Name: In Vitro Düzenleyici T Hücrelerinin Fonksiyonel Analizi: Proliferasyon ve Farklılaşmaya Odaklanma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Öğrenin fare Treg hücrelerinin fonksiyonel analizi için modifiye edilmiş in vitro baskılama testi. Bu yöntem hem efektör T hücre proliferasyonunu hem de Th1 ve Th17 farklılaşmasını aynı anda değerlendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1.5 mL centrifuge tube</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>12.5 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>1250 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>15 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>200 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>48-well plates</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>5 mL syringe piston</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>50 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>50 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>70 &mu;m cell strainer&nbsp;</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD28 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD3 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Anti-mouse Foxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Anti-mouse IFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Anti-mouse IL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S Flow Cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>immune cell samples için akış sitometre veri toplama</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>primary lymphocytes ve T cell subsets izole etmek için</td></tr><tr><td>CD25 Monoclonal Antibody (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>CD45.1 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>primary lymphocytes ve T cell subsets izole etmek için</td></tr><tr><td>CD45.1 Monoclonal Antibody (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>CD45.2 Monoclonal Antibody (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) Monoclonal Antibody (MEL-14), FITC&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>eBioscience Cell Proliferation Dye eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>akış sitometre veri analizi için yazılım</td></tr><tr><td>Golgi-Plug Protein Transport Inhibitor</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Human TGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Ionomycin calcium salt</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>LD Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>OctoMACS Separators</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>PE Rat IgG1, &kappa; Isotype Ctrl Antibody</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 Rat IgG2a kappa Isotype Control Antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Purified anti-mouse CD16/32 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>hücre sıralama için</td></tr><tr><td>Recombinant mouse IL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Recombinant Mouse IL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysing Buffer)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>veya eşdeğeri</td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate (10

in vitro düzenleyici t hücrelerinin fonksiyonel analizi: proliferasyon ve farklılaşmaya odaklanma

In Vitro Functional Analysis of Regulatory T cells: Focus On Proliferation And Differentiation

Temsilci deneyde, Treg ile zenginleştirilmiş hücrelerin Th1 ve Th17 hücrelerinin çoğalması ve farklılaşması üzerindeki etkilerini incelemek için naif T hücreleri Tresp hücreleri olarak kullanıldı. Bu deneyde, Tresp hücreleri anti-fare CD3 ve APC ile zenginleştirilmiş CD4+ olmayan hücreler tarafından aktive edildi ve ardından IL-12 p70 indüksiyonu altında Th1 hücrelerine veya TGF-β1 ve IL-6 indüksiyonu altında Th17 hücrelerine farklılaştı. Bu iki indüksiyon koşullarında, Tresp hücrelerinin çoğalma ve farklılaşm...

In Vitro Düzenleyici T Hücrelerinin Fonksiyonel Analizi: Proliferasyon ve Farklılaşmaya Odaklanma

Regulatory T (Treg) cells play key roles in maintaining immune homeostasis. Abnormalities in Treg cell function are associated with various diseases, ...

in-vitro-functional-analysis-regulatory-t-cells-focus-on

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz tek bir insan kan bağışında düzenleyici, bellek ve naif T hücreleri oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Polarize Tregs sonra da burada ayrıntılı bir bastırma testi dahil olmak üzere genetik homojenlik ile genetik ve fonksiyonel uygulamalar çeşitli diğer komutlara göre olabilir.

İlköğretim İnsan naif ve Bellek T Hücreleri gelen İsteyerek Düzenleyici T Hücreleri Üretimi

Indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerden T lenfositlerin Nesil T hücre tabanlı immünoterapi için embriyonik kök hücreler kullanarak alternatif bir yaklaşım verir. Yöntem kullanılarak ya da...

