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Medicine

एक चूहा मन्या गुब्बारा चोट मॉडल का परीक्षण करने के लिए एंटी-नाड़ी चिकित्सा Remodeling

Published: September 19, 2016 doi: 10.3791/53777
Automatic Translation
1, 1,2, 1, 1, 1, 1
1Laboratory of Cardiovascular Sciences, National Institute on Aging, 2Department of Biomedical Science and Research Institute for Bioscience and Biotechnology, Hallym University

Introduction

एंजियोप्लास्टी ऐसे atherosclerosis के रूप में रोग की स्थिति से परिणामी संकुचित या बाधित धमनियों को चौड़ा करने के लिए इस्तेमाल एक endovascular प्रक्रिया है। एंजियोप्लास्टी की एक आम समस्या के बाद परिचालन neointimal hyperplasia, या restenosis है, जो शल्य चिकित्सा चोटों और बाद में सूजन प्रेरित संवहनी remodeling के कारण होता है। इन शर्तों संवहनी चिकनी कोशिकाओं, और कई pathophysiological परिणामों 1-3 के प्रसार के लिए नेतृत्व। पोत Neointimal हाइपरप्लासिया फिर से गाढ़ा, और पहले साल के भीतर 60% के बाद एंजियोप्लास्टी के रोगियों के लिए ऊपर में होता है। इसलिए, restenosis व्यापक रूप से इस्तेमाल एंजियोप्लास्टी प्रक्रिया 4 के एक बड़ा झटका है। हालांकि दवा क्षालन स्टेंट का आरोपण restenosis को रोकने में मदद कर सकते हैं, केवल चयनित उम्मीदवारों इस महंगी प्रक्रिया 5 से गुजरना कर सकते हैं।

दोनों जानवर और नैदानिक ​​अध्ययन की स्थापना की है कि जीर्ण सूजन vascu द्वारा उत्पन्नLAR चोट और / या शल्य घाव के बाद एंजियोप्लास्टी neointimal विकास 2,4 के लिए मुख्य प्रोत्साहन के रूप में कार्य करता है। चूहे मन्या गुब्बारा चोट मॉडल mimics नैदानिक ​​स्थिति है और इसलिए एक मूल्यवान मॉडल प्रणाली सेलुलर कारक है कि संवहनी remodeling और संवहनी सेल प्रसार 6-9 में शामिल करने के लिए की पहचान के रूप में कार्य करता है। इस मॉडल प्रणाली भी एक अत्यंत उपयोगी मूल्यांकन करने के लिए और स्क्रीन या दवाओं और चिकित्सकीय अभिकर्मकों कि पूर्व नैदानिक ​​translational अध्ययन 10-14 में neointimal विकास को दबाने के लिए उपकरण / है।

Murine मन्या तार चोट 15 मॉडल और murine और्विक धमनी तार चोट मॉडल 16, चूहे मन्या गुब्बारा चोट मॉडल पर्याप्त शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया में आसानी कि प्रवृत्त चोट के reproducibility की सुविधा के लिए आकार में बड़े होने का लाभ है की तुलना में। यह addit के लिए प्राथमिक कोशिकाओं की एक बड़ी संख्या (जैसे संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं, endothelial कोशिकाओं) प्रदान कर सकते हैंional इन विट्रो अध्ययन संवहनी remodeling गवर्निंग आणविक तंत्र चित्रित करने के लिए। महत्वपूर्ण बात है, चूहों की तुलना में, चूहों भी शारीरिक और विषाक्तता अध्ययन 17 के लिए एक बेहतर मॉडल माने जाते हैं। हालांकि एक नुकसान या चूहे मॉडल की सीमा आनुवंशिक रूप से संशोधित और जीन पीटा मॉडलों की कमी है, इस नुकसान चूहे जीनोमिक अनुक्रम की उपलब्धता और ऐसे CRISPR कैस प्रौद्योगिकी है कि renders के रूप में शक्तिशाली जीनोमिक संपादन उपकरण की हाल ही में विकास से दूर किया जा सकता है अलग अलग मॉडल प्रणाली 18,19 में जीनोमिक दृश्यों के विशाल पर्वतमाला के संभावित हेरफेर।

