Name: Sıçan Optik Sinirine Enjeksiyon için Transkonjonktival Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 2 min 33 s
Description: Öğrenin, sıçan optik sinirine transkonjonktival yaklaşımla minimal invaziv enjeksiyon tekniğini. Bu yöntem, nörofibromatoz tip 1 araştırmalarında terapötik ajanların etkili teslimatını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Korn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+neuroprotective+effects+of+methylprednisolone+and+surgical+decompression+in+a+rodent+model+of+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the neuroprotective effects of methylprednisolone and surgical decompression in a rodent model of traumatic optic neuropathy.</a> Curr Eye Res. 47 (3), 461-467 (2022).</li>
<li>Lim, J. Y., Utzschneider, D. A., Sakatani, K., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+attenuation+of+GABA+sensitivity+in+the+maturing+myelin-deficient+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The attenuation of GABA sensitivity in the maturing myelin-deficient rat optic nerve.</a> Brain Res Dev Brain Res. 72 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Singh, D., Dromel, P. C., Perepelkina, T., Baranov, P., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C6+cell+injection+into+the+optic+nerve+of+long-evans+rats%3A+A+short-term+model+of+optic+pathway+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">C6 cell injection into the optic nerve of long-evans rats: A short-term model of optic pathway gliomas.</a> Cell Transplant. 29, 963689720964383(2020).</li>
<li>Schwaner, S. A., Feola, A. J., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+optic+nerve+head+biomechanics+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Factors affecting optic nerve head biomechanics in a rat model of glaucoma.</a> J R Soc Interface. 17 (165), 20190695(2020).</li>
<li>Ellouze, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+allotopic+expression+of+the+human+mitochondrial+ND4+prevents+blindness+in+a+rat+model+of+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Optimized allotopic expression of the human mitochondrial ND4 prevents blindness in a rat model of mitochondrial dysfunction.</a> Am J Hum Genet. 83 (3), 373-387 (2008).</li>
<li>Kwon, H., Park, M., Nepali, S., Lew, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-preconditioned+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+rescue+optic+nerve+axons+via+differential+roles+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+an+optic+nerve+compression+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-preconditioned placenta-derived mesenchymal stem cells rescue optic nerve axons via differential roles of vascular endothelial growth factor in an optic nerve compression animal model.</a> Mol Neurobiol. 57 (8), 3362-3375 (2020).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Raykova, K., Jones, M. V., Huang, H., Hoffman, P. F., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally-invasive+Technique+for+Injection+into+Rat+Optic+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve.</a> J Vis Exp. (99), e52249(2015).</li>
<li>Hallas, B. H., Wells, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+mulitple+injections+into+the+mamallian+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Kopf+Carrier%22%5BJournal%5D)">A novel technique for mulitple injections into the mamallian optic nerve.</a> Kopf Carrier. 54, 1-10 (2000).</li>
<li>Yan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+optic+nerve+transection+in+rats%3A+A+model+established+with+a+new+operative+approach+to+assess+secondary+degeneration+of+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Partial optic nerve transection in rats: A model established with a new operative approach to assess secondary degeneration of retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (128), e56272(2017).</li>
