Summary
Benmargstransplantasjon gir en måte å endre genotype i benmargen avledet celler. Dersom genet av interesse er uttrykt i begge benmargsceller avledet celler og ikke-benmarg avledet celler, kan benmargstransplantasjon endre benmargsceller avledet celler til en annen uten å endre genotypen ikke-beinmargen avledet celle genotype.
Abstract
For å forstå hvilken rolle et gen i utviklingen av kolitt, sammenlignet vi svarene på villtype mus og gen-of-interesse mangelfull knockout mus til kolitt. Hvis genet-of-interesse uttrykkes i begge benmargsceller avledet celler og ikke-benmarg avledet celler av verten, men, er det mulig å differensiere rollen av et gen av interesse i benmarg avledet celler og ikke-benmarg avledet celler ved benmargstransplantasjon teknikk. Å endre benmargen avledet celle genotype av mus, ble den opprinnelige benmargen mottakerland mus ødelagt av stråling og deretter erstattet av ny donor benmarg av ulike genotype. Når villtype mus donor beinmargen ble transplantert til knockout-mus, kan vi generere knockout mus med villtype genuttrykk i benmarg avledet celler. Alternativt ble da knockout mus donor beinmargen transplantert til villtype mottaker mus, villtype mus uten gen-of-interesse uttrykkerfra benmarg avledet celler ble produsert. Imidlertid kan benmargstransplantasjon ikke være 100% fullført. Derfor benyttet vi klynge av differensiering (CD) molekyler (CD45.1 og CD45.2) som markører for donor og mottaker celler å spore andelen donor benmarg avledet celler i mottakerlandene mus og suksess av benmargstransplantasjon. Villtype mus med CD45.1 genotype og knockout mus med CD45.2 genotype ble brukt. Etter bestråling av mottaker mus ble donor benmargsceller forskjellige genotyper infunderes i mottakeren mus. Når den nye beinmargen regenereres til overta dens immunitet, ble musene utfordret av kjemisk middel (dekstran natriumsulfat DSS 5%) for å indusere kolitt. Her finner vi også viste metode for å indusere kolitt i mus og vurdere rollen til genet av interesse uttrykt fra benmarg avledet celler. Hvis genet-of-interesse fra beinet avledet cellene spiller en viktig rolle i utviklingen av sykdommen (som colitis), kan fenotypen av mottaker mus med benmargstransplantasjon bli betydelig endret. På slutten av kolitt eksperimenter, benmargen avledet celler i blod og benmarg ble merket med antistoffer mot CD45.1 og CD45.2 og deres kvantitative forholdet eksistens kan brukes for å vurdere effekten av benmargstransplantasjon ved strømningscytometri. Vellykket benmargstransplantasjon skal vise et stort flertall av donor genotype (på sikt av CD molekyl markør) over mottakeren genotype i både benmarg og blod mottaker mus.
Protocol
1. Før-du-start tekniske hensyn
- Vi anbefaler at du bruker både C57/BL6 villtype mus og knockout mus for eksperimentet fordi mus med tilsvarende CD molekyler kan kjøpes fra store mus leverandører.
- Siden det er vanskelig å spore villtype mus og knockout-mus avledet donorceller etter benmargstransplantasjon, er det nødvendig å bruke CD45.1 mus å representere villtype mus. (CD45.1 C57/SJL WT mus Jackson Laboratories lager # 002014).
- De fleste mus koloniene er CD45.2. Våre knockout mus tilhører CD45.2 genotype (alternativt en CD45.2 WT mus kilde: Jackson Laboratories lager # 000664). Fastsettelse av CD45.1 eller CD45.2 genotype kan utføres ved hjelp flowcytometri av benmarg og perifert blod som nevnt i § 7 i denne protokollen.
- Mus etter bestråling har kompromittert immunitet. Hold mus i patogen gratis anlegget.
