Introduction
Angioplasti er en endovaskulær prosedyre anvendes for å utvide den trange eller hindret arterier resulterende fra patologiske tilstander, slik som aterosklerose. En vanlig komplikasjon av angioplastikk er den post-operative neointimal hyperplasia, eller restenose, som oppstår på grunn av kirurgiske skader og påfølgende betennelse-indusert vaskulær remodeling. Disse forholdene fører til proliferasjon av vaskulære glatte muskelceller, og flere patofysiologiske konsekvenser 1-3. Neointimale hyperplasia re-tykner fartøyet, og forekommer hos opptil 60% post-angioplastikk pasienter innen det første året. Derfor er restenose et stort tilbakeslag for den mye brukte angioplastikk prosedyre fire. Selv om implantasjon av narkotika-eluering stent kan bidra til å hindre restenose, kan bare utvalgte kandidater gjennomgå denne kostbar prosedyre fem.
Både dyr og kliniske studier har vist at kronisk betennelse som genereres av vascuLar skader og / eller operasjonssåret fungerer som den viktigste stimulus for post-angioplastikk neointimal vekst 2,4. De rotte carotis ballong skademodellen etterligner den kliniske situasjonen og derfor fungerer som en verdifull modellsystem for å identifisere cellulære faktorer som involverer i vaskulær remodellering og vaskulær celleproliferasjon 6-9. Denne modellen systemet er også et svært nyttig verktøy for å evaluere og / eller skjermen for narkotika og terapeutiske reagenser som undertrykker neointimal vekst i pre-kliniske translasjonsforskning studier 10-14.
Sammenlignet med den murine carotis skademodell ledningen 15, og det murine lårarterien trådskade modell 16, rotte carotis skademodell ballongen har fordelene av å være tilstrekkelig stor i størrelse for å lette kirurgisk prosedyre som muliggjør reproduserbarheten av påført skade. Det kan gi et større antall av primære celler (f.eks vaskulære glatte muskelceller, endotelceller) for additional in vitro studier for å avgrense den molekylære mekanismen som regulerer vaskulær remodellering. Viktigere, sammenlignet med mus, rotter er også kjent for å være en bedre modell for fysiologiske og toksikologiske studier 17. Selv om en ulempe eller begrensning av rottemodellen er mangelen på genetiske modifiserte og genet knockout-modeller, kan denne ulempe overvinnes ved tilgjengeligheten av rotte genomisk sekvens, og den nylige utvikling av kraftige genomiske redigeringsverktøy som CRISPR-CAS teknologi som gjengir mulig manipulering av store områder av genomiske sekvenser i ulike modellsystemer 18,19.
Selv om rotte ballong skade modellen har blitt brukt av flere laboratorier og ulike omfattende protokoller har blitt publisert 20,21, har som mål denne protokollen på å gi flere detaljer på pre-kirurgi forberedelser og kan veilede forskere nye til denne fremgangsmåten for å sette opp denne kirurgisk praksis. Vi vektlegger også etter operasjonen vare på than dyr som gjør at ikke bare post-mortem patologiske og histomorphological analyser av terapeutiske effekter på arteriell ombygging, men også ultralyd sonografiske studier i levende dyr 13,22.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: Bruk av rotte ballong skade modell og tilhørende prosedyrer inkludert injeksjon av rekombinante sRAGE og ultralyd sonografiske studier har blitt godkjent av Animal Care og bruk Committee (ACUC) av National Institute on Aging, NIH.
1. Pre-kirurgi Forberedelser
- Instrument, Kirurgisk Platform, og personlig verneutstyr.
- Se Materialer og utstyr Table for alle kirurgiske instrumenter og reagenser som brukes i denne prosedyren. Autoklav alle kirurgiske instrumenter før kirurgisk inngrep.
MERK: For flere operasjoner utført på samme dag, må du bruke en forvarmet glass perle sterilisator å sterilisere instrumentene mellom operasjoner. - Steril overflaten av driftsplattform med 70% alkohol. Sett på kirurgisk kjole, hår cover, kirurgiske maske, vernebriller og hansker. Legg igjen en boks av steriliserte hansker nær kirurgisk plattform for ytterligere osse.
- Se Materialer og utstyr Table for alle kirurgiske instrumenter og reagenser som brukes i denne prosedyren. Autoklav alle kirurgiske instrumenter før kirurgisk inngrep.
- Utarbeidelse av ballongkateter.
- Fyll en ml sprøyte med sterilt vann og fest sprøyten til et sterilt vann-fylt to-veis stoppekran. Forsiktig presse vannet gjennom stengeventilen for å fylle den med Luer-lås-delen av ballongkateteret, og fjerne luftbobler fra åpningen av kateteret.