हालांकि चूहे गुब्बारा चोट मॉडल कई प्रयोगशालाओं और विभिन्न व्यापक प्रोटोकॉल द्वारा इस्तेमाल किया गया है प्रकाशित किया गया है 20,21, इस प्रोटोकॉल पूर्व सर्जरी की तैयारी पर अधिक जानकारी प्रदान करना है और इस शल्य चिकित्सा अभ्यास स्थापित करने के लिए इस प्रक्रिया के लिए नए शोधकर्ताओं मार्गदर्शन कर सकता है। हम यह भी टी के बाद सर्जरी देखभाल पर जोरवह जानवरों है कि नहीं जीवित पशुओं 13,22 में धमनी remodeling पर उपचारात्मक प्रभाव का ही पोस्टमार्टम रोग और histomorphological विश्लेषण करती है, लेकिन यह भी अल्ट्रासाउंड sonographic के अध्ययन की अनुमति देता है।

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Protocol

नोट: चूहे गुब्बारा चोट मॉडल और पुनः संयोजक sRAGE और अल्ट्रासाउंड sonographic अध्ययन के इंजेक्शन सहित संबद्ध प्रक्रियाओं के उपयोग पशु की देखभाल और उपयोग समिति (ACUC) नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ एजिंग पर, एनआईएच द्वारा अनुमोदित किया गया है।

1. पूर्व सर्जरी तैयारी

  1. साधन, सर्जिकल मंच, और व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण।
    1. सभी सर्जिकल उपकरणों और अभिकर्मकों इस प्रक्रिया में इस्तेमाल के लिए सामग्री और उपकरण के तालिका देखें। शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया करने से पहले सभी सर्जिकल उपकरणों आटोक्लेव।
      नोट: एक ही दिन में प्रदर्शन के लिए कई सर्जरी के लिए, सर्जरी के बीच उपकरणों बाँझ एक पूर्व गर्म गिलास मनका अजीवाणु का उपयोग करें।
    2. 70% शराब के साथ ऑपरेटिंग मंच की सतह जीवाणुरहित। शल्य गाउन, बाल कवर, सर्जिकल मास्क, सुरक्षा चश्मा, और दस्ताने पर रखो। अतिरिक्त हमारे लिए शल्य चिकित्सा मंच के पास निष्फल दस्ताने की एक बॉक्स छोड़ई।
  2. बैलून कैथेटर की तैयारी।
    1. बाँझ पानी के साथ 1 मिलीलीटर सिरिंज भरें और एक बाँझ पानी से भरे दो तरह से पानी निकलने की टोंटी के लिए सिरिंज देते हैं। धीरे पानी निकलने की टोंटी के माध्यम से पानी धक्का बैलून कैथेटर की luer ताला हिस्से को भरने, और कैथेटर के उद्घाटन से हवाई बुलबुले को दूर करने के लिए।
    2. टेस्ट गुब्बारा मुद्रास्फीति गुब्बारा आश्वस्त करने के लिए पानी की 0.02 मिलीग्राम से फुलाया जा सकता है। निष्फल पानी की एक कंटेनर में गुब्बारे की नोक स्टोर सर्जरी से पहले सुखाना और प्रदूषण से बचने के लिए।
  3. संज्ञाहरण और पशु तैयारी।
    1. वजन पुरुष Wistar चूहों (400-450 ग्राम) और आईडी पुष्टि करने के लिए कान टैग की जाँच करें। एक प्रेरण कक्ष में चूहे प्लेस, तो vaporizer पर बारी और 3.5-4.0% isoflurane के स्तर पर और 1.5-2.0 एल के लिए ऑक्सीजन के स्तर को समायोजित ऐसे पैर की अंगुली या पूंछ बन्द रखो के रूप में पेडल वापसी पलटा जाँच करके बेहोश करने की क्रिया की गहराई की जांच जानवर की।
    2. संज्ञाहरण तक पहुँचने के बाद (
    3. संज्ञाहरण की शल्य चिकित्सा के स्तर तक पहुँचने के बाद, बस पशु बाल कतरनी के साथ उरोस्थि ऊपर ठोड़ी से उदर गर्दन क्षेत्र दाढ़ी बनाने के लिए नीचे और povidone आयोडीन और 70% इथेनॉल 3 बार 1:10 कमजोर पड़ने के साथ बारी मुंडा त्वचा झाड़ू।
    4. उन्हें सुखाने से रोकने के लिए एक कपास झाड़ू के साथ जानवर की खुली आँखों पर नेत्र समाधान रखें। पीने के पानी के आपरेशन के दौरान सुखाने से बचने के साथ जीभ और पशु के मुंह गीला।
    5. एक बाँझ शल्य पत्र के साथ चूहे कवर और शीट में कटौती गर्दन क्षेत्र को बेनकाब करने के लिए। लापरवाह स्थिति ओ में पशु रखेंna सर्जन की ओर सिर के साथ शल्य चिकित्सा मंच पर पैड गर्म। टेप का उपयोग शल्य मंच करने के लिए जानवर के अंगों को ठीक करें।

