Summary
ऊतक इंजीनियर हृदय वाल्व में neotissue गठन और एक प्रकार का रोग विकास अंतर्निहित सेलुलर और आणविक तंत्र को समझने के लिए, heterotopic हृदय वाल्व प्रत्यारोपण के एक murine मॉडल विकसित किया गया था. एक फेफड़े के हृदय वाल्व heterotopic हृदय प्रत्यारोपण तकनीक का उपयोग कर प्राप्तकर्ता को प्रत्यारोपित किया गया था.
Abstract
ऊतक इंजीनियर हृदय वाल्व, विशेष रूप से decellularized वाल्व, मिश्रित परिणाम के साथ पुनर्निर्माण सर्जरी के नैदानिक प्रयोग में गति हासिल करने के लिए शुरू कर रहे हैं. हालांकि, neotissue विकास, वाल्व और अधिक मोटा होना, और एक प्रकार का रोग के विकास के सेलुलर और आणविक तंत्र बड़े पैमाने पर शोध नहीं कर रहे हैं. उपरोक्त सवालों का जवाब है, हम एक murine heterotopic हृदय वाल्व प्रत्यारोपण मॉडल विकसित किया है. एक हृदय वाल्व एक वाल्व दाता माउस से काटा और एक दिल दाता माउस में प्रत्यारोपित किया गया था. एक नया वाल्व के साथ दिल एक प्राप्तकर्ता माउस को heterotopically प्रत्यारोपित किया गया था. प्रतिरोपित दिल प्राप्तकर्ता के दिल की धड़कन की स्वतंत्र अपने स्वयं के दिल की धड़कन, पता चला है. रक्त का प्रवाह एक स्पंदित लहर डॉपलर के साथ एक उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड प्रणाली का उपयोग मात्रा था. प्रत्यारोपित फेफड़े के वाल्व के माध्यम से प्रवाह कम से कम regurgitation के साथ प्रवाह आगे दिखाया और पीक फ्लो 100 मिमी / सेकंड के करीब था. हृदय वाल्व प्रत्यारोपण की इस murine मॉडल highl हैबहुमुखी वाई, तो यह संशोधित और विभिन्न hemodynamic वातावरण प्रदान करने के लिए और / या एक ऊतक इंजीनियर हृदय वाल्व में neotissue विकास का अध्ययन करने के लिए विभिन्न ट्रांसजेनिक चूहों के साथ प्रयोग किया जा सकता है अनुकूलित किया जा सकता.
Introduction
जन्मजात हृदय दोष पश्चिमी दुनिया 1,2 में शिशु मृत्यु दर के प्रमुख कारणों में से एक हैं. उनमें से, फेफड़े से वाल्व स्टेनोसिस और द्विकपर्दी महाधमनी वाल्व दोष एक बार होने वाली प्रपत्र 3 रहे हैं. हार्ट वाल्व रिप्लेसमेंट सर्जरी सर्जरी की दिनचर्या पसंद है; हालांकि, एक प्रकार का रोग और कड़ा हो जाना हृदय वाल्व की, और anticoagulants पर आजीवन निर्भरता सहित जटिलताओं पुरानी खराब स्वास्थ्य और मृत्यु 4-7 की एक महत्वपूर्ण स्रोत हैं. इसके अलावा, विकास की संभावनाओं की कमी के आगे उन युवा रोगियों 4,8,9 की मृत्यु दर बढ़ जाती है, जो संशोधन सर्जरी की आवश्यकता है.
