Summary
Benmärgstransplantation ger ett sätt att ändra genotypen av ben härrör benmärgsceller. Om genen av intresse uttrycks i båda ben härledda märgceller och icke-benmärg härledda celler, kan benmärgstransplantation ändra benmärg härledda celler till en annan genotyp utan att ändra den icke-benmärg härledd cell genotyp.
Abstract
För att förstå betydelsen av en gen i utvecklingen av kolit, jämförde vi svaren från vildtyp möss och gen av intresse brist möss knockout på kolit. Om genen av intresse uttrycks i båda ben härledda märgceller och icke-benmärgsceller härledda celler hos värden, men det är möjligt att differentiera rollen av en gen av intresse i ben härledda märgceller och icke-benmärg härledda celler genom benmärgstransplantation teknik. För att ändra benmärgen härledda celler genotyp av möss var den ursprungliga benmärgen hos mottagande möss förstördes av bestrålning och sedan ersätts av nya givare benmärg olika genotyp. När vildtyp möss givare benmärg transplanterades till knockout-möss, kunde vi generera knockout-möss med vildtyp genexpression i ben härledda benmärgsceller. Alternativt var när knockoutmöss donator benmärg transplanteras till vildtyp mottagare möss, vildtyp möss utan gen av intresse som uttryckerfrån benmärg härledda celler producerades. Emellertid kan benmärgstransplantation inte 100% fullständig. Därför använde vi kluster av differentiering (CD) molekyler (CD45.1 och CD45.2) som markörer för givar-och celler att spåra andelen givarens benmärg härledda celler i mottagande möss och framgång av benmärgstransplantation. Vildtyp möss med CD45.1 genotyp och knockout-möss med genotyp CD45.2 användes. Efter bestrålning av mottagande möss, var givarens benmärgsceller från olika genotyper infuseras i de mottagande mössen. När den nya benmärg regenereras att ta över dess immunitet, utmanades mössen genom kemisk agens (dextran natriumsulfat, DSS 5%) för att inducera kolit. Här har vi också visat att metoden för att inducera kolit i möss och utvärdera rollen av genen av intresse uttrycks från benmärg härledda celler. Om genen av intresse från de härledda bencellerna spelar en viktig roll i utvecklingen av sjukdomen (t.ex. E. colitis), kan fenotypen för de mottagande möss med benmärgstransplantation vara signifikant. Vid slutet av kolit experiment, benmärgen härledda celler i blod och benmärg märktes med antikroppar mot CD45.1 och CD45.2 och deras kvantitativa förhållande existerar kan användas för att utvärdera framgången med benmärgstransplantation genom flödescytometri. Framgångsrik benmärgstransplantation ska visa en stor majoritet av givare genotyp (i tid av CD-molekyl markör) över mottagare genotyp i både benmärgen och blod mottagande möss.
Protocol
1. Innan-du-start tekniska överväganden
- Vi rekommenderar att du använder både C57/BL6 vildtyp möss och möss knockout för experiment eftersom möss med motsvarande cd-molekyler kan köpas från de stora mus leverantörer.
- Eftersom det är svårt att spåra vildtyp möss och möss knockout härledda givarceller efter benmärgstransplantation, är det nödvändigt att använda CD45.1 möss för att representera vildtypsmöss. (CD45.1 C57/SJL WT möss Jackson Laboratories lager # 002.014).
- De flesta mus kolonier CD45.2. Vår knockoutmöss tillhör CD45.2 genotyp (alternativt en CD45.2 WT möss Källa: Jackson Laboratories lager # 000.664). Fastställandet av CD45.1 eller CD45.2 genotyp kan utföras med flödescytometri av benmärg och perifert blod som nämns i avsnitt 7 i detta protokoll.
- Möss efter bestrålning har nedsatt immunförsvar. Håll möss i patogenfri anläggning.
