Summary
Den mest almindeligt anvendte metode til at generere mange autologe dendritiske celler (DC'er) til anvendelse i tumor immunterapi er beskrevet. Fremgangsmåden anvender IL-4 og GM-CSF at differentiere udviklingslandene fra monocytter. De umodne DC'er stimuleres til modne og derefter fyldt med antigener, før de injiceres tilbage i patienten.
Abstract
Mens kliniske undersøgelser har fastslået, at antigen-loaded DC vacciner er sikre og lovende behandling for tumorer 1, deres kliniske effekt er endnu ikke fastslået. Den nedenfor beskrevne metode, aflægges i overensstemmelse med Good Manufacturing Process (GMP) retningslinjer, er en optimering af de mest almindelige ex vivo forberedelse metode til at generere et stort antal udviklingslandene for kliniske forsøg 2.
Vores metode udnytter den syntetiske TLR 3 agonist Polyinosinic-Polycytidylic Syre-poly-L-lysin Carboxymethylcellulose (Poly-ICLC) at stimulere udviklingslandene. Vores tidligere undersøgelse fastslået, at poly-ICLC er den mest potente individuel modning stimulans for humane DC'er som vurderet ved en opregulering af CD83 og CD86, induktion af interleukin-12 (IL-12), tumornekrosefaktor (TNF), interferon gamma-inducerede protein 10 (IP-10), interleukmin 1 (IL-1), og type I-interferoner (IFN) og minimal interleukin 10 (IL-10) produktion. DC'er er differentieret fra frosne perifere mononukleære blodceller (PBMC'er) opnået ved leukaferese. PBMC'er isoleres ved Ficoll-gradient centrifugering og frosset i portioner. På dag 1, er PBMC'er optøet og udpladet på vævsdyrkningskolber at selektere for monocytter, der klæber til plastoverfladen efter 1-2 timers inkubation ved 37 ° C i vævskultur inkubator. Efter inkubering lymfocytter vaskes og vedhængende monocytter dyrkes i 5 dage i nærværelse af interleukin-4 (IL-4) og granulocyt makrofag-koloni-stimulerende faktor (GM-CSF) til at differentiere til umodne DC'er. På dag 6, er umodne DC'er pulses med keyhole limpet hæmocyanin (KLH)-protein, der tjener som en kontrol for kvaliteten af vaccinen og kan øge immunogeniciteten af vaccinen 3.. DCS stimuleres til at modnes, lastet med peptidantigener, og inkuberes natten over. På dag 7, vaskes cellerne, og frosset i portioner på 1 ml indeholder4 - 20 x 10 6 celler med en kontrolleret-sats fryser. Lot release test for partierne af udviklingslandenes udføres, og skal opfylde mindstekrav specifikationer, inden de bliver sprøjtet ind patienterne.
Protocol
1.. Isolering og Kryopræservering af PBMC'er 4
- Aseptisk spike en af adgangsportene i leukaferese posen ved hjælp af et plasma transfer sæt. Ved hjælp af en 60 ml sprøjte, overføre leukaferese opnås fra patienter i en steril 500 ml flaske.
- Juster lydstyrken på leukaferese til 2x dets oprindelige volumen ved hjælp stuetemperatur RPMI. Bland grundigt.
- Bland forsigtigt flasken Ficoll-Paque PLUS. Tilføj 12 ml Ficoll-Paque PLUS i sterile 50 ml konisk rør.
- Forsigtigt lag 30 ml af den fortyndede leukaferese produkt til hver steril 50 ml konisk rør indeholdende Ficoll. Vær omhyggelig med ikke at forstyrre grænsefladen mellem Ficoll og celle suspension.
- Gentag trin 1.3 og 1.4 indtil hele leukaferese er lagdelt.
- Centrifuger 50 ml koniske rør ved 1.000 x g i 20 minutter ved stuetemperatur med ingen bremse.
- Omhyggeligt høste overskyet lag af PBMC'er fra hvert rør og transfer til nye sterile 50 ml rør.
- Læg RPMI til hvert rør til et endeligt volumen på 50 ml. Bland forsigtigt ved inversion.
- Centrifuger cellerne ved 500 x g i 10 minutter ved 4 ° C med fuld bremse.
- Fjern supernatanter fra hvert rør. Resuspender cellepellets fra hvert rør og tilføje RPMI til en slutvolumen på 50 ml. Bland forsigtigt ved inversion.
- Centrifuger cellerne ved 500 x g i 6 min ved 4 ° C.