2. सर्जिकल प्रक्रियाओं

  1. विच्छेदन और वाम मन्या धमनी का अलगाव
    1. सिर्फ रिब पिंजरे के ऊपर उरोस्थि के शीर्ष करने के लिए सभी तरह पूंछ की ओर एक दिशा में ठोड़ी के नीचे एक सीधे चीरा बनाने के लिए एक छुरी का प्रयोग करें। एक 7S संदंश का प्रयोग त्वचा के नीचे दो टूक लार ग्रंथियों के ऊतकों टुकड़े करना पेशी परत बेनकाब करने के लिए। अलग मांसपेशियों के ऊतकों मन्या वाहिका और गर्दन के क्षेत्र में वेगस तंत्रिका के लिए पहुँच प्राप्त करने के लिए।
    2. दो टूक कैरोटिड धमनी आसपास के ऊतकों को काटना, और ध्यान से वेगस तंत्रिका और संवहनी प्रावरणी किसी भी नुकसान से बचने के लिए अलग। लगातार उरोस्थि के नीचे आंतरिक और बाहरी शाखाओं और आम मन्या धमनी का पर्दाफाश करने के लिए कैरोटिड धमनी विभाजन तक काटना।
  2. Arteriot की तैयारीअर्थव्यवस्था
    1. त्याग और रक्तस्तम्भन के लिए, बाईं आम मन्या धमनी पर सबसे समीपस्थ स्थल पर एक संयुक्ताक्षर, और विभाजन के लिए स्थान तत्काल बाहर का में एक और संयुक्ताक्षर जगह है।
    2. जहाँ तक संभव हो बंटवारे से सिर की ओर धमनी वापस लेना करने के लिए बाह्य मन्या धमनी में एक 4.0 रेशम सीवन रखें। स्थायी रूप से आरोही ग्रसनी, पश्चकपाल और बेहतर थाइरोइड धमनी रिसाव से बचने के लिए सहित बाहरी मन्या धमनी के साथ 4.0 रेशम टांके का उपयोग कर छोटे धमनियों ligate।
    3. आंतरिक मन्या धमनी के चारों ओर एक 4.0 रेशम सीवन की जगह एक महत्वपूर्ण प्रतिगामी खून की कमी से बचने के लिए। आमतौर पर, आंतरिक शाखा के उपलब्ध लंबाई कम है। आंतरिक मन्या धमनी कल्पना करने के लिए, धीरे सही करने के लिए overlying कैरोटिड धमनी retracting से जितना संभव हो उतना आंतरिक मन्या धमनी का पर्दाफाश।
  3. बैलून कैथेटर का परिचय
    1. आम मन्या एक पर समीपस्थ सीवन वापस लेनाrtery और पोत पर एक धमनी दबाना जगह अस्थायी रूप से रक्त के प्रवाह को रोकने के लिए। बाहर के रूप में एक स्थान के रूप में संभव सिवनी करने पर एक छोटे से बाहरी मन्या धमनी पर चीरा (धमनी की परिधि के 1/4 के लिए 1/3) बनाओ।
    2. धीरे चीरा में एक संयुक्त राष्ट्र फुलाया गुब्बारे कैथेटर डालने और फिर लुमेन आम मन्या धमनी पर धमनी दबाना के लिए पास में कैथेटर अग्रिम। दबाना निकालें, और आगे महाधमनी चाप के लिए बैलून कैथेटर अग्रिम, चीरा से लगभग 35-40 मिमी।
  4. गुब्बारा चोट
    1. मैन्युअल जुड़ी सिरिंज के माध्यम से 0.02 मिलीलीटर की एक मात्रा को कैथेटर फुलाना और फिर सिरिंज और कैथेटर के बीच पानी निकलने की टोंटी ताला। धीरे-धीरे घुमाव के साथ कैथेटर वापस ले लें। जब कैथेटर arteriotomic चीरा के करीब है, गुब्बारा खंडन करना। कैथेटर वापस मूल स्थान पर अग्रिम।
    2. कुल 3 बार के लिए 2.4.1 दोहराएँ। ध्यान से धमनी लुमेन से कैथेटर को हटा दें।
  5. सर्जिकल घाव ऊपर बंद
    1. टांके के साथ धमनीछेदन बंद करें। रक्त के प्रवाह को बहाल करने के लिए आंतरिक मन्या धमनी रिलीज। धमनी रक्तस्राव या रिसाव के लिए जाँच करें। खून बह रहा होता है, तो रक्तस्राव को रोकने के लिए एक सा दबाव के साथ धुंध का एक टुकड़ा लागू होते हैं।
    2. टांके और अकड़न प्रक्रिया के लिए इस्तेमाल के बाकी निकालें। 6.0 टांके के साथ ग्रंथियों के ऊतकों को बंद करें। त्वचा टांके या घाव क्लिप के साथ त्वचा को बंद करें। isoflurane बंद करें और एक कुछ मिनट के लिए शुद्ध ऑक्सीजन के साथ पशु छोड़ दें।