- Test ballong inflasjon for å sikre at ballongen kan blåses opp med 0,02 ml vann. Oppbevar tuppen av ballongen i en beholder med sterilt vann før operasjonen for å unngå uttørking og forurensning.
- Anestesi og Animal forberedelse.
- Vei Wistar hannrotter (400-450 g) og sjekk øremerke å bekrefte ID. Plasser rotte i en induksjon kammer, og slå på fordamperen og juster isofluran nivå til 3,5-4,0% og oksygennivået til 1,5-2,0 L. Sjekk dybden av sedasjon ved å sjekke pedal tilbaketrekking refleks som klyping tå eller hale av dyret.
- Etter å ha nådd anestesi (
- Etter å ha nådd den kirurgiske nivået av anestesi, barbere den ventrale halsområde fra haken ned til like over sternum med dyrehårklippe og vattpinnen barbert hud med vekslende 1:10 fortynning av povidon-jod og 70% etanol 3 ganger.
- Plasser øyedråper på de åpne øynene til dyret med en bomullspinne for å hindre dem fra å tørke. Fukte tungen og munnen til dyret med drikkevann for å unngå uttørring under operasjonen.
- Dekk rotte med en steril kirurgisk ark og kutte arket for å eksponere nakkeregionen. Plasserer dyret i ryggleie ona oppvarmet pad på den kirurgiske plattform med hodet mot kirurgen. Fest lemmer av dyret til det kirurgiske plattformen ved hjelp av tape.
2. kirurgiske prosedyrer
- Disseksjon og Isolering av Venstre arteria carotis
- Bruke en skalpell for å lage et rett snitt under haken i retning mot halen hele veien til toppen av brystbenet like over brystkassen. Bruk en 7S pinsett til rett ut dissekere spyttkjertelvevet under huden for å utsette muskellaget. Separate muskler for å få tilgang til carotis blodkar og vagus nerve i nakkeregionen.
- Rett ut dissekere vevet rundt halspulsåren, og nøye skille vagus nerve og vaskulær konseptet for å unngå skader. Kontinuerlig dissekere til karotidarterien bifurkasjonen å eksponere de indre og ytre grener og arteria carotis communis ned til sternum.
- Utarbeidelse av Arteriotomy
- For inntrekking og hemostase, plassere en ligatur på det mest proksimale området på venstre felles halsarterie, og en annen ligatur på det sted umiddelbart distalt til forgreningen.
- Plasser en 4,0 silkesutur ved den ytre halsarterie så langt fra forgreningen som mulig for å trekke tilbake arterien mot hodet. Permanent ligere små arterier ved hjelp av 4,0 silkesuturer langs den ytre halsarterie inkludert stigende faryngeale, occipital og den overlegne skjoldbruskkjertelen for å unngå arteriell lekkasje.
- Plasser en 4,0 silke sutur rundt arteria carotis interna å unngå en betydelig retrograd blodtap. Vanligvis er den tilgjengelige lengden av den indre gren er minimal. For å visualisere den indre halsarterie, eksponere den indre halsarterie så mye som mulig ved forsiktig å trekke tilbake den overliggende halspulsåren til høyre.
- Innføring av ballongkateter
- Trekk den proksimale sutur på felles carotis enrtery og plassere en arteriell klemme på fartøyet for å midlertidig stoppe blodtilførselen. Foreta en liten (1/3 til 1/4 av omkretsen av arterien) innsnitt på den eksterne karotid arterien på et sted som distalt for suturen som mulig.
- Forsiktig inn en un-oppblåst ballongkateter inn i snittet og deretter videre kateteret i hulrommet nær den arterielle klemmen på den felles halsarterie. Fjerne klemmen, og ytterligere fremme ballongkateteret til aortabuen, omtrent 35-40 mm fra snittet.
- Balloon Injury
- blåses opp manuelt kateteret til et volum på 0,02 ml via den vedlagte sprøyten og deretter låser stengeventilen mellom sprøyten og kateteret. Sakte trekke kateteret med rotasjoner. Når kateteret er i nærheten av arteriotomic innsnitt, deflatere ballongen. Advance kateteret tilbake til den opprinnelige plasseringen.
- Gjenta 2.4.1 for totalt 3 ganger. fjerne kateteret forsiktig fra blod lumen.
- Nærbilde operasjonssåret
- Lukk arteriotomi med sting. Slipp arteria carotis interna å gjenopprette blodstrømmen. Sjekk for arteriell blødning eller lekkasje. Hvis blødningen oppstår, gjelder et stykke gasbind med litt press for å stoppe blødningen.
- Fjerne resten av suturer og klemmer som benyttes for prosedyren. Lukk kjertelvevet med 6,0 sting. Lukk huden med hud sting eller sår klipp. Slå av isofluran og la dyret med rent oksygen for et par min.