- Drift av bestrålningsugnen kräver särskild säkerhet clearance och utbildning. För att spara tid i utbildning och godkännande processer, är det bäst att samarbeta med ett laboratorium med kvalificerad tekniker som kan driva bestrålningsanordningen.
- Många institutioner har laboratorier flödescytometri med erfarna tekniker. För att minimera problemen med flödescytometri drift är det bättre att diskutera ditt flöde plan för cytometri experimentera med erfaren tekniker innan du börjar.
- Möss tilldelades på detta sätt (10 möss per grupp):
| Grupp | Benmärg givare till mottagare | Behandling | |
| EN | BM utbyte | CD45.1 WT till CD45.2 KO | DSS kolit |
| B | Vatten normal kontroll | ||
| C | BM utbyte | CD45.2 KO till CD45.1 WT | DSS kolit |
| D | Vatten normal kontroll | ||
| E | Sham | CD45.1 WT till CD45.1 WT | DSS kolit |
| F | Vatten normal kontroll | ||
| G | Sham | CD45.2 KO till CD45.2 KO | DSS kolit |
| H | Vatten normal kontroll |
* En kort illustration av försöksprotokollet visas i figur 1.
2. Mottagare Möss Bestrålning
- Möss föds och hålls i patogenfri anläggning. Placera möss i autoklaverat bestrålning paj med filter. Placera en mus i varje slits bestrålning paj. Placera kakan i bestrålningsanordningen och se den roterande tallriken och paj vänder.
- Sätt på luftpumpför ventilation. Stäng bestrålningsanordningen dörren och låsa den.
- Bestråla mössen med 1.000 rad (vilket är ekvivalent med 10 Gy) omkring 10 minuter (beroende på strålningskällan och halveringstid). Från denna tidpunkt, de bestrålade mössen är nedsatt immunförsvar och har svag immunitet mot infektion. Efter bestrålning, ta kakan ut och placera i en steril behållare för transport till biosäkerhet skåp i djur anläggning. Undvik att utsätta mössen för yttre miljön för att minimera risken för infektion.
- I biosäkerhet skåp, överföra mössen i autoklaverade mus burar med autoklaverad strö (4 möss per bur Lägg till ny sterilt vatten med sulfatrim fjädring -. 3,12 ml per 100 ml vatten).
- Linda vattenflaska med aluminiumfolie som antibiotika är ljuskänsliga. Skaka för att blanda sulfatrim lösningen flaskan väl innan du lägger det till buren.
3. Donator benmärg Extraktion
- Offra möss med koldioxid eller isoflurning och sedan doppa i 1:200 Lysol-lösning. Spraya mössen med 70% etanol för att väta huden och dissekera öppna ben.
- Blötlägg dissekering instrument i 70% etanol för sterilisering.
- Utför dissektion i en biosäkerhet skåp. Använd sterila dissekering instrumenten att exponera överarmsbenet, lårben, skenben och vadben ben, utan från att fästa muskler och ligament.
- Klipp upp båda ändarna av ben för att visa det röda benmärgen. Håll benen med pincett. Spola röda benmärgen ut med kall PBS med 3 ml spruta och 25G nålar till en petriskål. Spola från båda ändarna av ben för att ge mer benmärgsceller.
- Använd 6 ml sprutor och 18G1 / 2 nålar för att bryta röda pluggar benmärg genom upprepad aspiration och utstötning. Överför benmärg med 50 ml Falcon-rör.
- Snurra benmärgen i 1.800 rpm under 5 minuter vid 4 ° C. Kasta supernatanten, återsuspendera pelleten genom virvling under 5-10 sek.
- Späd 10X RBC lysbuffert med sterilt vatten. Add 1X RBC lysbuffert (5 ml per donator mus), virvel igen för 5 sek och hålla exakt 3 min vid rumstemperatur.
- Efter 3 minuter, fylla rören med 20 ml kall PBS för att stoppa lys och blanda. Häll innehållet genom en 40 | im cellfilter direkt i en ny 50 ml Falcon-rör.
