Summary
Knoglemarvstransplantation tilvejebringer en måde at ændre genotype af knoglemarv-afledte celler. Hvis genet af interesse udtrykkes i både knoglemarvsafledte celler og ikke-knoglemarvsafledte celler, kan knoglemarvstransplantation ændre knoglemarv afledte celler til en anden genotype uden at ændre den ikke-knoglemarvsafledte celler genotype.
Abstract
For at forstå den rolle, et gen i udviklingen af colitis, sammenlignede vi svarene fra vildtype-mus og gen-af-interesse deficiente knockout-mus til colitis. Hvis genet af interesse udtrykkes i både knoglemarvsafledte celler og ikke-knoglemarvsafledte celler af værten, men det er muligt at skelne rollen af et gen af interesse i knoglemarv afledte celler og ikke-knoglemarv afledte celler ved knoglemarvstransplantation teknik. For at ændre knoglemarvsafledte celler genotype af mus, blev den oprindelige knoglemarv fra recipientmus ødelagt ved bestråling og derefter erstattes af nye donorknoglemarv af forskellige genotype. Når vildtype-mus donorknoglemarv blev transplanteret til knockout-mus, kunne vi generere knockout-mus med vildtype-genekspression i knoglemarv afledte celler. Alternativt blev da knockout mus donor knoglemarv transplanteres til vildtype-recipientmus, vildtype-mus uden gen af interesse udtrykkerfra knoglemarv afledte celler blev fremstillet. Imidlertid kan knoglemarvstransplantation ikke være 100% komplet. Derfor har vi udnyttet differentieringsklynge-(CD)-molekyler (CD45.1 og CD45.2) som markører for donor-og recipientceller at spore andelen af donorknoglemarv afledte celler i recipientmus og succes af knoglemarvstransplantation. Vildtypemus med CD45.1 genotypen og knockout mus med CD45.2 genotype blev anvendt. Efter bestråling af recipientmus, var donor knoglemarvceller hos forskellige genotyper infuseres ind i recipientmus. Når den nye knoglemarv regenereres at overtage sin immunitet blev musene udfordret ved kemisk middel (dextrannatriumsulfat, DSS 5%) for at inducere colitis. Vi her viste også fremgangsmåden til at inducere colitis hos mus og vurdere rollen af genet af interesse udtrykkes fra knoglemarv afledte celler. Hvis genet af interesse fra knoglen afledte celler spiller en vigtig rolle i udviklingen af sygdommen (f.eks colitis), kan fænotypen af de recipientmus med knoglemarvstransplantation ændres væsentligt. Ved afslutningen af colitis eksperimenter, afledt af knoglemarv celler i blod og knoglemarv blev mærket med antistoffer mod CD45.1 og CD45.2 og deres kvantitative forhold mellem eksistens kan anvendes til at evaluere effekten af knoglemarvstransplantation ved flowcytometri. Vellykket knoglemarvstransplantation bør vise et stort flertal af donor genotype (på sigt af CD-molekyle markør) over modtager genotype i både knoglemarven og blod recipientmus.
Protocol
1. Før-du-starte Tekniske overvejelser
- Vi anbefaler brug af begge C57/BL6 vildtype-mus og knockout-mus for eksperiment, fordi mus med tilhørende cd-molekyler kan købes fra store muse leverandører.
- Da det er vanskeligt at spore de vildtypemus og knockout-mus afledt donorceller efter knoglemarvstransplantation, er det nødvendigt at anvende CD45.1 mus til at repræsentere vildtypemus. (CD45.1 C57/SJL WT mus Jackson Laboratories stock # 002014).
- De fleste mus kolonier er CD45.2. Vores knockout-mus tilhører CD45.2 genotype (alternativt en CD45.2 WT mus kilde: Jackson Laboratories lager # 000.664). Bestemmelsen af CD45.1 eller CD45.2 genotype kan udføres ved hjælp af flowcytometri af knoglemarv og perifert blod som nævnt i § 7 i denne protokol.