T Lenfositler doğru İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Yönetmen Farklılaşma

CD4+ Regülatör T hücreleri güçlü immün modülatörlerdir ve immün homeostazda önemli işlevlere hizmet ederler. Bu hücrelerin periferik kandaki azlığı, özellikle HIV-1 enfeksiyonu bağlamında fonksiyonel çalışmaları zorlaştırır. Burada, HIV-1 ile enfekte bireylerden alınan periferik kandan fonksiyonel CD4 + Treg'leri izole etmek ve genişletmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Yeni Araçlar HIV-1 ile enfekte bireyler gelen Düzenleyici T hücreleri büyütmek için

Naif CD4 Coxsackie adenovirüs reseptör transgenik ekspresyonu ile T-hücreleri içine adenoviral gen transferi düzenleyici T hücre farklılaşmasının moleküler analiz...

Naif CD4 adenoviral İletimi Treg Farklılaşma Eğitim Hücreler T

Naif CD4+ T hücreleri, aktivasyon sırasındaki ortama bağlı olarak çeşitli alt kümelere polarize olur.  Naif CD4 + T hücrelerinin çeşitli efektör alt kümelerine farklılaşması, T hücresi reseptör uyaranlarının ve spesifik sitokin sinyallerinin eklenmesiyle in vitro olarak elde edilebilir.

Fare Naif CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Hücre İzolasyonu ve<em&gt; In vitro</em&gt; T hücre alt içine Farklılaşma

Burada, naif ve kronik lenfositik koryomenenjit virüsü ile enfekte farelerden izole edilen düzenleyici T (Treg) hücrelerinin fenotipini analiz etmek için bir protokol açıklıyoruz. Ek olarak, Treg hücrelerinin baskılayıcı aktivitesini değerlendirmek için bir süreç sunuyoruz.

Fenotipik ve Kronik Lenfositik koryomenenjit Virüs ile enfekte Fare İzole Aktif Düzenleyici T hücrelerinin Fonksiyonel Analiz

Bu protokol, in vitro olarak naif CD4 + T hücrelerinden üretilebilir üretimi ve insan kaynaklı düzenleyici T hücrelerinin (iTregs) fenotipleme tarif eder. FoxP3 indüksiyonu için farklı protokoller ilgili protokolleri ile elde edilen spesifik iTreg fenotipleri çalışması için izin verir.

Bir TGF-β-içeren Protokolü kullanılarak naif CD4 + T hücrelerinden insan CD4 + FoxP3 + Bağlı regülatör T hücreleri (iTregs) in vitro ayrımında

Burada, hoşgörü Ekiminde teşvik ve içinde in vitro ve in vivo değerlendirmek için bir protokol farklı hücre alt kümeleri alıcıdan gelen süpresif kapasitesi ve donör veya eksojen antijenleri doğru alıcının bağışıklık durumu mevcut.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

Bu makalede, üç boyutlu (3D) timik kültür sistemi tarafından tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre kaynaklı timik göçmenler (iTE) oluşturmak için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. iTE, proliferasyon, hafıza oluşumu ve tümör baskılanması kapasitesine sahip naif T hücreleri ile yakından ilişkili T hücrelerinin homojen bir alt kümesidir.

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

Burada kantitatif PCR (qPCR) kullanılarak saptanan epigenetik imzalar ile bağışıklık hücresi kimliğini ve saflığını belirlemenin sağlam bir yöntemini tanımlıyoruz. Belirli bir lokustaki DNA demethylation belirli bir hücre tipi için benzersiz bir tanımlayıcı olarak hizmet verir ve CD8+ veya Th17 T hücrelerinin tanımlanmasına olanak tanır.

Epigenetik Tabanlı Kantitatif PCR Kullanarak Bağışıklık Hücre Kimliğinin ve Saflığın Belirlenmesi

Öğrenin fare Treg hücrelerinin fonksiyonel analizi için modifiye edilmiş in vitro baskılama testi. Bu yöntem hem efektör T hücre proliferasyonunu hem de Th1 ve Th17 farklılaşmasını aynı anda değerlendirir.

In Vitro Düzenleyici T Hücrelerinin Fonksiyonel Analizi: Proliferasyon ve Farklılaşmaya Odaklanma

Daha fazla video keşfet