Summary
이 프로토콜은 염료가 조정 해상도 등 기니 돼지 장용 신경계의 plexuses으로 손상 신경망에서 전기 활동의 광학 녹음을 활성화하는 방법 전압에 민감한 개념 단일 세포에서 다중 ganglionic 회로 등을 꼽을 수 있습니다.
Abstract
장용 신경계 (팔)는 격리 복잡한 행동을 수행하는 능력이 확인된 기능과 자체 네트워크를 포함하고 있습니다. 그 뉴런은 (직경 10-25 μm의) 창자 벽의 별개의 비행기를 역사는 plexuses에 배열되어
Protocol
1 부 : 조직 준비
- submucous 및 myenteric 신경 얼기 준비는 1백50-2백g (이전 2-3주) isoflurane 흡입과 참수하여 anesthetized되었습니다 하틀리 기니 돼지 작은 창자에서 연속적인 절개로 절연하고 있습니다. 안락사 후, 소장은 excised과 내용은 따뜻하고, 산소 솔루션 루멘 플러싱에 의해 제거됩니다. 우리는 25 MM HEPES, 37 미리 예열되어 7.4 (M199 - DM으로, 지금부터 함) 조정 5 MM NaHCO 3 2 MM의 글루타민, 그리고 산도, ° C.와 보충 중간 199 사용 프로토콜의 모든 나머지 단계는 그러나, 상온에서 실시한다.
- 창자 세그먼트 길이 80-10센티미터은 mesenteric 경계 오픈 M199 - DM을 포함하는 Sylgard 요리로 전송하고, 곤충 핀을 사용하여 점막 측면까지 마운트됩니다. 그것은 달아 후 조직이 정기적으로 정렬 점막 villi의 행을 가진 직사각형 모양을 전시 있도록도 긴장을 유지하기 위해 매우 중요합니다.
- 스트레이트 팁을 잘 더몬트 집게를 사용하여, 거의 수평 위치에서 그것은 쉽게 준비 중 한 끝에 villi를 잡을과 조직의 세로 축을 따라 거리에 당겨 점막 껍질. 샘플이 균일하게 고정된 경우, 점막의 리본은 submucous 신경 및 submucosal vasculature을 포함하는 submucosa를 노출, 몇 개인 뇌졸중에 분리 수 있습니다.
- plexuses의 미세 절개의 경우, 우리는 어두운 현장 조명과 해부 현미경을 사용하는 것이 좋습니다. 사실, 이런 종류의 조명에 의해 생성된 가상 입체 효과는이를 예방하거나 악기 쏜 손상을 최소화, 개별 레이어를 구별하는 데 도움이됩니다.
- submucosal 준비를하기 위해서, 우리는 필요 허스트와 맥커디 4의 고전적인 절차를 따르십시오)는 원형 근육 섬유의 방향 다음 submucosal 레이어에 상처를 만들기를,이 (예 : 모리아로 매우 미세 가위를 사용하여 얻을 수 MC19 또는 이에 상응하는 금액), 고급 가위를 사용하여 아래 원형 근육 레이어를 추진하면서 B)는 고급 포셉 매우 부드럽게 submucosa 리프팅, 분리가의 나머지 부분에서 submucosa을 해방이 진행됨에 따라 C)은 세로 가장자리를 따라 절단 준비, D)은 submucosal 준비의 최종 크기를 정의하는 첫 번째에서 거리에서 원형 근육 섬유의 방향 다음과 같은 두 번째 절개를하고. 단 30-50 μm의 두께이며 고사머 모양을 가지고 결과 submucosal 세그먼트는, 신선한 M199 - DM, 고정된 부드럽게하고 긴장하지 않고를 포함하는 다른 Sylgard 요리로 전송하고, 나중에 사용하기 위해 산소 챔버에 보관하실 수 있습니다.
