Burada, lncPVT1'in tiroid kanseri hücrelerinde HIF-1α stabilitesini ve glikolitik gen ekspresyonunu nasıl düzenlediğini incelemek için bir protokol sunuyoruz, bu da metabolik düzenleme ve potansiyel terapötik hedeflerin incelenmesini sağlıyor.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Araştırma makalesi
Burada, lncPVT1'in tiroid kanseri hücrelerinde HIF-1α stabilitesini ve glikolitik gen ekspresyonunu nasıl düzenlediğini incelemek için bir protokol sunuyoruz, bu da metabolik düzenleme ve potansiyel terapötik hedeflerin incelenmesini sağlıyor.
En önde gelen endokrin sistem kanseri olan tiroid karsinomu, popülasyonlar arasında hızlanan bir epidemiyolojik eğilim sergiler. Tedavi yöntemlerindeki gelişmelere rağmen, nüks ve metastaz zorluklar devam etmektedir. Uzun kodlamayan RNA PVT1 (lncPVT1), birden fazla kanser türünde korunmuş bir onkojenik düzenleyici olarak ortaya çıkmıştır, ancak TC'deki spesifik işlevi daha fazla araştırma gerektirir. Araştırmamız, TC hücre dizileri TPC-1 ve K1'i kullanarak lncPVT1'in hem normoksik hem de hipoksik koşullar altında glikolizi nasıl etkilediğini incelemeye odaklandı. lncPVT1'in aşırı ekspresyonu, hipoksi altında glikoz tüketimini ve laktat üretimini önemli ölçüde arttırdı ve glikolizi artırma yeteneğini doğruladı. Ayrıca, lncPVT1 , GLUT1, HK1, HK2 ve PGK1 gibi anahtar glikolitik genleri yukarı regüle etti ve TC hücre proliferasyonunu kolaylaştırdı. Mekanik olarak, lncPVT1, hipoksi ile indüklenebilir faktör 1a'yı (HIF-1a) bozunmasını engelleyerek ve birikmesine yol açarak stabilize etti. Bu biriken HIF-1α daha sonra glikolizde yer alan genlerin ekspresyonunu kontrol eden spesifik düzenleyici dizilere bağlanır, sonuçta bu genleri aktive eder ve glikolitik aktiviteyi arttırır. Bulgularımız, lncPVT1'in HIF-1α stabilitesini ve glikolitik gen ekspresyonunu düzenlediğini, TC metabolizması anlayışımızı ilerlettiğini ve potansiyel olarak yeni terapötik hedefleri ortaya çıkardığını göstermektedir.
Oldukça yaygın bir endokrin malignite olan tiroid kanseri (TC), insidans oranlarında hızlı bir artış yaşamıştır1. Cerrahi prosedürler, radyasyon tedavisi ve tiroid hormonal baskılama tedavisi dahil olmak üzere terapötik stratejilerdeki ilerlemelere rağmen, TK hastalarının önemli bir kısmı hala tümör nüksü ve metastaz riskiyle karşı karşıyadır ve bu da moleküler patogenezinin daha derin bir şekilde anlaşılması ihtiyacını vurgulamaktadır 2,3. TC gelişimi, iyonlaştırıcı radyasyona maruz kalma, kimyasal kanserojenlerle temas, tütün kullanımı ve obezite dahi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Hücre kültürü ve transfeksiyon
İnsan tiroid karsinomu (TC) hücre dizileri TPC-1 ve K1, %10 fetal sığır serumu ve 100 μg/mL penisilin-streptomisin ile desteklenmiş, 4,5 g/L glikoz içeren Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamında (DMEM) kültürlendi. Hücreler, %5 CO2 ile nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 °C'de tutuldu. Hipoksi tedavisi için, 1 x 105 hücre, aksi belirtilmedikçe, 24 saat boyunca 37 ° C'de% 1 O2 , % 5 CO2 ve% 94 N2 ile dengelenmiş kapalı bir hipoksik odaya transfer edildi. lncPVT1'in (lncPVT1 OE) kararlı aşırı ekspresyonu ve kar....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
lncPVT1'in aracılık ettiği TC hücre hatlarında gelişmiş glikoliz
Başlangıçta bir lentiviral ekspresyon sistemi kullanarak TPC-1 ve K1 hücrelerinde lncPVT1 OE ve NC'yi kurduk. lncPVT1'in başarılı aşırı ekspresyonu qRT-PCR ile doğrulandı (Şekil 1A-B). Glikoliz üzerindeki etkiyi değerlendirmek için hücreler 24 saat boyunca normoksi ve hipoksi altında kültürlendi. Bulgu.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
En sık görülen endokrin malignite olan TK, nüksü ve metastazı açısından önemli zorluklar ortaya çıkarmaktadır22. Tiroid karsinogenezinin mekanik manzarası, özellikle onkojenik metabolik yeniden programlamanın ve temel hücresel davranışların lncRNA aracılı düzenlenmesi ile ilgili olarak tam olarak tanımlanmamıştır23 . Bu çalışmada, onkojenik lncPVT1'e ve bunun TC hücrelerinde glikoliz ve HIF-1α stabilitesi üzerindeki etkisine odaklandık.
