Name: איתור פעילות Neu1 Sialidase בוויסות חיוג כמו הפעלת קולטן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-07T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: חקור פעילות סיאלידאז בוויסות חיוג כמו הפעלת קולטן במקרופאגים חיים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחרי תגובות תאיות ומנגנוני מערכת החיסון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

תמיכה חלקית על ידי מענקים גברת הוא מן למדעי הטבע וההנדסה מועצת המחקר של קנדה (NSERC), את Botterell הארי קרן Neuroscience Research, ARC, ואת המחקר קלי גארפילד לב וכלי דם הקרן לפיתוח. SRA הוא חתן פרס המלכה מחקר אוניברסיטת רוברט וילסון המלגה. ג&#39;יי הוא חתן פרס בוגר של המלכה ואת רוברט וילסון המלגה. AG ו SA הם מקבלי פרס בוגר של המלכה. המדע הבדיוני היה מקבל מלגת אונטריו בוגר במדע וטכנולוגיה (OGSST). AG הוא מקבל מלגת פרנקלין של המלכה בוגר שרך. SA הוא מקבל מלגת RS של המלכה בוגר מקלפלין.

1. החייאת&#39; תאים macrophage קפוא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני להחיות תאים קפואים מ -80 מעלות צלזיוס הקפאה, צריך להכין מדיום תרבות באמצעות סטרילי בינונית מסוננת השתנה Dulbecco של הנשר (DMEM) בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS) ו - 5 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​של plasmocin. Plasmocin הוא פתרון אנטיביוטי השתמשו במחקר שלנו לחסל ולמנוע זיהום mycoplasma של תרביות תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור בקבוקון אחד של תאים קפואים, מוסיפים 4 מ&quot;ל, 1 מ&quot;ל של מדיום תרבותי ל 25 ס&quot;מ 2 בקבוק תרבית תאים במנדף Biohazard הבלימה סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר את הבקבוקון של תאים קפואים לקוחים במקפיא -80 מעלות צלזיוס, הם הפשירו מהר מכסה המנוע סטרילית, אשר לוקח בערך 2-3 דקות על ידי ההתחממות יד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהתאים מופשר, הם מועברים במהירות לתוך בקבוקון המכיל את המדיום מותנה בעזרת פיפטה סטרילית 1mL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקבוקון המכיל את התאים ממוקמים בתרבית רקמה החממה ב 37 ° C ו 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים בדק צמיחה ועמידה על בסיס יומי עד שהם הופכים 75% עד 90% ומחוברות באמצעות מיקרוסקופ הפוכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הדגירה את התרבות התאים, 12 מ&quot;מ עגול שקופיות זכוכית מעוקר ידי כיסוי אותם אתנול 70% צלחת פטרי זכוכית גדול עבור שעות 1 בממשלה הבלימה Biohazard, אלכוהול הוא הסיר לאחר מכן מאוחסן עבור reusage, והצדדים כוס רטוב נותרים חשופים תזרים סטרילי סינון האוויר בממשלה תחת UV למשך 24 שעות או עד שהם יבשים. </li></ol> 2. ציפוי תאים עבור Assay Sialidase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ציפוי התאים, שקופית אחת בודדת סטרילי זכוכית עגול ממוקם היטב באחד היטב של פלקון 24-BD גם שטוחות תחתית עם מכסה רקמות תרבות צלחת קלקר שטופלו באמצעות עיקור מעוקל מלא בוערים, 4 &quot;, משונן, נירוסטה המלקחיים . עבור בקבוק אחד של תאים בנקודת המפגש 75%, אנו משתמשים בדרך כלל 12 בארות הצלחת תרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור תאים macrophage חסיד, המדיום DMEM מותנה הוסר מהבקבוק בעזרת פיפטה 5 מ&quot;ל סטרילי בממשלה הבלימה סטרילית. לשטוף את התאים חסיד פעם עם 1x סטרילי טריס בופר סליין pH 7.4 כדי להסיר כל מדיום המכיל סרום, ולהוסיף 1 מ&quot;ל של סידן זרחתי בינוני (CMF) חינם בופר ב-pH 7.4 מספיק כדי לכסות את התאים. התאים ממוקמים 37 ° C חממה כ -10 דקות או עד שהתאים מתחילים להמריא בבקבוק. הבקבוק ניתן התנדנדה קלות או מזועזע כדי לשחרר את כל התאים הנותרים חסיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי מ&quot;ל 1 של תאים המרחפים הבקבוק, להוסיף 3 מ&quot;ל של מדיום DMEM