- 원래의 용기를 세그먼트, 지금은 점막 및 submucosa을 박탈하고, 순환 근육이 노출과 함께 여전히 myenteric 신경 얼기 준비를 양보하는 데 사용할 수 있습니다. myenteric 신경 얼기를 노출하기 위해, 하나는 많은 원형 근육 계층의 가능한 방지해야합니다. 이것은 이전 단계에서 사용된 동일한 스트레이트 팁 미세 집게를 사용하여 얻을 수 있습니다. 섬유의 묶음이 하나, 그리고 준비의 반대편에서 먼저 부드럽게 끌려나 수 있습니다. 노출된 myenteric 신경 얼기는 근육과 기본 serosa의 길이 계층에서 분리 될 수 없습니다. 따라서, 무엇 myenteric 신경 얼기 준비라는 것은 핀에 따라 절개해 수있는 세그먼트이다. 그것이 라이브 근육 포함되어 있기 때문에, 그것은 생리 실험을 시작할 때까지 산소 M199 - DM을 포함하고있는 접시에서 매우 느슨하게 그것을 핀 것이 좋습니다.
- 점막의 주요 팔 센서이며, 모든 effectors은 또한 창자 벽에 포함된 이후, 그것은 전체 반응 경로를 보존 반 그대로 준비를 해부하다 할 수 있습니다. 이러한 맞춤 설계 준비는 1.3에서 설명한 단계의 조합이 필요합니다. 1.6., 절연 장 세그먼트의 인접 지역에 적용.
- 이전에 실제 광학 실험, 선택의 준비되는 데 몇 분 정도는 긴장이 균일하게 배포하여 조직의 Sylgard 바닥으로부터 완전히 평평하게 놓여 있는지 확인 것을 만드는 실험 챔버에 장착됩니다. 이것은 조직 손상을 가하없이 주위에 위치 수있는 여러 개의 아주 좋은 핀으로 표본을 잡고하여 이루어진다.
2 부 : 광학 레코딩을위한 조직 표본의 준비
- (선택 사항) 잔류 평활근과 결합 조직으로 구속력이 염료의 배경 형광을 방지하기 위해, 두 격리 plexuses는 collagenase VII (≤ 50 U / ML)와 프로 테아제 IX (≤ 0.5 μg을 포함 M199 - DM에서 30-60 분 incubated 수 있습니다 / ML). 에, 효소 치료 다음과 같은 준비가와 함께 세탁해야하고, (스트렙토 마이신, 100 μg / ML 페니실린, 100U/ml) M199 - DM 플러스 10% 동물 혈청 (예, 말 또는 소)와 항생제에 야간 유지 챔버 WI를 포화일 95% O 2 5% CO 2. 그것이 눈에 띄게 광학 녹음의 신호 대 잡음 비율을 향상하기 때문에 우리는 수년 동안 사용한이 절차는, 초보자를위한 도움이되지 않을 수 있으며 신중하게 채택되어야합니다. 실제로 해부하는 동안 손상된 준비는 효소 치료 중에 험악의 위험을 실행합니다. 그러나, 심지어 효소 치료의 부재에, 우리는 준비가 혈청과 항생제로 M199 - DM에서 밤새 유지하는 것이 좋습니다. 이 단계는 급성 절개 손상 후 조직 치유를 촉진하고, 샘플의 투명성을 증가시킵니다.
- 전기 활동의 광학 녹음은 근육이 수축있는 준비를 얻을 수 없습니다. 전에 우리가 M199 - DM 목욕 조직 2 μm의의 nifedipine을 추가 광학 실험 myenteric 신경 얼기, 몇 분 거리에 녹화 때 따라서, 근육 수축을 방지하기 위해.
파트 3 : DI - 4 - ANEPPDHQ와 스테 이닝
- DI - 4 - ANEPPDHQ는 동결 건조된 형태로 상업적으로 사용할 수 있습니다. 우리는 순수 에탄올에 용해 집중 재고 솔루션을 만드는 [예, 15-20 MG / ML]. 권장 이 주식은 -20 ° C에 보관하면 매우 안정합니다. 사실, 우리 연구실에, 우리는 우리가 거의 6 년전 만들었다이 염료의 주식 솔루션의 마지막 한 방울을 끝냈습니다.