एक biodegradable कृत्रिम हृदय वाल्व 8 पर विकास क्षमता, Shinoka एट अल. वरीयता प्राप्त ऑटोलॉगस कोशिकाओं के साथ एक कार्यात्मक प्रतिस्थापन हृदय वाल्व विकसित करने की कोशिश में. विकास potenti के साथ संरचना की तरह एक देशी हृदय वाल्व को बदल कृत्रिम वाल्वअल. प्रारंभिक बड़े जानवरों के अध्ययन के लिए एक कार्यात्मक हृदय वाल्व 10 बनाने के लिए इस पद्धति का उपयोग करने की व्यवहार्यता का प्रदर्शन किया. हालांकि, लंबी अवधि के आरोपण पढ़ाई की वजह से हृदय वाल्व का संकुचन में जिसके परिणामस्वरूप वाल्व neotissue की प्रगतिशील उमड़ना को गरीब स्थायित्व का प्रदर्शन किया. Sodian से काम एट अल. Shinoka पद्धति का इस्तेमाल किया, लेकिन अंततः एक अधिक शारीरिक प्रोफाइल 9,11,12 निर्माण ऊतक इंजीनियर वाल्व के biomechanical गुणों दे दी है, जो एक biodegradable elastomer, साथ पीजीए मैट्रिक्स बदल दिया. Vivo अध्ययन में, आरोपण की सफलता के बावजूद, एक मिला हुआ endothelial सेल अस्तर इस पाड़ 12 की दीर्घकालीन सफलता को सीमित कर सकता है जो गठन नहीं किया गया था.
तर्क से एक बेहतर दूसरी पीढ़ी के कृत्रिम हृदय वाल्व डिजाइन करने के लिए, हृदय वाल्व प्रत्यारोपण के एक murine मॉडल सेलुलर और आणविक तंत्र underlyin जांच करने के लिए बनाया गया थाजी neotissue गठन, वाल्व और अधिक मोटा होना, और एक प्रकार का रोग विकास. Murine मॉडल अन्य प्रजातियों 7 में आसानी से उपलब्ध नहीं हैं, जो ट्रांसजेनिक्स सहित आणविक अभिकर्मकों की एक विशाल सरणी, प्रदान करते हैं. इस हृदय वाल्व प्रत्यारोपण मॉडल में, एक पूर्व vivo syngeneic फेफड़े के हृदय वाल्व रिप्लेसमेंट पहली बार प्रदर्शन किया गया था; और फिर प्रत्यारोपित हृदय वाल्व के साथ दिल एक microsurgical तकनीक का उपयोग कर एक syngeneic मेजबान में heterotopically प्रत्यारोपित किया गया था. इस मॉडल कार्डियोपल्मोनरी बाईपास के लिए आवश्यकता के बिना हृदय वाल्व बदलने में सक्षम बनाता है.
इस पत्र में, एक हृदय वाल्व फसल का एक विस्तृत विवरण, दाता दिल तैयारी, हृदय वाल्व प्रत्यारोपण, और heterotopic हृदय प्रत्यारोपण में वर्णित है. परिणाम प्राप्तकर्ता दिल की धड़कन के स्वतंत्र था जो दाता दिल से एक निरंतर दिल की धड़कन दिखाया. प्रत्यारोपित फेफड़े के वाल्व के माध्यम से रक्त के प्रवाह को एक स्पंदित लहर करते के साथ एक उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड प्रणाली का उपयोग कर मापा गया थाppler.
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Protocol
नोट: सभी पशु प्रक्रियाओं राष्ट्रव्यापी बच्चों के अस्पताल संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.
एक हार्ट वाल्व दाता माउस से 1. फेफड़े हार्ट वाल्व हार्वेस्ट
- सर्जरी से पहले सभी सर्जिकल उपकरणों आटोक्लेव: ठीक कैंची, 3x सूक्ष्म संदंश, 2x सूक्ष्म संवहनी clamps, 1x दबाना लागू करने संदंश, 1x सूक्ष्म सुई धारक, 1x वसंत कैंची, 1x प्रत्याकर्षक 1x.
- एक 6-8 सप्ताह पुराने महिला C57BL 6 / माउस एक फेफड़े के हृदय वाल्व दाता के रूप में प्रयोग किया जाता है. अपने पिंजरे से माउस निकालें और यह तौलना, तो एक ketamine / xylazine कॉकटेल (Ketamine, 200 मिलीग्राम / किग्रा और xylazine, 20 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी) की अधिक मात्रा के साथ euthanize.
