Summary
Questo protocollo illustra come voltaggio-sensibile coloranti attivare la registrazione ottica di attività elettrica da intatte le reti neurali, come i plessi della cavia sistema nervoso enterico, con una risoluzione regolabile che va dal singolo cellule gangliari a più circuiti.
Abstract
Il sistema nervoso enterico (ENS) è un self-contained di rete con funzioni identificate, in grado di eseguire comportamenti complessi in isolamento. Suoi neuroni (10-25 micron di diametro) sono organizzati in plessi che sono confinati ai piani distinti della parete intestinale
Protocol
Parte 1: preparazione dei tessuti
- I preparativi sottomucosa e plesso mienterico sono isolati da dissezione sequenziale dal piccolo intestino di 150-200g (2-3 settimana di vita) Hartley cavie che sono stati anestetizzati per inalazione isoflurano e decapitato. Dopo l'eutanasia, l'intestino tenue è asportato e il suo contenuto rimosso dal lavaggio del lume con un caldo, soluzione ossigenata. Noi usiamo Medium 199 integrata con 25 HEPES mm, 5 mm NaHCO 3 e 2 mM glutammina, e pH regolato a 7,4 (di cui, d'ora in poi, come M199-DM), che è stato pre-riscaldato a 37 ° C. Tutti gli altri passaggi del protocollo, tuttavia, saranno effettuate a temperatura ambiente.
- Un segmento intestinale, 8-10 cm di lunghezza, viene trasferito in un piatto contenente Sylgard M199-DM, ha aperto lungo il confine mesenterica, e montato mucosa lato pin-up con gli insetti. E 'estremamente importante mantenere anche la tensione, in modo che dopo appuntare il tessuto presenta una forma rettangolare con le file dei villi della mucosa regolarmente allineati.
- Utilizzando bene pinze Dumont con punte diritte, in una posizione quasi orizzontale, è facile da sbucciare la mucosa afferrando i villi ad una estremità della preparazione e tirando via lungo l'asse longitudinale del tessuto. Quando il campione è uniformemente appuntato, nastri di mucosa può essere separato in pochi tratti individuali, esponendo la sottomucosa che contiene i gangli sottomucoso e la vascolarizzazione sottomucosa.
- Per la dissezione fine dei plessi, si consiglia di utilizzare un microscopio da dissezione con illuminazione in campo scuro. Infatti, la pseudo effetto tridimensionale creato da questo tipo di illuminazione aiuta a distinguere i singoli strati, in modo da prevenire o minimizzare strumento-inflitto danni.
- Per effettuare una preparazione sottomucosa, seguiamo la procedura classica di Hirst e McKirdy 4 che richiede: a) fare un taglio nello strato sottomucoso seguito l'orientamento delle fibre muscolari circolari, questo può essere realizzato utilizzando forbici molto fini (come un Moria MC19 o il suo equivalente), b) il sollevamento della sottomucosa molto delicatamente con le pinze fine, mentre si spinge lo strato muscolare circolare verso il basso con le forbici multa; c) il taglio lungo i bordi longitudinali come la separazione progredisce per liberare la sottomucosa dal resto del prep; d) fare un secondo taglio dopo l'orientamento delle fibre muscolari circolari ad una distanza dal primo, per definire la dimensione finale della preparazione della sottomucosa. Il segmento risultante sottomucosa, che è solo 30-50 micron di spessore e ha un aspetto impalpabile, può essere trasferito ad un altro piatto Sylgard contenente fresca M199-DM, appuntato dolcemente e senza tensione, e tenuti in una camera ossigenata per un uso successivo.
- L'originale gut-segmento, ora privo della mucosa e la sottomucosa, e con il muscolo circolare a vista, può ancora essere utilizzato per produrre una preparazione mioenterico plesso. Per esporre la mioenterico plesso, si deve eliminare il più possibile dello strato muscolare circolare. Ciò può essere ottenuto utilizzando lo stesso diritto-punta una pinza sottile impiegato nelle fasi precedenti. Fasci di fibre possono essere tirato delicatamente via, prima volta da uno, e poi dall'altra parte della preparazione. L'esposto mioenterico plesso non può essere separata dallo strato longitudinale della muscolare e la sierosa sottostante. Quindi, quello che viene chiamato la preparazione mioenterico plesso è il segmento che può essere tagliato lungo il pin. Perché contiene muscolo vivo, si consiglia di pin è molto liberamente nel piatto contenente ossigenato M199-DM fino a quando l'esperimento inizia fisiologici.