- 얼룩 솔루션은 M199 - DM에서 준비되어야하고, 프로토콜은 그것을 요구하는 경우 2 μm의의 nifedipine을 포함해야합니다. 염료의 최종 농도 5 μg / ML만큼 낮은 수 있으며, 50 μg / ML보다 높은해서는 안됩니다. 그러나, 주식의 농도에 따라 에탄올의 일정 금액은 얼룩 솔루션에있는 것이며, 고려되어야합니다. 예를 들어, 50 μg / ML과 얼룩 솔루션 염료는 ~ 0.3 %의 에탄올을 포함 주식은 불과 5 MG / ML의 농도가 있었다면 15 MG / ML 주식에서 만들었지만 가까이에 1 %의 에탄올 경우.
- 얼룩의 경우 준비는 염료 용액에 10~30분 위해 잠수합니다. 그 기간 후 염료가 신선한 씻겨 및 교체, M199 - DM 산소. DI - 4 - ANEPPDHQ은 지질 환경에서 fluoresces 멤브레인 - impermeant의 염색이므로, 스테인드 장용 준비에서 건강한 뉴런은 비어 풍선의 모양이 있어야합니다.
4 부 : 전기 자극
- 자극은 전압 또는 전류에 의해 구동 수 있습니다. 우리는 채널당 16mA 최대 출력, 4 채널 자극 발생기 제어 컴퓨터에 의해 제공되는 전류 자극을 사용합니다.
- 주어진 실험에 사용되는 전극 모델은 실험 목적에 따라 결정됩니다. 목표는 특정 신경 세포의 자극 때 세포 pipettes 또는 패치 전극을 사용할 수 있습니다. 자극이 주어진 신경절에 하나 이상의 신경 세포를 활성화하기위한 것일 뿐이므로 이러한 경우 결합을 만진 세포 전극 사용할 수 있습니다. 연결된 신경, 큰, 낮은 저항 전극 및 / 또는 다중 요소 전극 어레이를 고용 수를 공부하지만, 우리가 일반적으로 마찬가지로 현재의 자극을 사용하는 경우, 다중 요소 배열 유일한 옵션이된다. 세포외 전극뿐만 아니라, 일부 선형 전극 배열, 많은 모델을 상용 소스에서 쉽게 사용할 수 있습니다.
- 전극 micromanipulators 다양한 유형을 사용하여 위치를하실 수 있습니다. 길고 멋진 배럴에 의해 유발 진동을 피하기 위해, 우리는 실험 챔버에 인접한 위치에있을 수있는 마그네틱베이스에 작은 micromanipulators를 사용하고 얇은하지만, 매우 딱딱한 금속 막대와 함께 텅스텐 전극의 유연한 배럴을 지원 찬성.
제 5 부 : 재관류
하나는 산소 솔루션 입력 채널과 출력에 대한 다른과 2 채널 연동 펌프를 사용합니다. 재관류에 의해 유도된 기계적 장애를 제거하려면, 펌프 광학 데이터의 수집 중에 설정되어 - 해제되어 있습니다.
