Summary
본 논문은 인간의 말초 혈액 mononuclear 세포의 alloantigen 특정 anergy를 유도하는 간단한 기술을 설명합니다. 기술은 아닌 alloreactive 기증자의 세포를 생성하는 임상 적용할 수 있습니다. 이러한 세포의 주입은 면역 reconstitution를 개선하고 allogeneic 조혈 줄기 세포 이식 후 독성을 줄일 수 있습니다.
Abstract
Allogeneic 조혈 줄기 세포 이식 (AHSCT)은 선천성과 인수 hematologic 질병 많은 환자에 대한 치료의 가장 좋은 기회를 제공합니다. 불행히도, 건강한 환자 조직을 인식하고 피해 alloreactive 기증자 T 세포의 이식은 이식 - 대 - 호스트 질환 (GvHD) 1 발생할 수 있습니다. 성공 AHSCT 한 과제는 기증자의 T 세포, 특히 면역 reconstitution 및 재발 방지에 유익한 효과 관련 장애없이 GvHD의 예방입니다. GvHD는 줄기 세포 이식이나 약리 immunosuppression의 관리에 의해 기증자 T 세포가 아닌 구체적인 고갈로 막을 수 있습니다. 불행히도 이러한 방식을 증가 감염과 질병 재발 2-4. 대안 전략은 이식 전에받는 항원 제시 세포 (APC)에 의해 allostimulation 후 선택 alloreactive 기증자 T 세포를 고갈하는 것입니다. 이러한 allodepletion 전략의 초기 임상 시험이 초과 GvHD 5, 6 않고 HLA - 일치 HSCT 후 면역 reconstitution 향상. 그러나 일부 allodepletion 기술은 전문받는 APC 생산 6, 7을 필요로하고 어떤 접근 방법은 기증자 병원체 특정 T 세포 8 CD4의 고갈을 포함 오프 대상 효과를 규제 세포에게 9 T있을 수 있습니다. 하나의 대안 접근 alloreactive 기증자 T 세포의 불활 성화입니다 alloantigen 특정 hyporesponsiveness의 유도를 통해. CD28 - 중재 공동 자극 신호 10 봉쇄를 제공하면서이 수신자 APC와 함께 자극 기증자 세포에 의해 이루어진다. 체외 11 병원체와 종양 - 관련 항원 T 세포 응답을 유지하면서 이러한 "alloanergization"접근법 1-2 로그로 alloreactivity 감소 . 전략은 성공적으로 2 alloanergized 기증자 T 세포가의 역사 제어받는 사람보다 빠른 면역 reconstitution, 몇 가지 감염 이하 중증 급성 및 만성 GvHD의 결과 HLA - 일치 HSCT하는 동안이나 이후에 주입되었던 1 지속적인 임상 시험 연구를 완료 및 채용되었습니다 HLA - 일치 이식 12 unmanipulated. 여기 우리는 HLA - 일치 무관 자극기의 PBMC에 alloanergized되었습니다 말초 혈액 mononuclear 세포 (PBMC)의 생성을 위해 현재 프로토콜을 설명합니다. Alloanergization는 리간드에 단클론 항체의 존재에 allostimulation에 의해 이루어집니다 CD28 - 중재의 costimulation을 차단하는 B7.1와 B7.1. 이 기술은 전문 자극기 APC의 생산을 요구하고 단지 하나의 상대적으로 간단한 전직의 생체내 보육 단계를 필요로하는, 수행 간단하지 않습니다. 따라서 접근 방식은 감소하지만 과도한 alloreactivity GvHD없이 면역 reconstitution을 개선하기 위해 AHSCT의 설정에 입양 전송을위한 유지 병원체 특정 면역과 기증자 T 세포를 생성하기 위해 임상 사용하기 위해 쉽게 표준화 될 수 있습니다.
Protocol
Discussion
Disclosures
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-Hypaque PLUS | GE Healthcare | 17-1440-02 | |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 11875-093 | |
| Hepes 1M | Invitrogen | 15630-080 | |
| L-Glutamine 200mM | Invitrogen | 25030-081 | |
| Gentamicin | Invitrogen | 15750-060 | |
| Human AB serum (heat inactivated) | Gemini Bio Products | 100-512 | Use validated batches |
| Complete Culture Media (500ml) | 440ml RPMI 1640, 50ml AB serum, 5ml Hepes, 5 ml Glutamine, 167uL Gentamicin | ||
| Irradiator | GammaCell 1000 | ||
| T-25 Cell Culture Flasks with gas permeable caps | Corning | 3056 | |
| Humanized Monoclonal anti-B7.1 and anti B7.2 antibodies | See protocol text | ||
| U bottomed 96 well culture plates | BD Biosciences | 353077 | |
| Monoclonal CD3 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM0178 | Reconstitute with 200ml distilled water |
| Monoclonal CD28 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM1376 | Reconstitute with 200ml distilled water |
| CMV grade 2 antigen | Microbix | EL-01-02 | |
| Tritiated Thymidine | NEN | NET027 | |
| Scintillation Fluid | PerkinElmer, Inc. | 1205-440 | |
| Harvester | Tomtec | ||
| Printed Filtermat A | PerkinElmer, Inc. | 1450-421 | |
| Filter Bag | PerkinElmer, Inc. | 1450-432 | |
| 1450 MicroBeta TriLux Scintillation Counter | Wallac | ||
| null | |||
References
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