Name: Yeni Bir Tespit ve Miktar Belirleme Yöntemi Olarak Kilitli Nükleik Asit Yerinde Hibridizasyon Yoluyla MikroRNA Amplifikasyonu ve Tanınması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Keşfedin, mikroRNA ve proteinleri FFPE dokularda eş zamanlı tespit ve miktar belirleme yöntemini. Bu teknik, tümör mikroçevresindeki moleküler ilişkileri bozmadan incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Smolarz, B., Nowak, A. Z., Romanowicz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-epidemiology%2C+classification%2C+pathogenesis+and+treatment+%28review+of+literature%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-epidemiology, classification, pathogenesis and treatment (review of literature).</a> Cancers. 14 (10), 2569(2022).</li>
<li>Davis-Dusenbery, B. N., Hata, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+cancer%3A+The+involvement+of+aberrant+microrna+biogenesis+regulatory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microrna in cancer: The involvement of aberrant microrna biogenesis regulatory pathways.</a> Genes Cancer. 1 (11), 1100-1114 (2010).</li>
<li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microRNAs+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Targeted+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of microRNAs in human cancer.</a> Signal Transduct Targeted Ther. 1 (1), 15004(2016).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirnas+and+cancer%3A+Key+link+in+diagnosis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Mirnas and cancer: Key link in diagnosis and therapy.</a> Genes. 12 (8), 1289(2021).</li>
<li>Juźwik, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+dysregulation+in+neurodegenerative+diseases%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA dysregulation in neurodegenerative diseases: A systematic review.</a> Prog Neurobiol. 182, 101664(2019).</li>
<li>Pauley, K. M., Cha, S., Chan, E. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+autoimmunity+and+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Microrna in autoimmunity and autoimmune diseases.</a> J Autoimmun. 32 (3-4), 189-194 (2009).</li>
<li>Lee, Y. S., Dutta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micrornas+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Pathol+Mech+Dis%22%5BJournal%5D)">Micrornas in cancer.</a> Ann Rev Pathol Mech Dis. 4 (1), 199-227 (2009).</li>
<li>Thomson, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+gene+regulatory+properties+of+argonaute-bound+small+rnas+of+diverse+genomic+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Assessing the gene regulatory properties of argonaute-bound small rnas of diverse genomic origin.</a> Nuc Acids Res. 43 (1), 470-481 (2015).</li>
<li>Kim, Y. K., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nobel-winning+microRNA%2C+the+microRNAestro+of+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Nobel-winning microRNA, the microRNAestro of gene silencing.</a> Mol Cells. 47 (11), 100123(2024).</li>
<li>Lai, X., Eberhardt, M., Schmitz, U., Vera, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+biology-based+investigation+of+cooperating+microRNAs+as+monotherapy+or+adjuvant+therapy+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Systems biology-based investigation of cooperating microRNAs as monotherapy or adjuvant therapy in cancer.</a> Nuc Acid Res. 47 (15), 7753-7766 (2019).</li>
<li>Garzon, R., Marcucci, G., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+micrornas+in+cancer%3A+Rationale%2C+strategies+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Disc%22%5BJournal%5D)">Targeting micrornas in cancer: Rationale, strategies and challenges.</a> Nat Rev Drug Disc. 9 (10), 775-789 (2010).</li>
<li>Jiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA%3A+The+impact+on+cancer+stemness+and+therapeutic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">MicroRNA: The impact on cancer stemness and therapeutic resistance.</a> Cells. 9 (1), 8(2019).</li>
<li>Lin, B., Jiang, J., Jia, J., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+exosomal+miRNA+biosensing+for+liquid+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Recent advances in exosomal miRNA biosensing for liquid biopsy.</a> Molecules. 27 (21), 7145(2022).</li>
<li>Farrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+circulating+miRNAs+in+bovine+serum+and+their+potential+as+novel+biomarkers+of+early+Mycobacterium+avium+subsp.+paratuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The identification of circulating miRNAs in bovine serum and their potential as novel biomarkers of early Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection.</a> PLoS One. 10 (7), e0134310(2015).</li>
<li>Aparicio-Puerta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Srnabench+and+srnatoolbox+2022+update%3A+Accurate+mirna+and+sncrna+profiling+for+model+and+non-model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Srnabench and srnatoolbox 2022 update: Accurate mirna and sncrna profiling for model and non-model organisms.</a> Nuc Acid Res. 50 (W1), W710-W717 (2022).</li>
<li>Friedländer, M. R., Mackowiak, S. D., Li, N., Chen, W., Rajewsky, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirdeep2+accurately+identifies+known+and+hundreds+of+novel+microRNA+genes+in+seven+animal+clades%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirdeep2 accurately identifies known and hundreds of novel microRNA genes in seven animal clades.</a> Nuc Acid Res. 40 (1), 37-52 (2012).</li>
<li>Chou, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirtarbase+2016%3A+Updates+to+the+experimentally+validated+miRNA-target+interactions+database%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirtarbase 2016: Updates to the experimentally validated miRNA-target interactions database.</a> Nuc Acid Res. 44 (D1), D239-D247 (2016).</li>