- Mus efter bestråling har nedsat immunforsvar. Hold mus i patogenfri facilitet.
- Drift af stråleovnen kræver særlige sikkerhedsforanstaltninger clearance og uddannelse. For at spare tid i uddannelses-og godkendelsesprocesser, er det bedst at samarbejde med et laboratorium med kvalificeret tekniker, der er i stand til at betjene strålerøret.
- Mange institutioner har flowcytometri laboratorier med erfarne teknikere. For at minimere problemer med flowcytometri operation, er det bedre at drøfte din flowcytometri eksperiment plan med den erfarne tekniker, før du starter.
- Mus blev tildelt på denne måde (10 mus per gruppe):
| Group | Knoglemarv donor til modtager | Behandling | |
| A | BM udveksling | CD45.1 WT til CD45.2 KO | DSS colitis |
| B | Vand normal kontrol | ||
| C | BM udveksling | CD45.2 KO til CD45.1 WT | DSS colitis |
| D | Vand normal kontrol | ||
| E | Sham | CD45.1 WT til CD45.1 WT | DSS colitis |
| F | Vand normal kontrol | ||
| G | Sham | CD45.2 KO til CD45.2 KO | DSS colitis |
| H | Vand normal kontrol |
* En kort illustration af eksperimentelle protokol er vist i figur 1..
2. Recipientmus Bestråling
- Mus er opdrættet og holdt i patogenfrit anlæg. Placer mus i autoklaveret bestråling pie med filter. Placer en mus i hver slot af bestråling pie. Placer pie i strålerøret, og sørg for pladespilleren og pie vender.
- Tænd for luft-pumpentil ventilation. Luk strålerøret døren og låse den.
- Bestråle musene med 1000 rad (hvilket svarer til 10 Gy) omkring 10 minutter (afhængig af strålingskilde og halveringstid). Fra dette tidspunkt er de bestrålede mus med svækket immunforsvar eller har svag immunitet mod infektion. Efter bestråling tage kagen ud og placere i en steril beholder til transport til biosikkerhed kabinet i dyrefacilitet. Undgå at udsætte musene for ydre miljø for at minimere risikoen for infektion.
- I biosikkerhed kabinet, overfører musene i autoklaverede mus bure med autoklaveret strøelse (4 mus pr bur Tilføj sterilt vand med sulfatrim suspension -. 3,12 ml per 100 ml vand).
- Vikl vandflaske med aluminiumsfolie, da antibiotika er lysfølsomme. Ryst at blande sulfatrim løsning flasken godt før du lægger det til buret.
3. Donor Bone Marrow Extraction
- Sacrifice mus med kuldioxid eller isoflurning og derefter nedsænkes i 1:200 Lysol opløsning. Sprøjte musene med 70% ethanol til at befugte huden og dissekere åbne ben.
- Soak dissektion instrumenter i 70% ethanol til sterilisering.
- Udfør dissektion i en biosikkerhed kabinet. Anvende de sterile dissektion instrumenter for at blotlægge humerus, femur, tibia og fibula knogler, fri for fastgørelse muskler og ledbånd.
- Skær begge ender af knoglerne til at vise den røde knoglemarv. Hold knoglerne med pincet. Skyl røde knoglemarv ud med koldt PBS med 3 ml sprøjte og 25G nåle til en petriskål. Flush fra begge ender af knoglerne til opnåelse af mere knoglemarvsceller.
- Brug 6 ml sprøjter og 18G1 / 2 nåle til at bryde røde knoglemarv stik ved gentagen aspiration og udstødning. Overfør knoglemarv med 50 ml Falcon-rør.
- Spin knoglemarven i 1800 rpm i 5 min ved 4 ° C. Bortskaf supernatanten, resuspender pellet ved hvirvelbehandling i 5-10 sek.
- Fortynd 10X RBC lysepuffer med sterilt vand. Add 1X RBC lysis buffer (5 ml pr donormus), vortex igen i 5 sekunder og holde nøjagtig 3 minutter ved stuetemperatur.