- Fjern supernatanter fra hvert rør. Resuspender og samle de cellesuspensioner i en 50 ml konisk rør.
- Bring volumen poolede PBMC'er op til 50 ml med mere RPMI. Bland forsigtigt ved inversion.
- Centrifuger cellerne ved 300 x g i 6 min ved 4 ° C.
- Fjern supernatanten. Resuspender cellepelleten i 50 ml RPMI. Bland forsigtigt for at sikre en ensartet celle suspension.
- Tælle antallet af celler og bestemme cellelevedygtighed. Beregn det samlede antal af levedygtige celler.
- Centrifuger cellerne ved 300× g i 6 min ved 4 ° C. Forbered indefrysning medier. Frysning medier består af 10% dimethylsulfoxid (DMSO, Miltenyi Biotec) i humant AB serum (Valley Biomedical).
- Fjern supernatanten. Cellerne i en slutkoncentration på 2 x 10 8 celler / ml i kolde frysemedium.
- Lav portioner på 1 ml i 1,8 ml kryoglas.
- Overfør kryoglas ind med kontrolleret hastighed fryser og begynde indefrysning køre, Program 1. Ved afslutningen af kørslen, overføre de frosne kryoglas straks ind i dampfasen af flydende nitrogen fryser.
2.. Dag 0: Differentiering af dendritiske celler fra monocytter
- Der tilsættes 30 ml RPMI / 1% autologt plasma til en steril 50 ml konisk rør.
- Optø portioner af frosne PBMC'er ved forsigtig rystning i 37 ° C vandbad. Når helt optøet, overføres indholdet af hætteglassene til den sterile 50 ml konisk rør. Bland grundigt.
- Centrifuger cellerne i 6 minved 500 x g ved stuetemperatur. Fjern supernatanten og resuspender pelleterede celler i et lille volumen RPMI / 1% autologt plasma. Derefter tilsættes mere RPMI / 1% autologt plasma til et endeligt volumen på 50 ml. Bland grundigt.
- Centrifuger cellerne igen i 6 minutter ved 500 x g ved stuetemperatur. Aspirer supernatanten og resuspender pelleten i 50 ml RPMI / 1% autologt plasma. Bland grundigt.
- Tælle antallet af celler og bestemme cellelevedygtighed. Beregn det samlede antal af levedygtige celler.
- Plade 1,40 x 10 8 celler i 40 ml RPMI / 1% autologt plasma på 225 cm 2 EasyFlask. Gentag, indtil alle celler er blevet udpladet.
- Inkuber EasyFlasks fladt på sin side til 1 - 2 timer ved 37 ° C i vævskultur inkubator indeholdende 5% CO 2 for at tillade monocytter at klæbe til kolben.
- Når inkubationen er færdig, fjernes EasyFlask fra inkubatoren og vask to gange for at fjerne de ikke-adhærente celler USIng 30 ml forvarmet RPMI.
- Efter den anden vask, tilsættes 40 ml RPMI / 1% autologt plasma med 400-1.000 IU / ml IL-4 og 100-1.000 IU / ml GM-CSF 5-8. Til denne protokol, bruger vi 400 IE / ml IL-4 og 100 IE / ml GM-CSF.
- Inkubér EasyFlasks i 2 dage ved 37 ° C i vævskultur inkubator indeholdende 5% CO2.
3.. Dag 2: Fodring af dendritiske celler med IL-4 og GM-CSF
- Tilsæt 4 ml RPMI / 1% autologt plasma med 400-1.000 IU / ml IL-4 og 100-1.000 IU / ml GM-CSF til hver EasyFlask. Bland ved hvirvlende og rokke på sin side.
- Inkubér EasyFlasks for 3 dage mere (indtil dag 5) ved 37 ° C i vævskultur inkubator indeholdende 5% CO2.
4.. Dag 5: Høst af umodne dendritiske celler
- Harvest kulturerne ved kraftig hvirvlende kolberne og ved pipettering op og ned for at resuspendere ikke-klæbende og løst adhærerende celler. Overførhøstede celler til nye 50 ml koniske rør.
- Centrifuger rørene ved 500 x g i 6 minutter ved stuetemperatur. Fjern supernatanterne og resuspender cellepelleten i 50 ml RPMI / 1% autologt plasma. Bland grundigt.
- Tælle antallet af celler og bestemme cellelevedygtighed. Beregn det samlede antal af levedygtige celler.