- Skölj de ursprungliga rören med 5 ml PBS och överför till cell sil samt. Fyll upp till 50 ml med PBS och blanda.
4. Räkna benmärgsceller Donor
- Tillsätt 100 | il trypanblått till ett Eppendorf-rör och 100 | il av benmärg suspensionen till ett Eppendorf-rör och blanda. Pipettera färgade cellblandningen till en hemocytometer.
- Mängden celler beräknas genom totala levande benmärg celltalet i Falcon-rör = ofärgade cellantal i 16 kvadrater x 2 (beroende på trypanblått utspädning) x 10.000 x 50 ml
- Centrifugera ner benmärgsceller i 50 ml Falcon-rör vid 2.000 rpm under 5 minuter vid 4 ° C.
- Avlägsna supernatanten. Baseradpå de totala cellräkningar, resuspendera pelleten med PBS till 1 x 10 8 celler per ml
5. Infusion till mottagande möss
- Värm de mottagande mössen på en värmedyna och under en värmande lampa. Sätt mottagande möss i förband. Injicera 1 x 10 7 celler per mus i 100-200 ul intravenöst.
- Injektion av givare benmärg måste göras mellan 4-24 timmar efter bestrålning.
- Håll dig till 4 injicerade möss per bur. Bibehålla de injicerade mottagande möss i autoklaverade burar med antibiotika-behandlat vatten under de första 4 veckorna i patogenfri djur anläggning och låt mössen återfå immunitet. Ändra burar, Antibiotikabehandlade vatten och mat var 4 dagar för att bibehålla hygienen.
6. Induktion av kolit och utvärdering av kolit
- 4 veckor efter bestrålning och benmärgstransplantation, växla till vanligt vatten utan antibiotika och bibehålla mössen för ytterligare 2 veckor för att återfå sin normalatarmens mikroflora.
- 6 veckor efter benmärg injektion, mäta initiala kroppsvikt. Vissa möss ges 5% dextransulfat i dricka vatten ad libitum att inducera kolit. Vissa möss får regelbunden dricksvatten endast som normala kontrollgrupper.
- 5 dagar senare, dra perifert blod, överföring till heparin belagda rör (Vacutainer) och hålla i is. Poolen blod från 4 möss till 1 rör. Kombinera 300 pl blod med 300 pl cellfärgning buffert = 600 pl. Dividera blodet till 5 Eppendorf-rör, vart och ett med 100 pl.
- Offra mössen med koldioxid eller isofluran. Utvärdera makroskopiska skador poäng (se annan JUPITER video publikation för detaljer 1). Mät förändring kroppsvikt. Mät tarm längd och tjocklek med digital skjutmått. Observera avföring konsistens (hård, mjuk eller blodig). Bestäm ockult blod i avföringen med Hemooccult. Dissekera kolon vävnader och fixa i formalin för H & E färgning.
- Dissekera 1 lårbenet bone per mus, extrahera benmärg och spola benmärgen med kall PBS genom 25G nål och 1 ml spruta. Pool 4 benmärg pluggar till 1 tub och hålla i is.
- Häll benmärgen till petriskål, skjuvning benmärgen kontakten med 18G nål och 5 ml spruta flera gånger tills ingen benmärg kontakten är närvarande.
- Spinn ner med 1.500 rpm under 5 minuter vid 4 ° C. Avlägsna supernatanten och återsuspendera med 600 pl cellfärgning buffert. Dela upp den återsuspenderade benmärgen att 5 Eppendorf-rör, vart och ett med 100 pl.
7. Kvalitetskontroll av benmärgstransplantation genom flödescytometri
- Märk varje provrör av blod eller benmärg # 1-5:
- Förbered antikroppen blandningen för respektive rör i mörker.