- Efter 3 min, fylde rørene med 20 ml kold PBS at stoppe lysis og blandes. Hæld indholdet gennem en 40 um si celle direkte i en ny 50 ml Falcon-rør.
- Skyl de oprindelige rør med 5 ml PBS og overføres til celle si også. Fyld op til 50 ml med PBS og blandes.
4. Optælling knoglemarvsdonor Cells
- Tilsættes 100 ul Trypan-blåt til et Eppendorf-rør og 100 gl knoglemarv suspensionen til et Eppendorf-rør og blandes. Afpipetter den farvede celleblandingen for et hæmocytometer.
- Mængden af celler beregnes ved total levende knoglemarv celletal i Falcon-rør = ufarvet celleantal i 16 kvadrater x 2 (på grund af trypanblåt fortynding) x 10.000 x 50 ml
- Spin ned knoglemarvsceller i 50 ml Falcon rør ved 2.000 rpm i 5 min ved 4 ° C.
- Supernatanten fjernes. Baseretpå de samlede celletællinger, pellet resuspenderes med PBS til 1 x 10 8 celler pr
5. Infusion til recipientmus
- Varm de modtagende mus på en varmepude og under en opvarmning lampe. Sæt recipientmus i harpiksstopperen. Injicere 1 x 10 7 celler per mus i 100-200 ml intravenøst.
- Injektion af donorknoglemarv skal foretages mellem 4-24 timer efter bestråling.
- Hold op til 4 injicerede mus pr bur. Vedligehold de injicerede recipientmus i autoklaverede bure med antibiotika-behandlet vand i de første 4 uger i patogenfri dyrefacilitet og lad musene genvinde immunitet. Skift bure, antibiotika-behandlet vand og mad hver 4 dage for at opretholde hygiejne.
6. Induktion af Colitis og vurdering af Colitis
- 4 uger efter bestråling og knoglemarvstransplantation, skifte til regelmæssig vand uden antibiotika og opretholde musene i 2 uger mere at genvinde deres normalemikrotarmfloraen.
- 6 uger efter knoglemarv injektion måle oprindelige legemsvægt. Nogle mus gives 5% dextransulfat i drikkevand ad libitum til at inducere colitis. Nogle mus gives regelmæssige drikkevand udelukkende som normale kontrolgrupper.
- 5 dage senere, tilbagekalde perifert blod, overførsel til heparin coatede rør (Vacutainer) og holde i is. Pool blodet fra 4 mus til 1 rør. Kombiner 300 gl blod med 300 pi cellefarvning puffer = 600 pi. Opdele blodet til 5 Eppendorf-rør, hver med 100 ul.
- Sacrifice musene med kuldioxid eller isofluran. Evaluere makroskopiske skader score (se anden JOVE video publikation for detaljer 1). Mål legemsvægtændring. Mål tarm længde og tykkelse med digital skydelære. Overhold afføring tekstur (hård, blød eller blodig). Bestem okkult blod i afføringen med Hemooccult. Dissekere kolon væv og løse i formalin for H & E farvning.
- Dissekere 1 femur bone per mus, ekstrahere knoglemarv og skyl knoglemarven med koldt PBS via 25G kanyle og 1 ml sprøjte. Pool 4 knoglemarv stik til 1 rør og holde i is.
- Hæld knoglemarven til petriskålen, shear knoglemarven prop med 18G nål og 5 ml sprøjte flere gange indtil der ikke knoglemarven plug er til stede.
- Spin ned med 1500 rpm i 5 min ved 4 ° C. Fjern supernatanten og resuspender med 600 pi cellefarvning puffer. Opdele den resuspenderede knoglemarv til 5 Eppendorf-rør, hver med 100 ul.
7. Kvalitetskontrol af knoglemarvstransplantation ved flowcytometri
- Mærk hver prøve rør af blod eller knoglemarv # 1-5:
- Forberede antistof blandingen for hvert respektivt rør i mørke.
