Name: Kabul edilmiş DTH indüksiyonu sonra Kulak Görüntüleme Efektör Bellek T hücreleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-14T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: Öğrenin gecikmiş tip aşırı duyarlılık indüksiyonu ve iki foton mikroskobisi ile sıçan kulağında efektör bellek T hücrelerinin canlı görüntülenmesi. Bu yöntem immünolojik yanıtları in vivo incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Kabul edilmiş DTH indüksiyonu <a href="/index/Details.stp?ID=325">İndüksiyon ve İzleme</a> Lütfen vallahi makalesine bakın: <a href="/index/Details.stp?ID=325">Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık</a> Christine Beeton George K. Chandy Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü, University of California, Irvine J. görüntülenmiştir Deneyler, Sayı 8 Burada, bu protokol fagositik antijen-sunan hücreler görünüm için izin etiketsiz antijen ile 1:1 oranında antijen (ovalbumin) Texas-Kırmızı konjuge kullanarak modifiye ettiler. Kulak Doku Hasat <ol><li> İstediğiniz zaman noktada onaylanmış hayvan protokolde belirtilen usul ile sıçan Euthanize. Burada, aşırı dozda anestezi, izofluran kullanın. Bu, iyi havalandırılmış bir kaput içinde bulunan kapalı bir kap içinde yapılır. Hayvan torasik kavite açılması ve kalp kesim ya dekapitasyon ölü olduğundan emin olun. </li><li> Büyük makas kullanarak hayvanın vücuduna mümkün olduğu kadar yakın tek bir kesim, (Şekil 1) kulak çıkarın. <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_0/Figure_1.jpg" alt="Figure_1.jpg"> Şekil 1. Rat kulak kaldırılması </li><li> Içeren bir buz 1x PBS veya RPMI-1640 ~ 10 ml 15 ml konik tüp kulak yerleştirin. Buz üzerinde doku örnekleri doku görüntüleme hazırlamak için hazır olana kadar tutun. </li><li> Mümkün olduğunca çabuk Görüntü doku, hasat ve anında görüntülü doku göre 1 ila 2 saat buz üzerinde doku, hücre hareketi üzerinde belirgin bir etkisi olduğunu, ancak, bulabilirsiniz. </li></ol> Görüntüleme için Doku Hazırlama Epidermal ve dermal Katman I. Kaldırma * Not: derin dermal tabaka sağlam tutulmalıdır. Eğer doğru yapılırsa büyük kan damarları kalacaktır ve kulak kıkırdak maruz kalmayacaktır. Herhangi bir inflamasyon (kontrol koşulları) var, özellikle bu zor bir tekniktir ve bir diseksiyon mikroskop kullanılması yararlı olur. <ol><li> 10 cm doku kültürü çanak konik tüp doku ve medya yerleştirin. </li><li> Eldivenli eller, dorsal yüzü yukarı bakacak şekilde (Şekil 2) kulak kulak (distal) ucuna hafifçe sıçan kulak tutun ile. <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_1/Figure_2.jpg" alt="Figure_2.jpg"> Şekil 2. Kulak keserek kürk </li><li> Kulak üst, derin dermis dermis ayrı ucu kapalı Dumont # 5 makas kullanırken sabit doku başparmak ile. Alternatif olarak, kulak kenarı deri / derin dermis bir çıkıntı varsa, bu forseps ile kavradı ve yavaşça altındaki doku (Şekil 3) ayrı çekti. <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_2/Figure_3.jpg" alt="Figure_3.jpg"> Şekil 3. Üst dermis kaldırılması </li><li> Bir kez cilt küçük bir alanda alternatif hafifçe kaldırın ve yerinden deri soyulabilir, dermal katmanlar ve forseps arasında kesmek için makas kullanarak ayırma adımları tekrarlayın, altta yatan doku ayrılmış oldu. </li><li> 