil bir sinyal gösterdi, bu da materyalin sızdığını ve sinir dokusuna girmediğini düşündürdü.