Summary
Kv канала дисфункции связаны с нарушениями ритма сердца. С целью изучения молекулярных механизмов, которые приводят к таким аритмии мы используем систематическое протокол для изоляции предсердий и желудочков кардиомиоциты от Kv канала мышей вспомогательные подразделения нокаутом. Изолированные кардиомиоциты могут быть немедленно использованы для сотовых электрофизиологических исследований, биохимических или иммунофлюоресценции (ИФ) анализы.
Abstract
KCNE гены кодируют для небольшой семьи из Kv канала вспомогательные подразделения, которые образуют комплексы с гетеромерных Kv канала альфа-субъединицы для изменения их функциональных свойств. Мутации в генах KCNE были обнаружены у пациентов с сердечной аритмии, такие как синдром удлиненного QT и / или фибрилляции предсердий. Тем не менее, точные молекулярные патофизиологии, что приводит к таким заболеваниям остается неуловимым. В предыдущих исследованиях электрофизиологических свойств болезнетворные мутации в этих генах в основном были изучены в гетерологичных системы экспрессии и мы не можем быть уверены, что если сообщила эффекты могут быть непосредственно переведены на родной кардиомиоцитов. В нашей лаборатории, мы используем другой подход. Мы непосредственно изучить влияние делеции гена KCNE в изолированных кардиомиоцитов из нокаутных мышей сотовой электрофизиологии - уникальный метод, который мы опишем в этом номере журнала Визуализированные эксперименты. Сердца от генетикаLLY инженерии мышей KCNE быстро вырезали и установлен на аппарате Лангендорфа путем катетеризации аорты. Бесплатные Ca 2 + в миокарде связана EGTA, и диссоциации кардиомиоцитов затем достигается ретроградной перфузии коронарных артерий со специализированным низким Ca 2 + буфер, содержащий коллагеназы. Atria, бесплатно стенки правого желудочка и левого желудочка могут быть отделены друг от микрохирургической техники. Кальций затем медленно добавляют обратно в изолированном кардиомиоцитов в нескольких шаг содержащие процедуры промывки. Предсердий и желудочков кардиомиоцитов здоровый вид, не спонтанное схватки сразу же подвергается анализу электрофизиологических патчем техника зажима или других биохимических анализов в течение первых 6 часов после изоляции.
Protocol
1. Анестезии животных и изъятия органов
- Анестезию мыши, внутрибрюшинно (IP) инъекции кетамина (200 мг / кг массы тела) и Ксилазин (20 мг / кг массы тела).
- Чтобы противодействовать свертыванию вводят 250 МЕ гепарина IP, чтобы избежать свертывания крови и образованию тромбов.
- Подождите, пока глубокий наркоз будет достигнуто, которая характеризуется арефлексия. Чтобы проверить, арефлексия, тест роговичного рефлекса, осторожно касаясь роговицы или рефлекс испытательный полет хвостом щипать.
- Передача мыши на операционный стол и зафиксируйте его в положении лежа на спине.
- Надрезать кожу и брюшной стенки ниже мечевидного и выполнять раскладушка торакотомии: Расширить разрез с обеих сторон вдоль реберной дуги, а затем разрезать ребра в средней подмышечной линии, отклоняются вверх грудную клетку.
- Откройте перикарда, найдите крупных сосудов. Мягко нажмите сердце хвостового для лучшего отображения аорты. Зажмите аорты с помощью пинцета.
- Поместите сердце в вогнутость паре с cissors и анализировать все сообщающиеся сосуды с одного разреза. Убедитесь в том, чтобы сохранить достаточно большой части восходящей аорты для катетеризации Лангендорфа.
- Передача вырезали сердце сразу в чашку Петри заполнены холодный лед и предварительное решение оксигенированного 1 (для решений, см. таблицу 1).
2. Подготовка перфузии сердца и Лангендорфа
- Иглу аорты с 1.8F канюли стали. Убедитесь в том, чтобы избежать воздушной эмболии.
- Зафиксируйте аорты на канюлю с помощью хирургического шовного и флеш коронарных артерий с 1 мл раствора 1.