- Drift av irradiator krever spesiell sikkerhet clearance og opplæring. For å spare tid på trening og godkjenning prosesser, er det best å samarbeide med et laboratorium med kvalifisert tekniker som er i stand til å betjene irradiator.
- Mange institusjoner har flowcytometri laboratorier med erfarne teknikere. For å minimere problemer med flowcytometri drift, er det bedre å diskutere flowcytometri eksperiment plan med erfaren tekniker før du begynner.
- Mus ble tildelt på denne måten (10 mus per gruppe):
| Gruppe | Benmarg donor til mottaker | Behandling | |
| A | BM utveksling | CD45.1 WT til CD45.2 KO | DSS kolitt |
| B | Vann normal kontroll | ||
| C | BM utveksling | CD45.2 KO til CD45.1 WT | DSS kolitt |
| D | Vann normal kontroll | ||
| E | Sham | CD45.1 WT til CD45.1 WT | DSS kolitt |
| F | Vann normal kontroll | ||
| G | Sham | CD45.2 KO til CD45.2 KO | DSS kolitt |
| H | Vann normal kontroll |
* Et kort illustrasjon av eksperimentell protokoll er vist i figur 1.
2. Mottaker Mus Bestråling
- Mus er avlet og holdt i patogen-fri anlegget. Sted mus i autoklaverte bestråling pie med filter. Plasser en mus i hvert spor av bestråling pie. Plasser kaken i irradiator og sørge dreieskive og kaken er å snu.
- Slå på air-pumpefor ventilasjon. Lukk irradiator døren og låse den.
- Strålebehandling musene med 1000 rad (som tilsvarer 10 Gy) rundt 10 min (avhengig av strålekilde og halveringstid). Fra dette tidspunkt, det bestrålte mus er immun-kompromittert og har svak immunitet mot infeksjon. Etter bestråling, ta kaken ut og legg i en steril beholder for transport til biosikkerhet skap i Dyreavdelingen. Unngå å utsette musene til ytre miljø for å minimere sjansen for infeksjon.
- I biosikkerhet kabinett, overføre mus inn autoklaverte mus merder med autoklaverte sengetøy (4 mus pr bur Legg til ny sterilt vann med sulfatrim suspensjonen -. 3.12 ml pr 100 ml vann).
- Pakk vannflaske med aluminiumsfolie som antibiotika er lysfølsom. Rist for å blande sulfatrim flasken godt før du legger det til buret.
3. Donor Bone Marrow Extraction
- Ofre mus med karbondioksid eller isoflurselskapsledelse og deretter dyppe i 1:200 Lysol løsning. Spray musene med 70% etanol for å fukte huden og dissekere åpne bein.
- Suge disseksjon instrumenter i 70% etanol for sterilisering.
- Utfør disseksjon i en biosikkerhet kabinett. Bruk sterile disseksjon instrumenter for å avdekke humerus, femur, tibia og fibula ben, fri fra å feste muskler og leddbånd.
- Klipp opp begge endene av bein å vise den røde beinmargen. Hold beina med pinsett. Skyll den røde beinmargen ut med kaldt PBS med 3 ml sprøyte og 25g nåler til en petriskål. Spyle fra begge endene av bein for å gi mer benmargsceller.
- Bruk 6 ml sprøyter og 18G1 / 2 nåler å bryte røde beinmargen plugger ved gjentatt aspirasjon og utstøting. Overfør benmarg med 50 ml Falcon rør.
- Spinn benmargen ned i 1800 rpm i 5 min ved 4 ° C. Kast supernatant, resuspender pellet ved å virvle for 5-10 sek.
- Fortynn 10X RBC lyseringsbuffer med sterilt vann. Annonsed 1X RBC lyseringsbuffer (5 ml pr donor mus), vortex igjen for 5 sek og holde nøyaktig 3 minutter ved romtemperatur.
