Name: Ein schnelles Verfahren für die Visualisierung von Live-immobilisierten Hefezellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Lernen Sie eine schnelle Methode zur Visualisierung immobilisierter Hefezellen mit fluoreszierenden Reportern. Diese Technik ermöglicht die Beobachtung epigenetischer Zustandsänderungen während der Zellteilung.

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Wir möchten Pete Houston und Eugenia Xu für ihre Hilfe danken.

<ol><li> Immobilisierten Zellen für die Zeit natürlich Epifluoreszenzmikroskopie. Bitte beachten Sie, dass dieses Protokoll nur dann sinnvoll, wenn die Objektive des Mikroskops unter die Mikroskoptisch. </li><li> Legen Sie Zellen in der gewünschten Konzentration in flüssigen Medien auf eine lange Deckglas (ca. 24x50mm) </li><li> Cut eine Agar-Block in der gewünschten Größe aus einem synthetischen Medien Platte (diese haben eine geringere Autofluoreszenz) und Ort über die Zellen. Legen Sie die Seite der Agar-Block nicht mit einer Pinzette in Kontakt mit den Zellen behandelt. </li><li> Für kürzere Zeit-Verläufe (bis zu 3 Stunden), diese Einrichtung ist ausreichend. Wenn Zellen sich bewegen, wenn visualisiert am Mikroskop, um die Lautstärke von Zellen oder erhöhen Bereich der Agar-Block. </li><li> Für längere Zeit Kurse, einen Tropfen frischen flüssigen Medien auf der Oberseite des Agar-Block, und legen einen Objektträger auf dem Agar-Block. Diese Folie reduziert die Verdunstung durch die Spitze der Agar-Block. Falls gewünscht, können die Ränder der Agar-Block in Kontakt mit dem Deckglas mit Vaseline weiter zu reduzieren Feuchtigkeit abgedichtet werden. Ich habe dieses Set verwendet für Filme bis zu 9 Stunden lang, mit der sich teilenden Zellen in Wildtyp-Preisen. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Die Autoren haben keine Offenlegungen vorzunehmen.

Dies ist ein schnelles Verfahren, dass Hefezellen immobilisiert, während immer noch um ein Wachstum. Wir haben das Wachstum der Hefe bis zu 10 Stunden gefolgt, mit der Hefe Anzeige Wildtyp Division Preise während des gesamten Experiments. Beachten Sie, dass dieses Setup das Objektiv unter dem Mikroskop Bühne werden muss.

ein schnelles verfahren für die visualisierung von live-immobilisierten hefezellen

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Wir stellen Ihnen hier eine einfache, schnelle und extrem flexible Technik zur Immobilisierung und Visualisierung von wachsenden Hefezellen durch Epifluoreszenzmikroskopie. Die Technik ist ebenso für die Visualisierung von statischen Hefepopulationen oder Zeitverläufe Experimenten bis zu 10 Stunden in der Länge geeignet. My-Mikroskopie untersucht epigenetische Vererbung auf die stille Paarung loci in S. cerevisiae. Es gibt zwei stille Paarung loci, HML und HMR, die normalerweise nicht zum Ausdruck, wie sie in Heterochromatin verpackt sind. In der sir1 mutierten Hintergrund Schweigen ist geschwächt, so dass jeder Ort kann entweder in der ausdrücklichen oder zum Schweigen gebracht epigenetische Zustand sein, so in der Bevölkerung als Ganzes gibt es einen Mix aus Zellen verschiedener epigenetische Zustände für beide HML und HMR. My-Mikroskopie gezeigt, dass es keine Beziehung zwischen der epigenetische Zustand der HML und HMR in einer einzelnen Zelle. sir1 Zellen stochastisch Schalter epigenetische Staaten, Gründung Schweigen zu einem vorher zum Ausdruck locus oder Ausdruck einer zuvor zum Schweigen Locus. Meine Zeit natürlich Mikroskopie beobachtet einzelnen sir1 Zellen und ihrer Nachkommen, um die Frequenz eines jeden der vier möglichen epigenetischen Schalter, und damit die Stabilität der einzelnen epigenetische Zustände in sir1 Zellen des Gastes. Siehe auch Xu et al., Mol. Gen. Zell 2006.