- Подключите канюля с аппаратом Лангендорфа.
- Убедитесь, что время от торакотомии к катетеризации Лангендорфа не превышает 120 секунд, чтобы избежать расширенного ишемии / реперфузии в миокарде.
- Заливать сердца с 10 мл Ca 2 + бесплатное решение 2 (4 мл / мин).
- Заливать сердце с раствором коллагеназы 3 по 8 мин (4 мл / мин).
- Передача сердце в предварительно нагретой 100-мм чашки Петри, содержащие низкие Ca 2 + Решение 4.
- Осторожно снимите аорты и других не-сердечной ткани с помощью ножниц и выбросьте его.
- Отдельные предсердий и желудочков и продолжить каждую камеру отдельно. Держите клетки погружены в раствор 4. Использование небольших объемах (менее 5 мл).
4. Далее Диссоциация кардиомиоцитов
- Мерцательная кардиомиоцитов:
- Чтобы индивидуализировать кардиомиоцитов предсердий передачи предсердия в отдельную подогретого 100-мм культуры блюдо и отделить ткани через осторожно потянув ее на части с тонким пинцетом. Убедитесь, почти полной диссоциации ткани.
- Используйте 1 мл пипетки с увеличенной огневой полировкой пластиковые пипетки приостановить клеток в 1 мл раствора 5 на 5 мин.
- Отделить клетки от космического мусора с помощью мобильного фильтр (200 мкм размер ячейки). <li> Добавить 5 мл раствора 5 к клеточной суспензии и центрифуги в течение 2 мин на 16 мкг при комнатной температуре.
- Следующие шаги выполняются под капот культуре клеток. Удалите супернатант и ресуспендируют осадок в 5 мл раствора 6.
- После осаждения под действием силы тяжести в течение 10 мин в 15 мл трубки, центрифугируют в течение 1 мин на 16 мкг при комнатной температуре. Удалить супернатант. Повторное приостановить клеток в зависимости от их количества в 1-5 мл раствора 6.
- Проанализируйте левого желудочка области интереса с тонким пинцетом в 5 мл раствора 4.
- Приостановить клетки, осторожно пипеткой, пока большая часть клеток разделены. Передача ячейки раствор после фильтрации (200 мкм размер ячейки) в 50 мл трубки, добавить объемом 25 мл.
- Центрифуга в течение 2 мин на 16 мкг при комнатной температуре.
- Следующие шаги выполняются под капот культуре клеток. Удалить супернатант, вновь приостановить гранул в 25 млРешение 6 и позволяют осаждения клеток в течение 10 мин.
- Подсчет клеток и удалить супернатант, добавить 25 - 50 мл раствора 6 на клетки.
5. Подготовка кардиомиоцитов для сотовых электрофизиологии, биохимической или, если исследования
- Для исследования электрофизиологии, держать миоцитов в растворе 6 в 50 мл трубки и препятствует седиментации.
- Для биохимических исследований, например, изображений кальция, пластины миоцитов на ламинине покрытием блюдо клеточной культуры (конечная концентрация 20 мкг / мл ламинина в PBS).
- Для иммунофлуоресцентного окрашивания готовить блюдо клеточной культуре пластины с отворотами стеклянной крышкой и покрытые ламинином решение (конечная концентрация 50 мкг / мл ламинина в PBS).
- Удалите раствор перед покрытием миоцитов. Пластина клеток и контролировать плотность клеток с помощью микроскопа.
- Пусть миоцитов придерживаться, чтобы покрыть скольжение в течение 1 часа при 37 ° С в 2% CO 2, удаления раствораи начать сразу со стандартным протоколом процедуры окрашивания.
- Инкубируйте с фиксатором, например, 4% PFA в PBS (рН 7,5) в течение 10 мин при комнатной температуре и последующей три стадии промывки PBS в течение 5 минут каждый.
- Для permeabilize клеток и подавлять неспецифическое связывание антитела инкубировать миоцитов с 10% сыворотки, 0,3% Triton, 0,2% BSA в PBS в течение 30 мин при комнатной температуре.