3. Administrasjon av Therapeutics, Analgetika, Post-kirurgi Care, og Avliving
- Administrasjon av Therapeutics og smertestillende.
- Etter operasjonen, injisere buprenorfin (0,03 mg / kg) intramuskulært. Injiser 5 ml forvarmes sterilt saltvann subkutant å kompensere blodtap under operasjonen. Injisere sRAGE (0,5 ng / g) (terapi) i peritoneum.
- Fukt øynene igjen med OPHthalmic salve. Plasser rotte på varmen pad og overvåke dyret før det gjenvinner full bevissthet for å opprettholde sternal recumbency.
- Returner rotte til et bur med rent sengetøy og bringe buret tilbake til vivarium. Plasser en spesiell observasjon kort på buret for å varsle møtende veterinærer og vaktmester.
- Post-kirurgi Cleanup
- Sett brukt kirurgisk materiell inkludert pads, vattpinner, nåler et al enten i søpla eller en spesiell avfallsbeholder. Desinfiser kirurgi plattformen og rengjøre kirurgiske instrumenter.
- Post-kirurgi Care
- Administrer buprenorfin (0,03 mg / kg) to ganger daglig (bid) i løpet av 48 timer etter operasjonen perioden. Overvåk dyret tett i løpet av 48 timer etter operasjonen periode for vanlige tegn på stress som immobilitet, manglende evne til å mate, hutched holdning, ruffled pels, og grimase. Overvåk sår forhold for rødhet, hevelse, dehiscence og infeksjoner.
NOTAT:Flere behandlinger kan være foreskrevet i henhold til behandlende veterinær anbefaling. - Fjern sutur eller såret klipp henhold til behandlende veterinær anbefaling.
- Administrer buprenorfin (0,03 mg / kg) to ganger daglig (bid) i løpet av 48 timer etter operasjonen perioden. Overvåk dyret tett i løpet av 48 timer etter operasjonen periode for vanlige tegn på stress som immobilitet, manglende evne til å mate, hutched holdning, ruffled pels, og grimase. Overvåk sår forhold for rødhet, hevelse, dehiscence og infeksjoner.
- Aktiv dødshjelp
- To uker etter operasjonen, avlive rottene å isolere carotis for obduksjon histo-morfologiske analyser 22. Plasser rotte i et kammer som inneholder 5-20% isofluran mettet luft i minst 2 minutter inntil fullstendig opphør av respirasjon. Kontroller død før disseksjon av organer og vev.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
To uker etter ballongskade, blir rotten avlivet, og halspulsårene er isolert for histo-morfologisk analyse. Begge opererte venstre halspulsåren og un-opererte høyre arterie er cross-seksjonert, behandles og parafin-embedded. Parafin Prøvene blir deretter ytterligere tynne snitt, og farget med hematoksylin-eosin (H & E). Histo-morfologiske analyser utført ved hjelp av en digital bildebehandling analysesystem. Detaljene i arterie høst og histo-morfologisk analyse har blitt beskrevet 13,23. Ballongen skade-fremkalte neointimal vekst, eller fortykning av karveggen, dersom den ikke behandles (eller behandlet med saltoppløsning som placebo), er tydelig, som vist i figur 1B, sammenlignet med ikke-opererte fartøyet seksjonen fra samme rotte (figur 1A). Fartøyet seksjonen fra rotte fikk terapeutiske reagens (i dette tilfellet, sRAGE) som blokkerer neointimal vekst viste signifgrad å redusere fortykning av karveggen (figur 1C). Virkningene av ballongen skade, så vel som den terapeutiske behandling kan også bli evaluert in vivo ved hjelp av ultralyd sonografi 22, som samarbeider godt med resultatene fra histo-morfologisk analyse (Figur 2). Detaljene for evaluering av effekt og administrasjonsvinduet terapeutisk sRAGE i rotte ballong skade modellen er beskrevet i tidligere publikasjoner 13,22. For å evaluere terapeutiske reagenser som reduserer eller blokkerer skade-fremkalte karvegg remodellering, en gruppe rotter (n = 8-15) som skal drives inn for å oppnå statistisk meningsfulle konklusjoner.