- Centrifuger rørene ved 500 x g i 6 minutter ved stuetemperatur. Plade 1-2 x 10 6 celler per brønd i 3 ml RPMI / 1% autologt plasma med 400 IE / ml IL-4 og 100 IE / ml GM-CSF i 6-brønds vævskulturplader.
- Pladerne inkuberes ved 37 ° C i vævskultur inkubator indeholdende 5% CO 2 natten over.
5.. Dag 6: Modning og Antigen Loading af dendritiske celler
- Tilsæt 10 ug / ml KLH til 1/3 af brøndene i 6-brønds dyrkningsplader. Swirl pladerne for at blande. KLH kun tilsættes til 1/3 af brøndene fordi KLH kun anvendes til den første DC-vaccine. Efterfølgende DC vacciner conopretholde kun tumorantigen peptider.
- DC'er kan stimuleres til at modnes ved hjælp af forskellige stimuli. De mest almindelige modning stimuli, der er blevet anvendt i kliniske forsøg har været en cocktail af cytokiner (IL-1 β, TNFa og IL-6) og prostaglandin E2 (PGE2) 9,10. For nylig har anvendelsen af Toll-lignende receptor (TLR) agonister vundet popularitet 11,12. I denne protokol, tilsættes 2 mg / ml Polyinosinic-Polycytidylic Syre-poly-L-lysin Carboxymethylcellulose (Poly-ICLC) til brøndene og bland godt. Poly-ICLC er den kliniske kvalitet formulering af poly-IC, der er stabiliseret med poly-L-*-lysin og carboxymethylcellulose (fremstillet af Oncovir, Inc.).
- Tilføj 100 ug / ml lange peptidantigener (NY-ESO-1 og / eller Melan-A/MART-1) til deres udpegede brønde hver brønd modtager kun en enkelt peptid at undgå cross-konkurrence 13..
- Pladerne inkuberes ved 37 ° C i vævskultur inkubator indeholdende 5% CO <sub> 2 O / N.
6.. Dag 7: Kryopræservering af dendritiske celler
- Forbered DC Frysning Solution hjælp autolog plasma og 10% DMSO. Centrifuger DC Frysning Solution på 2.000 x g i 20 minutter ved 4 ° C for at fjerne ethvert partikelformet materiale. Overfør supernatanten til en ny mærket 15 ml konisk rør. Opbevares ved 4 ° C indtil anvendelse.
- Når inkubation natten er færdig, høst og pool alle brønde indeholdende udviklingslandene pulset med peptiderne i 50 ml koniske rør.
- Centrifuger rørene ved 500 × gi 6 min. Fjern supernatanterne. Resuspender cellepelleten i 5 ml RPMI / 1% autologt plasma. Bring det samlede volumen op til 50 ml med RPMI / 1% autologt plasma. Bland grundigt.
- Tælle antallet af celler og bestemme cellelevedygtighed. Beregne det samlede antal af levedygtige celler.
- Centrifuger rørene ved 500 x g i 6 minutter ved stuetemperatur. Fjern supernatanterne og resuspender hver pellet i 5 ml Sterile 0,9% NaCl, USP og overførsel til nye 15 ml koniske rør. Bring hver cellesuspension til 14 ml med mere sterilt 0,9% NaCl, USP. Cap og bland ved inversion.
- Gentag forrige trin to gange. Efter den sidste centrifugering, fjerne supernatanterne, at komme så tæt som muligt på cellepellets uden at forstyrre disse pellets.
- Resuspender cellepellets i DC Frysning Solution på 4 - 20 x 10 6 celler / ml og alikvot 1 ml til hver 1,8 ml kryorør hætteglas.
- Brug den kontrollerede sats fryser, Program 1, til at fryse ned portioner af DC-vacciner og overføre straks ind i damp fase af en flydende nitrogen fryser i langtidsopbevaring.
7.. Lot Udgivelsesdato Testing
- Hvert parti DC vaccine skal vurderes og opfylde særlige lot frigivelse kriterier (tabel 1), før den frigives til injektion i patienter i undersøgelsen, typisk 5 til 6 uger efter vaccine forberedelse.
- Levedygtighed:Evaluere levedygtighed DC vaccinen anvendelse af en automatiseret celletæller. Den mindste acceptable levedygtighed specifikation er> 70%.
- Identitet: Evaluer identiteten af den modne DC'er (CD11 c + CD14-CD83 +) ved flowcytometri. Procentdelen af CD11 c +-celler skal være> 50%. Procentdelen af CD11 c + og CD14 +-celler skal være <30% og andelen af CD11c +, CD14-og CD83 + celler bør være> 50%.