- Инкубируйте с первичными антителами в течение 1 часа при температуре 37 ° C и мыть, как описано выше.
- Инкубируйте с вторичными антителами в течение 1 часа при комнатной температуре. Для контрастирующая окраска ядер и α-актинина использования DAPI и флуорохромом сопряженных фаллоидином (Alexa Fluor 488, Invitrogen).
- После промывки, передает стеклянной крышкой скользит внимательно на силан лечение микроскоп слайды и вставлять флуоресценции клеток в монтажную среду.
6. Сотовый электрофизиологии
- Выполните Цельноклеточная патч-зажим записи на частотеshly изолированных предсердий и желудочков кардиомиоцитов при комнатной температуре.
- Передача здорового появляться в кардиомиоциты перфузии камере, заполненной определенного объема внеклеточной решение ванну. 117 мм NaCl, 4 мМ KCl, 1 мМ KH 2 PO 4, 4 мМ NaHCO 3, 1,7 мМ MgCl 2, 3 мМ CoCl 2, 10 HEPES мм, 10 мм глюкозы и 0,02 мМ тетродотоксин (ТТХ), (рН 7,4) . Используйте NaOH для доведения рН значение.
- Используйте соответствующее оборудование зажим патч (т.е. IX71 инвертированный микроскоп, Multiclamp 700B Усилители, приобретение Digidata 1440A системы и ПК с программным обеспечением pClamp10.3 (Molecular Devices)).
- Используйте патч пипетки с сопротивлением 3-5 МОм при заполнении внутриклеточного раствора, содержащего 130 мМ KCl, 2 мМ MgCl 2, 11 мМ HEPES, 11 мм EGTA, 5 мМ Na 2 АТФ, 0,4 мМ Na 2 GTP, 5 мМ Na 2 CP и 4,9 мМ CaCl 2 (рН 7,2). Используйте KOH для регулирования рН значение.
- Вызывание наружу K + ток-дю-Кольцо 4,5-секунды шаги напряжения для проверки потенциалов между -60 и +50 мВ в 10-мв шагом от проведения потенциал -70 мВ после 20-мс предымпульса до -40 мВ.
- Убедитесь, что утечка тока всегда <100 мкА.
- Для вскрытия различных K + ток использовать специальные ингибиторы, такие как 4-аминопиридина (4-AP; ICN Biomedicals, Irvine, CA, USA), Heteropodatoxin 2 (HpTx2; Alomone) или тетраэтиламмония (TEA; Sigma). Исходные растворы должны быть подготовлены в внеклеточный раствор ванны, и применяются непосредственно к ближайшим и клетку через микронаконечником после "базового" записей. Уравновешивание должно быть разрешено в течение 2-3 мин до "наркотик" записей.
- Для анализа нормализации амплитуды тока в отдельных клетках, чтобы размер ячейки (все-клеточной мембраны емкость). Анализ данных в автономном режиме с помощью программного обеспечения pClamp10.3 (Molecular Devices) или сопоставимые программного обеспечения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Выделение взрослых мышиных кардиомиоцитов из генетически модифицированных мышей для изучения функций генов конкретного интереса в пробирке стала мощным инструментом для дальнейшего понимания патофизиологии сердечной. Этот метод в настоящее время используется только небольшая, но растущее число основных научных лабораторий по всему миру. Тем не менее, изоляция взрослых кардиомиоцитов желудочков мышиной может быть сложно и должно быть сделано тщательно и многократно опытных руках. Рисунке 1 показана свежевыделенных образцом предсердий и желудочков кардиомиоцитов. Для желудочковых кардиомиоцитов, мы рекомендуем использовать только в форме стержня, поперечно-полосатые миоциты желудочка здоровый вид, не спонтанные сокращения. По сравнению с желудочковой миоцитов, предсердные миоциты короче и тоньше. Характерной страты и стержневые формы желудочковой кардиомиоцитов отсутствует у взрослых предсердий мышиных кардиомиоцитах. Выход для кардиомиоцитов желудочков изолированныхс нетронутым сердцем мыши 5х10 5 - 1х10 6. Для предсердных кардиомиоцитов это значительно меньше. В целом мы ожидаем, чтобы изолировать около 5 - 25.000 предсердий клеток из одной мыши сердце. После выделения кардиомиоцитов может быть подвергнута различным в пробирке методами, включая электрофизиологические записи (рис. 1). Мы рекомендуем использовать изолированные кардиомиоцитов в течение первых 6 часов после изоляции. Показано на рисунке 1 экземпляр Kv канала наружу записи (справа) из предсердий и желудочков кардиомиоцитов, вызванные различными шагами деполяризации цельноклеточной техники зажим патч. Характерную форму мышиного желудочков и предсердий взрослый канал Kv repolarizing токов можно увидеть в течение определенного времени курс (здесь 4 сек, рисунок 1). Обратите внимание, что амплитуда тока значительно ниже, в мышиных взрослых кардиомиоцитов предсердий по сравнению с желудочковой cardiomycytes.
