Encyclopedia of Experiments: Biology
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- वयस्क फ्लाई में, अप्रत्यक्ष उड़ान की मांसपेशियां, या आईएफएम, पूरे छाती में फैली फ्लाई की सबसे बड़ी मांसपेशियां हैं। IFMs ड्रोसोफिला सहित दो पंखों वाली मक्खियों में विशेषता उच्च आवृत्ति विंग आंदोलनों को आर्केस्ट्रा करता है। दो विरोधी मांसपेशी फाइबर समूहों में आईएफएम शामिल हैं।
सबसे पहले, पृष्ठीय देशांतर की मांसपेशियां, या डीएलएमएस, आंत के ऊपर छाती के औसत विमान के साथ स्थित हैं और पूर्वकाल से पीछे तक फैली हुई हैं। दूसरा, पृष्ठीय वेंट्रल मांसपेशियां, या डीवीएमएस, छाती के ऊपर से नीचे तक फैली हुई हैं और टीडीटी द्वारा फ्लैंक की जाती हैं, या मांसपेशियों को कूदती हैं। दोनों मांसपेशी समूह क्यूटिकल से जुड़े होते हैं।
प्यूपरियम गठन के लगभग 48 घंटे बाद या एपीएफ, परिपक्व आईएफएम को एक साधारण विच्छेदन माइक्रोस्कोप के साथ नेत्रहीन रूप से पहचाना जा सकता है। उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम उच्च थ्रूप विश्लेषण के लिए 48 घंटे से अधिक पुराने पीपे से आईएफएम एकत्र करेंगे।
- 48 घंटे के बाद IFM विच्छेदन के लिए, एक हल्के से गीला पेंट ब्रश का उपयोग करने के लिए एक माइक्रोस्कोप स्लाइड पर घुड़सवार डबल तरफा चिपचिपा टेप की एक पट्टी पर मंचन pupae हस्तांतरण । एक लाइन में pupae ओरिएंट, वेंट्रल साइड नीचे, और पूर्वकाल स्लाइड के नीचे की ओर । जब pupae के सभी रखा गया है, के अलावा चिढ़ाने और पूर्वकाल spiracles के ऊपर पहला पुपल मामले खोलने के लिए संदंश का उपयोग करें, और धीरे पीछे की ओर dorsally संदंश की एक जोड़ी स्लाइड, पुपल मामले को काटने के रूप में संदंश कदम ।
पिल्ला को खोले गए केस से मुक्त करें और तुरंत पिल्ला को दूसरे माइक्रोस्कोप स्लाइड पर पीबीएस की एक बूंद में ट्रांसफर करें। - जब सभी प्यूप को मुक्त कर दिया जाए तो प्यूप के पेट को छाती से दूर काटने के लिए बारीक कैंची का इस्तेमाल करें और पेट को अलग ढेर में धकेल दें जब सभी छाती हटा दिए गए हों, तो पीबीएस के बहुमत और पेट के ढेर को हटाने के लिए टिशू पेपर के एक टुकड़े का इस्तेमाल करें ।
एक ही गति में देशांतर शरीर धुरी के साथ सिर से काटने के लिए कैंची का उपयोग करने से पहले शेष छाती के लिए ताजा ठंडा PBS की एक बूंद जोड़ें छाती को आधे में विभाजित करने के लिए । जब पिल्ले के सभी विच्छेदन किया गया है, नंबर पांच संदंश का उपयोग करने के लिए hemisections में से एक का चयन करें और धीरे से ऊपर और IFMs के बीच के नीचे एक forceps की युक्तियां डालें ।
अभी भी संदंश की पहली जोड़ी पकड़े हुए, ठीक कैंची का उपयोग करने के लिए आईएफएम के एक छोर को काटने के लिए, पिल्ला १८० डिग्री घूर्णन से पहले आईएफएम के दूसरे छोर को क्यूटिकल और टेंडन से मुक्त करने की अनुमति देने के लिए । आईएफएम के दूसरे छोर को क्यूटिकल और टेंडन से मुक्त करने की अनुमति दी जा सके । आईएफएम के बंडल को छाती से पीबीएस बुलबुले के किनारे पर स्थानांतरित करने के लिए संदंश का उपयोग करें जगह में बंडल पकड़ ।
इसके बाद शव को स्लाइड के विपरीत दिशा में धकेल दें और बाकी आईएफएम को उसी तरीके से विच्छेदन करें। जब सभी आईएफएम एकत्र हो गए हैं, तो नमूनों में अपना रास्ता मिल सकता है कि किसी भी कूद मांसपेशी या छल्ली टुकड़े को हटाने के लिए नंबर पांच संदंश का उपयोग करें । फिर, पानी के तनाव का उपयोग करने के लिए धीरे से एक जोड़ी संदंश के बीच विच्छेदित IFMs पर कब्जा और एक १.५ मिलीलीटर माइक्रोसेंट ट्यूब में २५० माइक्रोरिफायरों से युक्त आईएफएम जगह है ।