- Etter 3 min, fyll rørene med 20 ml kaldt PBS for å stoppe lysis og bland. Hell innholdet gjennom en 40 um celle sil direkte inn i en ny 50 ml Falcon-rør.
- Skyll de opprinnelige rør med 5 ml PBS og overfør til celle sil samt. Fyll opp til 50 ml med PBS og bland.
4. Counting Bone Marrow Donor Cells
- Legg 100fil Trypan blått til en Eppendorf rør og 100 pl av benmarg suspensjon til en Eppendorf rør og bland. Pipetter farget celleblanding til et hemocytometer.
- Mengden av celler er beregnet ved totalt bto.areal benmarg celletall i Falcon rør = unstained cellenummer i 16 ruter x 2 (grunnet Trypan blå fortynning) x 10.000 x 50 ml
- Spinn ned benmargsceller i 50 ml Falcon rør på 2000 rpm i 5 min ved 4 ° C.
- Supernatanten fjernes. Basertpå den totale celletall, resuspender pelleten med PBS til 1 x 10 8 celler per ml
5. Infusjon til Mottaker Mus
- Varm mottakeren mus på en varme puten og under en oppvarming lampe. Sett mottakeren mus i restrainer. Injiser 1 x 10 7 celler per mus i 100-200 pl intravenøst.
- Injeksjon av donor beinmarg må gjøres mellom 4-24 timer etter bestråling.
- Hold deg til 4 injisert mus per bur. Opprettholde injiserte mottaker mus i autoklaveres bur med antibiotika-behandlet vann for de første fire ukene i patogen fri dyr anlegget og la musene gjenvinne immunitet. Endre bur, antibiotika-behandlet vann og mat hver 4. dag for å opprettholde hygiene.
6. Induksjon av kolitt og evaluering av kolitt
- 4 uker etter bestråling og benmargstransplantasjon, bytte til vanlig vann uten antibiotika og vedlikeholde mus for 2 uker for å gjenvinne sin normalegut mikroflora.
- 6 uker etter benmarg injeksjon, måle opprinnelige kroppsvekt. Enkelte mus gis 5% dekstransulfat i drikkevann ad libitum å indusere kolitt. Enkelte mus gis vanlig drikkevann bare som normale kontrollgrupper.
- 5 dager senere, trekke perifert blod, overføre til heparin belagt rør (Vacutainer) og holde i isen. Pool blodet fra 4 mus til en tube. Kombiner 300 ul blod med 300 pl cellefarging buffer = 600 pl. Dele blod til 5 Eppendorf-rør, hver med 100 ul.
- Ofre mus med karbondioksid eller isofluran. Vurdere makroskopiske skader score (se annen JOVE video publikasjon for detaljer 1). Måle kroppsvekt endring. Mål tarm lengde og tykkelse med digital caliper. Observere avføring tekstur (hard, myk eller blodig). Bestem okkult blod i avføring med Hemooccult. Dissekere kolon vev og fikse i formalin for H & E flekker.
- Dissekere en femur bone per mus, trekke benmarg og skyll benmargen med kaldt PBS via 25G nål og 1 ml sprøyte. Pool 4 benmargen plugger til en tube og holde i isen.
- Hell benmargen til Petriskål, skjær benmargen plugg med 18G nål og 5 ml sprøyte flere ganger til ingen benmarg plug er til stede.
- Spinne ned med 1500 rpm i 5 min ved 4 ° C. Fjern supernatant og resuspender med 600 ul cellefarging buffer. Dele resuspenderte benmargen til 5 Eppendorf-rør, hver med 100 ul.
7. Kvalitetskontroll av benmargstransplantasjon med flowcytometri
- Merke hver prøve rør med blod eller benmarg # 1-5:
- Klargjør antistoff blandingen for hver respektive rør i mørket.
