Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- I vuxenflugan är de indirekta flygmusklerna, eller IFMs, flugens största muskler som spänner över hela bröstkorgen.
För det första är de dorsala längsgående musklerna, eller DLMs, belägna längs bröstkorgens medianplan ovanför tarmen och sträcker sig från främre till bakre.
Med cirka 48 timmar efter pupariumbildning, eller APF, kan mogna IFMs visuellt identifieras med ett enkelt dissekeringsmikroskop. I exempelprotokollet samlar vi in IFMs från puppar äldre än 48 timmar APF för hög genomströmningsanalys.
- För IFM-dissekering efter 48 timmar APF, använd en lätt våt färgborste för att överföra den iscensatta poppan till en remsa av dubbelsidig klibbig tejp monterad på en mikroskopbild. Orientera popparna i en linje, ventral sida ner och främre mot botten av bilden.
Lossa poppan från det öppnade fodralet och överför omedelbart poppan till en droppe PBS på en andra mikroskopbild. När alla puppor frigörs, använd fin sax för att skära bort poppens buk bort från bröstkorgen och tryck buken i en separat hög. När alla bröstkorgar har tagits bort, använd en bit vävnadspapper för att ta bort majoriteten av PBS och högen med bukar.
Tillsätt en droppe färsk kyld PBS till de återstående bröstkorgarna innan du använder saxen för att skära från huvudet längs den längsgående kroppsaxeln i en enda rörelse för att dela bröstkorgen i hälften.
Håll det första paret tång stilla, använd fin sax för att skära ena änden av IFM bort från nagelband och senor innan du roterar poppan 180 grader för att låta den andra änden av IFM skäras loss från nagelband och senor. Använd tång för att överföra IFM-bunten från bröstkorgen till kanten av PBS-bubblan med vattenspänning för att hålla bunten på plats.
Tryck sedan slaktkroppen till motsatt sida av bilden och dissekera resten av IFMs på samma sätt. När alla IFMs har samlats in, använd sedan de fem tångarna för att ta bort eventuella hoppmuskel- eller nagelbandsfragment som kan ha letat sig in i proverna.
