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Chapters
- 00:05Title
- 01:37CRISPR/Cas System Overview
- 02:29Generation of Long Pre-crRNA Substrates via PCR
- 04:14Generation of Intermediate Pre-cdRNA Substrates via Annealing of DNA Oligonucleotides
- 06:10Generation of Short Cas RNA Substrates via Custom RNA Oligonucleotide Synthesis
- 06:41In vitro T7 RNA Polymerase Transcription
- 08:04Cas6 Endonuclease Assay
- 09:08Results: Representative Cas6 Endonuclease Assay
- 11:10Conclusion
CRISPR / Cas sistemi mediata immunità adattativa in Batteri e Archaea. Molte proteine Cas si propongono di agire come agiscono sul endoribonucleases crRNA precursori di varia lunghezza. Qui si illustrano tre diversi approcci per la generazione pre-crRNA substrati per l'analisi biochimica di attività endonucleasi Cas.
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Substrate GenerationEndonucleasesCRISPR/Cas SystemsVirusesProkaryotic HostsBacterial EvolutionArchaeal LifeRestriction ModificationAbortive InfectionAdaptive Immune SystemsCRISPR SequencesCas GenesCas ProteinsSpacer ElementCRISPR ClusterPrecursor-crRNACas6 FamilyCrRNAsViral DNA UptakeCascade ComplexBase ComplementarityNuclease Cas3Invader DNA Destruction
