تقنية Subnormothermic فيفو السابقين الكبد الإرواء للتخزين، تقييم، وإصلاح الطعوم الكبد الهامشية

الهدف من هذا الإجراء هو الحفاظ على طعم الكبد وتقييمه في ظل ظروف فسيولوجية تقريبا. يتم تحقيق ذلك عن طريق استرداد طعم الكبد أولا من خنزير متبرع. في الخطوة الثانية ، يتم قنية الكبد ، ثم يتم توصيل الكسب غير المشروع بدائرة التروية خارج الجسم الحي.

في الخطوة الأخيرة ، تتم مراقبة خصائص التروية وخصائص طعم الكبد لوقت التروية المطلوب. في النهاية ، يتم استخدام مستويات ترانسفيراز أمينو الأسبارتات أو ST والتحليلات النسيجية للخزعات المتني لإظهار الحفاظ على الإصابة وقابلية بقاء طعم الكبد. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على طرق الحفظ الحالية ، مثل التخزين الثابت ، هي أن الحفظ في ظل ظروف فسيولوجية يؤدي إلى تقليل إصابة الحفظ ويسمح بالتقييم الوظيفي والعلاج للكسب غير المشروع قبل زرع الأعضاء الفعلي.

مباشرة بعد إحداث الموت القلبي عن طريق إدارة كلوريد البوتاسيوم ، قم بجمع 1.6 لتر من الدم من خنزير يوركشاير ذكر يتراوح وزنه من 30 إلى 35 كيلوغراما في أكياس CPDA ، وأغلق البطن ، واترك الكبد داخل البطن لمدة 45 دقيقة للحث على إصابة إقفارية دافئة مباشرة قبل نهاية نقص التروية الدافئ. الوقت يقذف الشريان الأورطي والوريد البابي بخطوط تدفق الأعضاء في هذا الوقت أيضا. استخدم التروية المزدوجة عن طريق ضغط الشريان الأورطي والأكياس التي تحركها الجاذبية البابية لشطف الكبد بمحلول جامعة ويسكونسن.

ثم اقطع الكبد من الخنزير ، واترك جميع الأوعية المتبقية طويلة وضعها في كيس الأعضاء. قم بتقليد الأجزاء الكبدية فوق وتحت الحمراء من كهف الوريد السفلي بنصف بوصة في ثلاثة أثمان من مخفضات البوصة بقفل إغراء. قم بتقشير الوريد البابي وشريان الكبد بثلاثة أثمان بوصة في ربع بوصة وربع بوصة بثلاثة أثمان البوصة.

يقلل بقفل إغراء في هذا الوقت أيضا. ثم أغلق الكيس وقم بتخزين الكبد على الثلج حتى التروية. لإعداد دائرة التروية خارج الجسم الحي ، قم بتوصيل تدفق الخزان الرئيسي بمضخة طرد مركزي ومؤكسج تجاري خلف الأكسجين.

قسم الأنبوب إلى سطرين. قم بتوصيل خط واحد بجهاز غسيل الكلى الذي يتم تصريفه مرة أخرى في الخزان الرئيسي. قم بتوصيل الخط الآخر بمرشح تقليل الكريات

قم بتقسيم الخط بعد مرشح تقليل الكريات البيض إلى خط شرياني لتزويد الشريان الكبدي بثمانية وإلى خط وريدي بوابة لتوصيل النفهات ثمانية إلى خزان ثان يتم تصريفه في الوريد البابي عن طريق تدفق الجاذبية. قم بتثبيت تدفق البوابة ثم قم بتوصيل الخط الشرياني بحلقة كهف الوريد التي يتم تصريفها في الخزان الرئيسي. لاستعادة السوائل ، اضبط درجة حرارة بدء الدائرة والحمام المائي على 20 درجة مئوية.

ثم قم بتغطية الحمام بغشاء غير منفذ لجمع الاستسقاء أو تسرب الثمانية. قم بتوصيل خط شفط مدفوع بمضخة الأسطوانة بالخزان الرئيسي. ثم حرر مشبك التدفق من الخزان الرئيسي واملأ الدائرة بمحلول التروية.

ابدأ تشغيل مضخة الطرد المركزي بسرعة 1،500 طلقة في الدقيقة ، مع التأكد من إخراج كل الهواء من الدائرة. ثم قم بتشغيل مصدر الغاز إلى الأكسجين. يعد توصيل الكبد بالدائرة أصعب جزء من الإجراء.

احرص على تجنب التواء الأنبوب وإزالة أي فقاعات لمنع إعاقة تدفق الكبد. يجب أيضا متابعة مستوى خزان البوابة بعناية. يجب ألا تكون فارغة أبدا.

قم بإزالة الكبد من الجليد وإخراج محلول جامعة ويسكونسن بالمحلول الملحي. ثم ضع الكبد على الغشاء فوق الحمام المائي. قلل سرعة مضخة الطرد المركزي إلى 1000 طلقة في الدقيقة ، وضع مشابك في الجانب الشرياني من حلقة كهف الوريد.