3. चिकित्सा विज्ञान का प्रशासन, दर्दनाशक दवाओं, सर्जरी के बाद देखभाल, और इच्छामृत्यु

  1. चिकित्सा विज्ञान और दर्दनाशक दवाओं का प्रशासन।
    1. सर्जरी के बाद, buprenorphine (0.03 मिलीग्राम / किग्रा) intramuscularly इंजेक्षन। सर्जरी के दौरान खून की कमी की भरपाई करने के लिए 5 मिलीलीटर पूर्व गरम बाँझ खारा subcutaneously इंजेक्षन। पेरिटोनियम में sRAGE (0.5 एनजी / g) (चिकित्सा) इंजेक्षन।
    2. OPH के साथ फिर से आंखों को गीलाthalmic मरहम। गर्मी पैड पर चूहे की जगह और पशुओं पर नजर रखने के लिए जब तक यह स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए पूरी तरह से होश आएगा।
    3. साफ बिस्तर के साथ एक पिंजरे में चूहे लौटें और पिंजरे वापस मछली पालने का बाड़ा लाने के लिए। भाग लेने के पशु चिकित्सकों और रखवाले सचेत करने के लिए पिंजरे पर एक विशेष अवलोकन कार्ड रखें।
  2. सर्जरी के बाद सफाई
    1. पैड, swabs, सुइयों एट अल या तो कचरा या एक विशेष कंटेनर में निपटान सहित इस्तेमाल सर्जिकल सामग्री रखो। सर्जरी मंच कीटाणुरहित और सर्जिकल उपकरणों को साफ।
  3. सर्जरी के बाद की देखभाल
    1. 48 घंटा के बाद सर्जरी की अवधि के दौरान buprenorphine (0.03 मिलीग्राम / किग्रा) दिन में दो बार (बोली) प्रशासन। ऐसे गतिहीनता की रखवाली करने में असमर्थता, hutched आसन, झालरदार फर, और मुंह बनाना के रूप में संकट के सामान्य लक्षण के लिए 48 घंटे के बाद सर्जरी की अवधि के दौरान बारीकी से पशु मॉनिटर। लाली के लिए घाव की स्थिति, सूजन, स्फुटन, और संक्रमण की निगरानी।
      ध्यान दें:अतिरिक्त उपचार पशु चिकित्सक की सिफारिश में भाग लेने के अनुसार निर्धारित किया जा सकता है।
    2. पशु चिकित्सक की सिफारिश में भाग लेने के अनुसार सिवनी या घाव क्लिप निकालें।
  4. इच्छामृत्यु
    1. दो सप्ताह के बाद सर्जरी, पोस्टमार्टम histo-रूपात्मक के लिए मन्या धमनियों को अलग-थलग करने के लिए 22 का विश्लेषण करती है चूहों euthanize। एक कक्ष युक्त 5-20% isoflurane श्वसन की पूर्ण समाप्ति तक कम से कम 2 मिनट के लिए संतृप्त हवा में चूहे रखें। अंगों और ऊतकों के विच्छेदन के लिए पहले मौत की जाँच करें।