- छाती क्षेत्र क्लिप और एक पैड पर एक पृष्ठीय लेटना स्थिति में माउस जगह. फिर thoracotomy बनाते हैं. , दिल बेनकाब सही आलिंद पर एक छोटे से कट कर, और बर्फ के ठंडे नमक के साथ बाएं वेंट्रिकल छिड़कना.
- दो टूक आरोही एक से फेफड़े के धमनी (पीए) काटनाOrta. फेफड़े के धमनी की 2 मिमी कफ के साथ फेफड़े के वाल्व (पीवी) काट दिया. दिल के शेष के निपटान के.
- ठंड हेपरिन और खारा समाधान (100 इकाइयों / एमएल) में पी.वी. स्टोर. नोट: पी.वी. दाता दिल के प्रत्यारोपण से पहले दो घंटे के लिए समाधान में रखा जा सकता है.
2. दाता दिल तैयारी
- एक 6-8 सप्ताह पुराने महिला C57BL 6 / माउस एक दिल दाता के रूप में प्रयोग किया जाता है. अपने पिंजरे से माउस निकालें और यह तौलना, तो एक ketamine / xylazine कॉकटेल (ketamine, 200 मिलीग्राम / किग्रा और xylazine, 20 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी) की अधिक मात्रा के साथ euthanize. यह एक टर्मिनल प्रक्रिया है.
- छाती क्षेत्र क्लिप और एक पैड पर एक पृष्ठीय लेटना स्थिति में माउस जगह. फिर thoracotomy बनाते हैं. दो टूक दिल, अवर रग Cava (IVC), बेहतर रग Cava (एसवीसी), आरोही महाधमनी, पीए, और फेफड़े नस अलग. बर्फ ठंड बाँझ खारा साथ IVC छिड़कना.
- IVC, एसवीसी, और फिर से बेहतर कटौती 6-0 रेशम सीवन के साथ फेफड़े नस ligateसंयुक्ताक्षर.
- 2 मिमी कफ के साथ महाधमनी और पीए काटें.
- पी.वी. काट और इसे के निपटान के.
एक दाता दिल पर 3. हार्ट वाल्व प्रत्यारोपण
- इसके तत्काल बाद 2.5 कदम के बाद, दाता दिल में 1.5 कदम से हृदय वाल्व जगह और हृदय वाल्व पूरबी.
- पतला सुइयों पर 10-0 monofilament टांके का उपयोग वाल्व के सही पक्ष पर एक सिलाई के साथ पी.वी. सुरक्षित और पी.वी. की दूसरी तरफ से 5-6 stiches साथ लगातार सिवनी लगते हैं.
- सामने की ओर पूरा करने के बाद, क्षैतिज दिल बारी बारी से और दाता दिल पर पी.वी. के पीछे की ओर सिवनी लगते हैं.
- एक ठंडा बाँझ हेपरिन / खारा समाधान में दिल स्टोर. नोट: दाता दिल प्राप्तकर्ता माउस को आरोपण से पहले दो घंटे के लिए समाधान में रखा जा सकता है.
एक प्राप्तकर्ता माउस पर 4. Heterotopic हार्ट ट्रांसप्लांटेशन
- एक 6-8 सप्ताह पुराने महिला C57BL 6 / माउस एक Reci के रूप में इस्तेमाल किया गया थाpient. अपने पिंजरे से माउस निकालें और फिर ketamine / xylazine कॉकटेल (ketamine, 100 मिलीग्राम / किग्रा और xylazine 10 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ anesthetized, यह तौलना. Ketoprofen (5 मिलीग्राम / किग्रा) preanesthesia एनाल्जेसिक के रूप में प्रयोग किया जाता है.