Nr 1 Ingen antistoff
# 2 30 ul FITC isotype kontroll + 30 ul PE isotype kontroll + 15 ul CD16/32 blokkering
# 3 30 ul FITC CD45.1 Ab + 15 ul CD16/32 blokkering
# 4 30 ul PECD45.2 Ab + 15 ul CD16/32 blokkering
# 5 30 ul FITC CD45.1 Ab + 30 ul PE CD45.2 Ab + 15 ul CD16/32 blokkering
| Legg ingenting å blod eller benmarg prøve nr. 1 |
| Tilsett 5 pl antistoff blandingen nr. 2 til hver blod eller benmarg prøve nr. 2 |
| Tilsett 3 pl antistoff blandingen # 3 til hver blod eller benmarg prøve nr. 3 |
| Tilsett 3 pl antistoff blandingen # 4 til hver blod eller benmarg prøve nr. 4 |
| Tilsett 5 pl antistoff blandingen nr. 5 til hver blod eller benmarg prøve nr. 5 |
- Ha i mørket i isen i 30 minutter.
- Tilsett 2 ml 1X RBC lyseringsbuffer til hvert rør. Ha i mørket på isen i 15 minutter.
- Spinne ned cellene ved 1500 rpm, 5 min ved 4 ° C. (GH 3,8 rotor, 1500 rpm = 350 xg) Fjern supernatant. Resuspender pelleten med 500 pl cellefarging buffer i mørket og deretter vortex kort. Sjekk CD45.1 (som representerer WT) og CD45.2 (som representerer KO) i immunostained blod og benmarg prøver med flowcytometri. Velg FITC å representere WT CD45.1 og PE å representere KO CD45.2.
- Analyser flowcytometri resultatene etter FlowJo programvare. Beregn forholdet FITC: PE ratio eller PE: FITC ratio for å avgjøre om donor genotype er dominerende genotype i blod og benmarg.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hvis gen-of-interesse spiller en betydelig rolle i immunceller under utvikling av kolitt, musene fikk beinmarg av ulike genotype gjennom benmargstransplantasjon (WT til KO eller KO til WT) bør ha en endret respons på DSS kolitt. En av de viktigste parametre for å bestemme graden av kolitt er H & E farging av colonic vev. Colonic vev struktur endringer og tegn på betennelse kan være kvantitativt evaluert av H & E histologi scoring system. Kriterier for H & E histologi scoring for DSS kolitt modellen kan finnes her to. Alternativt kan kjemisk indusert kolitt også bli indusert av trinitrobenzene sulfonsyre (TNBS). Metoder for TNBS kolitt induksjon og H & E histologi scoring kriterier kan bli funnet i en tidligere publikasjon 3. Histologi poengsum forskjell mellom gruppene kan analyseres av student t-tester.
Musene kan ha betydeligbedres eller forverret kolitt sammenlignet med mus med humbug benmargstransplantasjon (WT til WT eller KO til KO). Hvis genet-of-interesse spiller en betydelig rolle i kolitt via beinmargen avledet celler bør musene med utvekslet benmarg reagere vesentlig forskjellig fra musene med sham benmargstransplantasjon.
For DSS kolitt modell kan histologi endring evalueres med histologi scoring (se Figur 4). Vesentlig endring av histologi score kan indikere utvikling av kolitt mediert av genet-of-interesse i benmarg avledet celler. For eksempel er cathelicidin antimikrobiell og antiinflammatoriske peptid genet (gen-av-interesse i vårt tilfelle) 4. Uten benmargstransplantasjon, cathelicidin KO mus generelt utviklet verre kolitt enn vill-type mus gjorde i respons til DSS. Transfusjon av vill-type (WT) benmargen til cathelicidin knockout (KO) mus fører til ameliorated kolitt mens transfusipå av benmarg fra cathelicidin knockout (KO) mus med villtype (WT) mus fører til forverret kolitt når de utsettes for DSS (figur 2).