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Representative Results

दो हफ्ते के गुब्बारे की चोट के बाद, चूहे euthanized है और मन्या धमनियों histo-रूपात्मक विश्लेषण के लिए अलग कर रहे हैं। दोनों संचालित बाईं मन्या धमनी और संयुक्त राष्ट्र संचालित सही धमनी पार sectioned, संसाधित, और आयल एम्बेडेड रहे हैं। पैराफिन नमूने तो आगे पतली sectioned, और hematoxylin-eosin (एच एंड ई) के साथ दाग रहे हैं। Histo-रूपात्मक विश्लेषण एक डिजिटल इमेजिंग विश्लेषण प्रणाली का उपयोग कर प्रदर्शन कर रहे हैं। धमनी फसल और histo-रूपात्मक विश्लेषण का ब्यौरा 13,23 वर्णित किया गया है। गुब्बारा neointimal विकास, या पोत दीवार का उमड़ना, अगर अनुपचारित छोड़ दिया (या प्लेसबो के रूप में नमक के साथ इलाज) चोट हासिल स्पष्ट ही चूहे से गैर संचालित पोत खंड (चित्रा की तुलना में, के रूप में चित्रा 1 बी में दिखाया गया है 1 ए)। चूहे प्राप्त चिकित्सीय अभिकर्मक से पोत खंड (इस मामले में, sRAGE) ब्लॉक neointimal विकास signif से पता चला किicantly पोत दीवार (चित्रा 1 सी) का उमड़ना कम हो। गुब्बारा चोट के प्रभाव के रूप में अच्छी तरह से चिकित्सीय उपचार भी अल्ट्रासाउंड सोनोग्राफी 22 है, जो histo-रूपात्मक विश्लेषण से परिणामों के साथ अच्छी तरह से सहयोग (चित्रा 2) का उपयोग vivo में मूल्यांकन किया जा सकता है। प्रभावकारिता का मूल्यांकन और चूहे गुब्बारा चोट मॉडल में चिकित्सीय sRAGE के प्रशासन खिड़की के लिए विवरण पिछले प्रकाशनों 13,22 में वर्णित किया गया है। चिकित्सीय अभिकर्मकों है कि कम या चोट हासिल पोत दीवार remodeling ब्लॉक, चूहों के एक समूह का मूल्यांकन करने के लिए (एन = 8-15) आदेश सांख्यिकीय सार्थक निष्कर्ष प्राप्त करने में संचालित हो रहे हैं।

आकृति 1
चित्रा 1:। चूहे मन्या गुब्बारा चोट मॉडल से प्रतिनिधि परिणाम एच ई caroti का धुंधलाडी धमनी पार वर्गों (ए) गैर संचालित सही मन्या धमनी खंड; (बी) के गुब्बारे घायल हो गए और प्लेसबो का इलाज बाईं मन्या धमनी खंड (तीर neotimal क्षेत्रों से संकेत मिलता है); (सी) के गुब्बारे घायल हो गए और sRAGE इलाज बाईं मन्या धमनी अनुभाग। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2:। अल्ट्रासाउंड सोनोग्राफी और ऊतक विज्ञान के सहसंबंध sRAGE (0.5 एनजी / छ) में इलाज मन्या वाहिकाओं 2 सप्ताह के बाद चोट पर ((ए) के आंकड़ों के तितर बितर साजिश लुमेन व्यास और (बी) के पोत दीवार मोटाई में दिखाया गैर संचालित , = प्रत्येक समूह का 12) के साथ sRAGE घायल हो गए, और प्लेसबो का इलाज, एन। (सी) प्रतिनिधि sonographiसी और histologic (100x) छवियों। (संदर्भ 22 से चित्रा, प्रकाशक से अनुमति के साथ)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

वहाँ आदेश चोट है कि मन्या धमनी लुमेन में भित्ति endothelium को हटा उत्पन्न करने के लिए गुब्बारे फुलाना के लिए इस्तेमाल किया दो तरीके से किया गया है। एक साथ तरल 20 जुड़ी सिरिंज भरने के लिए है, और दूसरे में हवा के दबाव, 21 का उपयोग करने के लिए है। हम तरल भरा सिरिंज का उपयोग करने के लिए है क्योंकि सटीक तरल की मात्रा (0.02 मिलीग्राम) प्रत्येक प्रक्रिया के लिए इस्तेमाल किया जाएगा पसंद करते हैं। इस गुब्बारे के एक सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मुद्रास्फीति renders, प्रत्येक जानवर प्रक्रिया के दौर से गुजर में चोट का एक समान स्तर के लिए अग्रणी। सिरिंज में तरल पदार्थ का उपयोग वास्तव में तरल में हवा के बुलबुले के हटाने की आवश्यकता है। इस कैथेटर के उद्घाटन से बुलबुले बाहर धकेलने के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है। हवा के बुलबुले के बहुमत को हटाने के बाद, किसी भी अवशिष्ट, छोटे हवाई बुलबुले 1-2 घंटे में नष्ट करना होगा। हमारा सुझाव है कि शोधकर्ताओं ने पूर्व सर्जरी सामग्री 1-2 घंटा प्रक्रिया से पहले तैयार करना, और appro सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक व्यक्ति को सर्जरी से पहले गुब्बारा मुद्रास्फीति की डिग्री की जांचpriate मुद्रास्फीति।