- Sterilitet: Test DC vaccinen for tilstedeværelsen af anaerobe og aerobe bakterier og svamp ved direkte kultur og Gram-farvning. Evaluer for tilstedeværelsen af mycoplasma ved hjælp af et direkte dyrkningssystem og DNA fluorochrom farvning Assay med indikator cellelinie. For disse tests, er den mindste specifikation sæt, ingen vækst observeres fra alle kulturer.
- Endotoxin: Vurdere endotoxinindhold vha. Kinetic-QCL kinetisk kromogent LAL assay og det skal være <50 EU / ml for at opfylde minimumskravene.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Mellem 10 - 20% af udgangsmaterialer PBMC'er differentierer til DC'er ved udgangen af dyrkningsperioden. Modne DC'er er CD11c +, CD14-, CD83 +, CD40 + og CCR7 + (figur 1). De udtrykker høje niveauer af MHC klasse I og II-molekyler og costimulerende molekyler CD80 og CD86. Poly-ICLC inducerede også lavere niveauer af PDL-1 sammenlignet med andre TLR agonister 14. Derudover disse Poly-IC-modnet DC'er udskiller store mængder af IL-12 (figur 2 og 15,16) og inducerer proliferation af allogene T-celler (figur 3).
Figur 1. Repræsentativ fænotype fuldt differentierede DCs modnet med Poly-IC. Alle DCS var gated på fremadrettede og side-scatter plot. DC'er blev identificeret ens CD11c + og CD14-. Modning af udviklingslandenes svar på Poly-ICLC (fed linie) blev evalueret baseret på ekspressionen af CD83, CD40 og CCR7 og sammenlignet med ikke-stimulerede DC'er (grå nuance). Klik her for at se større figur .
Figur 2. DCs modnet med Poly-IC producerer høje niveauer af cytokiner. Supernatanter fra udviklingslandene differentieret fra 3 raske donorer blev opsamlet efter overnight modning af DC'er med Poly-IC. Cytokiner produceres blev målt ved Cytokine Bead Array (CBA) Menneskelige inflammatoriske cytokiner Kit (BD Biosciences), som måler IL-12p70, TNF, IL-10, IL-6, IL-1β og IL-8.
rc = "/ files/ftp_upload/50085/50085fig3.jpg" />
Figur 3. DC'er modnet med Poly-ICLC inducerer proliferation af allogene T-celler. Poly-ICLC-modnet DC'er fra raske donorer blev inkuberet 1:10 med carboxyfluorescein diacetat succinimidylester (CFSE)-mærkede allogene T-celler. Efter 6 dage blev proliferation (A) evalueret ved flowcytometri ved gating på CD3 + T-cellepopulation. X-aksen viser fortynding af CFSE, som en måling af proliferation i de forskellige co-dyrkningsbetingelser: T-celler alene, ustimulerede DC, Poly-ICLC stimuleret DC, og phytohaemagglutinin (PHA)-stimulerede T-celler. Cytokinsekretion (B) under spredning blev evalueret fra supernatanterne i kulturerne med BD CBA Menneskelige Th1/Th2 Cytokine Kit II (BD Biosciences), som måler IFNy, TNF, IL-10, IL-6, IL-4, og IL-2. Kun IFNy er vist som de andre cytokiner ikke blev påvist til målbare niveauer i analysen./ / Www.jove.com/files/ftp_upload/50085/50085fig3large.jpg "target =" _blank "> Klik her for at se større figur.
| Test | Metode | Kriterier |
| Levedygtighed | Guava Personal Cell Analysis med ViaCount Reagent | > 70% |
| Identity | Flowcytometri -% CD11c +-celler | > 50% |
| Flowcytometri -% CD11c + CD14 +-celler | <30% | |
| Flowcytometri -% CD11 c + CD14-CD83 +-celler | > 50% | |
| Sterilitet | Bakterier eller svampe, Cultures | Negativ |
| Mycoplasma: Direkte Cell Culture | Negativ | |
| Endotoxin | Kinetic Chromogenic LAL Assay | <50 EU / ml |
| Funktion | Blandet lymfocytreaktion | Rapport Resultater |
Tabel 1. Lot release Kriterier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Fase I og II kliniske forsøg med monocytafledte DC'er har vist, at de inducerer immunrespons hos patienter, men klinisk succes har været begrænset 1.. Dette kan til dels skyldes den manglende konsensus om, hvordan at generere de optimale DC'er til tumor immunterapeutisk brug. Selvom der er mange måder at generere klinisk-grade DC'er, disse metoder variere med hensyn til anvendelsen af cytokiner anvendes til at differentiere monocytter, stimuli, der bruges til at inducere modning og fremgangsmåder til antigen belastning. Formlen for generering af optimale DC'er stadig skal defineres 2.