מותנה. קח 0.5 מ&quot;ל של תאים על תנאי sterilely והעבירו אותם בצלחת בתרבית רקמה המכילה את 12 עגול מ&quot;מ שקופיות הזכוכית. כ, 0.5 x 10 6 תאים מועברים השקופיות זכוכית עגולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות הרקמה צלחת התאים המכילים מודגרת על 37 מעלות צלזיוס 5% CO 2 למשך 24 שעות על מנת לאפשר לתאים לדבוק שקופיות זכוכית עגולה. </li></ol> 3. Sialidase Assay 1. ביצוע הבקרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום שקופיות מיקרוסקופ (חלבית: 1 סוף, 1slide, 25 x 75 x 1 מ&quot;מ) בקבינט בלימה או ספסל מעבדה להוסיף ידי ערבוב בסדר רציף המתחמים הבאים: 1 + 1 μL DAKO μL של 4-MUNANA ולבסוף + 3 μL של טריס בופר סליין pH 7.4 (TBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת התקשורת מאחד היטב המכיל את התאים, להרים בעדינות את השקף זכוכית עגול עם המלקחיים את &quot;4 לפינה של הבאר. בזהירות להסיר את השקופית זכוכית עם המלקחיים והמקום השקופית עם התאים הפונים אל הפתרון את התערובת על השקופית מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לקחת את השקופית microcope כדי מיקרוסקופיה עלית פלורסנט אשר הוגדר עבור המסנן UV ויש לו מצלמה דיגיטלית ללכידת תמונות ניאון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוקוס תחת מיקרוסקופ לעומת שלב עד שתוכל לראות את התאים ולאחר מכן לעבור למצב ניאון. צלמו תמונות של התאים תחת פלורסנט בבית 1 דקות, 2 דקות, ו - 3 דקות. קחו תמונה אחת של תאים תחת בניגוד שלב. </li></ol> 2. ביצוע הבדיקה חיובית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוט המתחמים הבאים לפי סדר רציף בשקופית אחרת מיקרוסקופ: 1 + 1 μL DAKO μL של 4-MUNANA + 2 μL של LPS + 1 μL של TBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 3.1.2 עד 3.1.4 לעיל. </li></ol> 3. ביצוע הבדיקה חיובית יחד עם מעכב טמיפלו neuraminidase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוט המתחמים הבאים לפי סדר רציף הבא בשקופית אחרת מיקרוסקופ: 1μL DAKO + 1μL של 4-MUNANA + 2 μL של LPS + 1 μL של טמיפלו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוזים טמיפלו הם מראש שהוכנו 1x טריס בופר סליין pH 7.4, הריכוז הסופי של תרכובות במגע עם תאים חיים בשקופית זכוכית עגול יהיה גורם לדילול של 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 3.1.2 עד 3.1.4 לעיל. </li></ol> 4. קביעת ריכוז של מעכבי צורך לעכב 50% פעילות Sialidase (IC 50) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לכמת את פלורסנט סביב התאים, התמונות מנותחות באמצעות ImageJ 1.38x עם תוסף לנתח את למדידת RBG. קח 50 קריאות נקודה אקראית של הקרינה המקיפה את התאים לחשב את הממוצע של הקרינה הכוללת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> IC 50 מופק מגרש של ריכוז מעכב המרה יחידות יומן (למשל, יומן ng / mL) על ציר ה-x נגד הקרינה אומר על ציר ה-Y באמצעות רגרסיה ליניארית. </li></ol> 5. סודות להצלחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי התאים בתרבית הם זיהום ללא mycoplasma. אנו משתמשים באופן שגרתי Plasmocin במדיום תרבות לשלוט על זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המצע neuraminidase מלאכותית, 4-MUNANA, יש להשתמש מוכן טרי. המצע מוכן ניתן להשתמש תוך שבוע עבור assay sialidase. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם שורת תאים יש ביטוי נמוך קולטן על פני התא, אפשר להשתמש מינון גבוה יותר של ליגנד לגירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לנו ניסיון גם כי תאי passaged במשך 6 פעמים עלול לאבד פנוטיפ הקולטן שלהם. טרי, תאים לתחייה צריך להיות תרבותי. </li></ol> 6. נציג תוצאות ראה פרוטוקול אנימציה של assay sialidase עם תוצאות נציג המצורף <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/2142/szewczuk_JoVE_sialidase_assay.pptx">קובץ Powerpoint</a> .