6 부 : 막 잠재력의 여러 사이트의 광학 녹음 장치
- 광학 부품 :
막 잠재력의 여러 사이트의 광학 녹음 장치는 NeuroCCD - SM 카메라 (RedShirtImaging)과 수직 현미경의 trinocular 튜브에 장착된 1시 10분 demagnifier / 릴레이 렌즈로 구성되어 있습니다. 현미경 rigidly 활성 진동 절연 표 상단에 고정 무대의 독립적, XY 번역기를 이동합니다. 공기 진동을 최소화하려면, 전체 장치는 무거운 음향 커튼 mylar 지붕으로 둘러싸여 있습니다. 에피 조명은 울트라 - 로우 - 리플 피드백 안정화 전원 공급 장치에 의해 구동 100W 텅스텐 - 할로겐 램프에 의해 제공됩니다. 입사 광은 열 필터, 높은 Q 간섭 필터 (HQ530/50)와 565 nm의 (50 % 전송) 이색성 거울을 사용하여 유사 단색 이루어집니다. 형광 방출은 이색성 거울과 긴 패스 필터 (HQ572LP)를 사용하여 구분합니다. inten입사 광의 sity는 중립적인 밀도 필터를 사용하여 조정됩니다. 트랜스 - 조명은, 준비의 밝은 - 분야 감상 0-55 V, 1-10 특별한 속성을 가지고 필요하지 않습니다 전원 공급 장치에 의해 구동 두 번째 100 W 텅스텐 - 할로겐 램프에 의해 제공됩니다. - 고속 카메라 사양 :
전자 디자인과 NeuroCCD - SM 카메라의 성능 특성은 세부 3에 설명되어있다. 간단히, 그것은 (80x80 픽셀) 마르코니 CCD39 - 01 칩을 다시 - 조명, 백 thinned를 사용하는 냉각, 낮은 해상도, 정밀 고속 카메라입니다. 디지털화는 14 비트이며, 전체 프레임 속도는 2 kHz에서 수 있습니다. 그러나, 특정 목적을 위해, 하나는 다양한 비닝 조합을 사용하거나 기능 픽셀의 수를 줄임으로써 10 kHz에서 최대 프레임 속도를 증가시킬 수 있습니다. 카메라는 매우 낮은 읽기 소음 (, 1 kHz에서 9 전자 2 kHz에서 23 전자)의 중요한 장점이 있습니다. 또한, 그 픽셀은 높은 프레임 속도로 적당한 조명 농도를 허용, 비교적 큰 잘 깊이 (215000 전자)가. - 데이터 수집 및 분석 소프트웨어 :
광학 실험은 Neuroplex, IDL 플랫폼 (대화형 데이터 언어) 내에 응용 프로그램으로 운영하고 있으며 광학 데이터의 수집, 표시 및 분석에 필요한 여러 기능을 포함 RedShirtImaging에서 소프트웨어 패키지에 의해 제어됩니다. - 추가 카메라 :
장치의 필수적인 부분, 프레임 그래버에 연결된 두 번째, 고해상도 CCD 카메라에 현미경 릴레이 준비의 이미지 trinocular 머리에 빔 스플리터로. 획득 및 글로벌 연구소 이미지 / 2 소프트웨어를 사용하여 저장된 이미지가, NeuroCCD - SM 카메라로 캡처한 광 신호의 공간적 원산지의 정확한지도를 생성하는 시간이 해결 하위 밀리초의 표시로 겹쳐 수 있습니다 광학 전압 신호를 기록했다. 우리가 실험실에서이 카메라 프레임 그래버는 기능 데이터 수집에 책임이있는가 아닌 다른 컴퓨터에 있습니다. 따라서 이미지 파일이 한 컴퓨터에서 다른 컴퓨터로 전송해야하고, 크기와 고해상도 이미지의 위치에 작은 조정은 두 카메라의 완벽한 등록이 달성되기 전에 필요합니다.
7 부 : 광학 실험
- 이전의 각 기능을 녹음하기 위해, 우리는 (6.4에 표시된 등) 광학 방식으로 전기 활동을 기록하도록 계획하는 지역의 고해상도 흑백 이미지를 획득. 고속 카메라의 픽셀지도에 겹쳐이 이미지는, 우리가 광 신호의 소스의 구조를 파악하는 데 도움이됩니다.