# 1 Ingen antikropp
# 2 30 ul FITC isotypkontroll + 30 pl PE isotypkontroll + 15 pl CD16/32 blockering
# 3 30 pl FITC CD45.1 Ab + 15 pl CD16/32 blockering
# 4 30 il PECD45.2 Ab + 15 pl CD16/32 blockering
# 5 30 pl FITC CD45.1 Ab + 30 pl PE CD45.2 Ab + 15 pl CD16/32 blockering
| Tillföra något till blod eller benmärg prov # 1 |
| Tillsätt 5 pl av antikropp blandning # 2 till varje blod eller benmärg prov # 2 |
| Tillsätt 3 | il av antikropp blandning # 3 till varje blod eller benmärg prov # 3 |
| Tillsätt 3 | il av antikropp blandning # 4 till varje blod eller benmärg prov # 4 |
| Tillsätt 5 pl av antikropp blandning # 5 till varje blod eller benmärg prov # 5 |
- Förvara i mörker i is under 30 minuter.
- Tillsätt 2 ml 1X RBC lysbuffert till varje rör. Förvara i mörker på is under 15 minuter.
- Centrifugera ner cellerna vid 1.500 rpm, 5 minuter vid 4 ° C. (GH 3,8 rötor, 1.500 rpm = 350 xg) Avlägsna supernatanten. Resuspendera pelleten med 500 pl cellfärgning buffert i mörker, sedan skaka snabbt. Kontrollera CD45.1 (representerande WT) och CD45.2 (representerande KO) i immunfärgat blod och ben prover märg genom flödescytometri. Välj FITC att representera WT CD45.1 och PE för att representera KO CD45.2.
- Analysera resultaten flödescytometriinstrument av FlowJo programvara. Beräkna förhållandet av FITC: PE-förhållande eller PE: FITC-förhållande för att avgöra om givaren genotyp är dominerande genotyp i blod och benmärg.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Om genen av intresse spelar en viktig roll i immuna celler under utvecklingen av kolit, de möss som fick benmärg av olika genotyp genom benmärgstransplantation (WT KO eller KO till WT) bör ha ett förändrat respons på DSS kolit. En av de viktigaste parametrarna för att bestämma graden av kolit är H & E-färgning av kolon vävnad. Kolonvävnad struktur förändringar och tecken på inflammation kan kvantitativt utvärderas genom H & E-histologi poängsystem. Kriterier för H & E histologi poäng för DSS kolit modellen kan hittas här 2. Alternativt kan kemisk inducerad kolit också induceras genom trinitrobensensulfonsyra (TNBS). Metoder för TNBS kolit induktion och H & E histologi kriterier poäng finns i en tidigare publikation 3. Histologi poäng skillnad mellan grupperna kan analyseras genom Students t-test.
Mössen kan ha betydligtförbättras eller förvärras kolit jämfört med möss med simulerad benmärgstransplantation (WT till WT eller KO till KO). Om genen av intresse spelar en viktig roll i kolit genom ben härledda benmärgsceller, bör möss med utbytt benmärg svarar signifikant skild från mössen med simulerad benmärgstransplantation.
För DSS kolit modell kan histologi förändring utvärderas av histologi poäng (se figur 4). Väsentliga förändringar i histologi värdering kan tyda på utveckling av kolit förmedlas av genen av intresse för ben härrör benmärgsceller. Till exempel, är cathelicidin en antimikrobiell och antiinflammatorisk peptidgenen (gen av intresse i vårt fall) 4. Utan benmärgstransplantation utvecklade cathelicidin KO-möss i allmänhet sämre kolit än vildtyp möss gjorde som svar på DSS. Transfusion av vildtyp (WT) benmärg till cathelicidin knockout (KO)-möss leder till lindras kolit medan transfusipå av benmärg från cathelicidin knockout (KO) möss till vildtyp (WT) möss leder till försämrad kolit när den utsätts för DSS (figur 2).