सर्जरी के लिए, सर्जन और उसका / उसकी सहायक (s) चेहरे मास्क, बाँझ दस्ताने, और सर्जिकल गाउन सहित संक्रमण से दोनों जानवरों और शोधकर्ताओं की रक्षा के लिए सभी आवश्यक सुरक्षा गियर पहनने चाहिए। यह (जैसे 380-450 ग्राम के बीच) इस प्रक्रिया के लिए इस्तेमाल मानक 2 एफ Fogarty गुब्बारा embolectomy कैथेटर की शुरूआत के लिए कैरोटिड धमनी के उचित आकार सुनिश्चित करने के लिए पूरी तरह से बड़े हो गए, इसी तरह bodyweights साथ नर चूहों का उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है। सर्जरी से पहले, एनेस्थेटिक कि पूरे सर्जरी कवर के लिए पर्याप्त मात्रा में आश्वस्त करने के लिए vaporizer में isoflurane के स्तर की जांच, और प्रत्येक सर्जरी के शुरू होने से पहले vaporizer फिर से भरना यदि आवश्यक है। ऑक्सीजन टैंक के दबाव गेज की जाँच सर्जरी के लिए पर्याप्त ऑक्सीजन सुनिश्चित करने के लिए। यह सुनिश्चित करने के संज्ञाहरण के एक उचित गहराई तक पहुँच जाता है, एक भी चूहा के श्वसन दर निगरानी कर सकते हैं। एक सामान्य चूहे ~ 85 सांस / मिनट की एक सांस की दर है; सांस की गहराई और फिर में वृद्धिगुलर ताल, और सांस की दर में कमी शल्य चिकित्सा संज्ञाहरण का प्रतीक है।

सर्जरी के दौरान, संज्ञाहरण लगातार नजर रखी और श्वसन, पेडल पलटा, और शल्य चिकित्सा प्रोत्साहन के लिए जानवर की प्रतिक्रिया की जाँच द्वारा बनाए रखा जाना चाहिए। ध्यान से, सर्जन, तो उसकी / उसके हाथ ऐसे पेडल पलटा जाँच संभावित प्रदूषण और संक्रमण को रोकने के रूप में सर्जरी के दौरान पशु की गैर बाँझ भागों को छूने के दस्ताने में परिवर्तन होना चाहिए। इसके अलावा, सर्जन और सहायक भी ध्यान से जानवर के महत्वपूर्ण संकेत आपरेशन के दौरान अधिक मात्रा संवेदनाहारी रोकने के लिए और अगर यह isoflurane बंद करके होती है ऐसी स्थिति से बचने के लिए जल्दी सुधारात्मक कार्रवाई ले और 100% करने के लिए ऑक्सीजन का स्तर बढ़ाने के लिए निगरानी करनी चाहिए। संवेदनाहारी अधिक मात्रा के लक्षण धीमी और उथले श्वास, और कमजोर और अनियमित नाड़ी शामिल हैं। हम यह भी एक अच्छा मन्या एक की एक पूरी जुदाई सहित गुब्बारा चोट से पहले धमनीछेदन की तैयारी का सुझावउनकी आसन्न ऊतकों से rtery वर्गों। इस कार्रवाई के दौरान अप्रत्याशित bleedings से बचने में मदद मिलेगी।