# 1 Intet antistof
# 2 30 ul FITC isotypekontrol + 30 pi PE isotypekontrol + 15 gl CD16/32 blokering
# 3 30 ul FITC CD45.1 Ab + 15 gl CD16/32 blokering
# 4 30 gl PECD45.2 AB + 15 pi CD16/32 blokering
# 5 30 pi FITC CD45.1 Ab + 30 ul PE CD45.2 AB + 15 pi CD16/32 blokering
| Føj intet til blod eller knoglemarv prøve # 1 |
| Tilsættes 5 pi antistofblanding nr. 2 til hver blod eller knoglemarv prøve # 2 |
| Tilsæt 3 pi antistofblanding nr. 3 til hver blod eller knoglemarv prøve # 3 |
| Tilsæt 3 pi antistofblanding # 4 på hvert blod eller knoglemarv prøve # 4 |
| Tilsættes 5 pi antistofblanding nr. 5 til hvert blod eller knoglemarv prøve # 5 |
- Opbevares i mørke i is i 30 min.
- Tilsættes 2 ml 1X RBC lysis buffer til hvert rør. Opbevares i mørke på is i 15 min.
- Centrifuger cellerne ved 1.500 rpm, 5 min ved 4 ° C. (GH 3,8 rotor, 1.500 rpm = 350 x g) Fjern supernatanten. Pellet resuspenderes med 500 pi cellefarvning puffer i mørke, derefter vortexes kort. Kontroller CD45.1 (der repræsenterer WT) og CD45.2 (svarende KO) i immunfarvet blod-og knoglemarvsprøver ved flowcytometri. Vælg FITC at repræsentere WT CD45.1 og PE til at repræsentere KO CD45.2.
- Analysere flowcytometri resultater efter FlowJo software. Beregn forholdet mellem FITC: PE-forholdet eller PE: FITC-forhold at fastslå, om donor genotype er dominerende genotype i blod og knoglemarv.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hvis genet af interesse spiller en vigtig rolle i immune celler under udvikling af colitis, musene modtager knoglemarv af forskellige genotype ved knoglemarvstransplantation (WT til KO eller KO til WT) bør have en ændret reaktion på DSS colitis. En af de vigtigste parametre til bestemmelse af graden af colitis er H & E-farvning af colon væv. Colonvæv struktur ændringer og tegn på inflammation kan kvantitativt bedømt ved H & E histologi pointsystem. Kriterier for H & E histologi scoring for DSS colitis model kan findes her 2. Alternativt kan kemisk induceret colitis også induceres af trinitrobenzen-sulfonsyre (TNBS). Fremgangsmåder til TNBS colitis induktion og H & E histologi scoring kriterier kan findes i en tidligere publikation 3. Histologibedømmelse forskel mellem grupperne kan analyseres ved Students t-test.
Musene kan have signifikantlindres eller forværret colitis sammenlignet med mus med sham knoglemarvstransplantation (WT til WT eller KO til KO). Hvis genet af interesse spiller en vigtig rolle i colitis via knoglemarv afledte celler, bør musene med udveksles knoglemarv reagerer signifikant forskellig fra musene med sham knoglemarvstransplantation.
For DSS colitis model, kan histologi ændring vurderes ved histologi scoring (se figur 4). Væsentlig ændring af histologibedømmelse kan indikere udvikling af colitis medieret af genet af interesse i knoglemarv afledte celler. For eksempel er cathelicidin et antimikrobielt og antiinflammatorisk peptid-genet (genet af interesse i vores tilfælde) 4. Uden knoglemarvstransplantation, generelt cathelicidin KO-mus udviklede værre colitis end vildtypemus gjorde som reaktion på DSS. Transfusion af vildtype (WT) knoglemarv til cathelicidin knockout (KO) mus fører til lindres colitis mens transfusiden af knoglemarv fra cathelicidin knockout (KO) mus til vildtype (WT) mus fører til forværret colitis når de udsættes for DSS (figur 2).
