Summary
Este artículo describe una técnica simple para inducir aloantígenos específicos de anergia en las células mononucleares de sangre periférica. La técnica puede aplicarse clínicamente para generar no aloreactivas células del donante. La infusión de estas células podría mejorar la reconstitución inmune y reducir la toxicidad después de trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas.
Abstract
Alogénico de células madre hematopoyéticas (AHSCT) ofrece la mejor oportunidad de cura para muchos pacientes con enfermedades hematológicas congénitas y adquiridas. Por desgracia, el trasplante de células del donante aloreactivas T que reconocen y dañar los tejidos sanos del paciente puede resultar en la enfermedad de injerto contra huésped (EICH) 1. Uno de los retos a AHSCT éxito es la prevención de la EICH sin deterioro asociado de los efectos beneficiosos de las células T del donante, la reconstitución inmune en particular y la prevención de la recaída. EICH se puede evitar no específica agotamiento de las células T del donante de los injertos de células madre o por la administración de la inmunosupresión farmacológica. Lamentablemente, estos enfoques infección aumentan y la enfermedad recaída 2-4. Una estrategia alternativa es agotar selectivamente células T alorreactivas donante después de allostimulation antígeno por las células que presentan receptores (APC) antes del trasplante. Los primeros ensayos clínicos de estas estrategias allodepletion mejorar la reconstitución inmune después de HLA diferente TCMH sin exceso de EICH 5, 6. Sin embargo, algunas técnicas requieren allodepletion especializados receptor producción APC 6, 7 y algunos enfoques pueden tener efectos fuera del objetivo como el agotamiento de los donantes de patógenos específicos de las células T CD4 8 y las células T reguladoras 9. Un enfoque alternativo es la inactivación de las células T del donante aloreactivas a través de la inducción de aloantígenos específicos de respuesta menor. Esto se logra estimulando las células del donante con el receptor de APC mientras que proporciona el bloqueo de CD28 mediado por la estimulación de señales co-10. Este "alloanergization" enfoque reduce alorreactividad por 1-2, preservando los registros de agentes patógenos y el tumor de antígeno asociado a las respuestas de células T in vitro 11 . La estrategia ha sido empleado con éxito en dos completado los estudios en curso y un clínico piloto en el que las células T del donante alloanergized fueron infundidos durante o después de HLA diferente TCMH resultantes de una reconstitución rápida inmunológico, infecciones y algunos EICH aguda y crónica menos graves que los receptores de control histórico de sin manipular con HLA diferente del trasplante 12. A continuación se describe el protocolo actual para la generación de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) que han sido alloanergized de HLA diferente PBMC estimulador no relacionados. Alloanergization se logra allostimulation en presencia de los anticuerpos monoclonales a los ligandos B7.1 y B7.1 para bloquear CD28 mediada coestimulación. Esta técnica no requiere la producción de APC especializados estimulador y es fácil de realizar, que requieren sólo un vivo sola y relativamente breve ex etapa de incubación. Como tal, el enfoque puede ser fácilmente estandarizados para el uso clínico de generar células T del donante con alorreactividad reducción de patógenos, pero conservando la inmunidad específica para la transferencia adoptiva en el marco de AHSCT para mejorar la reconstitución inmune sin EICH excesivo.
Protocol
Discussion
Disclosures
No hay conflictos de interés declarado.
Acknowledgments
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Ficoll-Hypaque PLUS | GE Healthcare | 17-1440-02 | |
RPMI 1640 | Invitrogen | 11875-093 | |
Hepes 1M | Invitrogen | 15630-080 | |
L-Glutamine 200mM | Invitrogen | 25030-081 | |
Gentamicin | Invitrogen | 15750-060 | |
Human AB serum (heat inactivated) | Gemini Bio Products | 100-512 | Use validated batches |
Complete Culture Media (500ml) | 440ml RPMI 1640, 50ml AB serum, 5ml Hepes, 5 ml Glutamine, 167uL Gentamicin | ||
Irradiator | GammaCell 1000 | ||
T-25 Cell Culture Flasks with gas permeable caps | Corning | 3056 | |
Humanized Monoclonal anti-B7.1 and anti B7.2 antibodies | See protocol text | ||
U bottomed 96 well culture plates | BD Biosciences | 353077 | |
Monoclonal CD3 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM0178 | Reconstitute with 200ml distilled water |
Monoclonal CD28 antibody | Beckman Coulter Inc. | IM1376 | Reconstitute with 200ml distilled water |
CMV grade 2 antigen | Microbix | EL-01-02 | |
Tritiated Thymidine | NEN | NET027 | |
Scintillation Fluid | PerkinElmer, Inc. | 1205-440 | |
Harvester | Tomtec | ||
Printed Filtermat A | PerkinElmer, Inc. | 1450-421 | |
Filter Bag | PerkinElmer, Inc. | 1450-432 | |
1450 MicroBeta TriLux Scintillation Counter | Wallac | ||
null |
References
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