- Dal momento che la mucosa è il sensore principale ENS, e tutti gli effettori sono anche incorporati nella parete intestinale, è possibile sezionare semi-preparati che conservano intatto l'intero vie reflex. Questi progettati su misura preparazioni richiedono combinazioni dei passi descritti in 1.3. a 1,6., applicati alle aree adiacenti del segmento isolato intestinale.
- Pochi minuti prima dell'esperimento reale ottica, la preparazione di scelta è montato nella camera sperimentale, facendo in modo che la tensione è distribuito uniformemente e il tessuto è completamente piatto contro il fondo Sylgard. Questo si ottiene tenendo premuto il campione con più perni molto fine che può essere posizionato in tutto il perimetro senza infliggere danni ai tessuti.
Parte 2: Preparazione dei campioni di tessuto per la registrazione ottica
- (Facoltativo) Per impedire fluorescenza di fondo di colorante residuo legame con muscolatura liscia e del tessuto connettivo, entrambi i plessi isolati possono essere incubate per 30-60 min a M199-DM contenente collagenasi VII (≤ 50 U / ml) e della proteasi IX (≤ 0,5 mg / ml). Dopo il trattamento enzimatico i preparativi devono essere lavati con, e mantenuto durante la notte in, M199-DM + 10% siero animale (per esempio, equino o bovino) e antibiotici (penicillina, 100U/ml, streptomicina, 100 mg / ml), in un camera satura wi° 95% O 2 e il 5% di CO 2. Questa procedura, che abbiamo usato per molti anni, perché migliora sensibilmente il rapporto segnale-rumore delle registrazioni ottico, può non essere utile per i principianti e dovrebbe essere adottata con cautela. Infatti, una preparazione danneggiato durante la dissezione corre il rischio di disintegrazione durante il trattamento enzimatico. Tuttavia, anche in assenza del trattamento enzimatico, si raccomanda che i preparativi essere mantenuta durante la notte in M199-DM con siero e antibiotici. Questa operazione favorisce la guarigione dei tessuti dopo un danno acuto dissezione, e aumenta la trasparenza del campione.
- Registrazioni ottiche di attività elettrica non può essere raggiunto in un preparato in cui il muscolo si contrae. Pertanto, per evitare la contrazione muscolare durante la registrazione dal mioenterico plesso, a pochi minuti prima dell'esperimento ottica si aggiungono 2 nifedipina mM al M199-DM bagno il tessuto.
Parte 3: La colorazione con di-4-ANEPPDHQ
- Di-4-ANEPPDHQ è disponibile in commercio in forma liofilizzata. Si consiglia di sciogliere in etanolo puro, rendendolo una soluzione concentrata magazzino [ml per esempio, 15-20 mg /]. Questo stock, conservato a -20 ° C, è estremamente stabile. Infatti, nel nostro laboratorio, abbiamo appena finito l'ultima goccia di una soluzione madre di questo colorante che avevamo fatto quasi 6 anni fa.
- La soluzione colorante deve essere preparata in M199-DM, e dovrebbe contenere 2 nifedipina mM se il protocollo lo richiede. La concentrazione finale di colorante può essere fino a 5 mg / ml e non deve essere superiore a 50 mg / ml. Tuttavia, a seconda della concentrazione delle azioni, una certa quantità di etanolo sarà presente nella soluzione colorante e dovrebbe essere preso in considerazione. Ad esempio, una soluzione colorante con 50 mg / ml di tintura contengono etanolo ~ 0,3% se fatto da un 15 mg / ml stock, ma quasi l'1% di etanolo se il titolo fosse una concentrazione di soli 5 mg / ml.
- Per la colorazione, la preparazione è sommerso per 10-30 minuti nella soluzione colorante. Dopo tale termine, il colorante è spazzato via e sostituito da fresco, ossigenato M199-DM. Dal momento che di-4-ANEPPDHQ è una membrana-impermeant colorante fluorescente che solo quando in un ambiente lipidico, i neuroni sani da una preparazione macchiato enterico deve avere l'aspetto di palloncini vuoti.
Parte 4: La stimolazione elettrica
- La stimolazione può essere guidata da tensione o di corrente. Noi usiamo corrente di stimolazione, consegnato da un computer controllato, a 4 canali generatore stimolo con una potenza massima di 16 mA per canale.