| Решение | Содержание (в мм, если не указано иначе) |
| 1 | 117 NaCl, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 3 NaHCO, 1,7 MgCl 2, 10 Глюкоза |
| 2 | 117 NaCl, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 3 NaHCO, 1,7 MgCl 2, 10 Глюкоза + 229,5 мкм EGTA |
| 3 | 117 NaCl, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 3 NaHCO, 1,7 MgCl 2, 10 Глюкоза, CaCl 2 0,1 + 0,8 г / л коллагеназы типа 2 (300 U / L) * |
| 4 | 117 NaCl, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 3 NaHCO, 1,7 MgCl 2, 10 Глюкоза, CaCl 2 0,2 + 0,8 г / л коллагеназы типа 2 (300 ед / л) * + BSA (1 г / L) |
| 5 | 117 NaCl, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 4, 4 3 NaHCO, 1,7 MgCl 2, 10 Глюкоза, CaCl 2 0.5 + BSA (1 г / л) |
| 6 | 117 NaCl, 4 KCl, 10 HEPES, 1 KH 2 PO 4, 4 3 NaHCO, 1,7 MgCl 2, 10 Глюкоза, CaCl 2 1.0 + BSA (1 г / л) |
Таблица 1. Изоляция решений. Уравновешивают в течение 10 мин с Карбоген (95% O 2, 5% CO 2), при 37 ° С рН = 7,4 (NaOH). * Активность может зависеть от номера партии, так предыдущем тестировании активности коллагеназы рекомендуется.
Рисунок 1 Верхний левый. Примеры окрашенных кардиомиоцитов желудочка с DAPI (ядер, синий) и Alexa Мука 488 фаллоидином (α-актинина, зеленый) Верхний правый. Примерные следы целом зажим патч клеткиЗапись слева внизу:.. Примерные предсердий окрашенных кардиомиоцитов с DAPI (ядер, синий) и флуорохромом сопряженных фаллоидином (α-актинина, зеленый) Внизу справа: Примерные следы целого записи патч зажим клетки.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
С ростом развития генно-инженерных мышей штаммов для изучения функции сердца и сердечной патологии, связанные с удалением гена есть также возрастающий интерес в специализированных методов для изучения последствий конкретных делеции гена в лабораторных условиях. В нашей лаборатории мы исследуем роль семьи Kv канала вспомогательные подразделения по сердечной реполяризации. KCNE гены составляют семьи из 5 генов (KCNE1-5), которые играют важную роль в человеческой желудочков и предсердий реполяризации 11, 15. KCNEs являются одним трансмембранного домена Kv канала вспомогательные подразделения, которые не могут передать любой калиевые токи сами по себе, но они могут образовывать комплексы с подразделениями Kv альфа-канал и модулируют их функциональных свойств, таких как стробирования, проводимости, фармакологии и торговли внутри клетки значительно. Мутации и полиморфизмы в общей KCNE2 например, связанных с наследственными и приобретенными формами OF синдром удлиненного QT (LQTS) 1, 16.