.......Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar, finansal veya finansal olmayan herhangi bir çıkar çatışması iddiasında bulunmamaktadır.
Araştırma finansmanı Fujian Bilim ve Teknoloji Planı Projesi (2022J01784) aracılığıyla sağlandı.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BCA Protein Test Kiti | Meilunbio Hakkında | MA0082-2 (İngilizce) | WB Protein Miktar Tayini |
| Biyogüvenlik Kabini | Lishen | HFsafe-1200LC Serisi | Hücre Geçişi ve Genişlemesi |
| Merkezkaç | Baiyang | B320A Serisi | Santrifüj Hücreleri |
| Kemilüminesans Görüntüleme Sistemi | BIO-RAD(ABD) | ChemiDoc Dokunmatik | Dünya Bankası Geliştirme |
| CO2 İnkübatör | Termo(ABD) | 311 | Hücre kültürü |
| ECL Kemilüminesans Tespit Kiti | Meilunbio Hakkında | MA0186-1 | Dünya Bankası Geliştirme |
| Akış Sitometresi | BD | FACSCalbur | Akış Sitometrisi Apoptoz Testi |
| Floresan Ters Mikroskop | NIKON(Japonya) | TS2-FL | Hücre Gözlemi |
| Floresan Kantitatif PCR Cihazı | ABI (ABD) | 7300 | PCR Deneyi |
| GAPDH | protein teknolojisi | 60004-1-IG | WB Dahili Referans Antikoru |
| Glikoz Test Kiti | Jiancheng Belediyesi | A154-1-1 | Biyokimyasal Test |
| HIF1A | BOSTER | A00013 | WB Antikoru |
| HRP-konjuge Affinipure Keçi Anti-Fare IgG(H+L) | protein teknolojisi | SA00001-1 | İmmünohistokimya (IHC) Deneyi |
| HRP konjuge Affinipure Keçi Anti-Tavşan IgG(H+L) | protein teknolojisi | SA00001-2 | İmmünohistokimya (IHC) Deneyi |
| K1 hücre hattı | Çin Bilimler Akademisi Hücre Bankası (Şanghay, Çin) | NA | İnsan papiller tiroid karsinomu hücre hattı |
| Laktik Asit Test Kiti | Jiancheng Belediyesi | A019-2-1 | Biyokimyasal Test |
| Mikroplaka Okuyucu | Termo(ABD) | K3 | ELISA Algılama |
| PAGE Jel Ultra Hızlı Hazırlama Kiti (%15) | Meilunbio Hakkında | MA0384 | WB Elektroforezi |
| PCR Cihazı | BIO-RAD(ABD) | PTC100 Serisi | PCR Deneyi |
| Önceden boyanmış Gökkuşağı Protein İşaretleyici | Meilunbio Hakkında | MA0342 (İngilizce) | WB Elektroforezi |
| Protein Dikey Elektroforez Sistemi | BIO-RAD(ABD) | GÜÇ PAC 200 | WB Elektroforezi |
| SDS-PAGE Protein Yükleme Tamponu (5X) | Beyotime | P0015L | WB Elektroforezi |
| Sodyum Dodesil Sülfat (SDS) | Sigma | 151-21-3 | WB Elektroforezi |
| TPC-1 hücre hattı | Çin Bilimler Akademisi Hücre Bankası (Şanghay, Çin) | NA | İnsan tiroid karsinomu hücre hattı |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.