- 적절한 시스템 구성에서 Neuroplex은 (6.3 참조) 또한 셔터를 조절하고, 전기 자극을 트리거합니다. 고속 데이터 수집은 상당한 컴퓨터 전원을 필요로하기 때문에, 그것은 메모리의 대량 높은 용량의 하드 드라이브와 전용 컴퓨터를 사용하기 위해, 가능하다면 좋습니다. 그 그러나, 하찮은되지 않습니다. 우리 자신의 시스템, 예를 들어, 이미 몇 세는 최첨단 컴퓨터에 맞게 너무 큰 데이터 수집 보드를 고용합니다. 타협, 우리는 채택 DELL 정밀 390가 500 GB 하드 드라이브와 4GB의 RAM을 갖춘 우리의 광학 시스템 전용. 아직도 우리 실험을 실행하는 데 충분한 전력을 제공하면서이 컴퓨터는, 우리가 A / D 및 D / A 보드, 우리의 나이지만, 적절한 유지있었습니다.
- 즉시 인수가 끝난로 Neuroplex 아래 내용 몇 가지있는 여러 보완적인 형식으로 결과를 표시할 수 있습니다 :
- 화면의 영역은 페이지 표시가 같은 개별 프레임으로 80X80 고속 카메라로 캡처한 준비의 원유 이미지를 보여줍했다. 두 번째 카메라 (로 6.4 및 7.1에서 설명)와 인수 고해상도 이미지의 픽셀지도에 중첩 관심 영역을 식별하는 조작의 능력을 refines.
- 이 페이지 디스플레이의 픽셀은 마우스 컨트롤에서 선택한 경우, Neuroplex 자동으로 시간의 함수로 해당 픽셀 등록된 광학 변화의 크기를 보여 흔적으로 그들의 광학 출력을 변환합니다. (예 : ΔF / F 대 시간). 연산자는 이러한 흔적은 각 픽셀의 출력, 또는 오히려, 준비 주어진 영역을 통해 여러 loci의 공간 - 평균 출력을 반영할지 여부를 결정할 수 있습니다.
- 데이터는 또한 영화 - 형식으로 표시할 수 있습니다.
각 실험의 실행에 포함된 모든 정보가 완전히 추출되도록하기 위해, 그러나, 우리는 광학 데이터의 오프라인 분석을 선호. 이 분석의 대표적인 결과를 사용할 수 있습니다.
8 부 : 광학 실험에 기술적 품질을 달성하는 방법
목광학 실험 전자 기술의 성공은 레코딩의 신호 대 잡음 비율에 의해 궁극적으로 측정됩니다. 또한, 좋은 신호 대 잡음 비율하지 떠오르에서하지만 여행에서 유래. 오페라 공연에 있듯이, 최종 결과는 synergistically 상호 작용 요소의 다중성에 의해 결정됩니다. 따라서, 기술적으로 소리 광학 실험을 달성하기 위해, 그것은 독립적으로, 광학 기기 및 프로토콜의 각 단계에 필요한 기술을 보완하는 것이 필수적입니다. 다음은 어떤 잠재적인 고장 분야의 목록입니다, 항상 5 예상하지 문제를 피하에 대한 몇 가지 제안 :
- 노이즈 소스
항상 생리 반응을 반영하는 부분 변경 (ΔF / F)는 (<10 % / 굿 레코딩 대부분의 100 MV) 비교적 적은이기 때문에, 전압에 민감한 염료로 전기 활동을 기록하고 시끄러운 추적하면 기계 광학 안정성이 중요합니다 나쁜 결과를 augurs. 따라서, 신호 대 잡음 비율 - 최적화, 그것이 제거하기 위해 필수적입니다, 또는 적어도 최소화하기 위해, 두 최악의 범죄자의 기여 :) 기계 진동, 그리고 B) 광원의 변동.- 기계 진동은 설치 구성, 안정성, 전동 기기, 공기 흐름, 음향 소음, 유체 운동, 또는 목욕 솔루션에 떠있는 입자의 근접을 건물로 다양한으로 다양한 소스에 의해 생성됩니다. 좋은 진동 절연 시스템, 그리고 극단적인 경우를위한 음향 커튼 (예, 5.1에서 설명을 참조), 큰 차이를 만들어 잘 그들의 비용을 가치가있다. 또한, 이러한 실험, 또는 설정의 작은 움직일 수있는 부품에 대한 자기 기지의 사용에 사용되는 솔루션의 여과와 같은 상식적인 접근 방식은 매우 효과적입니다.