5 x 5 mm veya kulak doku antijen enjeksiyonu ilk site (Şekil 4) en az 3 mm daha geniş bir alana Açığa. <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_3/Figure_4.jpg" alt="Figure_4.jpg"> Şekil 4. Görüntüleme için maruz Doku </li></ol> II. Görüntüleme Sahne Doku güvenliğini <ol><li> Plastik bir kapak kayma hazırlanan doku biraz daha büyük bir boyuta kesin. </li><li> 3M Vetbond ™ slaytta doku güvenli yapıştırıcı ince bir tabaka halinde sürün. </li><li> Hazırlanan doku (görüntü muhtemel değildir) köşesinde tutun, medya kaldırmak ve dab doku, lens kağıt veya Kym üzerinde alt aşırı medya kaldırmak için silin. </li><li> Tutkal kapalı slayt (ıslak mendil hemen Vetbond kürleri) doku kenarına dokunun. (Şekil 5) slayt dokunmak için son olan diğer ucunu nazikçe, düz doku germek <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_4/Figure_5.jpg" alt="Figure_5.jpg"> Şekil 5. Kayma kapsayacak şekilde doku Dağı </li><li> Cure Vetbond ™ tersine doku örneği / slayt ve daldırma, doku ve slayt yüzü aşağı ve aşağı yukarı 45 derecelik bir açıda olduğu gibi medya bir rezervuar. Ters bir açıyla Holding doku maruz kalan doku yüzey kür fazla tutkal önlemek için yardımcı olur. Tutkal doku yüzeyine lazer engeller (Şekil 6). <img src="/files/ftp_upload/old/907_2008_8_13_5/Figure_6.jpg" alt="Figure_6.jpg"> Şekil 6. Vetbond doku glu CureMedyada daldırma e Not: Adımlar 2-5 master için biraz pratik gerektirebilir. Ilk kez denemeden önce atılır veya ekstra doku parçaları ile pratik deneyin. </li><li> Dab üzerine silikon gres slayt altındaki küçük bir miktar. </li><li> Perfüzyon odasında slayt yerleştirin. Perfüzyon medya, 37 ° C akan ve doku eklemeden önce oksijenli olduğundan emin olun. Perfüzyon odasının alt ve plastik kapak kayma arasında silikon gres yağı ile bir mühür slayt kenarlarını hafifçe bastırın. </li></ol> III. İki-Foton Görüntüleme <ol><li> Parlak alan iletilen ışık kullanarak, doku üstüne odaklanır. Tüm ışıkları kapatın. </li><li> Lazer açın, çok foton mikroskop sistemi tarafından gerekli Proje Yönetim Ekipleri. </li><li> Ikinci harmonik üretimi, yüksek emretti lifli proteinler (SHG) (kolajen ve miyozin) ikaz lazer yarım dalga boyunda bir sinyal üretir. Mikroskop "mavi" kanalını kullanarak görüntülenebilmekte 450 nm'de SHG önde gelen 900 nM uyarma kullanın. SHG nesil bir non-lineer (iki-foton) işlemi ve bu nedenle floresan iki foton uyarma benzer bir optik "Kesit" etkisi sağlar. Paralel olarak çalışan fibriller görüntülenmiştir izin vermeyecek SHG tepe verimliliği, fibriller lazer dik oluşur. 1 </li><li> Bol hücre ile iyi bir görüntüleme alanı bulun hücrelerin çoğunluğunun merkezi ve görüntüleme başlar, satın alma alanı ayarlayın. Not: DTH reaksiyonlar, T hücreleri ve diğer hücre infiltrasyonlar sıklıkla, diğer alanlarda hücreler 2 infiltre yoksun ise birlikte konsantre olarak bulunmuştur . Bu nedenle, doku görüntü için en uygun alanı bulmak için arama biraz zaman alabilir. </li><li> Görüntüleme sırasında hücre hızı ve polarite değerlendirerek hücre canlılığı için kontrol edin. Minimal fotoğraf zarar görmesini sağlamak için kabul edilebilir bir görüntü kalitesi sağlayan en düşük lazer gücü kullanın. </li><li> Yeni bir doku hazırlanması gerektiği gibi değiştirin. </li></ol>

