Name: Dissection der Dünndarm-und Speicheldrüsen von Ae. aegypti Moskitos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 31 s
Description: Lernen Sie die Präparation von Dünndarm und Speicheldrüsen bei Aedes aegypti. Diese Technik ermöglicht molekulare Analysen zur Untersuchung von Krankheitserregern wie Dengue-Virus und Plasmodium.

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Dissection der Mitteldarm und Speicheldrüse Gewebe von Mücken, bedarf der vorherigen Vorbereitung 1X Phosphate Buffered Saline (1X PBS)-Lösung und Betäubung von Mücken, indem auf eine Temperatur von 4 ° C, bis immobilisiert. Die Mücken bleiben, indem sie in einer Petrischale, die kalt gehalten wird auf Eis betäubt. Andere Materialien erforderlich sind: Licht-Mikroskop mit 10-fach Objektiv, Pipette, spitzen Pinzette, Objektträger aus Glas-, Nadel-Spitze Sonden ausgestattet. Dünndarm-Dissektion <ol><li> Geben Sie einen Tropfen 1X PBS auf einen Objektträger unter dem Lichtmikroskop montiert. </li><li> Übertragen einer Mücke auf den vorbereiteten Schlitten durch stechende die Mücke Thorax mit einer Nadelspitze Sonde. </li><li> Halten Sie die Mücke mit der Sonde, die Zange auf den zweiten bis zum letzten Abdominalsegment fassen und vorsichtig abziehen Mücke Bauch in einer einzigen Bewegung. Der Mitteldarm bleiben sollte an der immobilisierten Thorax. </li><li> Entsorgen Sie den Bauch. Verwenden Sie die Zange, um den Mitteldarm aus dem Thorax zu lösen. </li></ol> Speicheldrüse Dissektion <ol><li> Geben Sie einen Tropfen 1X PBS auf einen Objektträger unter einem Lichtmikroskop montiert. </li><li> Pick-up eine Mücke durch stabbling den Brustkorb mit einer Nadelspitze Sonde. </li><li> Ziehen Sie Moskito-Beinen mit den Fingern. </li><li> Übertragen Sie die Moskitos auf die Folie. </li><li> Entfernen Sie den Kopf der Mücke mit einer Pinzette. </li><li> Halten Sie die Moskito-Thorax mit der Sonde, verwenden Sie eine andere Sonde vorsichtig nach unten auf den Brustkorb. </li><li> Die Speicheldrüsen sind am vorderen Teil des Thorax und kann durch Verwendung einer Nadelspitze Sonde und Abtrennen der Anhänge, die die Drüse eine Verbindung mit dem Thorax isoliert werden. Zwei seitlichen Lappen und einem medialen Lappen: Intakte Speicheldrüsen sind von drei Lappen besteht. </li></ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

dissection der dünndarm-und speicheldrüsen von ae. aegypti moskitos

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Der Moskito Mitteldarm und Speicheldrüsen sind wichtige Ein-und Ausspeisepunkten für Krankheitserreger wie Parasiten Plasmodium und Dengue-Viren. Dieses Video zeigt Protokoll Dissektion Techniken zur Entfernung der Mitteldarm und Speicheldrüsen von Aedes aegypti Moskitos.

Der Moskito Mitteldarm und Speicheldrüsen sind wichtige Ein-und Ausspeisepunkten für Vektor-Erreger wie Plasmodium falciparum und das Dengue-Virus. Dieses Video zeigt die Zerlegung Techniken zur Entfernung der Mitteldarm und Speicheldrüsen von Aedes aegypti Moskitos.

Dissection der Dünndarm-und Speicheldrüsen von Ae. aegypti Moskitos

Der Mitteldarm und die Speicheldrüsen der Mücke sind entscheidende Ein- und Austrittspunkte für Pathogene wie Plasmodium-Parasiten und Dengue-Viren. Dieses Videoprotokoll ...