Å verifisere uttrykk av gen-of-interesse, bør mRNA uttrykk av gen-of-interesse (f.eks. Cathelicidin) fra donor villtype benmarg kan påvises i de colonic (eller andre) vev i cathelicidin mangelfull knockout mottaker mus etter bein marg transplantasjon. Det er også interessant å vite om uttrykket av gen-of-interesse i villtype mottaker mus er redusert etter donasjon av knockout mus benmarg.
Vellykket engraftment av donor beinmargen er representert ved dominerende andel av donor CD isotype i mottakeren CD isotype i både perifere blodceller og beinmarg mottakerland mus. Benmarg viser best merking av CD45.1 og CD45.2 i flowcytometri som blod har mye unstained celler (figur 2 og 3).
Figur 1. Forsøksprotokollen av benmargstransplantasjon.
Figur 2. Flowcytometri data for beinmarg mottakerland mus etter benmargstransplantasjon. Y-aksen viser FITC-merket CD45.1 signal og X-aksen viser PE-merket CD45.2 signal. Vellykket bein transplantasjon er definert av endring av CD45.1 eller CD45.2 genotype både benmarg og blod mottakerlandenes mus. Klikk her for å se større figur .
Figur 3. Strømningscytometri data av blod av mottakerlandenes mus etter benmargstransplantasjon. Y-aksen viser FITC-merket CD45.1 signal og X-aksen viser PE-merket CD45.2 signal. Vellykket bein transplantasjon er definert av endring av CD45.1 eller CD45.2 genotype både benmarg og blod mottakerlandenes mus. Klikk her for å se større figur .
Figur 4. Evaluering av kolitt i mus etter benmargstransplantasjon. (A) Sample H & E bilder av kolon med normal histologi og DSS kolitt. (B) Histologi score. Vellykket induksjon av DSS kolitt kan bekreftes av en betydelig økning av histologi score ved dag 5 av DSS behandling. Etter utveksling av benmargen til forskjellig genotype, bør histologi scoren endres vesentlig. Dette antyder endret kurs av kolitt ved gen-of-interesse uttrykker i benmargen avledet celler. Data er representert ved middelverdi ± standard feil av midler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne benmargstransplantasjon tilnærming er egnet for immunologi forskning av kolitt, infeksjon, kreft, fedme og andre sykdommer. Denne benmargstransplantasjon eksperimentet trengs når genet-of-interesse uttrykkes i både beinmargen avledet og ikke-benmargsceller avledet celler og genet-of-interesse mistenkes å mediere sykdom ved celler fra enten populasjonen. For eksempel, er antimikrobielle peptidet cathelicidin vist å modulere akutt kolitt. Men det er uttrykt i både epitelceller og immunceller (for eksempel makrofager). Så vi brukte bein transplantasjon for å definere hvilke populasjon av celler modulerer akutt kolitt i mus. Kolitt alvorlighetsgrad ble betydelig endret etter endring av beinmargen cathelicidin genotyper via benmargstransplantasjon. Da kan vi konkludere med at cathelicidin uttrykt i beinmargen avledet celler spiller en betydelig rolle i modulerende akutt kolitt svar på DSS.
Bone marrow avledet celler vanligvis inkluderer røde blodceller, hvite blodceller og blodplater. Benmargstransplantasjon endrer genotype av disse cellene, men ikke andre. Sideveis sett kan dette eksperimentet bare skille rollen som gen-of-interesse i benmarg avledet celler versus benmarg avledet celler. Men dette forsøket ikke kan videre definere hvilke bestand av beinmargen avledet celler formidler kolitt som alle røde blodceller, hvite blodceller og blodplater er utledet fra benmargen. Skjebnen til benmarg avledet celler migrert til kolon under kolitt er en aktiv og kontroversiell forskning. Etter benmargstransplantasjon og induksjon av murin kolitt, er det sannsynlig at noen av benmarg avledet celler eksisterer som lymfoidceller og myofibroblasts i kolon 5. En annen rapport antydet at benmarg avledet celler tjene som endoteliale stamceller for neovascularization i gjenopprettingen 6. Det er også evidence viser benmarg avledet celler er forbundet med epitelisk celledifferensiering hos pasienter med kolitt 7. Vi kan ikke utelukke at noen av benmarg avledet celler kan differensiere til celler enn typiske immunceller og spille modulerende roller i kolitt utvikling. Likevel, benmarg avledet monocytt / makrofager befolkningen er viktig for beskyttelse mot kjemiske indusert colonic mucosal skade 8,9. Denne rapporten er i tråd med det resultatet at cathelicidin uttrykt fra benmarg avledet celler modulerer DSS kolitt mens cathelicidin skilles fra monocytter / makrofager 4.