För att verifiera uttryck av gen av intresse, bör mRNA-uttryck av gen av intresse (t.ex.. Cathelicidin) från givare vildtyp benmärg vara spårbart i kolon (eller andra) vävnader av cathelicidin brist möss knockout mottagare efter ben benmärgstransplantation. Det är också intressant att veta om uttrycket av genen av intresse för vildtyp mottagande möss minskar efter donation av knockout-möss benmärg.
Lyckad engraftment av givare benmärg representeras av dominerande förhållande donator CD isotyp över mottagare CD isotyp i både perifera blodceller och benmärg av mottagande möss. Benmärg visar bäst märkning av CD45.1 och CD45.2 i flödescytometri som blod har en hel del ofärgade celler (figur 2 och 3).
Figur 1. Det experimentella protokollet för benmärgstransplantation.
Figur 2. Flödescytometri data benmärg av mottagande möss efter benmärgstransplantation. Y-axeln visar FITC-märkt CD45.1 signalen och X-axeln visar PE-märkt CD45.2 signalen. Framgångsrik ben transplantation definieras av förändringen av CD45.1 eller CD45.2 genotyp både benmärgen och blodet hos mottagaren möss. Klicka här för att se större bild .
Figur 3. Flödescytometri uppgifter av blod av mottagande möss efter benmärgstransplantation. Y-axeln visar FITC-märkt CD45.1 signalen och X-axeln visar PE-märkt CD45.2 signalen. Framgångsrik ben transplantation definieras av förändringen av CD45.1 eller CD45.2 genotyp både benmärgen och blodet hos mottagaren möss. Klicka här för att se större bild .
Figur 4. Utvärdering av kolit hos möss efter benmärgstransplantation. (A) Prov H & E-bilder av kolon med normal histologi och DSS kolit. (B) Histologi poäng. Framgångsrik induktion av DSS kolit kan bekräftas genom signifikant ökning av histologi poäng av dag 5 av DSS behandling. Efter utbyte av benmärg till olika genotyp bör histologi poäng förändras avsevärt. Detta tyder på förändrade förlopp kolit av genen av intresse uttrycker i benet härrör benmärgsceller. Data representeras som medelvärdet ± standardfel av medel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denna benmärgstransplantation tillvägagångssätt är lämpligt för immunologi forskning av kolit, infektion, cancer, fetma och andra sjukdomar. Denna benmärgstransplantation experiment behövs när genen av intresse uttrycks i båda härledda benmärg och icke-benmärg härledda celler och genen av intresse misstänks förmedla sjukdom av celler från endera populationen. Exempelvis antimikrobiell peptid cathelicidin visats modulera akut kolit. Men det uttrycks i både epitelceller och immunceller (såsom makrofager). Sedan använde vi ben transplantation att definiera vilka population av celler modulerar akut kolit hos möss. Den kolit svårighetsgrad var signifikant efter bytet av ben genotyper märg cathelicidin via benmärgstransplantation. Då kan vi dra slutsatsen att cathelicidin uttryckt i ben härledda benmärgsceller spelar en betydande roll i att modulera akut kolit som svar på DSS.
Ben marrow härledda celler innefattar typiskt röda blodkroppar, vita blodkroppar och blodplättar. Benmärgstransplantation förändrar genotypen hos dessa celler men inte andra. Lateralt sett kan detta experiment differentiera endast rollen av genen av intresse i benmärg härledda celler kontra icke-benmärg härledda celler. Men detta experiment inte kan vidare definiera vilken population av benmärg härledda celler förmedlar kolit som alla röda blodkroppar, vita blodkroppar och blodplättar är härledda från benmärg. Ödet för ben härrör märgceller migrerat till kolon under kolit är en aktiv och kontroversiell forskningsområde. Efter benmärgstransplantation och induktion av murin kolit, är det troligt att en del av ben härledda benmärgsceller existerar som lymfoidceller och myofibroblaster i kolon 5. En annan rapport föreslog att benmärg härledda celler fungerar som endoteliala progenitorceller för neovaskularisering i återhämtningsprocessen 6. Det finns också evidence visar benmärgsceller härledda celler är associerade med epitelial celldifferentiering hos patienter med kolit 7. Vi kan inte utesluta att en del av ben härledda benmärgsceller kan differentiera till celler än typiska immunceller och spela modulerande roll i kolit utveckling. Ändå, benmärg härledd monocyt / makrofag befolkningen är viktigt för skydd mot kemisk inducerad kolon slemhinneskada 8,9. Denna rapport är i linje med vår bedömning att cathelicidin uttryckt från ben härledda benmärgsceller modulerar DSS kolit medan cathelicidin utsöndras från monocyter / makrofager 4.