<li>Porichis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+detection+of+miRNAs+and+gene-specific+mRNA+at+the+single-cell+level+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">High-throughput detection of miRNAs and gene-specific mRNA at the single-cell level by flow cytometry.</a> Nat Commun. 5 (1), 5641(2014).</li>
<li>Eichert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+crystal+structure+of+an+%27all+locked%27+nucleic+acid+duplex%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">The crystal structure of an 'all locked' nucleic acid duplex.</a> Nuc Acid Res. 38 (19), 6729-6736 (2010).</li>
<li>Viratham Pulsawatdi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+multiplex+immunofluorescence+and+digital+pathology+workflow+for+the+characterisation+of+the+tumour+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">A robust multiplex immunofluorescence and digital pathology workflow for the characterisation of the tumour immune microenvironment.</a> Mol Oncol. 14 (10), 2384-2402 (2020).</li>
<li>Janati-Idrissi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+for+a+needle+in+a+haystack%3A+De+novo+phenotypic+target+identification+reveals+hippo+pathway-mediated+mir-202+regulation+of+egg+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Looking for a needle in a haystack: De novo phenotypic target identification reveals hippo pathway-mediated mir-202 regulation of egg production.</a> Nuc Acid Res. 52 (2), 738-754 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x TRIS tamponlu tuzlu (TBS) pH 7.6&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp; J62662&nbsp; K7</td><td>Adımlar arasında aralıklı yıkamalar için</td></tr><tr><td>1x Opal Antikor Sulandırıcı/Blok ve Blok;</td><td>Akoya Biosciences</td><td>ARD1001EA</td><td>Protein bloklama çözeltisi</td></tr><tr><td>1x Plus Otomasyon Amplifikasyon Sulandırıcı</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1609</td><td>Opal floroforları seyreltmek için kullanılır</td></tr><tr><td>20x Konsantre & nbsp; Tuzlu Sodyum Sitrat (SSC) Tamponu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6639-1L</td><td>Prob hibridizasyonundan sonra miRNA yıkamaları için</td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel/ Invitrogen</td><td>EN62248 / 62248</td><td>Nükleer boyama için</td></tr><tr><td>ACD HybEZ II Hibritizasyon Sistemi</td><td>ACD Biotechne</td><td>321711</td><td>miRNAscope protokolü sırasında sıcaklığı düzenlemek için kullanılan fırın</td></tr><tr><td>Anti-CD8 (D8A8Y), Tavşan mAb</td><td>Hücre Sinyal Teknolojileri</td><td>85336S</td><td>Bu protokolü optimize etmek için kullanılan birincil antikor örneği</td></tr><tr><td>Anti-Digoksijenin (fare) HRP Konjugatı</td><td>Revvity Sağlık Bilimleri MM</td><td>NEF832001EA</td><td>miRNA tespiti için kullanılan ikincil reaktif</td></tr><tr><td>Anti-EpCAM (E6V8Y), Tavşan mAb</td><td>Hücre Sinyal Teknolojileri</td><td>93790</td><td>Bu protokolü optimize etmek için kullanılan birincil antikor örneği</td></tr><tr><td>Engelleyici Reaktif Tozu</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1012</td><td>miRNA bloke çözümü</td></tr><tr><td>Etil Alkol %100 (200 Proof)</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td>Deparafinizasyon için</td></tr><tr><td>EZ-AR1 Buffer</td><td>BioGeneX</td><td>HK521-XAK</td><td>Protein aşamasında FFPE doku kesitlerinin antijen geri alınması için kullanılır</td></tr><tr><td>EZ-AR1 Elegance Buffer</td><td>BioGeneX</td><td>HK546-XAK</td><td>miRNA prob aşamasında FFPE doku kesitlerinin antijen geri alınması için kullanılır</td></tr><tr><td>EZ-Retriever IR Sistemi</td><td>BioGeneX</td><td>MW015-IR</td><td>FFPE doku kesitlerinin antijen geri alınmasında kullanılan mikrodalga</td></tr><tr><td>Hidrojen Peroksit Çözeltisi %30&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>HX0640-5&nbsp;</td><td>Doku hazırlığı için. Endojen peroksidaz aktivitesini engellemeye ve yüksek renkli ürünler elde etmeye yardımcı olur</td></tr><tr><td>miR-181c-3p miRNA Probu</td><td>Qiagen</td><td>339112</td><td>Bu protokolü optimize etmek için kullanılan miRNA probuna örnek</td></tr><tr><td>miRCURY LNA miRNA ISH Buffer Set (FFPE)</td><td>Qiagen</td><td>339450&nbsp;</td><td>miRNA probunu seyreltmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Opal 620</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1495001KT</td><td>Primer antikoru tanımlamak için florofor</td></tr><tr><td>Opal 690&nbsp;</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1497001KT</td><td>Primer antikoru tanımlamak için florofor</td></tr><tr><td>Opal Anti-Ms + Rb HRP</td><td>Akoya Biosciences</td><td>ARH1001EA</td><td>Tespit ajanı olarak kullanılan ikincil antikor</td></tr><tr><td>Pierce 16% Formaldehit (w/v), Metanol içermeyen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>doku hazırlığı için %3,7 PFA yapmak</td></tr><tr><td>ProLong Diamond Antifade</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36970</td><td>Montaj medyası</td></tr><tr><td>RNAscope Proteaz Plus</td><td>ACD Biotechne</td><td>322331</td><td>Doku kesitlerini geçirimlileştirmek için&nbsp; proteinleri kısmen sindirerek ve hedef miRNA moleküllerini açığa çıkarmak</td></tr><tr><td>RNAssız su&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>46-000-CM&nbsp;</td><td>Tüm ekipmanları temizlemek ve hazırlamak, gerektiğinde dilatant olarak kullanmak ve gerekli olduğunda dilatant olarak kullanmak &nbsp;</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379-25ML</td><td>TBS-T yapmak için</td></tr><tr><td>Tiramid Sinyal Güçlendirmesi Plus Siyanin 3</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>NEL744001KT</td><td>miRNA'yı tanımlamak için florofor</td></tr><tr><td>U6 ve Scramble miRNA Probları</td><td>Qiagen</td><td>339459</td><td>Isteğe bağlı kontrol probları</td></tr><tr><td>Ksilen Histolojik Derecesi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>UN1307</td><td>Deparafinizasyon için</td></tr></tbody></table>