<ol><li>Koo, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+the+voltage-gated+potassium+channel+Kv1.3+inhibits+immune+responses+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo.</a> J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).</li>
<li>Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eosinophil+activation+and+T+lymphocyte+infiltration+in+allergen-induced+late+phase+skin+reactions+and+classical+delayed-type+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity.</a> J Immunol. 147, 816-822 (1991).</li>
<li>Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoaggressive+effector+T+cells+in+the+course+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+visualized+in+the+light+of+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy.</a> J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).</li>
<li>Kawakami, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+effector+cell+trafficking+and+autoantigen+recognition+within+the+unfolding+autoimmune+encephalomyelitis+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion.</a> J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).</li>
<li>Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+lymphocyte+motility+and+antigen+response+in+intact+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node.</a> Science. 296, 1869-1873 (2002).</li>
<li>Matheu, M. P. B., A, C. G. arcia, Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Situ+Imaging+of+Effector%2FMemory+T+Cells+During+DTH+and+Suppression+by+Kv1.3+Channel+Block%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block.</a> Immunity. , In Press (2008).</li>
</ol>

kabul edilmiş dth indüksiyonu sonra kulak görüntüleme efektör bellek t hücreleri

Imaging Effector Memory T cells in the Ear After Induction of Adoptive DTH

Efektör / bellek T lenfositleri - Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH), ana oyuncuları CCR7 olan bir bağışıklık reaksiyonu . Burada, uyaran ve sıçan kulakta bir DTH reaksiyon ilerleme kaydetmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Efektör / bellek T hücre yanıtı - Bu sıçan kulak doku hazırlanması CCR7 iki foton görüntüleme için bir gösteri izledi. Efektör / bellek T hücre hattı (Beeton, C J. görüntülenmiştir deneyler, Sayı: 8) - Bir evlat edinen DTH GFP etiketli Ova özel CCR7 intraperitoneal enjeksiyonu ile indüklenen. Hücreler daha sonra 48 saat önce meydan görselleştirme izin Texas-Kırmızı Ova ve Ova konjuge 1:1 karışımlar (Ova-TR) ile serum fizyolojik (kontrol kulak) ve diğer bir kulak enjekte sıçan denge sağlaması için izin verilir yerleşik antijen-sunan hücreler. Biz bir görüntüleme motilite bir immün yanıt sırasında, ikinci harmonik üretimi, kolajen liflerinin görselleştirme ile birlikte derin dermal tabaka içinde hücreler için yararlı doku hazırlanması yöntemi açıklanmaktadır. Kulak doku 5 x 5 mm kareler (biraz daha büyük daha iyidir) oyulmuş ve sonra 37 görüntüleme odasında silikon gres kullanılarak güvenli ve oksijen kabarmış doku kültürü ortamı superfused Vetbond ™ kullanarak plastik kapak bordroları monte ° C .

Burada uyaran ve sıçan kulak gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) reaksiyon ilerleme kaydetmek için bir yöntem gösteriyor. Bu sıçan kulak doku hazırlanması / bellek efektör T hücre yanıtının iki foton görüntüleme için bir gösteri izledi.

Kabul edilmiş DTH indüksiyonu sonra Kulak Görüntüleme Efektör Bellek T hücreleri

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH), ana aktörlerin CCR7+ efektör / bellek T lenfositleri olduğu bir immün reaksiyondur. Burada, bir ...

Merhaba, ben Melanie Matthew. California Üniversitesi Irvine'deki Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde, Micah Hollins laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim. Bugün, Dr. Christine Beaton ile birlikte, sıçan kulağındaki yanıt veren efektör veya bellek T hücresi popülasyonunu nasıl görüntülediğimizi size göstereceğiz.Dr. Christine Beaton öncelikle sıçan kulağında gecikmiş tip aşırı duyarlılık DTH oluşturacaktır. Ardından, iki foton mikroskobu ile sıçan kulağının in situ görüntülemesine geçeceğiz. İki gün önce, bir Lewis sıçanına GFP etiketli albümin spesifik T hücreleri enjekte ettim.Ve bugün aynı sıçanın kulağına uygulama yapacağım. Sağ kulağa albümin enjekte edeceğim ve sol kulağa ise sadece PBS enjekte edeceğim.Enjekte ettiğim albümin dozu 20 µL içerisinde 20 µg'dır. Kullandığım albümin, Texas Red ile işaretlenmiş albümin ve işaretlenmemiş albüminin bir bire bir karışımıdır. Bu, enjeksiyonu nasıl gerçekleştireceğimi göstereceğim olan sağ taraftır.Ben sağ elimi kullanıyorum. Bu yüzden, kulağın altına bir parmağımı, üstüne ise diğer parmağımı koyarak cildi gerebilmek için sol elimdeki eldiveni çıkardım; böylece iğneyle tam olarak nerede olduğumu görebilir ve iki cilt tabakası arasındak

imaging-effector-memory-t-cells-ear-after-induction-adoptive

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada Lewis sıçanlarda aktif DTH neden ve inflamatuar yanıt nasıl izleneceğini gösteriyor.

Sıçanlarda Aktif Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) İndüksiyon ve İzlenmesi

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T (TEM) lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada, antijen spesifik TEM hücreleri aktive Lewis sıçanlarda evlatlık DTH neden ve inflamatuar yanıt izlemek nasıl göstermektedir.

Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerden T lenfositlerin Nesil T hücre tabanlı immünoterapi için embriyonik kök hücreler kullanarak alternatif bir yaklaşım verir. Yöntem kullanılarak ya da...

T Lenfositler doğru İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Yönetmen Farklılaşma

Biz potansiyel greft reddi yüksek riski olmadan nakli sonrası immünsüpresyonun sonlandırmaya karar için kullanılabilecek değerli bir tanı testi açıklar. Tahlil Gecikmeli Tip Aşırı duyarlılık ilkelerini kullanır ve alıcılar tarafından monte hem donör özel efektör ve düzenleyici immün yanıtın doğru bir değerlendirme sağlar.

Antijen Özgül Düzenleme için Trans-vivo Gecikmeli Tip Aşırı Duyarlılık Testi

Video, in vivo adjuvan kaynaklı sitotoksik T lenfosit veya CTL üretimini izlemek için immünolojik bir yöntemi göstermektedir. Bir fareye genetik olarak tasarlanmış, proliferatif boya lekeli donör CD8 + T lenfositleri önceden enjekte edilir. Ovalbüminin adjuvanlarla deri altı enjeksiyonu, hasat sonrası immün boyama ve akış sitometrisi yoluyla tanımlanan sitotoksik CD8 + T lenfositleri oluşturur.

Adjuvan Aracılı Sitotoksik T Lenfosit Oluşumunu İzlemek İçin İmmünolojik Bir Teknik

enflamasyon bölgelerinde CD4 efektör T hücrelerinin geçiş motilite yöneten mekanizma nispeten bilinmemektedir. Biz görselleştirmek ve yerinde bu hücrelerin dinamik davranışının çalışması için izin iltihaplı kulak dermiş in vitro -astarlı CD4 T hücrelerinde işlemek için non-invaziv bir yaklaşım sunuyoruz.

Iltihaplı Dermisinde içinde görüntüleme CD4 + T hücre Geçiş Göç

Bu rapor, sıçan lakrimal bez özütü, ovalbümin ve komple Freund adjuvantının bir emülsiyonu ile bağışıklaştırma yoluyla Lewis sıçanlarında kronik deneysel otoimmün göz kurumasına neden olan bir yöntem ve bunu takiben göz kapağı yumrusu ekstraktı ve ovalbümin forniceal subkonjonktiva ve lakrimal bezlere enjekte edilir. Altı hafta sonra.

Eyeball Dokusunda Efektif Hafıza T Hücrelerini Artıran Kronik Otoimmün Kuru Göz Fare Modeli

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Orthotopic insan Glioblastoma Multiforme Xenografts fare modelleri sitotoksik bağışıklık hücrelerinin stereotaksik evlat edinen Transfer

Kontakt aşırı duyarlılık (CHS), alerjik kontakt dermatitin (AKB) murin deneysel bir modelidir. CHS, göğüs ve karın bölgesinin traş edilmiş cildini boyayarak reaktif hapten ile hassaslaşmaya dayanır, daha sonra seyreltilmiş bir hapten ile kulak derisi meydan okuması ile çeşitli şekillerde değerlendirilen bir şişlik reaksiyonuna neden olur.

Alerjik Kontakt Dermatitin Murin Modeli Olarak Kontakt Aşırı Duyarlılık

Çalışma, epikütan (EC) bağışıklama yoluyla farelerde bağışıklık tepkilerini modüle etmede cildin rolünü göstermektedir. Bir protein antijeni ile EC bağışıklaması, patojenle ilişkili moleküler paternlerle birleştirildiğinde temas aşırı duyarlılığında veya ters cilt kaynaklı baskılamada bağışıklık tepkilerini baskılayabilir. EC bağışıklaması, immünoterapiye etkili, iğnesiz bir yaklaşım olarak umut vaat etmektedir.

Epikütan İndüklenen İmmünomodülasyonun Murin Modeli

Öğrenin gecikmiş tip aşırı duyarlılık indüksiyonu ve iki foton mikroskobisi ile sıçan kulağında efektör bellek T hücrelerinin canlı görüntülenmesi. Bu yöntem immünolojik yanıtları in vivo incelemek için kullanılır.

Kabul edilmiş DTH indüksiyonu sonra Kulak Görüntüleme Efektör Bellek T hücreleri

Daha fazla video keşfet