Pioneer работа в изоляции и электрофизиологических характеристик различных каналов Kv альфа-субъединицы и их вклад в крысу, но и мышиный желудочков и предсердий реполяризации было сделано группой д-ра Nerbonne в Вашингтонском университете в Сент-Луисе в 1990 году 3, 5, 7. Тем не менее, значительно меньше известно о вкладе Kv канала подразделений вспомогательного чтобы предсердий и желудочков реполяризации в миокарде грызунов. KCNEs в основном были изучены в гетерологичных системы экспрессии, такие как клетки СНО и Xenopus Хепориз ооцитов. Используя эти методы подразделений KCNE было показано, что весьма беспорядочный в формировании гетеромерных Kv канала комплексы выявления целого ряда различных каналов Kv альфа-субъединицы в качестве потенциальных партнеров для KCNEs 10. Тем не менее, мы не можем быть уверены, что эти конкретные гетеромерных Kv канала дополненияXES также встречаются в родном кардиомиоцитов или если наблюдаемый гетеромерных KCNE Kv канала партнерства альфа-субъединицы являются гетерологичных выражение артефакты 1. Поэтому мы приняли техника изоляция и Kv канала записи протоколов из Nerbonne лаборатории и изменили их, как указано в протоколе этой статьи, чтобы анализировать различные каналы Kv в мышиных реполяризации, которые находятся под контролем KCNE генов. Используя этот подход, мы недавно обнаружили, что Kv канала вспомогательные подразделения KCNE2 управляет двумя различными токами кВ в мышиной миокарда желудочков (I Kslow, 1 а я, е). При применении специфических ингибиторов для различных калиевых каналов мы смогли показать, что удаление мышиного гена KCNE2 приводит к значительному сокращению как Kv1.5 и Kv4.2 токи 14. Регулирование Kv1.5 по KCNE2 ранее не было известно, WheReas регулирования Kv4.2 по KCNE2 уже была продемонстрирована в пробирке гетерологичных исследования выражении 20.
Фибрилляция предсердий (ФП) является наиболее частой аритмия в клинической практике и связано с высокой заболеваемостью и смертностью 4. Мутации в самых разных KCNEs Недавно были связаны с ФП у людей. Недавно два несинонимичные мутации были обнаружены в KCNE1 у пациентов с ФП, которые не присутствовали в контрольной группе (Olesen и соавт., 2012). Механистически, гетерологичный исследования выражения определены избыточной функцией эффект в KCNQ1 токов вероятно, основной механизм. Кроме того, недавно было показано, что KCNE1 - / - мышей страдают от спонтанных эпизодов пароксизмальной ФП 17. В исследовании оценки 28 китайских семей не связанных с одинокими AF, Yang и соавт. определены мутации в KCNE2,в результате которой аргинин-на-цистеин замещения (R27C). Функциональный анализ мутантных канала в гетерологичных исследования показали, выражение избыточной функцией влияния на KCNQ1 каналов (I Ks) 18. Тем не менее, KCNE2 также могут образовывать комплексы с рядом других Kv канала α-субъединиц в том числе Kv1.5, который также был вовлечен в AF. Недавно мы показали, что KCNE2 может модулировать Kv1.5 токов в мышиной желудочка приводит к продлению желудочка APD у мышей 15. Таким образом, нарушение предсердной Kv1.5 токов дисфункции KCNE2 также может представлять основные аритмогенной механизм автофокусировки в нашей KCNE2 - / - мышей и / или у пациентов, укрывательство мутации в KCNE2 страдающего от AF. Мутации в KCNE3 были также недавно выявленных у пациента с семейным AF 8. Электрофизиологические записи показал, приращенияased деятельности Kv4.3/KCNE3 и Kv11.1/KCNE3 генерируются токи мутация, тем самым присвоении восприимчивость носителей мутации к более быстрому сердечной реполяризации потенциала действия и, следовательно, уязвимость к Реентрантная всплесков в предсердиях. KCNE3 V17M миссенс мутаций, однако не влияет KCNE3/KCNQ1 токи, несмотря на то, что KCNE3 формы функциональных комплексов с