På den annen side, er det mange måter å spore suksessen benmargstransplantasjon. Flyten cytometri analyse av CD45.1 og CD45.2 genotyper kan gi en kvantitativ metode for å bestemme andelen av donor benmarg stamceller avledet cellene i mottakerens mus. Beinmargen avledet celles kan differensieres til flere typer celler 10. Når flowcytometri analyse ikke er mulig, er det mulig å bruke mannlige (XY kromosom) donor mus og kvinnelige (XX kromosom) mottaker mus 11. Donor mus vil bære unike Y kromosomet i kroppen av XX bare kvinnelige mottaker mus. Y kromosomet kan identifiseres ved fluorescerende in situ hybridisering 11. I tillegg kan immunhistokjemi av CD45.1, CD45.2 og / eller gen-av-interesse i vev være nødvendig å visualisere donor benmarg avledet celler.
Men CD45 flowcytometri analyse og Y kromosom i situ hybridiseringsprosedyrer gjennomføres vanligvis etter at musene ble avlivet. Å overvåke plasseringen av donor cellene i mottakerens mus blir brukt til å studere kroniske sykdommer som kreft uten å ofre de mus, er det mulig å bruke grønt fluorescerende protein transgene mus som donor mus 12. Derfor ødelegge donor beinrad avledet celler kan spores i kroppen av mottaker mus under ikke-invasiv høyoppløselig optisk imaging henhold forbigående anestesi og dette kan gjøres gjentatte ganger.
Ikke alle mus har lykkes benmargstransplantasjon 13. Vi observerte ~ 10-20% av mus dør i de første 2 ukene etter bestråling pga anemi eller infeksjon. Derfor bør flere mus enn nødvendig fremstilles ved begynnelsen av eksperimentet. For eksempel, bør du forberede 10 mus pr gruppe ved starten av eksperimentet hvis du forventer 8 mus pr gruppe tilgjengelig ved slutten av kolitt eksperimentet. Sørg også for at du fjerner de døde mus så snart som mulig. Hastigheten på immun rekonstitusjon er korrelert til nummeret blodkreft stamceller i beinmargen infused inn mottakeren mus 14. Derfor er det avgjørende å ha tilstrekkelig antall levende celler fra beinmargen (1 x 10 7 celler per mus) infused inn mottaker mus for vellykket benmarg transplantation.
Mottaker mus etter bestråling har kompromittert immunitet. Donor mus disseksjon og benmarg forberedelse prosedyrer bør gjøres i samme standard som cellekultur eksperimenter. Bruk av sterile instrumenter og containere, skal aseptisk håndtering teknikker brukes. Gjennom alle eksperimenter, inneholder PBS 1% Penicillin-streptomycin og 10 U / ml heparin bør brukes ved håndtering av bein marrows. Alle reagenser er cellekultur klasse. Ytterligere tekniske diskusjonen kan finnes i referanse 13.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklært.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble finansiert av Pilot og Feasibility Study stipend fra UCLA-CURE Center, Crohns og kolitt Foundation of America Career Development Award (# 2691) og National Institute of Health NIDDK K01 (DK084256) midler til Hon Wai Koon.