- 광원은 유사 최대한의 강도에 가장 안정적인 수 있습니다. 따라서, 하나는 전원 공급 장치를위한 전류 제한을 설정해야하고, 필요한 경우 전압을 감소하여 빛의 경로 대신에 중립적인 밀도 필터를 삽입하여 빛을 강도를 줄일 수 있습니다. 아크 램프는 본질적으로 시끄러운 있습니다. 텅스텐 - 할로겐 전구 또는 발광 다이오드는 훨씬 더 안정되고 선호하는 선택 6되어야합니다.
- 동물 시대
나이 굿 toughens 내에 결합 조직으로, 그것이 누구의 수입 성의와 efferent 프로세스 수 있습니다 두 plexuses의 뉴런에 큰 손상을 가하하지 않고 개별적인 조직 레이어를 분리하는 더 어려워집니다, 때문에 해부는 젊은 동물의 창자를 사용하여 완료해야합니다 크로스 레이어 경계 및 / 또는 창자의 길이 방향 축을 따라 상당히 거리에 대한 프로젝트입니다. 실험 목표 간의 ganglionic 회로 또는 반사 경로의 활성화의 분석을 때 내부 ganglionic 연결을 공부하면 무시 수있는이 고문은, 파라마운트 중요하다. - 다이 국제화
가능한 한 낮은 염료 농도로 사용하고, 불필요한 빛의 노출을 최소화하는 것이 중요합니다. DI - 4 - ANEPPDHQ 다른 염료보다 훨씬 적은 phototoxic 것으로 입증되었습니다 있지만 준비의 건강이 일이요로, 그것은 결국, internalized 받게됩니다. 다이 국제화는 크게 배경 형광 3 증가하여 신호 대 잡음 비율을 감소. - 전극 유지 보수
- 전극은 각 실험 후 신중하고 철저하게 씻어야한다. 텅스텐 전극의 끝을 유기 예금은 전극 저항을 향상시키고 자극을 방지합니다.
- 상용 텅스텐 전극의 절연은 매우 섬세하고 손상하는 경향이있다. 단열재의 누출은 자극의 효과를 현재의 혈관을 손상시키고 해당 실험의 성공을 위태롭게합니다.
- 재관류의 것이 얼마나 위험한지
재관류가있는 동안 설정 무인 두지 마십시오. 인 흐름과 연동 펌프 밖으로 흐름이 제대로 균형을하지 않는 경우, 두 치명적인 이벤트 장소를 걸릴 수 있습니다 :- 홍수는 현미경으로 돌이킬 수없는 손상을 줄 수 있습니다.
- 준비는 실험 도중 밖으로 건조 수 있습니다.
- 소프트웨어 번거로움
그것은 수집뿐만 아니라 분석을 제어하는 소프트웨어와 함께 자신을 숙지하는 것이 필수적입니다. 고속 데이터 수집 및 / 또는 매우 큰 파일의 생성은 붕괴 직전에 시스템을 운전하는 경향이, 그 경계 조건을 존중하지 않는 매우 용서할 줄을입니다 Neuroplex는 끊임없이 충돌합니다. 분석 관심이 제한된 지역에 국한되었을 때 쉽게보고 기록 내에서 미묘는, 종종 데이터의 동영상 표시에 자신을 노출.
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Discussion
이 프로토콜은 두 가지 목표를 염두에두고 작성되었습니다. 첫 번째는 지난 10의 다양한 기술 발전, 전압에 민감한 염료를 사용하는 전기 활동의 광학 녹음 덕분에 그대로의 연결 네트워크를 공부에 대해 가장 강력하고, 안정적이고 저렴한 방법 중 하나가 있으며, 다른 조사를 설득하는 것입니다, 정말 그것은 쉽게 겸손한 자원을 가지고 실험실에서도 구현할 수 있습니다. 두 번째 목표는 두 가지의 연결 plexuses 및 생물 학적 출력의 전기적 동작과 분자 및 세포 이벤트를 상호 연관시킬하는 독특한 실험 모델로 장용 신경계를 촉진하는 것입니다.