At kontrollere ekspression af genet af interesse, bør mRNA-ekspression af gen af interesse (f.eks. Cathelicidin) fra donor vildtype knoglemarv kunne spores i de colon (eller andre) væv af cathelicidin deficiente knockout recipientmus efter knogle knoglemarvstransplantation. Det er også interessant at vide, om ekspressionen af genet af interesse i vildtype-recipientmus reduceres efter donation af knockout mus knoglemarv.
Vellykket transplantation af donor knoglemarv er repræsenteret ved dominerende forhold mellem donor CD isotype løbet modtager CD isotype i både perifere blodceller og knoglemarv af recipientmus. Knoglemarv viser bedst mærkning af CD45.1 og CD45.2 i flowcytometri som blod har en masse af ufarvede celler (figur 2 og 3).
Figur 1. Forsøgsprotokollen for knoglemarvstransplantation.
Figur 2. Flowcytometri data fra knoglemarv hos recipientmus efter knoglemarvstransplantation. Y-aksen viser FITC-mærket CD45.1 signal og X-aksen viser PE-mærket CD45.2 signal. Vellykket knogle transplantation er defineret ved ændringen af CD45.1 eller CD45.2 genotype i både knoglemarv og blod af recipientmus. Klik her for at se større figur .
Figur 3. Flowcytometri data af blod af recipientmus efter knoglemarvstransplantation. Y-aksen viser FITC-mærket CD45.1 signal og X-aksen viser PE-mærket CD45.2 signal. Vellykket knogle transplantation er defineret ved ændringen af CD45.1 eller CD45.2 genotype i både knoglemarv og blod af recipientmus. Klik her for at se større figur .
Figur 4. Evaluering af colitis hos mus efter knoglemarvstransplantation. (A) Prøve H & E billeder af koloner med normal histologi og DSS colitis. (B) Histologi scorer. Vellykket induktion af DSS colitis kan bekræftes ved betydelig forøgelse af histologibedømmelse på dag 5 i DSS behandling. Efter udveksling af knoglemarv til forskellige genotype, bør histologibedømmelse ændres væsentligt. Dette antyder den ændrede forløb colitis af genet af interesse udtrykker i knoglemarven afledte celler. Data er betegnet ved gennemsnit ± standardfejl af middel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne knoglemarvstransplantation fremgangsmåde er egnet til immunologiske forskning af colitis, infektion, cancer, fedme og andre sygdomme. Denne knoglemarvstransplantation eksperiment er nødvendig, når genet af interesse udtrykkes i både knogle afledt marv og ikke-knoglemarv-afledte celler, og genet af interesse er mistænkt for at mediere sygdom af celler fra nogen af populationerne. For eksempel antimikrobielle peptid cathelicidin vist sig at modulere akut colitis. Men det udtrykkes i både epithelceller og immunceller (såsom makrofager). Så vi brugte knogletransplantation til at definere hvilken population af celler modulerer akut colitis hos mus. Den colitis sværhedsgrad var signifikant ændret efter skift af knoglemarv cathelicidin genotyper via knoglemarvstransplantation. Så kan vi konkludere, at cathelicidin udtrykt i knoglemarvsceller afledte celler spiller en vigtig rolle ved modulering akut colitis i forbindelse med DSS.
Bone maRROW afledte celler indbefatter typisk røde blodlegemer, hvide blodlegemer og blodplader. Knoglemarvstransplantation ændrer genotypen af disse celler, men ikke andre. Sideværts set kan dette forsøg kun differentiere rolle genet af interesse i knoglemarv afledte celler versus ikke-knoglemarvsafledte celler. Men dette forsøg kan ikke yderligere definere hvilken population af knoglemarvsafledte celler medierer colitis som alle røde blodlegemer, hvide blodlegemer og blodplader er afledt af knoglemarv. Skæbne knoglemarv afledte celler migreret til koloner under colitis er en aktiv og kontroversiel forskningsområde. Efter knoglemarvstransplantation og induktion af murin colitis, er det sandsynligt, at nogle af knoglemarv afledte celler eksisterer som lymfoide celler og myofibroblaster i koloner 5. En anden rapport foreslog, at knoglemarv afledte celler tjener som endoteliale stamceller til neovaskularisation i helbredelsesprocessen 6. Der er også evidence viser knoglemarv afledte celler er forbundet med epitelial celledifferentiering hos patienter med colitis 7. Vi kan ikke udelukke, at nogle af knoglemarvsceller afledte celler kan differentiere til andre celler end typiske immunceller og spille modulerende roller i colitis udvikling. Alligevel knoglemarvsafledte monocyt / makrofag population er vigtigt for beskyttelse mod kemisk induceret colon slimhindeskader 8,9. Denne rapport er i overensstemmelse med vores konklusion om, at cathelicidin udtrykt fra knoglemarv afledte celler modulerer DSS colitis mens cathelicidin udskilles fra monocytter / makrofager 4.