- बन्द रखो पूंछ से बेहोश करने की क्रिया के स्तर की जाँच के बाद, पेट और छाती के बाल क्लिप. बाँझ नेत्र मरहम के साथ आंखों चिकना, और एक पैड पर एक पृष्ठीय लेटना स्थिति में माउस जगह. Betadine और शराब पैड के साथ पेट कीटाणुरहित. फिर एक बाँझ कपड़ा के साथ माउस को कवर किया और केवल चीरा क्षेत्र का पर्दाफाश.
- Suprapubic क्षेत्र को xyphoid नीचे से एक midline laparotomy चीरा, और एक स्वयं को बनाए रखना retractor डालें. खारा सिक्त धुंध में आंतों लपेटें. दो टूक अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी और रग को परिभाषित.
- रक्त परिसंचरण को नियंत्रित करने के लिए महाधमनी और IVC के आसपास proximally और distally दो 6-0 रेशम टांके रखें.
- उदर महाधमनी के दाईं ओर दाता दिल प्लेस और बाँझ गऊ के साथ कवरज़ी. नमक के साथ यह नमी मिलेगी.
- एक 30 जी सुई का उपयोग उदर महाधमनी में एक महाधमनीछेदन बनाओ और दाता महाधमनी के आकार को कैंची से खोलने का विस्तार.
- पतला सुइयों पर बाँझ 10-0 monofilament टांके का उपयोग कर एक पक्ष अंत करने के सम्मिलन प्रदर्शन करना. उदर महाधमनी में खोलने के समीपस्थ अंत पर एक सिलाई के साथ दाता महाधमनी सुरक्षित और उदर महाधमनी के बाहर का अंत से 4-5 stiches साथ लगातार सिवनी लगते हैं.
- बाईं ओर करने के लिए दिल फ्लिप खारा संचार धुंध के साथ कवर, और उदर महाधमनी के बाहर का अंत से 4-5 stiches साथ लगातार सिवनी लगते हैं.
- एक 30 जी सुई का उपयोग IVC में एक venotomy बनाओ और दाता फेफड़े के धमनी के आकार को खोलने का विस्तार.
- पतला सुइयों पर बाँझ 10-0 monofilament टांके का उपयोग पक्ष सम्मिलन के लिए एक अंत प्रदर्शन करना. IVC में खोलने के समीपस्थ अंत पर एक सिलाई के साथ दाता पीए सुरक्षित और से 4-5 stiches साथ लगातार सीवन शुरूअवर रग Cava के बाहर का अंत. महाधमनी रास्ते में है, क्योंकि इस समय, सुनिश्चित करें कि दाता के पीए की बाईं दीवार के suturing IVC के अंदर पर है.
- हेपरिन और खारा समाधान (100 इकाइयों / एमएल) के साथ IVC लुमेन फ्लश. बाहर का अंत करने के लिए उन्हें लगातार suturing द्वारा दाता पीए और प्राप्तकर्ता IVC की सही दीवार को बंद करें.
- बाहर का संयुक्ताक्षर निकालें और एक सामयिक absorbable बाँझ hemostat एजेंट लगाने से नकसीर नियंत्रित करते हैं. नकसीर पूरी तरह से बंद हो जाता है, समीपस्थ सीवन को हटाने और नकसीर उसी तरह नियंत्रित करते हैं.
- आंतों लौटें और एक 6-0 काली पॉलियामाइड monofilament सीवन का उपयोग कर दो परतों में पेट की मांसलता और त्वचा को बंद करें.
- 0.5 मिलीलीटर खारा subcutaneously इंजेक्षन और माउस को पूरी तरह से मोबाइल है जब तक एक वार्मिंग पैड पर एक वसूली पिंजरे में माउस जगह. वसूली करने पर, कागज बिस्तर के साथ एक नए पिंजरे के लिए माउस वापसी. 48 घंटे के लिए दर्द की दवा (ब्रुफेन 30 मिलीग्राम / किग्रा, पीने के पानी) दीजिए. करनापूरी तरह से ठीक है जब तक अन्य जानवरों की कंपनी के लिए सर्जरी आया है कि एक जानवर वापस नहीं.