- Il modello di elettrodi da utilizzare in un dato esperimento è determinato dall'obiettivo sperimentale. Pipette intracellulari o elettrodi patch può essere utilizzato quando l'obiettivo è la stimolazione di un neurone particolare. Quando la stimolazione ha lo scopo di attivare più di un neurone in un ganglio dato, un elettrodo extracellulare toccare un connettivo può essere utilizzato. Per studiare gangli di interconnessione, di grandi dimensioni, a bassa resistenza elettrodi e / o multi-elemento schiere di elettrodi può essere impiegato, tuttavia, quando si utilizza corrente di stimolazione come noi di solito facciamo, multi-elemento array diventano l'unica opzione. Molti modelli di elettrodi extracellulari, così come alcune schiere di elettrodi lineari, sono facilmente reperibili da fonti commerciali.
- Elettrodi può essere effettuata mediante diversi tipi di micromanipolatori. Per evitare le vibrazioni indotte da fusti lunghi e fini, siamo favore utilizzare micromanipolatori piccolo su basi magnetiche che può essere posizionato adiacente alla camera sperimentale, e sostenere le botti flessibile degli elettrodi di tungsteno con barre di metallo sottile, ma molto rigida.
Parte 5: perfusione
Usiamo un 2-canali pompa peristaltica con un canale per l'ingresso di soluzioni ossigenata, l'altra per l'uscita. Per eliminare i disturbi meccanica indotta dalla perfusione, la pompa viene spenta durante l'acquisizione di dati ottici.
Parte 6: apparecchi per la registrazione multi-sito ottico del potenziale di membrana
- Componenti ottici:
L'apparecchio per la registrazione multi-sito ottico del potenziale di membrana comprende una fotocamera NeuroCCD-SM (RedShirtImaging) e un 1:10 demagnifier / relè lente montata sul tubo trinoculare di un microscopio in posizione verticale. Il microscopio si muove su un traduttore XY, indipendentemente da una fase che è rigidamente fissato alla parte superiore di un tavolo attivo isolamento dalle vibrazioni. Per ridurre al minimo le vibrazioni nell'aria, l'intero apparato è circondato da tende pesanti acustica e un tetto mylar. Epi-illuminazione è fornita da un 100W tungsteno lampada alogena alimentato da un ultra-low-ripple Ritorno tensione stabilizzata. La luce incidente è quasi monocromatica utilizzando un filtro di calore, un alto Q filtro di interferenza (HQ530/50) e un 565 nm (50% di trasmissione) specchio dicroico. Emissione di fluorescenza è separata tramite lo specchio dicroico e una lunga filtro passa-(HQ572LP). L'intensitàsità della luce incidente viene regolata utilizzando filtri a densità neutra. Trans-illuminazione, per la brillante campo visivo della preparazione è fornita da una seconda di tungsteno-100 W lampada alogena azionata da un 0-55 V, 1-10 Un alimentatore che non è necessario possedere attributi speciali. - Telecamera ad alta velocità specifiche:
La progettazione elettronica e le caratteristiche prestazionali del NeuroCCD-SM telecamera sono stati descritti in dettaglio 3. In breve, si tratta di un raffreddamento, a bassa risoluzione, precisione telecamera ad alta velocità che utilizza il back-assottigliati, retro-illuminato Marconi CCD39-01 chip (80x80 pixel). La digitalizzazione è 14-bit, e la massima velocità di trasmissione è di 2 kHz. Tuttavia, per scopi specifici, si può aumentare il frame-rate fino a un massimo di 10 kHz utilizzando varie combinazioni di binning o ridurre il numero di pixel funzionale. La fotocamera ha l'importante vantaggio di bassissimo rumore di lettura (23 elettroni a 2 kHz, 9 elettroni a 1 kHz). Inoltre, i pixel hanno una profondità relativamente grande bene (215.000 elettroni), permettendo intensità di luce moderata a frame rate elevati. - Acquisizione dati e software per l'analisi:
L'esperimento ottico è controllato da Neuroplex, un pacchetto software da RedShirtImaging, che opera come applicazione all'interno della piattaforma IDL (Interactive Data Language) e include funzioni più necessarie per l'acquisizione, visualizzazione e analisi dei dati ottici. - Telecamera aggiuntiva:
Come parte integrante dell'apparato, un divisore di fascio sulla testa trinoculare dei relè microscopio l'immagine della preparazione su una seconda fotocamera ad alta risoluzione CCD collegata ad un frame-grabber. L'immagine, che viene acquisito e conservato utilizzando globale Laboratorio Immagine / 2 software, possono essere sovrapposti sul display del sub-millisecondi tempo risolto segnali ottici catturato dalla NeuroCCD-SM fotocamera per generare una mappa accurata della provenienza spaziale del otticamente registrato segnali di tensione. Nel nostro laboratorio, il frame grabber per questa fotocamera si trova in un computer diverso da quello responsabile per l'acquisizione dei dati funzionali uno. Pertanto, il file immagine deve essere trasferita da un computer all'altro, e le regolazioni di piccole dimensioni e la posizione della immagine ad alta risoluzione sono necessari prima della registrazione perfetta delle due fotocamere è raggiunto.