KCNQ1 в миокарде. Кроме того, KCNE3 Недавно было показано, быть до регулируется в человеческой популяции с клапанной AF поддержку гипотезы, что KCNE3 играет роль не только в семейной AF, но и клапанные AF 6. В последнее время одиночных нуклеотидных полиморфизма (G / T) был выявлен в KCNE4 в результате глутаминовой кислоты (Glu, E) / аспарагиновой кислоты (Asp, D) замещения в позиции 145 из KCNE4 пептида 19. Последующие функциональный анализ этого полиморфизма показали, что полиморфизм KCNE4оказывает эффект «усиления функции" на KCNQ1 каналов 9. Опять же, эти исследования были проведены в гетерологичных системы экспрессии и экспериментальные данные из родного кардиомиоцитов по-прежнему не хватает. Совсем недавно, изолированные несемейной случае АФ с миссенс (L65F) мутация была обнаружена в датской когорте из 158 пациентов с ФП 12. Кроме того, полиморфизм в KCNE5 (C97T) был определен в пределах одной популяции исследования, которое было связано с более высоким риском развития AF 13. Взаимодействие как мутант β-субъединицы (KCNE2 и KCNE5) с каналом KCNQ1 производства избыточной функцией эффекта с увеличением тока Икс. KCNQ1 α-субъединицы канала IKS можно связать с любым из пяти аксессуаров β-субъединиц (KCNE1-5). Поэтому KCNQ1 кажется вероятным кандидатом α-субъединицы при поиске партнера для молекулярного субстрата яп патогенезе KCNE связанных AF. Однако, учитывая выраженную распущенность из KCNE подразделений других молекулярных мишеней возможно, и поэтому мы намерены специально исследовать эти возможные KCNE / Kv альфа-субъединицы взаимодействия. Исследования, проведенные в нашей лаборатории, следовательно, также в настоящее время направлены на выяснение механизмов, лежащих KCNE связанных AF используя технику, которую мы расскажем в этой статье - выделение мышиных предсердных кардиомиоцитов и последующие в пробирке электрофизиологических записей с применением специфических ингибиторов различных подразделений канала Kv альфа-и биохимических анализов родной кардиомиоциты мышей KCNEx нокаутом.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Эта работа финансировалась за счет грантов от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), Фриц Тиссен-и-Stiftung Charité / MDC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tetrodotoxin | Alomone | ||
| 4-aminopyridine | ICN Biomedicals | ||
| Heteropodatoxin 2 | Alomone | ||
| Tetraethylammonium | Sigma Chemicals | ||
| Collagenase Type 2 | Worthington |
References
- Abbott, G. W., Goldstein, S. A., Sesti, F. Do all voltage-gated potassium channels use MiRPs? Circ. Res. 88, 981-983 (2001).
- Abbott, G. W., Sesti, F., Splawski, I., Buck, M. E., Lehmann, M. H., Timothy, K. W., Keating, M. T., Goldstein, S. A. MiRP1 forms IKr potassium channels with HERG and is associated with cardiac arrhythmia. Cell. 97, 175-187 (1999).
- Barry, D. M., Trimmer, J. S., Merlie, J. P., Nerbonne, J. M. Differential expression of voltage-gated K+ channel subunits in adult rat heart. Relation to functional K+ channels? Circ. Res. 77, 361-369 (1995).
- Benjamin, E. J., Wolf, P. A., D'Agostino, R. B., Silbershatz, H., Kannel, W. B., Levy, D. Impact of atrial fibrillation on the risk of death: the Framingham Heart Study. Circulation. 98, 946-952 (1998).
- Bou-Abboud, E., Nerbonne, J. M. Molecular correlates of the calcium-independent, depolarization-activated K+ currents in rat atrial myocytes. J. Physiol. 517 (Pt 2), 407-420 (1999).
- Gaborit, N., Steenman, M., Lamirault, G., Le, M. N., Le, B. S., Lande, G., Leger, J., Charpentier, F., Christ, T., Dobrev, D., Escande, D., Nattel, S., Demolombe, S. Human atrial ion channel and transporter subunit gene-expression remodeling associated with valvular heart disease and atrial fibrillation. Circulation. 112, 471-481 (2005).
