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Afinidad La precipitación de los activos Rho GEFs El uso de un GST-etiquetados mutante de la proteína Rho (GST-RhoA (G17A)) a partir de lisados ​​de células epiteliales
JoVE Journal
Biology
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JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
DOI:

11:28 min

March 31, 2012

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

El método aquí presentado describe un ensayo para seguir la activación de RhoA específicos PIB / GTP Factores de cambio (GEFS) en células cultivadas, haciendo uso de una proteína de fusión GST RhoA mutante que tiene una alta afinidad por GEFs activados. GEFs se precipitan a partir de lisados ​​celulares, detectados por Western Blot y cuantificados por densitometría.

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