<ol><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2%2C3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Signal%22%5BJournal%5D)">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li>
<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase%5BTitle%5D)+AND+%22Glycoconjugate+Journal%22%5BJournal%5D)">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li>
<li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li>
<li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Signal%22%5BJournal%5D)">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li>
<li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage%2C+dendritic%2C+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G%CE%B1i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9%5BTitle%5D)+AND+%22Glycoconj+J%22%5BJournal%5D)">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR Gαi proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li>
<li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li>
</ol>

SRA ו PJ תרמו באותה מידה מחברים הראשון.

השימוש assay החדש שפותח כדי לזהות פעילות sialidase בתאים macrophage לחיות 2, השתמשנו בטכנולוגיה זו כדי לזהות פעילות sialidase בפעילות ליגנד-Induced sialidase ב לחיות BMC-2 תאים macrophage באופן תלוי מינון, כמו גם ב לחיות DC-2.4 התאים הדנדריטים , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 תאים אדנוקרצינומה החלב, WT האדם 1140F01 ו WG0544 סוג תאים פיברובלסטים אני sialidosis. מעכבי neuraminidase כמו טמיפלו (oseltamivir פוספט) עכבות thymoquinone-Induced פעילות sialidase ב לחיות BMC-2 תאים עם...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-MUNANA</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי</td><td>Hyclone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DakoCytomation, מדיום סמיך להרכבת דגימות פלואורסצנטיות</td><td>Dako</td><td>S3023</td><td>15 mL</td></tr><tr><td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td><td>Hoffmann-La Roche AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

איתור פעילות neu1 sialidase בוויסות חיוג כמו הפעלת קולטן

Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

היונקים קולטני Toll-כמו (TLRs) הם משפחה של קולטנים המזהים פתוגנים הקשורים דפוסי מולקולרית. לא רק TLRs חיישנים מכריע של חיידקים (כגון וירוסים, חיידקים טפיל) זיהומים, הם גם ממלאים תפקיד חשוב בפתופיזיולוגיה של מחלות זיהומיות, מחלות דלקתיות, ואולי גם מחלות אוטואימוניות. לפיכך, עוצמת ומשך תגובות TLR נגד מחלות זיהומיות חייבים להיות מבוקרים היטב. מכאן להבנת השלמות המבנית של קולטנים חיישן, אינטראקציות ליגנד שלהם ורכיבים איתות חיוני להגנה החיסונית שלאחר מכן. זה יהיה גם לספק הזדמנויות חשובות עבור שינוי המחלה באמצעות מניפולציה חיישן. למרות מסלולי איתות של חיישנים TLR מאופיינים היטב, הפרמטרים השליטה אינטראקציות בין חיישנים ligands שלהם נותרו מוגדרות היטב. זיהינו לאחרונה מנגנון חדשני של הפעלת TLR על ידי ליגנד הטבעי, שלא נצפתה בעבר 1,2. זה מצביע על כך ליגנד-Induced ההפעלה TLR נתונה לפיקוח הדוק על ידי הפעלת Neu1 sialidase. יש לנו עוד דווח כי Neu1 בחוזקה מווסת רצפטורים neurotrophin כמו TrkA ו TrkB 3, אשר כרוך Neu1 והמטריקס metalloproteinase-9 (MMP-9) צולבות לדבר מורכב עם קולטנים 4. Assay sialidase כבר בתחילה להשתמש כדי למצוא thymoquinone רומן, ליגנד, בשנת ההפעלה של sialidase Neu4 על פני התא של מקרופאגים, תאים דנדריטים ותאי פיברובלסטים דרך GPCR Gαi חלבונים MMP-9 5. עבור קולטני TLR, הנתונים שלנו מצביעים על כך Neu1 sialidase כבר מורכבים עם קולטני TLR-2, -3 ו -4, והוא המושרה על הכריכה ליגנד לקולטן אחד. הופעל Neu1 hydrolyzes sialidase sialyl α-2 ,3-linked β-galactosyl שאריות רחוקים ליגנד מחייב להסיר hinderance סטרית כדי dimerization TLR-4, MyD88/TLR4 גיוס מורכבים, ההפעלה NFkB ופרו דלקתיים תגובות התא. בדו&quot;ח משותף, sialidase Neu1 הוכח להסדיר phagocytosis בתאים macrophage 6. יחדיו, assay sialidase סיפק לנו תובנות רבות עוצמה המנגנונים המולקולריים של הפעלת ליגנד-Induced הקולטן. למרות הקשר המדויק בין sialidase Neu1 ואת ההפעלה של TLR, TRK קולטנים טרם הובהר באופן מלא, זה היה לייצג גישה חדשה או חלוצית מסלולים תקנה התא.