På den anden side, er der mange måder til at måle effektiviteten af knoglemarvstransplantation. The flowcytometrianalyse af CD45.1 og CD45.2 genotyper kan tilvejebringe en kvantitativ metode til bestemmelse af andelen af donorknoglemarv stamceller afledte celler i recipientmus. Knoglemarvsafledte cellers kan differentiere i adskillige typer celler 10. Når flowcytometrianalyse ikke er mulig, er det muligt at anvende mandlige (XY kromosom) donormus og kvindelige (XX kromosom) recipientmus 11. De donormus vil bære unikke Y kromosomer i kroppen af XX kun kvindelige recipientmus. Y-kromosomet kan identificeres ved fluorescerende in situ-hybridisering 11. Desuden kan immunhistokemi af CD45.1, CD45.2 og / eller genet af interesse i vævene være nødvendigt at visualisere donorknoglemarv afledte celler.
Men CD45 flowcytometrianalyse og Y-kromosom in situ hybridisering procedurer udføres sædvanligvis efter blev musene aflivet. At overvåge placeringen af donorceller i recipientmus, der anvendes til at studere kroniske sygdomme som cancer uden at ofre de mus, er det muligt at anvende grønt fluorescerende protein transgene mus som donormus 12. Derfor er donorknoglemarv ødelæggerækken afledte celler kan spores i kroppen af de modtagende mus under ikke-invasiv høj opløsning optisk billeddannelse under forbigående anæstesi, og dette kan gøres gentagne gange.
Ikke alle mus har succes knoglemarvstransplantation 13. Vi observerede ~ 10-20% af musene dør i de første 2 uger efter bestråling på grund af anæmi eller infektion. Derfor bør flere mus end nødvendigt fremstilles ved starten af eksperimentet. For eksempel skal man udarbejde 10 mus per gruppe ved starten af eksperimentet, hvis man forventer 8 mus per gruppe til rådighed ved udgangen af colitis eksperimentet. Sørg også for du fjerne de døde mus så hurtigt som muligt. Hastigheden af immun rekonstitution er korreleret til antallet til hæmatopoietiske stamceller i knoglemarv infunderes i recipientmus 14. Det er derfor vigtigt at have tilstrækkeligt antal levende knoglemarvsceller (1 x 10 7 celler per mus) infunderede i recipientmus for vellykket knoglemarvstransplantation transplantation.
Recipientmus efter bestråling har nedsat immunforsvar. Donor-mus dissektion og knoglemarv forberedelsesprocedurer bør ske i samme standard som cellekultur eksperimenter. Anvendelse af sterile instrumenter og beholdere, bør aseptisk håndtering teknikker anvendes. Gennem alle eksperimenter, indeholder PBS 1% penicillin-streptomycin og 10 U / ml heparin bør anvendes under behandlingen af knogle græskar. Alle reagenser er cellekultur kvalitet. Yderligere teknisk diskussion kan findes i reference 13.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklæret.
Acknowledgments
Dette arbejde blev finansieret af Pilot og gennemførlighedsundersøgelsen tilskud fra UCLA-CURE Center, Crohns og Colitis Foundation of America Career Development Award (# 2691) og National Institute of Health NIDDK K01 (DK084256) finansiering til Hon Wai Koon.