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Acknowledgments
우리는 우리와 함께 자신의 기술 전문 지식을 공유에 대한 2 광자 영상의 시작 부분에 표시되는 이미지, H. 다카노를 얻기위한 자신의 2 광자 현미경을 사용하는 허용을위한 검찰 쿨터 (들어온다) 감사드립니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medium 199 | Sigma-Aldrich | M3769 | With Earle’s salts Without L-Glutamine, Phenol Red and Sodium Bicarbonate |
| Sylgard | Dow Corning | 184 silicone elastomer kit | |
| Insect pins used for dissection | F.S.T. | 26001-30 | |
| Dumont forceps | F.S.T. | 11203-23 or 11200-33 | |
| Moria MC19/B Pascheff-Wolff Spring Scissors | F.S.T. | 15371-92 | |
| Pins to hold the tissue during the experiment | Seirin Corp. | Seirin Spinex | |
| Collagenase VII | Sigma-Aldrich | C0773 | |
| Protease IX | Sigma-Aldrich | P6141 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 10439-016 | |
| PenStrep | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| L-Glutamine 100X | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| Nifedipine | Sigma-Aldrich | ||
| Di-4-ANEPPDHQ | Molecular Probes, Life Technologies | D36802 | |
| 4-Channel Stimulus Generator | Multi Channel System MCS GmbH | 2000 Series | |
| Peristaltic pump | Rainin | 2-channel Dinamax RP-1 | |
| High-speed camera | RedShirtImaging, LLC | NeuroCCD-SM | |
| 1:10 demagnifier / relay lens | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| Upright microscope | Olympus Corporation | BX61TRF | |
| Gibraltar fixed stage with motorized X-Y translator | Gibraltar, Burleigh Instruments, EXFO, Quebec, Canada | PSSG--BX2 | |
| Linear matrix electrodes | FHC, Inc. | Custom made | |
| Active vibration-isolation table | Halcyonics,Inc., Menlo Park, CA | Micro 60 | |
| Ultra-low-ripple feedback stabilized power supply | Kepco, Flushing, NY | ATE 75-15M | |
| Heat filter | Schott AG | KG-1 | |
| High-Q interference filter | Chroma Inc. | HQ530/50 | |
| Dichroic mirror | Chroma Inc. | 565 nm (50% transmission) | |
| Long-pass filter | Chroma Inc. | HQ572LP | |
| Acoustic curtains | Acoustical Surfaces, Inc. | BSC-25 | |
| Neuroplex | RedShirtImaging, LLC | ||
| IDL | ITT Visual Information Solutions | ||
| High-resolution CCD camera, with its own camera controller | Hamamatsu Corp. | ||
| Frame-grabber for high-resolution camera | Data Translation | DT3120K-1 | |
| Imaging software for high-resolution camera | Data Translation | Global Lab Image/2 |
References
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- Obaid, A. L. Spatiotemporal patterns of activity in an intact mammalian network with single-cell resolution: optical studies of nicotinic activity in an enteric plexus. J Neurosci. 19 (8), 3073-3073 (1999).
- Obaid, A. L., Loew, L. M., Wuskell, J. P., Salzberg, B. M. Novel naphthylstyryl-pyridinium potentiometric dyes offer advantages for neural network analysis. J. Neurosci. Methods. 134 (2), 179-179 (2004).
- Hirst, G. D., McKirdy, H. C. Synaptic potentials recorded from neurones of the submucous plexus of guinea-pig small intestine. J Physiol (Lond). 249 (2), 369-369 (1975).
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- Salzberg, B. M., Davila, H. V., Cohen, L. B. Optical recording of impulses in individual neurones of an invertebrate central nervous system. Nature. 246 (5434), 508-508 (1973).