yeni bir tespit ve miktar belirleme yöntemi olarak kilitli nükleik asit yerinde hibridizasyon yoluyla mikrorna amplifikasyonu ve tanınması

MicroRNA Amplification and Recognition through Locked-nucleic-acid In situ Hybridization as a Novel Detection and Quantification Method

Yeni Bir Tespit ve Miktar Belirleme Yöntemi Olarak Kilitli Nükleik Asit Yerinde Hibridizasyon Yoluyla MikroRNA Amplifikasyonu ve Tanınması

When using traditional probe-based in situ hybridization (ISH) imaging detection methods, microRNAs (miRNAs) are difficult to capture due to their size, ...

microrna-amplification-recognition-through-locked-nucleic-acid-situ

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Burada örnek sınırlı miktarda çalışma, özellikle microRNA (miRNA) ekspresyon düzeyleri için bir maliyet ve zaman etkili yüksek verimli bir tarama aracı olarak mikroakışkan platformu ile birlikte optimize edilmiş bir multiplex ters transkriptaz kantitatif PCR (QRT PCR) protokolü açıklamak.

Yüksek Verimli MicroRNA Profil: Optimize edilmiş, Multiplex QRT-PCR Fluidigm Dinamik ArrayTM IFCS Nanoliter Ölçeğinde

Yeni yüksek verimli bir yöntem kilitli nükleik asit probları ve flow sitometri floresan kullanarak tek bir bakteri hücrelerinin algılama ve göreceli küçük RNA ve mRNA ekspresyonu kantitatif...

Kilitli Nükleik Asit Sitometrisi-floresan Yerinde Hibridizasyon (LNA akış FISH): Bakteriyel Küçük RNA Algılama Yöntemi

Bu videoda, mRNA problarının belirli hedef mRNA'ya hibritleştirilmesini içeren sıralı bir hibridizasyon stratejisi açıklanmaktadır. Prob hibridizasyonunu takiben, histolojik numunelerin RNA-CISH sırasında sinyal-gürültü oranının azaltılması yoluyla çözünürlüğü artırmak için sinyal amplifikasyonu gerçekleştirilir.