Parte 7: esperimenti di ottica
- Prima di ogni registrazione funzionale, noi acquisiamo la immagine ad alta risoluzione in bianco e nero della regione da cui abbiamo in programma di registrare l'attività elettrica attraverso mezzi ottici (come indicato al punto 6.4). Questa immagine, quando sovrapposto il pixel-map della telecamera ad alta velocità, ci aiuta a identificare le strutture che sono la fonte dei segnali ottici.
- Nella configurazione del sistema appropriato, Neuroplex (vedi 6.3) controlla anche l'otturatore, e innesca la stimolazione elettrica. Dal momento che l'alta velocità di acquisizione dei dati richiede un notevole potere del computer, è consigliabile, se possibile, di utilizzare un computer dedicato, con una grande quantità di memoria e un hard disk ad alta capacità. Che, tuttavia, non è banale. Il nostro sistema, ad esempio, già diversi anni prima, impiega schede di acquisizione dati che sono troppo grandi per entrare in state-of-the-art computer. Come compromesso, abbiamo adottato e dedicato al nostro sistema ottico di un Dell Precision 390 equipaggiato con un disco rigido da 500 GB e 4 GB di RAM. Questo computer ci ha permesso di mantenere i nostri anziani, ma adeguata, A / D e D / A schede, pur fornendo una potenza sufficiente per eseguire i nostri esperimenti.
- Non appena l'acquisizione è finita, Neuroplex in grado di visualizzare i risultati in molteplici formati complementari, alcuni dei quali sono descritti di seguito:
- Un'area dello schermo chiamato visualizzazione della pagina mostra l'immagine cruda della preparazione come catturato dalla 80X80 telecamera ad alta velocità come un singolo fotogramma. Sovrapposizione su questa mappa di pixel ad alta risoluzione delle immagini acquisite con la seconda fotocamera (come spiegato in 6.4 e 7.1) affina la capacità dell'operatore s per identificare aree di interesse.
- Quando i pixel della visualizzazione della pagina sono selezionati sotto il controllo del mouse, Neuroplex converte automaticamente i loro uscite ottiche in tracce che mostrano la portata del cambiamento ottico registrato da quei pixel in funzione del tempo. (Ad esempio, ΔF / F vs tempo). L'operatore può decidere se queste tracce dovrebbe riflettere l'uscita dei singoli pixel, o meglio, lo spazio-media di uscita di loci multipli su una determinata regione del preparato.
- I dati possono essere visualizzati anche nel film di formato.
Per garantire che tutte le informazioni contenute in prove sperimentali individuo è completamente estratta, tuttavia, abbiamo favore analisi off-line dei dati ottici. Risultati rappresentativi di questa analisi sono disponibili.
Parte 8: Come ottenere una qualità tecnica in un esperimento ottico
Thsuccesso tecnico e di un esperimento ottico è misurata, in definitiva, dal rapporto segnale-rumore delle registrazioni. Inoltre, un buon segnale-rumore non deriva da una epifania, ma da un viaggio. Come in uno spettacolo d'opera, il risultato finale è determinata da una molteplicità di fattori che interagiscono sinergicamente. Quindi, per ottenere un esperimento tecnicamente valido ottica, è fondamentale per affinare, indipendentemente, l'apparato ottico e le competenze necessarie per ogni singolo passo del protocollo. Quello che segue è un elenco di potenziali problemi-aree, e alcuni suggerimenti per evitare problemi non sempre anticipato 5:
- Sorgenti di rumore
Stabilità meccanica e ottica sono cruciali per la registrazione dell'attività elettrica con tensione di coloranti sensibili, in quanto la variazione frazionale (ΔF / F) che riflette le risposte fisiologiche è relativamente piccolo (<10% / 100 mV, nella maggior parte delle registrazioni intestino) e una traccia rumorosa sempre auspica un esito negativo. Pertanto, per ottimizzare il rapporto segnale-rumore rapporto, è imperativo per eliminare, o, almeno, ridurre al minimo, i contributi dei due peggiori trasgressori: a) vibrazioni meccaniche, e b) fluttuazione fonte di luce.- Le vibrazioni meccaniche sono generati da una varietà di fonti diverse come impostazione di configurazione, la costruzione della stabilità, la vicinanza di attrezzature motorizzate, correnti d'aria, rumore acustico, movimento fluido, o particelle in sospensione nella soluzione bagno. Un buon sistema di isolamento di vibrazioni, e tende acustico per casi estremi (vedi, ad esempio, descrizione in 5.1), fare una grande differenza e sono ben valgono il loro costo. Inoltre, senso comune si avvicina, come la filtrazione di soluzioni utilizzate nell'esperimento, o l'uso di basi magnetiche per le piccole, parti mobili della configurazione, sono abbastanza efficaci.