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Representative Results
चित्रा 1 heterotopic हृदय प्रत्यारोपण का उपयोग दिल के वाल्व प्रत्यारोपण मॉडल की schematics दिखाता है. हृदय वाल्व एक दाता दिल से काटा और एक दूसरे दाता माउस से एक दिल पर प्रत्यारोपित किया गया था. तो फिर नए हृदय वाल्व के साथ दिल एक प्राप्तकर्ता माउस के पेट को प्रत्यारोपित किया गया था. 2 सही हृदय प्रत्यारोपण (बी) के बाद, पेट अंतरिक्ष (ए) पर प्रत्यारोपित दिल का एक उदाहरण से पता चलता है, और प्रत्यारोपण के बाद 5 मिनट चित्रा. महाधमनी और IVC के दोनों किनारों पर टांके हटाने पर, हृदय बाद 1-2 मिनट हरा करने के लिए शुरू होता है और अधिक रक्त परिसंचरण के साथ pinker हो जाता है. सही आलिंद अधिक (बी) से (ग) में फैली हुई है कि ध्यान दें. दिल धीरे - धीरे मजबूत धड़कता है और 24 घंटे के बाद स्थिर है.
प्रत्यारोपित फेफड़े के वाल्व के माध्यम से रक्त के प्रवाह का उपयोग कर 10 दिनों के आरोपण के बाद percutaneously मापा गया थास्पंदित लहर डॉपलर मोड (चित्रा 3) के साथ एक उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड प्रणाली. महाधमनी के स्थानों, सही वेंट्रिकल (आर.वी.), फेफड़े के वाल्व (पीवी) प्रत्यारोपित, और बी मोड में फेफड़े के धमनी (पीए) चित्रा 3 (ए) में दिखाया गया था. पीले नमूना मात्रा ओवरले प्रत्यारोपित पी.वी. पर स्थित है. चित्रा 3 (ख) शारीरिक रचना और नमूना मात्रा ओवरले के स्थान का एक चित्र से पता चलता है. चित्रा 3 (सी) में दिखाया गया है, दाता दिल क्यूआर लहर लय में पता लगाया है और प्राप्तकर्ता के दिल लहर के स्वतंत्र था. प्रत्यारोपित पी.वी. पर मापा सिस्टोलिक और डायस्टोलिक रक्त की मात्रा दाता दिल लहर का मिलान नहीं हुआ. शिखर वेग 100 मिमी / सेकंड के आसपास थी.
चित्रा 1.60, हृदय वाल्व प्रत्यारोपण के योजनाबद्ध एक फेफड़े के हृदय वाल्व में पहली बार एक दाता माउस से काटा और एक दूसरे दाता माउस से एक दिल में प्रत्यारोपित किया गया था.. तो फिर नए वाल्व के साथ दिल एक प्राप्तकर्ता माउस में heterotopically प्रत्यारोपित किया गया था.
चित्रा 2. प्रत्यारोपित दिल. ए) नई हृदय वाल्व के साथ एक दिल की एक आरेख सही आरोपण के बाद पेट की अंतरिक्ष (बी) को प्रत्यारोपित किया, और (सी) के 5 मिनट के आरोपण के बाद.
मैं में चित्रा 3. रक्त प्रवाह मापमहाधमनी के स्थानों, सही वेंट्रिकल (आर.वी.), प्रत्यारोपित फेफड़े के वाल्व (पीवी) और फेफड़े के धमनी (पीए). बी) नमूना मात्रा ओवरले की शारीरिक रचना और स्थान का एक चित्र का संकेत mplanted फेफड़े के वाल्व. ए) बी मोड छवि. ईसीजी की लहर के साथ प्रत्यारोपित पी.वी. पर सी) वेग माप.