Mein Name ist Judy Coleman, und ich gehöre zum James-Labor. Hier an der UCI befinden wir uns in der Abteilung für Molekularbiologie und Biochemie. Heute werde ich Eptide-Mücken dissezieren, wobei wir die Speicheldrüse und den Mitteldarm dissezieren werden.Wir interessieren uns für diese spezifischen Gewebe, da sie stark in den Weg des Virus und der Parasiten involviert sind. Wenn eine Mücke eine Blutmahlzeit aufnimmt, gelangt der Parasit oder das Virus in die Speicheldrüse, und von dort in den Mitteldarm. Es durchquert das epiteliale Mitteldarmgewebe und danach die Hämolymphe.Und dies gelangt durch die Blutbahn der Mücke, das Hämolymphe, und in die Speicheldrüse. Dort verbleibt es, bis es bereit ist, eine weitere Blutmahlzeit aufzunehmen. Gut.Was ich jetzt zuerst tun werde, ist, das Mitteldarm aus Aedes aegypti zu dissezieren. Zunächst muss ich einmal PBS hinzufügen. Dies ist ein Puffer, der physiologische Bedingungen bietet.Wir legen sie also auf den Objektträger, und ich habe eine Kältequelle, um zu verhindern, dass die Mücke während der Dissektion wegfliegt. Um das Mitteldarmgewebe zu erhalten, muss ich die Mücke fixieren. Ich verwende eine selbst angefertigte Sonde und führe die Sonde durch das Thorax der Mücke. Sobald ich sie unter dem Mikroskop habe, nehme ich die Pinzette auf, halte das äußerste Ende des Abdomens mit Saugkraft fest und ziehe es ab, wobei ich den Mitteldarm zurücklasse.Also befindet sich der Zwerg genau dort, und ich werde ihn entfernen. Da ist er. Dort ist der isolierte Mitteldarm.Im Moment werden wir die Speicheldrüsen aus den Achtzigerjahren von GT Auge sezieren. Bei diesem Verfahren verwende ich zwei verschiedene Nadeln und eine Pinzette. Ich habe hier eine Nadel mit einer geraden Spitze, mit der ich die Mücke festhalte.Ich verwende eine Sonde mit einem abgewinkelten Stift, um die Augenlinse aus der Mücke herauszuschieben. Die Pinzette verwende ich, um den Kopf der Mücke abzuziehen, bevor ich die Speicheldrüsen entnehme. Wenn ich die Mücke aus der Petrischale nehme, steche ich in den Thorax.Es ist einfacher für mich, die Drüsen herauszuziehen, wenn ich die Beine entfernen kann. Das mache ich dann manuell. Anschließend lege ich die Mücke in den Puffer, ziehe ihr den Kopf ab und drücke auf das Thorax, um die Speicheldrüse herauszupressen.Hier ist ein guter Blick auf die Speicheldrüse, und hier sieht man beide Teile des Paares der Speicheldrüsen. Wir haben gerade die Dissektion der Speicheldrüsen zusammen mit den Eingeweiden aus der Mücke der Gattung *Culex* abgeschlossen. Wir untersuchen dieses Material auf molekularer Ebene, um in den Weg des Virus oder des Parasiten innerhalb der Mücke einzugreifen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Sobald ein Gen als potentiell feuerfesten für die Dengue-Virus identifiziert ist, muss er für seine Rolle bei der Verhinderung virale Infektionen innerhalb der Mücke ausgewertet werden. Dieses Protokoll zeigt, wie das Ausmaß der Dengue-Infektionen von Mücken getestet werden kann. Die Techniken für den Anbau bis das Virus in Kultur-, Membran-Fütterung Moskitos menschlichem Blut und Testen von viralen Titer in der Mücke Mitteldarm demonstriert.

Protokoll für Dengue-Infektionen in Mücken (Aedes aegypti) und Infektionsbiologie Phänotyp Bestimmung

Sobald ein Gen als potentiell feuerfesten für Malaria identifiziert wird, muss er für seine Rolle bei der Verhinderung Plasmodium-Infektionen innerhalb der Mücke ausgewertet werden. Dieses Protokoll zeigt, wie das Ausmaß der Plasmodium-Infektionen von Mücken getestet werden kann. Die Techniken für die Vorbereitung der gametocyte Kultur-, Membran-Fütterung Moskitos menschlichem Blut und Testen von viralen Titer in der Mücke Mitteldarm demonstriert.

Protokoll für Plasmodium falciparum-Infektionen in Mücken und Infektionsbiologie Phänotyp Bestimmung

Zeitliche und räumliche Genexpressionsanalysen spielen eine entscheidende Rolle in der funktionellen Genomik.