Å andra sidan finns det många sätt att spåra framgång benmärgstransplantation. Den flödescytometrianalys av CD45.1 och CD45.2 genotyper kan ge en kvantitativ metod för att bestämma andelen benmärg donatorben stamceller härledda cell celler i de mottagande mössen. Benmärg härledd cells kan differentiera till flera typer av celler 10. När flödescytometrianalys inte är genomförbar, är det möjligt att använda manliga (XY kromosom) donatormöss och kvinnliga (XX kromosom) möss mottagande 11. De donatormöss bär unika Y-kromosomer i kroppen av XX endast kvinnliga mottagare möss. Y-kromosomen kan identifieras genom fluorescerande in situ-hybridisering 11. Dessutom kan immunohistokemi av CD45.1, CD45.2 och / eller genen av intresse i vävnaderna vara nödvändigt att visualisera donator benmärgs härledda celler.
Men CD45-flödescytometrianalys och Y-kromosomen in situ-hybridiseringsförfaranden görs oftast efter avlivades mössen. För att övervaka placeringen av givarceller i de mottagande mössen som används för att studera kroniska sjukdomar som cancer utan att offra mössen, är det möjligt att använda grönt fluorescerande protein transgena möss som donatormöss 12. Därför förstör givaren benrad härledda celler kan spåras i kroppen hos de mottagande möss under icke-invasiv hög upplösning optisk avbildning i övergående anestesi och detta kan göras flera gånger.
Inte alla möss har framgångsrikt benmärgstransplantation 13. Vi observerade ~ 10-20% av mössen dör under de första 2 veckorna efter bestrålning på grund av anemi eller infektion. Därför bör fler möss än vad som behövs framställas vid början av experimentet. Till exempel bör du förbereda 10 möss per grupp vid början av experimentet om du förväntar 8 möss per grupp finns i slutet av kolit experimentet. Se också till att du tar bort döda möss så snart som möjligt. Hastigheten hos immunrekonstituering är korrelerad till antalet till hematopoietiska stamceller i benmärg infuseras in i recipientmöss 14. Därför är det viktigt att ha tillräckligt antal levande benmärgsceller (1 x 10 7 celler per mus) infunderas i mottagande möss för framgångsrik benmärg transplantation.
Mottagare möss efter bestrålning har nedsatt immunförsvar. Donatormöss dissektion och benmärg förfaranden beredning bör ske i samma standard som experiment cellodling. Användning av sterila instrument och behållare bör aseptiska hanteringstekniker tillämpas. Under alla experiment innehåller PBS 1% Penicillin-streptomycin och 10 U / ml heparin bör användas vid hantering av benmärg. Alla reagenser är cellodling klass. Ytterligare teknisk diskussion finns i referens 13.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Acknowledgments
Detta arbete har finansierats av Pilot och genomförbarhetsstudien bidrag från UCLA-CURE Center, Crohns och kolit Foundation of America Karriärutveckling Award (# 2691) och National Institute of Health NIDDK K01 (DK084256) finansiering Hon Wai Koon.