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Discussion
इस प्रक्रिया की मृत्यु दर ज्यादातर प्राप्तकर्ता उदर महाधमनी के दाता महाधमनी पर पी.वी. प्रत्यारोपण साइट और सम्मिलन में रक्तस्राव की वजह से हुई है, जो 20% के करीब है. अधिकांश मामलों में, मृत्यु दर में काफी 48 घंटा बाद सर्जरी कम हो जाती है. अस्तित्व चूहों प्रत्यारोपित पी.वी. के माध्यम से मजबूत दिल धड़क रहा है और रक्त के प्रवाह को दिखाया. पूरी प्रक्रिया एक अनुभवी माइक्रो सर्जन के लिए चार घंटे लगते हैं. यह तकनीक मास्टर करने के लिए मोटे तौर पर 250 चूहों ले जाएगा. heterotopic हृदय प्रत्यारोपण दाता दिल को पी.वी. आरोपण की तुलना में आगे अपेक्षाकृत सीधे है. एक सफल एचवी प्रत्यारोपण के लिए सबसे महत्वपूर्ण कदमों में से एक एक दाता माउस से पी.वी. संरचना की फसल है. पी.वी. संरचना वाल्व नीचे 1-2 मिमी के आसपास transected किया जाना चाहिए. शेष ऊतक बहुत छोटा है, तो सम्मिलन चुनौतीपूर्ण होगा. पी.वी. नीचे ऊतक यानी (बहुत लंबा है. पीए चढ़ना की तुलना में बहुत देर हो जाएगी) आरोपण के बाद महाधमनी आईएनजी, प्रत्यारोपित पीए मोड़ या गुत्थी सकता है. एक और महत्वपूर्ण कदम प्रत्यारोपित पीए और प्राप्तकर्ता IVC के बीच सम्मिलन है. IVC बहुत पतली है, यह suturing दौरान फाड़ करने के लिए बेहद आसान है.
इस मॉडल में, महाधमनी रक्त, महाधमनी के माध्यम से आता है कोरोनरी धमनियों के माध्यम से बहती है, तो दाता आरए को कोरोनरी साइनस के माध्यम से बाहर निकलता है. तो प्रत्यारोपित पी.वी. के माध्यम से पारित करने के लिए रक्त की मात्रा TEHV अध्ययन में इस मॉडल की सबसे महत्वपूर्ण सीमा है जो आकलन में कुल रक्त की मात्रा का 5% है. पी.वी. हालांकि रक्त के प्रवाह को बढ़ाने के लिए, तीन अतिरिक्त मॉडल बनाए गए थे. सबसे पहले, एक तिहाई सम्मिलन प्राप्तकर्ता IVC को दाता आर.वी. से बनाया गया था. तीसरे सम्मिलन कुल रक्त की मात्रा का 50% से 10% द्वारा रक्त के प्रवाह को बढ़ा सकते हैं. दूसरा, आगे तीसरे सम्मिलन रखने के बाद, IVC तीसरे सम्मिलन के लिए समीपस्थ ligated गया था, रक्त के प्रवाह को बढ़ाने के लिए. इस विधि के माध्यम से रक्त के प्रवाह का 50% बीमाप्रत्यारोपित पी.वी.. तीसरा, प्रत्यारोपित पी.वी. के माध्यम से प्रवाह बढ़ाने के लिए और अधिक शारीरिक परिसंचरण बनाए रखने के लिए, दिल फेफड़ों के साथ प्रत्यारोपित किया गया था. इस विधि कुल रक्त प्रवाह का 50% प्रवाह को बढ़ाया जा सकता है और अधिक महत्वपूर्ण बात, बाएं वेंट्रिकल और बाएं आलिंद उनके परिसंचरण बनाए रखें. ये विभिन्न शारीरिक प्रवाह मॉडल शारीरिक प्रवाह की स्थिति में अंतर एक प्रत्यारोपित हृदय वाल्व में neotissue और एक प्रकार का रोग के विकास को प्रभावित कैसे अध्ययन करने के लिए सक्षम.