Hybridisierung<em&gt; In-situ-</em&gt; Der Speicheldrüsen, Ovarien und Embryonen von Vektor-Mücken

Quelle: Liu, X. et al. Ein bakterielles orales Fütterungsverfahren mit antibiotikabehandelten Mücken. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video zeigt die Zerlegung des Mückenmitteldarms zur Isolierung von Darmbakterien. Der Mitteldarm wird aus dem Verdauungstrakt extrahiert, homogenisiert, um die Bakterien freizusetzen, und auf Nährstoffagar versetzt, um Bakterienkolonien zu kultivieren.

Isolierung von Bakterien aus dem Mücken-Mitteldarm

Aufgrund der auffälligen Ähnlichkeiten des Lebenszyklus und der Biologie von Nagetier-Malariaparasiten mit menschlichen Malariaparasiten sind Nagetier-Malariamodelle für die Malariaforschung unverzichtbar geworden. Hierbei haben wir einige der wichtigsten Techniken standardisiert, die bei der phänotypischen Analyse von wildflebenden und transgenen Nagetier-Malaria-Arten verwendet werden.

Phänotypische Analyse von Nagetier Malaria Parasiten Asexual und Sexuelle Blutstadien und Mückenstadien

Detaillierte Untersuchungen an Mückenstadien von Malariaparasiten sind entscheidend, um wirksame Strategien zur Blockierung der Übertragung zu entwickeln. Dieses Protokoll zeigt, wie man infektiöse Gametozyten effektiv kultiviert und diese Gametozyten dann an Moskitos verfüttert, um Mückenstadien von P. falciparumzu erzeugen.

Plasmodium falciparum Gametozytenkultur und Mückeninfektion durch künstliche Membranfütterung

Dieses Protokoll beschreibt Methoden hinter dem Ramsay-Assay, ionenselektiven Mikroelektroden, Scanning Ion-selective Electrode Technique (SIET) und In-vitro-Kontraktionsassays, die zur Untersuchung des adulten Moskito-Ausscheidungssystems, bestehend aus den Malpigh-Tubuli und dem Hinterdarm, angewendet werden, um gemeinsam Ionen- und Flüssigkeitssekretionsraten, kontraktile Aktivität und transepithelialen Ionentransport zu messen.

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Die ausgewachsene Mückenspeicheldrüse (SG) ist für die Übertragung aller durch Mücken übertragenen Krankheitserreger auf ihre menschlichen Wirte, einschließlich Viren und Parasiten, erforderlich. Dieses Video zeigt die effiziente Isolierung der SGs von den Larven (L4) Anopheles gambiae-Mücken und die Vorbereitung der L4-SGs für die weitere Analyse.

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Diese Methodik, die orale Ernährung und intrathorakale Injektionsinfektionen umfasste, konnte den Einfluss von Mitteldarm- und/oder Speicheldrüsenbarrieren auf die Arbovirusinfektion effektiv bewerten.

Experimentelle Virusinfektion bei adulten Stechmücken durch orale Fütterung und Mikroinjektion

Quantitative und kontrollierte Untersuchungen des Stichverhaltens von Insekten sind entscheidend, um wirksame Strategien zur Bekämpfung vektorübertragener Krankheiten zu entwickeln. In diesem Zusammenhang wird ein Verfahren zur Herstellung einer biohybriden Rasterkraftmikroskopie (AFM)-Sonde vorgestellt.

Entwicklung einer bio-hybriden Mosquito-Stinger-basierten Rasterkraftmikroskopie-Sonde

Mikrobielle Gemeinschaften in Mücken sind vielversprechend für biologische Vektorkontrollstrategien. Die meisten Symbionten sind nicht kultivierbar und erfordern metagenomische Analysen. Wir beschreiben eine Methode zur Sezierung weiblicher Mücken und zur Trennung von Eierstöcken, Mitteldarm- und Speicheldrüsen, um Kreuzkontaminationen zu verhindern, Mikrobiomstudien auf Organebene zu erleichtern und das Verständnis der Rolle von Mikroorganismen in der Mückenbiologie zu verbessern.

Präparierung von Mücken-Eierstöcken, Mitteldarm- und Speicheldrüsen für Mikrobiomanalysen auf Organebene

Lernen Sie die Präparation von Dünndarm und Speicheldrüsen bei Aedes aegypti. Diese Technik ermöglicht molekulare Analysen zur Untersuchung von Krankheitserregern wie Dengue-Virus und Plasmodium.

Dissection der Dünndarm-und Speicheldrüsen von Ae. aegypti Moskitos

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