<li>Han, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+progenitor+cell+grafts+in+immunocompromised+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of human induced pluripotent stem cell-derived retinal progenitor cell grafts in immunocompromised rats.</a> Cell Transplantation. 31, 1-25 (2022).</li>
<li>Tang, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+Type+1-associated+optic+pathway+gliomas%3A+Current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Manag+Res%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis Type 1-associated optic pathway gliomas: Current challenges and future prospects.</a> Cancer Manag Res. 15, 667-681 (2023).</li>
<li>Pan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+biomimetic+polydopamine+nanocomposite+scaffold+promotes+optic+nerve+regeneration+through+modulating+inhibitory+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Implantation of biomimetic polydopamine nanocomposite scaffold promotes optic nerve regeneration through modulating inhibitory microenvironment.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 683(2024).</li>
<li>Gokoffski, K. K., Peng, M., Alas, B., Lam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-protection+and+neuro-regeneration+of+the+optic+nerve%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-protection and neuro-regeneration of the optic nerve: recent advances and future directions.</a> Curr Opin Neurol. 33 (1), 93-105 (2020).</li>
<li>Negishi, H., Dezawa, M., Oshitari, T., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+nerve+regeneration+within+artificial+Schwann+cell+graft+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Optic nerve regeneration within artificial Schwann cell graft in the adult rat.</a> Brain Res Bull. 55 (3), 409-419 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4 ',6-Diamidino-2-fenilindol dihidroklorür (DAPI)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D9542</td><td>1:10.000 seyreltme, kriyokesitleri boyamak için kullanılır</td></tr><tr><td>AAV viral partikülleri</td><td>Vectorbuilder</td><td>N/A</td><td>Optik sinir enjeksiyonu için kullanılan vektör</td></tr><tr><td>Aqua Montajlı Montaj Ortamı</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td>Lekeli kriyokesitleri monte etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Sığır serumu albümin&nbsp;</td><td>Araştırma Ürünleri International Corp</td><td>9048-46-8</td><td>Kriyoseksiyonları boyama işleminde kullanılır</td></tr><tr><td>Keçi anti-sıçan Alexa Fluor 488 & nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11006</td><td>1:1000 seyreltme, kriyokesitleri boyamak için kullanılır</td></tr><tr><td>İzofloran gazı</td><td>Primal Healthcare</td><td>66794-017-10</td><td>Anestezi gazı</td></tr><tr><td>Leica TCS SPE dik konfokal mikroskop sistemi&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>N/A</td><td>Konfokal mikroskop</td></tr><tr><td>Luer kilit şırınga</td><td>BD</td><td>309628</td><td>Enjeksiyon için Şırınga</td></tr><tr><td>Microm HM505E kriyostat&nbsp;</td><td>Microm</td><td>M-HM360 fom Marshall Scientific</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan anti-GFP ve nbsp numune</td> kesitleme için kullanılır;<td>BioLegend</td><td>338002</td><td>1:500 seyreltme, kriyokesitleri boyamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Omurilik kancası</td><td>FST</td><td>10162-12</td><td>Optik siniri izole etmek için kullanılan kanca</td></tr><tr><td>On mikrolitre şırınga</td><td>Hamilton</td><td>CAL 803901</td><td>Enjeksiyon için şırınga</td></tr><tr><td>Otuz üç guage iğne</td><td>JBP</td><td>JBP3308B</td><td>Enjeksiyon için iğne</td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT bileşiği&nbsp;</td><td>VWR International</td><td>25608-930</td><td>Kriyokalıp işleme için kullanılır</td></tr><tr><td>Dişli forseps</td><td>Bausch ve Lomb</td><td>E1809</td><td>Konjonktivayı kavramak için forseps</td></tr><tr><td>Westcott kavisli tenotomi makası</td><td>Bausch ve Lomb</td><td>E3323-R</td><td>Peritomi oluşturmak için makas</td></tr></tbody></table>