Benmärg bestrålning operationen hjälp av Bernard Levin och Scott kök av UCLA Center for AIDS Research mus / human Chimera core facility. Flödescytometri drift fick hjälp av UCLA Vector Core Facility.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell staining buffer | Biolegend | #420201 | |
| 10X RBC lysis buffer | Biolegend | #420301 | |
| FITC mouse isotype control | Biolegend | #400207 | |
| PE mouse isotype control | Biolegend | #400211 | |
| PE anti-mouse CD45.2 | Biolegend | #109807 | |
| FITC anti-mouse CD45.1 | Biolegend | #110705 | |
| Anti-mouse CD16/32 blocking | Biolegend | #101301 | |
| 40 μm cell strainer | Fisherbrand | #22363547 | |
| PBS 1X | MP biomedicals | #1860454 | |
| Heparin | Fisherbrand | #BP2425 | |
| Sulfatrim (SMZ) | Qualitest | NC9242720 (fisher) | |
| Lysol IC | Andwin Scientific | NC9745686 (fisher) | |
| Vaccutainer | BD | #8000813 | |
| Mouse restrainer | Braintree Scientific | #TV-150 | |
| Irradiator | J.L. Shepherd and Associates | Mark I 68A | |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCanto II | |
| Flow cytometer test-tube | Falcon | #352052 | |
| Digital caliper | Fisherbrand | 14-648-17 | |
| Hemoccult ICT | Beckman Coulter | G0328QW |
References
- Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. J. Vis. Exp. (60), e3678 (2012).
- Ungaro, R. A novel Toll-like receptor 4 antagonist antibody ameliorates inflammation but impairs mucosal healing in murine colitis. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 1167-1179 (2009).
- Castagliuolo, I. Protective effects of neurokinin-1 receptor during colitis in mice: role of the epidermal growth factor receptor. Br. J. Pharmacol. 136, 271-279 (2002).
- Koon, H. W. Cathelicidin signaling via the Toll-like receptor protects against colitis in mice. Gastroenterology. 141, 1852-1863 (2011).
- Lee, C. Y. marrow cells in murine colitis: multi-signal analysis confirms pericryptal myofibroblast engraftment without epithelial involvement. PLoS One. 6, e11 (2011).
- Deng, X. New cell therapy using bone marrow-derived stem cells/endothelial progenitor cells to accelerate neovascularization in healing of experimental ulcerative colitis. Curr. Pharm. Des. 17, 1643-1651 (2011).
- Valcz, G. Lymphoid aggregates may contribute to the migration and epithelial commitment of bone marrow-derived cells in colonic mucosa. J. Clin. Pathol. 64, 771-775 (2011).
- Takaba, J., Mishima, Y., Hatake, K., Kasahara, T. Role of bone marrow-derived monocytes/macrophages in the repair of mucosal damage caused by irradiation and/or anticancer drugs in colitis model. Mediators Inflamm. 2010, 634145 (2010).
- Bakhautdin, B. Protective role of macrophage-derived ceruloplasmin in inflammatory bowel disease. Gut. , (2012).
- Seta, N., Kuwana, M. Derivation of multipotent progenitors from human circulating CD14+ monocytes. Exp. Hematol. 38, 557-563 (2010).
- Crain, B. J., Tran, S. D., Mezey, E. Transplanted human bone marrow cells generate new brain cells. J. Neurol. Sci. 233, 121-123 (2005).
- Finnberg, N. K. High-resolution imaging and antitumor effects of GFP(+) bone marrow-derived cells homing to syngeneic mouse colon tumors. Am. J. Pathol. 179, 2169-2176 (2011).
- Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies. J. Am. Assoc. Lab Anim. Sci. 48, 11-22 (2009).
- Chen, B. J., Cui, X., Sempowski, G. D., Domen, J., Chao, N. J. Hematopoietic stem cell dose correlates with the speed of immune reconstitution after stem cell transplantation. Blood. 103, 4344-4352 (2004).