Nylig in vitro undersøgelser har vist, at DCS modnet med en cocktail af proinflammatoriske cytokiner 10, som er blevet anvendt i de fleste kliniske forsøg, især tilstedeværelsen af PGE2, kan inducere differentieringen af regulatoriske T-celler og Th2 svar 17, hurtig IDO 18, og er mangelfuld i IL-12p70produktion 19.. Disse virkninger kraftigt underminere vaccinens evne til at fremkalde immunrespons, og støtter derfor behovet for at evaluere alternative metoder til modning udviklingslandenes for at optimere deres virkninger in vivo.
Brugen af TLR agonister, især TLR 3 agonist Poly-IC, at modne DCS kan forbedre den kliniske effekt af udviklingslandenes. In vitro undersøgelser har vist, at Poly-IC-modnet DCs beholdt stabil høj ekspression af MHC molekyler og CD83 og costimulerende molekyler CD40, CD80 og CD86 14,15,20. Derudover Poly-IC-modnet DC'er producerede høje niveauer af IL-12 14,16,20, en vigtig cytokin til generering af anti-tumorrespons 21, samt andre proinflammatoriske cytokiner, såsom TNF-α, IL-6, IL-1β, IP-10, og type I IFNs 14.. Endnu vigtigere, som det er vist i murine tumormodeller, DCS pulset med Human Papilloma Virus (HPV) antigener og modnet wed Poly-IC-primet cytotoksiske T-celle responser var i stand til at udrydde etablerede HPV16-udtrykkende tumorer 22.. Som modning status udviklingslandene og tilstedeværelsen af IL-12 ser ud til at korrelere med effekten i kliniske forsøg 23,24, kan brugen af Poly-IC til modne DC'er være et vigtigt skridt i retning af at nå målet om klinisk succes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har modtaget økonomisk støtte fra følgende: NIH (AI061684, AI071078, AI044628 og K08 AI084578 (Miller)), Bill og Melinda Gates Foundation, Doris Duke Charitable Foundation, Cancer Research Institute, Alliance for Lupus Research og Emerald Foundation. Nina Bhardwaj er en coinventor om patenter vedrørende fremstilling og anvendelse af dendritiske celler til at manipulere immunitet. Forfatterne har ingen andre relevante overbevisninger eller finansiel involvering med en organisation eller enhed med en økonomisk interesse i eller økonomisk konflikt med emnet eller materialer diskuteres i manuskriptet bortset fra oplyses dem.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne takke Andres Salazar (Oncovir, Inc.) for gaven af Poly-ICLC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI-1640 medium with L-glutamine | BioWhittaker | 12-702F | |
| 1M HEPES buffered saline | BioWhittaker | 17-737E | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | BioWhittaker | 17-516F | |
| Human albumin, 25% solution USP | Aventis Behring | ||
| Ficoll-Hypaque PREMIUM | GE Healthcare | 17-5442-03 | |
| Human AB serum | Valley Biomedical | HP1022 | |
| Sterile saline USP | Hospira | ||
| CryoMACS DMSO | Miltenyi Biotec | 170-076-303 | |
| Leukine GM-CSF, 0.5 mg/ml | Berlex | A02266 | |
| MACS GMP IL-4 | Miltenyi Biotec | 170-076-101 | |
| Hiltonol, Poly-ICLC, 2 mg/ml | Oncovir | NA | |
| VACMUNE KLH | Biosyn | ||
| 225 sq cm EasyFlasks | Nalgene Nunc | 159934 | |
| Falcon 6-well tissue culture plates | Becton Dickinson | 353046 | |
| 1.8 ml CryoTube vials | Nalgene Nunc | 377267 | |
| Controlled Rate Freezer | Thermo | CryoMed |
References
- Lesterhuis, W. J., et al. Dendritic cell vaccines in melanoma: from promise to proof. Crit. Rev. Oncol. Hematol. 66, 118-134 (2008).
- Sabado, R. L., Bhardwaj, N. Directing dendritic cell immunotherapy towards successful cancer treatment. Immunotherapy. 2, 37-56 (2010).