Assay sialidase היא גישה טכני פשוט כי יהיה להבהיר המנגנון המולקולרי רומן (ים) של חיישנים TLR של זיהומים מיקרוביאליים ומעורבות מחלות דלקתיות ברמת הקולטן על פני התא של מקרופאגים לחיות.

איתור פעילות Neu1 Sialidase בוויסות חיוג כמו הפעלת קולטן

קולטני Toll-like (TLRs) בינקים הם משפחה של קולטנים המזהים תבניות מולקולריות הקשורות לנתיב פתוגני. TLRs אינם רק חיישנים קריטיים של...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא להעריך את השראת הפעילות של cellular new one sase בתגובה לקשירת ליגנד לקולטן הספציפי שלו. דבר זה מושג תחילה על ידי גידול תאים על למסות זכוכית מעגליות בקוטר 12 מילימטר בתוך פלטת תרבית רקמות בעלת 24 בארות למשך 24 שעות. כשלב שני, התאים החיים ההודבקים למסת הזכוכית מובאים למגע ישיר עם תערובת שהוכנה מראש של סובסטרט של sase וליגנד של הקולטן, עם או בלי מעכבים ספציפיים, על גבי למסת מיקרוסקופ.את זכוכית העצירה מניחים מיד תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי על מנת להדגים ולתעד באופן דיגיטלי את תמונות הפלואורסצנציה. עם הזמן מתקבלות תוצאות המראות שינויים בפעילות של new one sase על פני השטח של התא, הקשורה לתאים חיים שעובדו עם הליגנד, בהתבסס על עוצמת הפלואורסצנציה הכחולה המקיפה את התאים תחת מיקרוסקופיית epi fluorescence.היתרון המרכזי בשימוש בטכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון אנליזה ספקטרופוטומטרית, הוא שימוש בכמות מופחתת של ריאגנטים. כמו כן, ניתן לצפות וללכוד תמונות של פעילות sase בתאים חיים. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לענות על שאלות מפתח בתחום האימונולוגיה, כגון בחינת אינטראקציות פוטנציאליות וחדשניות בין ליגנד לרצפטור, וכן בחינת ההשפעות של מעכבי אנזימים או חלבונים ספציפיים על הפעלת רצפטורים.את הפרוצדורה ידגימו ד"ר Ray Amit וד"ר PT Gath, סטודנטים לשעבר לתואר PhD מהמעבדה שלי, המ

detection-neu1-sialidase-activity-regulating-toll-like-receptor

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מדגים בדיקה לבחינת הפעילות התלויה בקולטן דמוי אגרה (TLR) של גורמי השעתוק גורם גרעיני-קאפה-B (NF-κB) וחלבון מפעיל -1 (AP-1) במקרופאגים. ה-TLRs מפעילים מפל איתות פרו-דלקתי בעת זיהוי דפוסים מולקולריים הקשורים לנזק (DAMPs), ומפעילים NF-κB ו-AP-1. המקרופאגים המהונדסים מייצרים אנזים אלקליין פוספטאז עוברי מופרש (SEAP) בהפעלת NF-κB ו-AP-1, אשר מזוהה באמצעות תגובה כרומוגנית.

בדיקה עבור NF-&kcy--תלוי TLR;B/AP-1 איתות גורם שעתוק במקרופאגים

סרטון זה מדגים בדיקה מבוססת תאים של כתב לסינון ננו-חלקיקים ביו-אקטיביים פוטנציאליים המעכבים איתות קולטן דמוי אגרה (TLR). הבדיקה כוללת החדרת ליפופוליסכרידים (LPS) מעורבבים עם כלאיים של ננו-חלקיקי פפטיד זהב למקרופאגים המבטאים את חלבוני הכתב - פוספטאז אלקליין עוברי מופרש (SEAP) ולוציפראז. הפחתת אות ה-TLR המושרה על ידי LPS בתיווך ההיברידים נקבעת על ידי מדידת אותות המדווח.