- Guo, W., Xu, H., London, B., Nerbonne, J. M. Molecular basis of transient outward K+ current diversity in mouse ventricular myocytes. J. Physiol. 521 (Pt 3), 587-599 (1999).
- Lundby, A., Ravn, L. S., Svendsen, J. H., Hauns, S., Olesen, S. P., Schmitt, N. KCNE3 mutation V17M identified in a patient with lone atrial fibrillation. Cell Physiol. Biochem. 21, 47-54 (2008).
- Ma, K. J., Li, N., Teng, S. Y., Zhang, Y. H., Sun, Q., Gu, D. F., Pu, J. L. Modulation of KCNQ1 current by atrial fibrillation-associated KCNE4 (145E/D) gene polymorphism. Chin Med. J. (Engl.). 120, 150-154 (2007).
- McCrossan, Z. A., Abbott, G. W.
- Pongs, O., Schwarz, J. R. Ancillary subunits associated with voltage-dependent K+ channels. Physiol. Rev. 90, 755-796 (2010).
- Ravn, L. S., Aizawa, Y., Pollevick, G. D., Hofman-Bang, J., Cordeiro, J. M., Dixen, U., Jensen, G., Wu, Y., Burashnikov, E., Haunso, S., Guerchicoff, A., Hu, D., Svendsen, J. H., Christiansen, M., Antzelevitch, C. Gain of function in IKs secondary to a mutation in KCNE5 associated with atrial fibrillation. Heart Rhythm. 5, 427-435 (2008).
- Ravn, L. S., Hofman-Bang, J., Dixen, U., Larsen, S. O., Jensen, G., Haunso, S., Svendsen, J. H., Christiansen, M. Relation of 97T polymorphism in KCNE5 to risk of atrial fibrillation. Am. J. Cardiol. 96, 405-407 (2005).
- Roepke, T. K., Abbott, G. W. Pharmacogenetics and cardiac ion channels. Vascul. Pharmacol. 44, 90-106 (2006).
- Roepke, T. K., Kontogeorgis, A., Ovanez, C., Xu, X., Young, J. B., Purtell, K., Goldstein, P. A., Christini, D. J., Peters, N. S., Akar, F. G., Gutstein, D. E., Lerner, D. J., Abbott, G. W. Targeted deletion of kcne2 impairs ventricular repolarization via disruption of I(K,slow1) and I(to,f). FASEB J. 22, 3648-3660 (2008).
- Sesti, F., Abbott, G. W., Wei, J., Murray, K. T., Saksena, S., Schwartz, P. J., Priori, S. G., Roden, D. M., George, A. L., Goldstein, S. A. A common polymorphism associated with antibiotic-induced cardiac arrhythmia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 10613-10618 (2000).
- Temple, J., Frias, P., Rottman, J., Yang, T., Wu, Y., Verheijck, E. E., Zhang, W., Siprachanh, C., Kanki, H., Atkinson, J. B., King, P., Anderson, M. E., Kupershmidt, S., Roden, D. M.
- Yang, Y., Xia, M., Jin, Q., Bendahhou, S., Shi, J., Chen, Y., Liang, B., Lin, J., Liu, Y., Liu, B., et al. Identification of a KCNE2 gain-of-function mutation in patients with familial atrial fibrillation. Am. J. Hum. Genet. 75, 899-905 (2004).
- Zeng, Z. Y., Pu, J. L., Tan, C., Teng, S. Y., Chen, J. H., Su, S. Y., Zhou, X. Y., Zhang, S., Li, Y. S., Wang, F. Z., et al. [The association of single nucleotide polymorphism of slow delayed rectifier K+ channel genes with atrial fibrillation in Han nationality Chinese]. Zhonghua Xin. Xue. Guan. Bing. Za Zhi. 33, 987-991 (2005).
- Zhang, M., Jiang, M., Tseng, G. N. minK-related peptide 1 associates with Kv4.2 and modulates its gating function: potential role as beta subunit of cardiac transient outward channel? Circ. Circ. Res. 88, 1012-1019 (2001).