- Schumacher, K. Keyhole limpet hemocyanin (KLH) conjugate vaccines as novel therapeutic tools in malignant disorders. J. Cancer. Res. Clin. Oncol. 127, Suppl 2. 1-2 (2001).
- Jaatinen, T., Laine, J. Isolation of mononuclear cells from human cord blood by Ficoll-Paque density gradient. Curr. Protoc. Stem Cell Biol. Chapter 2, Unit 2A 1 (2007).
- Eichler, H., et al. Multicenter study on in vitro characterization of dendritic cells. Cytotherapy. 10, 21-29 (2008).
- Feuerstein, B., et al. A method for the production of cryopreserved aliquots of antigen-preloaded, mature dendritic cells ready for clinical use. J. Immunol. Methods. 245, 15-29 (2000).
- O'Neill, D., Bhardwaj, N. Generation of autologous peptide- and protein-pulsed dendritic cells for patient-specific immunotherapy. Methods Mol. Med. 109, 97-112 (2005).
- de Vries, I. J., et al. Phenotypical and functional characterization of clinical grade dendritic cells. J. Immunother. 25, 429-438 (2002).
- Jonuleit, H., et al. Pro-inflammatory cytokines and prostaglandins induce maturation of potent immunostimulatory dendritic cells under fetal calf serum-free conditions. Eur. J. Immunol. 27, 3135-3142 (1997).
- Lee, A. W., et al. A clinical grade cocktail of cytokines and PGE2 results in uniform maturation of human monocyte-derived dendritic cells: implications for immunotherapy. Vaccine. 20, Suppl 4. A8-A22 (2002).
- Bhardwaj, N. Harnessing the immune system to treat cancer. J. Clin. Invest. 117, 1130-1136 (2007).
- Gnjatic, S., Sawhney, N. B., Bhardwaj, N. Toll-like receptor agonists: are they good adjuvants? Cancer J. 16, 382-391 (2010).
- Kedl, R. M., Kappler, J. W., Marrack, P. Epitope dominance, competition and T cell affinity maturation. Curr. Opin. Immunol. 15, 120-127 (2003).
- Bogunovic, D., et al. TLR4 engagement during TLR3-induced proinflammatory signaling in dendritic cells promotes IL-10-mediated suppression of antitumor immunity. Cancer Research. 71, 5467-5476 (2011).
- Verdijk, R. M., et al. Polyriboinosinic polyribocytidylic acid (poly(I:C)) induces stable maturation of functionally active human dendritic cells. J. Immunol. 163, 57-61 (1999).
- Rouas, R., et al. Poly(I:C) used for human dendritic cell maturation preserves their ability to secondarily secrete bioactive IL-12. Int. Immunol. 16, 767-773 (2004).
- Jongmans, W., Tiemessen, D. M., van Vlodrop, I. J., Mulders, P. F., Oosterwijk, E. Th1-polarizing capacity of clinical-grade dendritic cells is triggered by Ribomunyl but is compromised by PGE2: the importance of maturation cocktails. J. Immunother. 28, 480-487 (2005).
- Krause, P., et al. Prostaglandin E2 is a key factor for monocyte-derived dendritic cell maturation: enhanced T cell stimulatory capacity despite IDO. J. Leukoc. Biol. 82, 1106-1114 (2007).
- Morelli, A. E., Thomson, A. W. Dendritic cells under the spell of prostaglandins. Trends Immunol. 24, 108-111 (2003).
- Adams, M., et al. Dendritic cell (DC) based therapy for cervical cancer: use of DC pulsed with tumour lysate and matured with a novel synthetic clinically non-toxic double stranded RNA analogue poly [I]:poly [C(12)U] (Ampligen R). Vaccine. 21 (12), 787-790 (2003).
- Colombo, M. P., Trinchieri, G. Interleukin-12 in anti-tumor immunity and immunotherapy. Cytokine Growth Factor Rev. 13, 155-168 (2002).
- Mayordomo, J. I., et al. Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with synthetic tumour peptides elicit protective and therapeutic antitumour immunity. Nat Med. 1, 1297-1302 (1995).
- Dhodapkar, M. V., et al. Rapid generation of broad T-cell immunity in humans after a single injection of mature dendritic cells. J. Clin. Invest. 104, 173-180 (1999).
- Schuler-Thurner, B., et al. Rapid induction of tumor-specific type 1 T helper cells in metastatic melanoma patients by vaccination with mature, cryopreserved, peptide-loaded monocyte-derived dendritic cells. J. Exp. Med. 195, 1279-1288 (2002).