हाल ही में, हम इस पत्र में वर्णित तकनीक का उपयोग सेल बोने के बिना प्रत्यारोपण decellularized एचवी के लिए एक पायलट अध्ययन किया. प्रत्यारोपित पी.वी., नियंत्रण के रूप में predecellularized प्रत्यारोपित पी.वी. समान रक्त प्रवाह विशेषताओं दिखाया. भविष्य में, कोशिकाओं के विभिन्न प्रकार प्रत्यारोपित एचवी की neotissue गठन और एक प्रकार का रोग के विकास का अध्ययन करने के लिए वरीयता प्राप्त किया जाएगा. इसके अलावा, इस तरह हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) चूहों या एक समझौता ज्ञापन के रूप में, ट्रांसजेनिक चूहों का उपयोगएचवी रोग के एसई मॉडल, neotissue गठन की प्रक्रिया को और अधिक तर्क से बनाया गया, दूसरी पीढ़ी के ऊतक इंजीनियर हृदय वाल्व की विकास सहायता करेगा जो immunohistochemistry का उपयोग decellularized या रोगग्रस्त हृदय वाल्व, populating कोशिकाओं के स्रोत का अध्ययन करके mechanistically का अध्ययन किया जा सकता है. विभिन्न शारीरिक प्रवाह की स्थिति, ट्रांसजेनिक चूहों, decellularized पी.वी. implantations, और इन तीनों का संयोजन संभव उपयोग करने की संभावना बहुमुखी प्रतिभा और इस एचवी प्रत्यारोपण मॉडल के संभावित महत्वपूर्ण preclinical उपयोगिता दिखा.
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Disclosures
हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
इस काम CKB लिए एनआईएच (RO1 HL098228) से अनुदान द्वारा, भाग में, का समर्थन किया था.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Microscope | Leica | M80 | |
| C57BL/6J (H-2b), Female | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 weeks |
| Ketamine Hydrochloride Injection | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Xylazine Sterile Solution | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofen | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Heparin Sodium | Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | |
| Saline solution (Sterile 0.9% sodium chloride) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| 0.9% Sodium chloride Injection | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Petrolatum Ophthalmic Ointment | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Iodine Prep Pads | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Alcohol Prep Pads | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Cotton tipped applicators | Fisher Sientific | 23-400-118 | |
| Fine Scissor | FST | 14028-10 | |
| Micro-Adson Forcep | FST | 11018-12 | |
| Clamp Applying Forcep | FST | 00072-14 | |
| S&T Vascular Clamp | FST | 00396-01 | |
| Spring Scissors | FST | 15008-08 | |
| Colibri Retractors | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 Forcep | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - Fine Forceps | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 Forceps | FST | 11251-35 | |
| Tish Needle Holder/Forceps | Micrins | MI1540 | |
| Black Polyamide Monofilament Suture, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | For sutureing the graft |
| Black Polyamide Monofilament Suture, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | For musculature and skin closure |
| Non Woven Sponges | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Absorbable hemostat | Ethicon | 1961 | |
| 1 ml Syringe | BD | 309659 | |
| 3 ml Syringe | BD | 309657 | |
| 10 ml Syringe | BD | 309604 | |
| 18 G 1 1/2 in, Needle | BD | 305190 | |
| 25 G 1 in., Needle | BD | 305125 | |
| 30 G 1 in., Needle | BD | 305106 | |
| Warm Water Recircultor | Gaymar | TP-700 | |
| Warming Pad | Gaymar | TP-22G | |
| Trimmer | Wahl | 9854-500 | |
| VEVO2100 High Frequency Ultrasound | VisualSonics | http://www.visualsonics.com/vevo2100 | The catalog number and pricing can be acquired from the sales representatives. |
| Ultrasound transmission gel | Parker Laboratories, INC. |
01-02 | |
| Table Top Laboratory Animal Anesthesia System | VetEquip, INC. | 901806 | |
| Isoflurane | Baxter | 1001936060 |
References
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