संज्ञाहरण के तहत पशु, शल्य चिकित्सा के बाद वसूली चरण के दौरान सहित, कभी नहीं पहुंच से बाहर छोड़ दिया जाना चाहिए। 48 घंटा के बाद सर्जरी की अवधि के दौरान नियमित रूप से buprenorphine (0.03 मिलीग्राम / किलो बोली) के लिए एक विकल्प के रूप में, निरंतर रिलीज buprenorphine (buprenorphine एसआर) का भी इस्तेमाल किया जा सकता है। buprenorphine एसआर (1.0-1.2 मिलीग्राम / किग्रा) को तुरंत सर्जरी के बाद इंजेक्शन 72 घंटा तक की शल्य चिकित्सा के बाद की अवधि को कवर किया जाएगा। सामान्य तौर पर, postsurgical जटिलताओं प्रत्याशित नहीं कर रहे हैं; लेकिन एक सावधान प्रबोधक अभ्यास जानवरों के कल्याण को सुनिश्चित करता है और संस्थागत ACUC द्वारा एक नीति है।

क्योंकि यह जानवर (8-15), पर्याप्त शल्य कौशल और प्रक्रिया के साथ अपनेपन का अध्ययन समूह में गुब्बारा चोट का एक ही स्तर को पुन: पेश करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण है अत्यधिक की सिफारिश कर रहे हैं। इस प्रक्रिया के लिए नए शोधकर्ताओं के लिए, हम सुझावपहले धमनीछेदन की तैयारी, गुब्बारा चोट और चूहे शवों कि संस्थागत जानवरों की सुविधा में उपलब्ध हो सकता है पर घाव बंद सहित पूरी प्रक्रिया में अभ्यास करने के लिए। पशु चिकित्सकों या शोधकर्ताओं प्रक्रिया से परिचित के साथ शल्य प्रक्रिया का अभ्यास भी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और लगातार गुब्बारा चोट परिणाम प्राप्त करने के लिए सुनिश्चित करता है।

हमारे विचार, ड्रग्स और / या चिकित्सा विज्ञान है कि neointimal विकास नकारना सबसे अच्छा क्रम में प्रारंभिक चरण में सूजन भरपाई के लिए गुब्बारे की चोट के बाद तुरंत प्रशासित रहे हैं। कुछ अभिकर्मकों वसूली के बाद के दिनों के दौरान लगातार प्रशासित किया जाना प्रभाव को प्राप्त करने के लिए आवश्यकता हो सकती है। एक प्रारंभिक हस्तक्षेप ब्लॉक या आगामी संवहनी remodeling 13,22,24 को कम करने में मदद करता है।

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Disclosures

लेखकों घोषणा की कि वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2 F Fogarty balloon embolectomy catheter                  Edwards Lifesciences            
Standard scalpel Fine Science Tools
Small  curved forceps (Large radius Dumont#7shanks curved)        Fine Science Tools         
Large, medium and small micro-scissors Roboz
Needles (20 G)   TycoHealthcare
Micro-surgery forceps with micro-blunted atraumatic tips Fine Science Tools        
Atraumatic straight small arterial clamps                          Fine Science Tools                                       
Retractor  with maximum spread 5.5 cm long blunt teeth Fine Science Tools                                          
Silk suture (4.0 and  6.0 ) Fine Science Tools                                          
Syringe (1.0 ml)  BD 
Curity gauze sponges AllegroMedical
Cotton tip applicators sterile and non-sterile Puritan Medical Products
Compact hot bead sterilizer Fine Science Tools
Self-regulating heating pad Fine Science Tools                                            
ADS200 anesthesia system/ventilator Paragon Medical
Isoflurane (forane), liquid form Baxter
Sodium chloride 0.9% (Saline)  Hospira
Buprenex (buprenorphine)                      Reckitt Benckiser Healthcare (UK) Ltd. 
70% alcohol Fisher
1:10 Betadine Fisher

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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चिकित्सा अंक 115 चूहे मन्या गुब्बारा चोट मॉडल धमनी चोट neointimal हाइपरप्लासिया restenosis चिकित्सा विज्ञान उन्नत ग्लिकेशन अंत उत्पादों (sRAGE) के लिए घुलनशील रिसेप्टर।
एक चूहा मन्या गुब्बारा चोट मॉडल का परीक्षण करने के लिए एंटी-नाड़ी चिकित्सा Remodeling
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Petrasheskaya, N., Tae, H. J.,… More

Petrasheskaya, N., Tae, H. J., Ahmet, I., Talan, M. I., Lakatta, E. G., Lin, L. A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics. J. Vis. Exp. (115), e53777, doi:10.3791/53777 (2016).

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