RNA In Situ Hibridizasyonda Prob Hibridizasyonu ve Sinyal Amplifikasyonu: Doku Kesitlerinde Spesifik RNA Dizilerini Tespit Etmek İçin Bir Teknik

Bu yayının amacı, görselleştirmek ve Drosophila çıkarılan RNA bir Geliştirilmiş Northern Blot protokolünün ameliyat adımları görüşmek embriyolar, hücreleri ve dokuları melanogaster etmektir. Bu protokol küçük RNA türünün etkin tespiti için özellikle yararlıdır.

Küçük RNA Türlerin Northern Blot Algılama geliştirilmiş Drosophila melanogaster

MicroRNA'lar (miRNA'lar), yaygın olarak korunan bir düzenleyici molekül sınıfıdır. Burada, iki güçlü ligasyon adımına ve ardından yüksek verimli dizilemeye dayanan bir miRNA klonlama yöntemini açıklıyoruz. Yöntemimiz, miRNA'ların genom çapında doğru bir şekilde kantitasyonuna izin verir.

Yüksek Verim Dizilimine tarafından MicroRNA ölçümü için Küçük RNA molekülleri, yüksek Verimli ligasyonu

Sirkülasyon mikroRNAlar son zamanlarda çeşitli kanser ve diğer hastalıklar için umut verici ve yeni biyolojik belirteçler olarak ortaya çıkmıştır. Bu makalenin amacı üç farklı prob-tabanlı gerçek zamanlı PCR platformları ve ölçmek ve microRNA dolaşan bereket belirlemek için kullanılabilir yöntemleri tartışmaktır.

Probe-tabanlı Real-time PCR microRNA Kantitatif Ölçüm Yaklaşımları

Burada, miRNA in situ hibridizasyon kullanarak meme kanseri hasta örneklerinde miRNA ekspresyonunu tespit etmek için bir protokol sunuyoruz.

miRNA kullanarak Meme Kanseri Dokularındaki miRNA İfade Klinikopatolojik Analizi<em&gt; In Situ</em&gt; Melezleme

Bu rapor hücresel miRNAs mRNA hedefleri doğrulamak için hızlı ve güvenilir bir yöntem açıklanır. Sentetik biotinylated miRNA kilitli nükleik asit LNA tabanlı yakalamaya taklit eden yöntemi kullanır mRNA hedef. Daha sonra manyetik boncuklar streptavidin kaplı açılan için istihdam edilmektedir hedef mRNA qPCR polimeraz zincir reaksiyonu tarafından miktar için.

Biotin tabanlı açılan tahlil için Doğrula mRNA hedefleri hücresel miRNAs

Tekrarlanarak mRNA'ların içinde bireysel yumurtalar, tek molekül RNA Floresans in situ olarak sayıları saymak için hibridizasyon (RNA-balık) yapışık olmayan hücreler için optimize edildi. Yumurtalar toplanmıştır, transkript belirli probları ile melezleşmiştir ve bir görüntü miktar yazılımı kullanarak sayılabilir.

Tek molekül floresan ın Situ hibridizasyon (SM-balık) kullanmak için fare yumurta miktarını ve Localize mRNA

Bu yöntem, toplam RNA ekstresinden miRNA'ları tespit etmek için kuzey hibridizasyon tekniğinin kullanımını göstermektedir.

Bitki MikroRNAlarının Saptanması ve Ölçülmesi için RNA Leke Analizi

DNAzyme tabanlı nanomakineler, nükleik asitlerin son derece seçici ve hassas tespiti için kullanılabilir. Bu makale, özgür yazılım kullanılarak 10-23 çekirdekli DNAzyme tabanlı nanomakinelerin tasarımı için ayrıntılı bir protokolü ve örnek olarak bir Epstein-Barr virüs parçasının tespitinde uygulanmasını açıklamaktadır.

DNAzyme 10-23 - Nükleik Asit Tanıma için Tabanlı Nanomakineler

Keşfedin, mikroRNA ve proteinleri FFPE dokularda eş zamanlı tespit ve miktar belirleme yöntemini. Bu teknik, tümör mikroçevresindeki moleküler ilişkileri bozmadan incelemenizi sağlar.

Yeni Bir Tespit ve Miktar Belirleme Yöntemi Olarak Kilitli Nükleik Asit Yerinde Hibridizasyon Yoluyla MikroRNA Amplifikasyonu ve Tanınması (Video) | JoVE Journal

Yeni Bir Tespit ve Miktar Belirleme Yöntemi Olarak Kilitli Nükleik Asit Yerinde Hibridizasyon Yoluyla MikroRNA Amplifikasyonu ve Tanınması

Daha fazla video keşfet