- Le sorgenti luminose sono più stabili in quasi-massima intensità. Pertanto, si dovrebbe impostare una corrente-limite per l'alimentazione, e, se necessario, ridurre l'intensità della luce con l'inserimento di densità neutra filtri nel percorso della luce invece che riducendo la tensione. Lampade ad arco sono intrinsecamente rumorose. Lampade alogene o diodi emettitori di luce sono molto più stabili e dovrebbe essere la scelta preferita 6.
- Animali Età
Dissezioni deve essere eseguita utilizzando il budello di animali giovani perché, come il tessuto connettivo all'interno del indurisce intestino con l'età, diventa più difficile separare i singoli strati di tessuto senza infliggere gravi danni sui neuroni dei due plessi, di cui afferenti ed efferenti processi possono croce strato confini e / o progetto per una certa distanza lungo l'asse longitudinale del budello. Questo avviso, che può essere trascurato quando si studiano le connessioni intra-gangliari, è di fondamentale importanza quando l'obiettivo è l'analisi sperimentale di inter-gangliari circuiti o l'attivazione di percorsi di riflesso. - Internalizzazione colorante
E 'importante utilizzare una concentrazione più bassa colorante possibile e per minimizzare l'esposizione non necessaria alla luce. Anche se di-4-ANEPPDHQ ha dimostrato di essere molto meno fototossiche di altri coloranti, otterrà interiorizzato, alla fine, come la salute della preparazione si deteriora. Interiorizzazione colorante diminuisce il rapporto segnale-rumore aumentando notevolmente la fluorescenza di fondo 3. - Elettrodo di manutenzione
- Elettrodi devono essere lavate accuratamente ed abbondantemente dopo ogni esperimento. Depositi organici alle punte di elettrodi di tungsteno aumentare la resistenza degli elettrodi e prevenire la stimolazione.
- L'isolamento di elettrodi di tungsteno disponibili in commercio è molto delicata e soggetta a danni. Una perdita in isolamento si shunt corrente, compromettere l'efficacia della stimolazione e mettono a repentaglio il successo dell'esperimento.
- Perfusione pericoli
Non lasciare mai il set-up incustodito mentre la perfusione è acceso. Se l'in-flusso e fuori portata della pompa peristaltica non sono correttamente bilanciate, due eventi catastrofici può avvenire:- Un fiume può causare danni irreversibili al microscopio.
- La preparazione può seccare durante l'esperimento.
- Software fastidi
E 'indispensabile familiarizzare con il software che controlla l'acquisizione e l'analisi. Veloce di acquisizione dati e / o la creazione di file molto grandi tendono a guidare il sistema sull'orlo del crollo, e Neuroplex, che è abbastanza spietato, si blocca inesorabilmente a meno che le sue condizioni al contorno sono rispettate. Sottigliezze all'interno dei record, facilmente perso quando l'analisi si limita alle regioni limitate di interesse, spesso si rivelano nei display film dei dati.
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Discussion
Questo protocollo è stato scritto con due obiettivi in mente. Il primo è quello di persuadere altri investigatori che, grazie ai molti progressi tecnologici degli ultimi dieci anni, la registrazione ottica di attività elettrica con tensione di coloranti sensibili è diventato uno dei più potenti, affidabili e convenienti metodologie per lo studio delle reti neuronali intatto, anzi , potrebbe essere facilmente applicata anche in un laboratorio che ha modeste risorse. Il secondo obiettivo è quello di promuovere il sistema nervoso enterico come modello sperimentale unico in cui per correlare gli eventi molecolari e cellulari con il comportamento elettrico dei due plessi neuronale e delle loro uscite biologico.