בדיקה לסינון ננו-חלקיקים ביו-אקטיביים לעיכוב איתות קולטן דמוי אגרה

תאים דנדריטים (DC) להפריש IL-1β בתגובה להכרה TLR8 של פורין הסינתטי, R848, ואחרי הפעלת inflammasome NLRP3 עם nigericin, ולכן, IL-1β יכולים לשמש למדידת פעילות inflammasome NLRP3. צביעה תאית ציטוקינים, immunoblotting, וELISA משמשים למדידת inflammasome NLRP3 תחול והפעלה באמצעות ביטוי IL-1β במדויק.

הפעלה ומדידה של NLRP3 Inflammasome פעילות באמצעות IL-1β בתאים דנדריטים נגזרות מונוציטים אדם

אנו מתארים שיטה מבוססת HPLC לקביעת חומצה N-acetylneuraminic ו- N-glycolylenuraminic חומצה בכבד העכבר חלב.

קביעת חומצות סיאליות בדגימות כבד וחלב של סוג הבר<em&gt; CMAH</em&gt; נוק- out עכברים.

כמו קולטן קולטן (TLR) איתות משחק תפקיד חשוב פתופיזיולוגיה של מחלות דלקתיות רבות של האדם, ואת הסדרת תגובות TLR על ידי חלקיקי ביו צפוי להיות מועיל בתנאים דלקתיים רבים. תאי ה- THP-1 מבוססי תאים מספקים פלטפורמה סינון רב-תכליתי וחזק לזיהוי מעכבים חדשים של איתות TLR.

הקרנת חלקיקים ביואקטיביים בתאי החיסון Phagocytic עבור מעכבי איתות כמו קולטן איתות

MALT1 מסדיר מולדת חסינות אך איך זה מתרחש נשאר מעורפל. השתמשנו החומר המדכא paracaspase סלקטיבית MALT1 הטכנולוגי-827 לפענח את התרומה של MALT1 איתות מולדת במורד הזרם של קולטני לקטין דמוי כמו אגרה או C-type, הוכחת MALT1 מסדיר את הייצור של תאים מיאלואידים ציטוקינים, ויוצאת של קולטני לקטין דמוי C-type, באופן סלקטיבי.

תאים מיאלואידים מולדת איתות לשביל רגולציה על-ידי פעילות Paracaspase MALT1

פרוטוקול זה מספק לחוקרים עם שיטה מהירה, עקיפה של מדידת tlr תלויי-NF-кb/AP-1 הפעילות שעתוק בשורה מקרופאג cell מורה בתגובה למגוון של משטחים פולימריים ושכבות חלבון נספחת כי המודל ביומיהמיקרוסביבה השתל ביומטריה.

תא עיתונאי מקרופאג שיטה לבחון קולטן שיחת כמו-תיווך NF-kB/AP-1 איתות על שכבות חלבון Adsorbed על משטחים פולימריים

פרוטוקול זה כולל סדרה של בדיקות פונקציונליות נויטרופילים שישמשו כשיטת סינון לכיסוי פונקציות ממסלולי איתות שונים. הפרוטוקול כולל הערכה ראשונית ופשוטה של כדאיות התא, טוהר, ייצור מיני חמצן תגובתי, נדידה בזמן אמת, פגוציטוזה, והצעה ראשונית של מלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים.

סדרה של טכניקות סינון לסקירה מהירה של פונקציית נויטרופיל

מוצג פרוטוקול ייחודי ומקיף ליצירת תאים דנדריטיים אנושיים שמקורם במונוציטים אנושיים (mo-DCs) מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים מבודדים (PBMCs) באמצעות טיפול בסיאלידאז. יתר על כן, מתוארות שיטות להערכת האפיון הפנוטיפי והפונקציונלי של mo-DCs ולהעריך כיצד טיפול בסיאלידאז משפר את רמת ההתבגרות של mo-DCs.

יצירת תאים דנדריטיים שמקורם במונוציטים עם פנוטיפים סיליליים שונים

כאן, אנו מציעים פרוטוקול פשוט המשלב הנדסת אוליגוסכריד מטבולית, כימיית קליקים ומיקרוסקופ הרחבה המאפשר הדמיה ביולוגית של N-גליקופרוטאינים תוך-תאיים עם רזולוציה משופרת באמצעות ציוד מיקרוסקופיה שגרתי.

הדמיה של סיאלילציה תוך-תאית עם כימיה של קליק ומיקרוסקופ הרחבה

חקור פעילות סיאלידאז בוויסות חיוג כמו הפעלת קולטן במקרופאגים חיים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחרי תגובות תאיות ומנגנוני מערכת החיסון.

איתור פעילות Neu1 Sialidase בוויסות חיוג כמו הפעלת קולטן

גלה סרטונים נוספים