Eine schnelle Methode zur Visualisierung von wachsenden immobilisierten Hefezellen, hier zu fluoreszierenden Reporter bei der stillen Paarung loci HML und HMR angewendet

Ein schnelles Verfahren für die Visualisierung von Live-immobilisierten Hefezellen

Wir präsentieren hier eine einfache, schnelle und äußerst flexible Technik zur Immobilisierung und Visualisierung wachsender Hefezellen mittels Epifluoreszenz...

Das Ziel des Experiments besteht darin, eine Population von Sir1-exprimierenden Zellen unter dem Mikroskop verfolgen zu können, um zu beobachten, wie sich die epigenetischen Zustände mit jeder aufeinanderfolgenden Zellteilung verändern. Nehmen Sie einen langen Deckel, geben Sie etwa sieben µL Zellen darauf, platzieren Sie sie auf dem langen Deckel und verwenden Sie eine synthetische Nährmittelplatte. Nehmen Sie eine Rasierklinge und schneiden Sie Einschnitte in das Agar. Nehmen Sie einen Agarblock, heben Sie ihn an und legen Sie ihn über die Zellen.Okay, für Kurzzeiterfahrungen bis zu drei Stunden. Dies allein ist in Ordnung. Für Langzeiterfahrungen werden die Zellen immobilisiert; dazu gebe ich flüssiges Medium auf die Oberseite des Agar-Präparats und lege dann einen Deckgläser über das gesamte Präparat.Das Medium wirkt wie eine Abdichtung zwischen den beiden. Der Deckel dient lediglich dazu, Verdunstung von der Oberseite des Agarblocks zu verhindern. Bei dieser Versuchsanordnung bleibt der Agarblock feucht, und die Zellen teilen sich weiterhin für bis zu acht, mindestens acht Stunden.

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Forschung

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Biology

Biologie

Gene Löschungs-und Protein-Überexpression sind gängige Methoden zur Untersuchung von Funktionen von Proteinen. In diesem Artikel beschreiben wir ein Protokoll für die Analyse der Phänotyp Entwicklung als eine Funktion der Protein-Konzentration in der Bevölkerung und Single-Cell-Ebenen...

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Quantitative Live Cell Fluoreszenz-Mikroskopie Analyse von Fission Yeast

Wir präsentieren ein einfaches Protokoll zur Fluoreszenzmikroskopie Filme von wachsenden Hefezellen und eine GUI-basierte Software-Paket, um Single-Cell-Zeitreihen extrahieren zu erhalten. Die Analyse umfasst automatisierte Linie und Teilung Zeitzuweisung mit Sichtprüfung und manuelle curation der verfolgten Daten integriert.

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Untersuchung der Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics durch Fluoreszenz-Livezellmikroskopie

Vitale Fluoreszenzfarbstoffe sind wesentliche Werkzeuge für livezellbildende Analysen in der modernen Pilzzellbiologie. Dieses Papier beschreibt die Anwendung etablierter und weniger bekannter Fluoreszenzfarbstoffe zur Verfolgung der Plasmamembrandynamik, Endo-/Exozytose und Zellwandmorphogenese in fadenförmigen Pilzen.

Anwendung von Membran- und Zellwandselektiven Fluoreszenzfarbstoffen für die Live-Zell-Bildgebung von filamentösen Pilzen

Lernen Sie eine schnelle Methode zur Visualisierung immobilisierter Hefezellen mit fluoreszierenden Reportern. Diese Technik ermöglicht die Beobachtung epigenetischer Zustandsänderungen während der Zellteilung.

Ein schnelles Verfahren für die Visualisierung von Live-immobilisierten Hefezellen

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