نحن تصف طريقة بسيطة وسريعة وقوية لتشكيل المبيضات البيض الأغشية الحيوية باستخدام 96 لوحات microtiter جيدا وفائدتها في اختبار قابلية مضاد للخلايا داخل الأغشية الحيوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
96 ألف لوحة حسنا Microtiter القائم على أسلوب تشكيل لمراقبة واختبار قابلية مضاد المبيضات البيض الأغشية الحيوية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المبيضات البيض يظل السبب الأكثر شيوعا للالتهابات فطرية في زيادة عدد السكان من المرضى للخطر والمبيضات الآن هو الثالث الأكثر شيوعا العدوى في المستشفيات في الولايات المتحدة. وترتبط مظاهر مختلفة من المبيضات مع تشكيل بيوفيلم ، سواء على أنسجة المضيف و / أو الأجهزة الطبية (القسطرة أي). تشكيل بيوفيلم دلالات سلبية السريرية ، ومحمية داخل خلايا الأغشية الحيوية من الاستجابات المناعية والمضيف من عمل مضادات الفطريات. وقد طورنا نموذجا بسيطا وسريعا وقويا في المختبر لتشكيل C. الأغشية الحيوية albicans به جيدا microtiter 96 لوحات ، والتي يمكن أن تستخدم أيضا لاختبار قابلية بيوفيلم مضاد. قراءات من هذا الاختبار هو اللونية ، على أساس الحد من XTT (أ tetrazolium الملح) بواسطة عملية الأيض نشطة بيوفيلم الخلايا الفطرية. تجربة نموذجية تأخذ ما يقرب من 24 ساعة لتشكيل بيوفيلم ، مع 24 ساعة إضافية لاختبار الحساسية المضادة للفطريات. بسبب بساطتها واستخدام المواد المتوفرة عادة المختبرات والمعدات ، وهذه التقنية نظاما ديمقراطيا البحوث بيوفيلم ويمثل خطوة مهمة نحو توحيد اختبار الحساسية من الفطريات الأغشية الفطرية.
البروتوكول
1. إعداد C. albicans
C. albicans هو مجموعة الكائنات الحية الدقيقة 1/BSL1 المخاطر. تذكر دائما أن حسن استخدام تقنيات العقيم / معقمة للعمل مع هذه الكائنات الدقيقة ومتابعة الإجراءات المؤسسية في مجال التخلص السليم من المواد بيولوجية.
- تعد الثقافة بين عشية وضحاها من C. albicans في المتوسط (الخميرة ببتون سكر العنب) YPD السائل ، فحقن مستعمرة واحدة من C. albicans الى 25 مل من YPD.
- الثقافة في اح....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نحن هنا وصف بسيط وسريع والاقتصادية واستنساخه غاية 96 لوحة microtiter نموذج جيد لتشكيل الأغشية الحيوية المبيضات مقرونا اللونية الأسلوب الذي يقيس النشاطات الأيضية من الخلايا داخل بيوفيلم XTT به. وقد تم تطوير هذا الأصل 96 لوحة microtiter كذلك نموذجا لتشكيل بيوفيلم لجيم ويمكن استخدام albicans ولكن لSPP المبيضات الأخرى. وتكييفها بسهولة للكائنات الفطرية الأخرى. ويمكن استخدام هذه الطريقة لفحص معلمات متعددة والعوامل المؤثرة في تشكيل بيوفيلم وتقدير قدرة .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
JLL - R تملك الأسهم في شركة MicrobeHTS ، التكنولوجيات ، وهو مضاد للفطريات وكلاء النامية. قدمت MicrobeHTS تكنولوجيز ، وشركة أي دعم مالي لهذه الدراسات.
شكر وتقدير
ويتم تمويل بيوفيلم ذات الصلة العمل في المختبر من المنح ومرقمة R21DE017294 R21AI080930 من المعهد الوطني لأبحاث طب الأسنان والجمجمة ، والمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية (لJLL - R). المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للNIDCR ، NIAID أو في المعاهد الوطنية للصحة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| آجار سابوراود-دكستروز | BD Biosciences | 211584 | لتحضير أطباق لزراعات فرعية حديثة من العزلات الفطرية |
| YPD: بيبتون ودكستروز للخميرة | US Biological | Y2076 | وسط لتكاثر المزارع السائلة طوال الليل |
| RPMI-1640 بدون بيكربونات الصوديوم مضاف إليه L-glutamine | Cellgro | 50-020-PB | وسط سائل لتكوين الغشاء الحيوي الرقيق |
| حمض المورفولين بروبان سلفونيك (MOPS) | Fisher Scientific | BP308 | كـمنظم لـ RPMI 1640 |
| المحلول الملحي المنظم بالفوسفات، PBS | Sigma-Aldrich | P4417 | منظم لعمليات الغسيل |
| ملح الصوديوم XTT | Sigma-Aldrich | X4251 | راجع التعليمات أعلاه للتحضير |
| لاكتات رينجر ’ | Hospira Inc. | NDC0409-7953-09 | لتحضير محلول XTT |
| ميناديون | Sigma-Aldrich | M5625 | تحذير: مادة خطرة عند ملامسة الجلد أو الاستنشاق أو البلع |
| أطباق بيتري | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| أنابيب طرد مركزي مخروطية سعة 15 ml | Corning | 430790 | |
| أنابيب طرد مركزي مخروطية سعة 50 ml | Corning | 430828 | |
| أطباق معايرة دقيقة ذات 96 بئراً: بولي ستيرين، قاعدتها مسطحة، ومعالجة للزراعة النسيجية | Corning | 3595 | |
| ماصة متعددة القنوات ورؤوس ماصات | Eppendorf | ||
| حضّانة | أي مورد | ||
| قارئ أطباق المعايرة الدقيقة | أي مورد |
المراجع
- Bachmann, S. P. In vitro activity of caspofungin against Candida albicans biofilms. Antimicrob Agents Chemother. 46, 3591-3596 (2002).
- Hawser, S. P., Norris, H., Jessup, C. J., Ghannoum, M. A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