Benmarg bestråling operasjonen ble assistert av Bernard Levin og Scott Kitchen of UCLA Center for AIDS Research Mouse / Human Chimera Kjerne anlegget. Flowcytometri operasjonen ble assistert av UCLA Vector Kjerne anlegget.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell staining buffer | Biolegend | #420201 | |
| 10X RBC lysis buffer | Biolegend | #420301 | |
| FITC mouse isotype control | Biolegend | #400207 | |
| PE mouse isotype control | Biolegend | #400211 | |
| PE anti-mouse CD45.2 | Biolegend | #109807 | |
| FITC anti-mouse CD45.1 | Biolegend | #110705 | |
| Anti-mouse CD16/32 blocking | Biolegend | #101301 | |
| 40 μm cell strainer | Fisherbrand | #22363547 | |
| PBS 1X | MP biomedicals | #1860454 | |
| Heparin | Fisherbrand | #BP2425 | |
| Sulfatrim (SMZ) | Qualitest | NC9242720 (fisher) | |
| Lysol IC | Andwin Scientific | NC9745686 (fisher) | |
| Vaccutainer | BD | #8000813 | |
| Mouse restrainer | Braintree Scientific | #TV-150 | |
| Irradiator | J.L. Shepherd and Associates | Mark I 68A | |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCanto II | |
| Flow cytometer test-tube | Falcon | #352052 | |
| Digital caliper | Fisherbrand | 14-648-17 | |
| Hemoccult ICT | Beckman Coulter | G0328QW |
References
- Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. J. Vis. Exp. (60), e3678 (2012).
- Ungaro, R. A novel Toll-like receptor 4 antagonist antibody ameliorates inflammation but impairs mucosal healing in murine colitis. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 1167-1179 (2009).
- Castagliuolo, I. Protective effects of neurokinin-1 receptor during colitis in mice: role of the epidermal growth factor receptor. Br. J. Pharmacol. 136, 271-279 (2002).
- Koon, H. W. Cathelicidin signaling via the Toll-like receptor protects against colitis in mice. Gastroenterology. 141, 1852-1863 (2011).
- Lee, C. Y. marrow cells in murine colitis: multi-signal analysis confirms pericryptal myofibroblast engraftment without epithelial involvement. PLoS One. 6, e11 (2011).
- Deng, X. New cell therapy using bone marrow-derived stem cells/endothelial progenitor cells to accelerate neovascularization in healing of experimental ulcerative colitis. Curr. Pharm. Des. 17, 1643-1651 (2011).
- Valcz, G. Lymphoid aggregates may contribute to the migration and epithelial commitment of bone marrow-derived cells in colonic mucosa. J. Clin. Pathol. 64, 771-775 (2011).
- Takaba, J., Mishima, Y., Hatake, K., Kasahara, T. Role of bone marrow-derived monocytes/macrophages in the repair of mucosal damage caused by irradiation and/or anticancer drugs in colitis model. Mediators Inflamm. 2010, 634145 (2010).
- Bakhautdin, B. Protective role of macrophage-derived ceruloplasmin in inflammatory bowel disease. Gut. , (2012).
- Seta, N., Kuwana, M. Derivation of multipotent progenitors from human circulating CD14+ monocytes. Exp. Hematol. 38, 557-563 (2010).
- Crain, B. J., Tran, S. D., Mezey, E. Transplanted human bone marrow cells generate new brain cells. J. Neurol. Sci. 233, 121-123 (2005).
- Finnberg, N. K. High-resolution imaging and antitumor effects of GFP(+) bone marrow-derived cells homing to syngeneic mouse colon tumors. Am. J. Pathol. 179, 2169-2176 (2011).
- Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies. J. Am. Assoc. Lab Anim. Sci. 48, 11-22 (2009).
- Chen, B. J., Cui, X., Sempowski, G. D., Domen, J., Chao, N. J. Hematopoietic stem cell dose correlates with the speed of immune reconstitution after stem cell transplantation. Blood. 103, 4344-4352 (2004).