Knoglemarv bestråling operation blev bistået af Bernard Levin og Scott Kitchen of UCLA Center for AIDS Research muse / humant Chimera Core facilitet. Flowcytometri operation blev bistået af UCLA Vector Core facilitet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell staining buffer | Biolegend | #420201 | |
| 10X RBC lysis buffer | Biolegend | #420301 | |
| FITC mouse isotype control | Biolegend | #400207 | |
| PE mouse isotype control | Biolegend | #400211 | |
| PE anti-mouse CD45.2 | Biolegend | #109807 | |
| FITC anti-mouse CD45.1 | Biolegend | #110705 | |
| Anti-mouse CD16/32 blocking | Biolegend | #101301 | |
| 40 μm cell strainer | Fisherbrand | #22363547 | |
| PBS 1X | MP biomedicals | #1860454 | |
| Heparin | Fisherbrand | #BP2425 | |
| Sulfatrim (SMZ) | Qualitest | NC9242720 (fisher) | |
| Lysol IC | Andwin Scientific | NC9745686 (fisher) | |
| Vaccutainer | BD | #8000813 | |
| Mouse restrainer | Braintree Scientific | #TV-150 | |
| Irradiator | J.L. Shepherd and Associates | Mark I 68A | |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCanto II | |
| Flow cytometer test-tube | Falcon | #352052 | |
| Digital caliper | Fisherbrand | 14-648-17 | |
| Hemoccult ICT | Beckman Coulter | G0328QW |
References
- Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. J. Vis. Exp. (60), e3678 (2012).
- Ungaro, R. A novel Toll-like receptor 4 antagonist antibody ameliorates inflammation but impairs mucosal healing in murine colitis. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 1167-1179 (2009).
- Castagliuolo, I. Protective effects of neurokinin-1 receptor during colitis in mice: role of the epidermal growth factor receptor. Br. J. Pharmacol. 136, 271-279 (2002).
- Koon, H. W. Cathelicidin signaling via the Toll-like receptor protects against colitis in mice. Gastroenterology. 141, 1852-1863 (2011).
- Lee, C. Y. marrow cells in murine colitis: multi-signal analysis confirms pericryptal myofibroblast engraftment without epithelial involvement. PLoS One. 6, e11 (2011).
- Deng, X. New cell therapy using bone marrow-derived stem cells/endothelial progenitor cells to accelerate neovascularization in healing of experimental ulcerative colitis. Curr. Pharm. Des. 17, 1643-1651 (2011).
- Valcz, G. Lymphoid aggregates may contribute to the migration and epithelial commitment of bone marrow-derived cells in colonic mucosa. J. Clin. Pathol. 64, 771-775 (2011).
- Takaba, J., Mishima, Y., Hatake, K., Kasahara, T. Role of bone marrow-derived monocytes/macrophages in the repair of mucosal damage caused by irradiation and/or anticancer drugs in colitis model. Mediators Inflamm. 2010, 634145 (2010).
- Bakhautdin, B. Protective role of macrophage-derived ceruloplasmin in inflammatory bowel disease. Gut. , (2012).
- Seta, N., Kuwana, M. Derivation of multipotent progenitors from human circulating CD14+ monocytes. Exp. Hematol. 38, 557-563 (2010).
- Crain, B. J., Tran, S. D., Mezey, E. Transplanted human bone marrow cells generate new brain cells. J. Neurol. Sci. 233, 121-123 (2005).
- Finnberg, N. K. High-resolution imaging and antitumor effects of GFP(+) bone marrow-derived cells homing to syngeneic mouse colon tumors. Am. J. Pathol. 179, 2169-2176 (2011).
- Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies. J. Am. Assoc. Lab Anim. Sci. 48, 11-22 (2009).
- Chen, B. J., Cui, X., Sempowski, G. D., Domen, J., Chao, N. J. Hematopoietic stem cell dose correlates with the speed of immune reconstitution after stem cell transplantation. Blood. 103, 4344-4352 (2004).