sıçan optik sinirine enjeksiyon için transkonjonktival yaklaşım

Transconjunctival Approach for Injection into the Rat Optic Nerve

Sıçan optik sinir enjeksiyonu için bu tekniği kullanan temsili deneysel sonuçlar Şekil 2'de gösterilmektedir. Bu örnekte, adeno-ilişkili virüs-eGFP (AAV-eGFP), 10 μL'lik bir şırıngaya bağlı 33 G'lik bir iğne ile yukarıda açıklanan transkonjonktival teknik kullanılarak sıçan optik sinirine enjekte edildi. Bu sonuçlar, bir sıçan nörofibromatozis 1 (NF1) modelinde optik sinirlere CRISPR düzeltmesi sağlamak için AAV'yi kullanma nihai amacının bir parçası olarak optik sinir enjeksiyonunu incelemek için bu tekniği kullanan bir deneyin parçasıydı. Enjeksiyon tekniğini geliştirmek için boya ve AAV vektörünün bir kombinasyonu kullanıldı. Hayvanlar, optik sinire enjeksiyondan yedi gün sonra sakrifiye edildi. Sinirler daha sonra diseke edildi ve materyalin optik sinir kılıfına başarılı bir şekilde nüfuz ettiğini ve optik sinire girdiğini doğrulamak için optik sinirin konfokal mikroskopi ile görüntülenmesine izin vermek için anti-GFP antikorları ile etiketlendi. Materyalin optik sinire başarılı bir şekilde sokulması, antikor boyaması ile doğrulandı ve Şekil 2A'da görüldüğü gibi konfokal mikroskopide yeşil göründü. Optik sinir kılıfından penetrasyonun tam olmadığı veya iğne yolundan materyal akışı olduğu durumlarda, Şekil 2C'de görüldüğü gibi sinir dokusu içinde değil, optik sinir kılıfının kenarı boyunca lekelenme görüldü.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig01.jpg"> 
Şekil 1: Cerrahi adımların sırası. (A) Konjonktiva dişli forseps ile kavranır ve limbal peritomi oluşturmak için Westcott makası kullanılır. (B) Zıvananın fasyası açıldıktan ve künt bir şekilde diseke edildikten sonra, Westcott makası yardımıyla yörünge ortaya çıkarılır. (C) Bir omurilik kancası yerleştirilir ve optik siniri izole etmek için kullanılır. (D) Üstteki orbital dokunun künt diseksiyonundan sonra, optik sinir omurilik kancası kullanılarak açığa çıkarılır. (E) Optik sinir kılıfını delmek ve optik sinire adenovirüs veya boya enjekte etmek için 33 G'lik bir iğne kullanılır. (F) Küre yörüngeye yerleştirilir ve konjonktiva peritomi bölgesi üzerinde yeniden konumlandırılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig02.jpg"> 
Şekil 2: AAV-eGFP (yeşil) ile başarılı enjeksiyondan 7 gün sonra sıçan optik sinirinin temsili floresan konfokal panoramik görüntüsü, burada optik kiazma yakınında vektör transdüksiyonlu nöronlar. (A) Optik sinir çekirdekleri DAPI (mavi) ile etiketlenmiştir. Oklu ONH, optik sinir başını veya sinirin orbital ucunu belirtirken, optik kiazma ucu "kiazma" olarak etiketlenir. (B) Donmuş kriyoseksiyon bloğuna gömülü bir sıçan optik sinirinin yörüngeden kiazmaya kadar olan fotoğrafı. Optik siniri yönlendirmek için sinire yörüngenin hemen arkasına (siyah okla gösterilen enjeksiyon bölgesi) Hindistan Mürekkebi enjekte edilir. (C) AAV-eGFP (yeşil) ile başarısız enjeksiyondan 7 gün sonra sıçan optik sinirinin panoramik floresan görüntüsü, burada vektör süspansiyonunun çoğu muhtemelen sinir yolundan dışarı akarak optik kılıfı transdüke eder. Optik sinir çekirdekleri DAPI (mavi) ile etiketlenmiştir. ONH, nöral retinanın hemen arkasındaki Optik Sinir Başını ve beyaz bir okla gösterilen enjeksiyon bölgesini belirtir. Kiazma ve beyaz ok, optik kiazmaya doğru sınır çizer. Ölçek çubukları = (A) içinde 400 μm ve (C) içinde 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Değişken</td>
			<td colspan="3">Yaklaşmak</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Transkonjonktival</td>
			<td>Üstün</td>
			<td>Yanal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cilt insizyonu</td>
			<td>Hayır</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Evet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Konjonktival insizyon</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Hayır</td>
			<td>Hayır</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mikroskop</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Evet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superior orbital kas transeksiyonu</td>
			<td>Hayır</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Hayır</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Çekiş sütürü</td>
			<td>Hayır</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Evet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omurilik kancası</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Hayır</td>
			<td>Hayır</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cilt sütürü</td>
			<td>Hayır</td>
			<td>Evet</td>
			<td>Evet</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: Deneysel çalışma için sıçan optik sinirini izole etmek için daha önce yayınlanmış tekniklerle karşılaştırma. Cilt insizyonu, konjonktival insizyon, ameliyat mikroskobu, superior orbital kas transeksiyonu, traksiyon sütürü, omurilik kancası ve cilt sütürü gibi değişkenler transkonjonktival, superior ve lateral yaklaşımlar kullanılarak karşılaştırıldı.

Sıçan Optik Sinirine Enjeksiyon için Transkonjonktival Yaklaşım

The rat serves as an important model for studying disorders of the optic nerve, including heritable, traumatic, neoplastic, and autoimmune conditions. ...

transconjunctival-approach-for-injection-into-the-rat-optic-nerve

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Intravitreal enjeksiyon, göz hastalıkları veya lokal tedavi doğrudan uygulama olarak görsel bilimler araştırma yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Bu video cam pipet yardımıyla 1 ml şırınga kullanarak intravitreal enjeksiyon için bir protokol gösterdi. Masif kanama ve lens hasarı önlemek konusunda yararlı ipuçları verilmiştir.