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Acknowledgments
Vorremmo ringraziare DA Coulter (CHOP) per averci permesso di usare il suo microscopio 2-fotoni ad acquisire il 2-fotone immagini mostrate all'inizio del video, e H. Takano per aver condiviso con noi la sua competenza tecnica.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medium 199 | Sigma-Aldrich | M3769 | With Earle’s salts Without L-Glutamine, Phenol Red and Sodium Bicarbonate |
| Sylgard | Dow Corning | 184 silicone elastomer kit | |
| Insect pins used for dissection | F.S.T. | 26001-30 | |
| Dumont forceps | F.S.T. | 11203-23 or 11200-33 | |
| Moria MC19/B Pascheff-Wolff Spring Scissors | F.S.T. | 15371-92 | |
| Pins to hold the tissue during the experiment | Seirin Corp. | Seirin Spinex | |
| Collagenase VII | Sigma-Aldrich | C0773 | |
| Protease IX | Sigma-Aldrich | P6141 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 10439-016 | |
| PenStrep | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| L-Glutamine 100X | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| Nifedipine | Sigma-Aldrich | ||
| Di-4-ANEPPDHQ | Molecular Probes, Life Technologies | D36802 | |
| 4-Channel Stimulus Generator | Multi Channel System MCS GmbH | 2000 Series | |
| Peristaltic pump | Rainin | 2-channel Dinamax RP-1 | |
| High-speed camera | RedShirtImaging, LLC | NeuroCCD-SM | |
| 1:10 demagnifier / relay lens | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| Upright microscope | Olympus Corporation | BX61TRF | |
| Gibraltar fixed stage with motorized X-Y translator | Gibraltar, Burleigh Instruments, EXFO, Quebec, Canada | PSSG--BX2 | |
| Linear matrix electrodes | FHC, Inc. | Custom made | |
| Active vibration-isolation table | Halcyonics,Inc., Menlo Park, CA | Micro 60 | |
| Ultra-low-ripple feedback stabilized power supply | Kepco, Flushing, NY | ATE 75-15M | |
| Heat filter | Schott AG | KG-1 | |
| High-Q interference filter | Chroma Inc. | HQ530/50 | |
| Dichroic mirror | Chroma Inc. | 565 nm (50% transmission) | |
| Long-pass filter | Chroma Inc. | HQ572LP | |
| Acoustic curtains | Acoustical Surfaces, Inc. | BSC-25 | |
| Neuroplex | RedShirtImaging, LLC | ||
| IDL | ITT Visual Information Solutions | ||
| High-resolution CCD camera, with its own camera controller | Hamamatsu Corp. | ||
| Frame-grabber for high-resolution camera | Data Translation | DT3120K-1 | |
| Imaging software for high-resolution camera | Data Translation | Global Lab Image/2 |
References
- Johnson, L. eonard R. in Physiology of the Gastrointestinal Tract, edited by Leonard R. , Raven Press. New York. 1-1 (1987).
- Obaid, A. L. Spatiotemporal patterns of activity in an intact mammalian network with single-cell resolution: optical studies of nicotinic activity in an enteric plexus. J Neurosci. 19 (8), 3073-3073 (1999).
- Obaid, A. L., Loew, L. M., Wuskell, J. P., Salzberg, B. M. Novel naphthylstyryl-pyridinium potentiometric dyes offer advantages for neural network analysis. J. Neurosci. Methods. 134 (2), 179-179 (2004).
- Hirst, G. D., McKirdy, H. C. Synaptic potentials recorded from neurones of the submucous plexus of guinea-pig small intestine. J Physiol (Lond). 249 (2), 369-369 (1975).
- Salzberg, B. M.
- Salzberg, B. M. An ultra-stable non-coherent light source for optical measurements in neuroscience and cell physiology. Journal of Neuroscience Methods. 141, 165-16 (2005).
- Obaid, A. L., Nelson, M. E., Lindstrom, J., Salzberg, B. M. Optical studies of nicotinic acetylcholine receptor subtypes in the guinea-pig enteric nervous system. J Exp Biol. 208 (Pt 15), 2981-2981 (2005).
- Obaid, A. L., Zou, D. J., Rohr, S., Salzberg, B. M. Optical recording with single cell resolution from a simple mammalian nervous system: Electrical activity in ganglia from the submucous plexus of the guinea-pig ileum. Biol. Bull. 183, 344-344 (1992).
- Salzberg, B. M., Davila, H. V., Cohen, L. B. Optical recording of impulses in individual neurones of an invertebrate central nervous system. Nature. 246 (5434), 508-508 (1973).
