Sıçanlarda Ortotopik Sol Akciğer Nakli

Araştırmam, nakil sonrası komplikasyonları, özellikle kronik rejeksiyonu araştırmak ve uzun vadeli greft yetmezliğine neden olan mekanizmayı daha iyi anlamak için standartlaştırılmış, tekrarlanabilir sol akciğer nakli modeli geliştirmeye odaklandı. Protokolümüz, mevcut tekniklere kıyasla daha kısa bir öğrenme eğrisi, tek operasyonel yetenek ve daha yüksek tekrarlanabilirlik sunar. Standartlaştırılmış doğrudan akciğer nakli modelimiz, akciğer nakli sonrası komplikasyonları incelemek için güvenilir bir platform sağlar ve greft sağkalımını iyileştirmek için translasyonel araştırmaları hızlandırabilir.

Gelecekte laboratuvarımız, akciğer nakli alıcılarının uzun süreli sağkalım oranını iyileştirmek için akciğer nakli sonrası kronik rejeksiyon çalışmalarına odaklanacaktır. Başlamak için 14 gauge ve 16 gauge intravenöz kateterler ve bıçaklar edinin. Kateterleri bıçaklı kuyruklu bir manşet şeklinde kesin.

Ardından her bir manşeti, her biri yaklaşık iki ila üç milimetre uzunluğunda bir gövdeye ve bir kuyruğa bölün. Bir neşter kullanarak, dikiş sabitleme için sürtünmeyi artırmak için manşet gövdesinde yüzeysel çizikler oluşturun. Donör akciğerini toplamak için, anestezi uygulanmış bir sıçanın dilini forseps kullanarak dışa ve yukarı doğru geri çekin.

Gırtlak açıklığını net bir şekilde aydınlatmak için boynun önüne bir ameliyat lambası yerleştirin. Şimdi, glottis yoluyla hava yoluna 14 gauge intravenöz kanül yerleştirin. Ventilatörü basınç kontrollü moda ayarlayın.

Ardından, ağırlık parametrelerini girin, basıncı 15 santimetre suya ayarlayın ve ventilatörü bağlayın. Ventilatör frekansı ile senkronizasyonu sağlamak için göğsün yükselişini ve düşüşünü gözlemleyin. Daha sonra uzuvları ve kafayı bant veya kısıtlama kullanarak sabitleyin.

Karın duvarı boyunca orta hat kesisi yapın. Açıkta kalan peritoneal venden heparin enjekte edin, ardından tam heparinizasyonu sağlamak için üç dakika boyunca sistemik dolaşıma izin verin. Diyaframı kesin ve göğüs boşluğunu sternumun orta hattından açın.

Daha sonra göğüs duvarını her iki taraftan hemostatlarla sabitleyin. Göğüs boşluğu organlarını ortaya çıkarmak için timusu çıkarın. Sırayla, üst vena kava, alt vena kava ve sol ve sağ kulakçıkları kesin.

Şimdi, donör akciğeri tamamen beyaza dönene kadar düşük basınçlı perfüzyon için bir dakika boyunca 20 mililitrelik bir şırınga kullanarak pulmoner arterin köküne soğuk salin enjekte edin. Donör akciğerini birbirine bağlayan dokuları kesin ve donör kalbini ve akciğeri blok halinde çıkarın. Donör kalp-akciğer bloğunu önceden soğutulmuş salin içinde bekletin.

Kalp-akciğer bloğunu mikroskop altında buz üzerine yerleştirin. Trakeayı bir hemostat ile kavrayın ve hamuru içine sabitleyin. Akciğerleri ıslak steril lens kağıdı ile örtün.

Şimdi pulmoner arteri, bronşu ve pulmoner veni mikroskop altında ayırmak için forseps kullanın. Bronşu akciğere yakın bir yerde 6-0 cerrahi dikiş kullanarak bağlayın. Pulmoner arteri, bronşu ve pulmoner veni kesmek için yaylı makas kullanın.

Pulmoner arteri, bronşu ve pulmoner veni 16 gauge, 14 gauge ve 16 gauge girinti kateterlerinden yapılmış ilgili manşetlerden çıkarın. Tüp duvarlarını manşete 8-0 ile sabitleyin cerrahi dikişler. Donör akciğerlerini salin içinde saklayın ve implantasyona kadar tekrar buza koyun.

Alıcı hayvanın sol torakodorsal bölgesini epilasyon yapın. Hayvanı termostatik bir ameliyat masasında sağ yanal dekübit duruşunda konumlandırın. Şimdi göğüs boşluğuna erişmek için dördüncü interkostal boşluktaki apikal impuls noktasında deri ve göğüs duvarından bir kesi yapın.

Göğüs boşluğunu açmak için bir göz kapağı ekartörü kullanın. Ardından, alt pulmoner bağı ortaya çıkarmak ve keskin bir şekilde kesmek için nemli bir pamuklu çubuk kullanarak sol akciğeri hafifçe kenara itin. Ardından, sol akciğeri forseps ile kavrayın ve göğüs boşluğunun dışına geri çekin.

Hilumu bir hemostat ile sabitleyin, ardından modelleme kili ile stabilize edin. Şimdi pulmoner arteri, pulmoner veni ve bronşu ayırmak için pulmoner hilusu parçalara ayırın. Vasküler klempler kullanarak pulmoner arter, pulmoner ven ve bronşun proksimal uçlarını klempleyin.

Alıcının pulmoner arterini, bronşunu ve pulmoner venini 8-0 ile önceden bağlayın. hızlı anastomoz için cerrahi dikişler. Donör akciğerinin yerleştirilmesini kolaylaştırmak için alıcının klemplenmiş sol akciğerinde bir platform kesin. Pulmoner arter, pulmoner ven ve bronşun distal uçlarında küçük kesiler yapın.

Pıhtı oluşumunu önlemek için pulmoner arteri ve pulmoner veni heparinize salinle durulayın. Ardından, donör akciğerini buzdan alın ve alıcının sol akciğerinin hazırlanmış platformuna yerleştirin. Kesik açıklığın bir tarafını kaldırmak için forseps kullanın, ardından pulmoner arter, pulmoner ven ve bronşun manşetlerini sırayla alıcıya implante edin ve bağlayın.

Mikro hemostatik klipsi açın ve donör akciğerin beyazdan kırmızıya döndüğünü gözlemleyin. Anastomoz bölgelerini herhangi bir kanama belirtisi açısından inceleyin. Şimdi, alıcının sol akciğerini çıkarın ve donör akciğerini göğüs boşluğuna geri koyun.

Göğüs boşluğunu steril pamukla kurulayın. Ardından göğüs boşluğunu katman katman kapatın. Ventilatörü çıkarmadan önce spontan solunumun iyileşmesini bekleyin.

Bir saat sonra alıcılar yemek yemekte özgürdü. Transplantasyondan altı ay sonra, BT görüntüleme, nakledilen akciğerlerin ventilasyonunun sahte grupla karşılaştırılabilir olduğunu gösterdi ve bu da korunmuş akciğer fonksiyonunu gösterdi. Akciğerlerin makroskopik görünümü, sahte ve nakledilen gruplar arasında gözle görülür bir farklılık göstermedi ve herhangi bir bozulma veya anormallik belirtisi göstermedi.

Akciğer dokularının hematoksilen ve eozin boyanması, nakledilen akciğerlerde sahte gruba kıyasla önemli bir patolojik değişiklik göstermedi, alveolar yapılar korundu ve inflamatuar infiltrasyon yoktu.