Oküler Hastalıkları Model kurulması için intravitreal enjeksiyon

Optik Sinir transeksiyonu yetişkin MSS yaralanma yaygın olarak kullanılan bir model. Bu model, küresel retina hedef ya da doğrudan hedef, retina ganglion hücrelerinin yaralı nöronal nüfus bir dizi deneysel manipülasyon yapmak için idealdir.

Memeli MSS Optik Sinir transeksiyonu sonra Deneysel İşlemler Yöntemleri

Bu video, anestezi uygulanmış bir sıçanda episkleral ven içine hipertonik salin enjekte edilerek glokom indüksiyonunu göstermektedir. Salin, Schlemm kanalı yoluyla trabeküler ağa girer ve sulu hümör çıkışını engelleyen ve göz içi basıncını artıran doku skarlaşmasına neden olur. Yüksek basınç retinal ganglion hücrelerine zarar vererek glokoma yol açar.

Sıçanlarda Glokomu İndüklemek için Hipertonik Salin Enjeksiyon Tekniği

Bu video, anestezi uygulanmış bir hayvanda optik sinire cerrahi olarak erişme ve fokal demiyelinizasyonu indüklemek için hassas bir şekilde lizolesitin verme prosedürünü göstererek daha fazla çalışma için nöropatolojik koşullar yaratır.

Lisolesitin kullanılarak optik sinirde lokal demiyelinizasyonun indüklenmesi

Sıçan optik sinirine doğrudan enjeksiyon, rejeneratif araştırmalar için yararlıdır. Kafatasının açılmasını içermeyen bir sıçan optik sinirine doğrudan enjeksiyon için minimal invaziv bir teknik gösteriyoruz. Bu yöntem kullanılarak cerrahi komplikasyonlar en aza indirilir ve iyileşme daha hızlı olur.

Sıçan Optik Sinir içine Enjeksiyon için minimal invaziv Tekniği

Aşağıdaki rapor, uygun boya, kontakt lens ve lazer parametreleri kullanılarak nonarteritik anterior iskemik optik nöropatinin (rNAION) kemirgen modelinin nasıl çoğaltılacağını açıklamaktadır. Ayrıca rNAION lezyonunu in vivo olarak değerlendirmek için uygun adımları da ortaya koyuyoruz.

Nonarteritik Anterior İskemik Optik Nöropati Kemirgen Modeli (rNAION)

Subretinal enjeksiyonlar, proteinler ve viral vektörler gibi büyük terapötik ajanları fotoreseptörlere ve retina pigment epiteline iletmek için en yaygın tekniktir. Farelerde, minimum ikincil hasar ve hızlı iyileşme süreleri ile subretinal boşluğu başarılı bir şekilde hedefleyen alternatif bir yöntem burada açıklanmaktadır.

Subretinal Space erişim için bir alternatif ve Onaylı Enjeksiyon Yöntemi<i&gt; yoluyla</i&gt; Bir transkleral Posterior Yaklaşım

Bu protokol, merkezi bir kornea insizyonu ve ön kamaraya uzun bir tünel kullanılarak sıçanlarda intrakameral enjeksiyon için bir tekniği tanımlar. Bu enjeksiyon yöntemi, yanlışlıkla doku hasarına neden olma riskini en aza indirir ve böylece hassasiyeti ve tekrarlanabilirliği artırır.

Yan Etki Riski Düşük Olan Sıçanlarda İntrakameral Enjeksiyon

Bu makale, hem enjeksiyon bölgesini hem de retina dekolmanı alanını kontrol etmek için intraoperatif görselleştirmeyi kullanan sıçanlarda subretinal enjeksiyon yöntemlerini açıklamaktadır.

Sıçanlarda Subretinal Enjeksiyon ve Retina Dekolmanı İntraoperatif Görselleştirmesi

Bu çalışma, terapötiklerin yetişkin sıçanın retina ve optik sinirlerine verilmesi için bir metodoloji sunmaktadır. Ek olarak, yetişkin bir sıçanda optik sinir ve retinanın yukarıdan aşağıya blok koleksiyonu için benzersiz bir doku elde etme yöntemi tanıtılmıştır.

Erişkin Sıçanlarda Oküler Terapötik Uygulama ve İleri Doku Alımı

Öğrenin, sıçan optik sinirine transkonjonktival yaklaşımla minimal invaziv enjeksiyon tekniğini. Bu yöntem, nörofibromatoz tip 1 araştırmalarında terapötik ajanların etkili teslimatını sağlar.

Sıçan Optik Sinirine Enjeksiyon için Transkonjonktival Yaklaşım

Daha fazla video keşfet