ثم قم بقطع الأنبوب بين المشابك وقم بتوصيل كل من تدفقات كهف الوريد بخط كهف الوريد. حرر المشبك من الخط الشرياني. صب النفوس ثمانية في القنية الشريانية للتخلص من الفقاعات وتوصيل الخط بالقنية.

قم بزيادة مضخة الطرد المركزي إلى 1،500 طلقة في الدقيقة وحرر المشبك الثاني من خط كهف فينر وحرر المشبك من الخزان الوريدي للبوابة لملئه. دع محلول التروية يصب في قنية البوابة ثم قم بتوصيله. الحرص على الحفاظ على استقرار مستويات السوائل في خزان البوابة.

بعد توصيل الكبد بالدائرة ، ارفع درجة حرارة الحمام المائي إلى 33 درجة مئوية خلال ال 60 دقيقة القادمة. تهدف إلى بدء تدفق الشرياني بحوالي 250 مل في الدقيقة عند 40 ملم من الزئبق. قد يصل هذا إلى 700 مل في الدقيقة أثناء التروية.

بمجرد زيادة الضغط حتى 70 ملم من الزئبق ، استهدف تدفق الوريد المنفذ من 500 إلى 600 مل في الدقيقة عند ثلاثة إلى خمسة ملليمترات من الزئبق. بعد رفع درجة الحرارة ، سيزداد التدفق الوريدي للمنفذ حتى 1 ، 100 مل في الدقيقة. اخفض الخزان الرئيسي لضبط التدفق الخارج على سالب ملليغرامين من الزئبق لمنع احتقان الكبد عن طريق انسداد التدفق الوظيفي ، مع التأكد من عدم وجود فقاعات هواء في الأنبوب الكاف

اضبط تدفق الكاليز ثمانية على 500 مل في الساعة. الحرص على ضبط تدفق غسيل الكلى بحيث لا يتم تخفيف أو تركيز PERFUSE الثماني. حافظ على درجة حموضة منخفضة أثناء بدء التروية لحماية العضو.

ضبط الضغط الجزئي لثاني أكسيد الكربون بشكل مستمر وصولا إلى 25 إلى 30 ملم من الزئبق بحيث يصل الرقم الهيدروجيني إلى مستوى فسيولوجي في غضون ساعة. لتقليد الظروف الفسيولوجية ، قم بحقن الجلوكوز والأنسولين باستمرار في الوريد البابي. حقن بيكربونات الصوديوم أو البوتاسيوم بعناية في الدائرة تحت التحكم المتكرر في الدم والغاز والكهارل ، ومراقبة التروية عن طريق غازات الدم الوريدية والشريانية الدورية وتحليلات ST.

مراقبة تدفق الأوعية الدموية والضغط. سيحافظ التروية المستقرة على مقاومة مستمرة للأوعية الدموية في نهاية فترة التروية خارج الجسم الحي. قم باستدعاء نظام التروية لأسفل ، ثم بعد فصل الأنبوب عن الكبد ، قم بإخراج PERFUSE ثمانية بشكل مزدوج من الكبد بمحلول جامعة ويسكونسن البارد.

أخيرا ، قم بتخزين الكبد على الثلج في كيس معقم قبل الزرع. يعد تحقيق تدفقات الأوعية الدموية المستمرة مع ضغوط مستقرة مؤشرا جيدا على الأكسجين الكافي. بمجرد الوصول إلى درجة الحرارة المستهدفة البالغة 33 درجة مئوية ، مستوى قيم التدفق عند نطاق ثابت ، فسيولوجي تقريبا لبقية فترة التروية ، في نفس الوقت يصبح العضو نشطا تمثيليا

يوضح هذا الرسم البياني ضغط الأكسجين الجزئي الوريدي، وهو علامة على استهلاك الأكسجين. خلال الساعتين الأوليين ، ينخفض ضغط الأكسجين الجزئي الوريدي إلى هضبة ثابتة في ذلك الوقت. في هذه الحالة النشطة الأيضية ، يبدأ الكبد في إنتاج الصفراء ويوفر جهاز غسيل الكلى توازن متوازن للإلكتروليت.

يعمل قياس A ST عبر الإنترنت كمراقبة للتلف الخلوي الكبدي. على سبيل المثال ، في هذه التجربة ، لوحظت زيادة ضحلة في A ST خلال فترة التروية بأكملها. يكشف تلطيخ H و e بعد ست ساعات من التروية عن نخر خلايا الكبد أقل من 5٪ مع بنية فصيصية وجيبية سليمة.

يظهر تلطيخ BAS للكبد المتدفق خارج الجسم الحي في نفس النقطة الزمنية تخزين الجليكوجين الخلوي المتجدد مقارنة بالتخزين المستنفد الذي لوحظ في ترقيع الموت القلبي للمتبرع المحفوظ على البارد. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء نموذج إعادة تروية الأعضاء مثل زراعة الكبد لدراسة تأثير نضح الكبد خارج الجسم الحي على إصابة إعادة التروية ووظيفة الأعضاء.