Figur 1:. Representative resultater fra rottehals ballong skade modell H & E farging av carotid arterie tverrsnitt (A) den ikke-opererte høyre halspulsåre delen; (B) ballongen skadet og placebo-behandlede venstre arteria carotis seksjon (piler indikerer neotimal områder); (C) ballongen skadet og sRAGE behandlet venstre arteria carotis delen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Fig. 2: Korrelasjon av ultralyd sonografi og histologi sRAGE (0,5 ng / g) ble behandlet carotis fartøy som er vist i spredningsdiagram av data fra (A) lumen diameter og (B) fartøyet veggtykkelse på 2 uker etter skade (ikke-operert , skadet med sRAGE, og som fikk placebo, n = 12 i hver gruppe). (C) Representant sonographic og histologiske (100X) bilder. (Figur fra referanse 22, med tillatelse fra forlaget). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det har vært to metoder som brukes for å blåse opp ballongen for å generere den skade som fjerner vegg endotelet i de karotide arterielle lumen. Det ene er å fylle den vedlagte sprøyten med væske 20, og den andre er å bruke lufttrykk 21. Vi foretrekker å bruke væskefylt sprøyte fordi den nøyaktige væskevolumet (0,02 ml) vil bli brukt for hver prosedyre. Dette gjør en nøyaktig og reproduserbar inflasjon av ballongen, som fører til et tilsvarende nivå av skade i hvert dyr under prosedyren. Ved hjelp av væske i sprøyten faktisk krever fjerning av luftbobler i væsken. Dette kan oppnås ved å skyve boblene ut fra åpningen av kateteret. Etter å ha fjernet et flertall av luftbobler, vil eventuelle gjenværende, små luftbobler forsvinner i løpet av 1-2 timer. Vi foreslår at forskere gjør pre-kirurgi materialer klar 1-2 timer før prosedyren, og sjekke graden av ballongen inflasjon før hver enkelt operasjon for å sikre appropriate inflasjon.
For kirurgi, må kirurgen og hans / hennes assistent (er) slitasje alle nødvendige beskyttelse tannhjul inkludert ansiktsmasker, sterile hansker og operasjonsfrakker å beskytte både dyr og forskere fra infeksjon. Det er viktig å bruke fullt utvokste, hannrotter med liknende bodyweights (for eksempel mellom 380 til 450 g) for å sikre den riktige størrelsen av halspulsåre for innføring av standard 2F Fogarty ballongkateter embolektomi anvendt for denne fremgangsmåten. Før operasjonen, kontrollere nivået av isofluran i vaporizer for å sikre tilstrekkelig mengde av narkosen som dekker hele operasjonen, og fylle den fordamper ved behov før hver kirurgi starter. Sjekk trykkmåleren av oksygentanken for å sikre at tilstrekkelig oksygen for operasjonen. For å sikre en forsvarlig anestesidybden er nådd, kan man også overvåke respirasjonsfrekvens av rotte. En vanlig rotte har en respirasjonsfrekvens på ~ 85 pust / min; en økning i respiratorisk dybde og regular rytme, og en nedgang i respirasjonsfrekvens betyr kirurgisk anestesi.
Under operasjonen, må anestesi kontinuerlig overvåkes og vedlikeholdes ved å kontrollere respirasjon, pedal refleks, og responsen av dyret til den kirurgiske stimulus. Av notatet, skal kirurgen bytte hansker hvis hans / hennes hender berører ikke-sterile deler av dyret under operasjonen som å sjekke pedal refleks for å unngå potensiell forurensning og smitte. I tillegg bør kirurgen og assistent også nøye overvåke vitale tegn på dyret under operasjonen for å hindre bedøvelse overdose og ta raske korrigerende tiltak for å avverge situasjonen hvis det skjer ved å slå av isofluran og øke oksygennivået til 100%. Tegnene på bedøvelse overdose inkluderer langsomme og grunne respirations, og svak og uregelmessig puls. Vi foreslår også en god forberedelse av arteriotomi før ballongen skade, inkludert en komplett separasjon av carotis enrtery seksjoner fra sine tilstøtende vev. Dette vil bidra til å unngå uventede blødninger under operasjonen.
Dyret under narkose, også om postoperativ restitusjonsfasen, bør aldri være uten tilsyn. Som et alternativ til den vanlige buprenorfin (0,03 mg / kg to ganger daglig) i løpet av 48 timer etter kirurgi periode, kan forlenget frigivelse av buprenorfin (buprenorfin SR) også anvendes. Injeksjon av buprenorfin SR (1,0-1,2 mg / kg) umiddelbart etter operasjonen vil dekke postoperativ periode opp til 72 timer. Generelt er postsurgical komplikasjoner ikke forventet; men en forsiktig monitory praksis sikrer velferden til dyrene og er en politikk av den institusjonelle ACUC.
Fordi det er viktigst å reprodusere samme nivå av ballongen skader i studien gruppen av dyr (8-15), tilstrekkelig kirurgiske ferdigheter og fortrolighet med prosedyren er sterkt anbefalt. For forskere nye til denne prosedyren, foreslår viførst å øve hele prosedyren herunder utarbeidelse av arteriotomi, ballongen skaden og lukking av sår på rotte kadaver som kan være tilgjengelige i den institusjonelle dyret anlegget. Øve den kirurgiske prosedyren med veterinærer eller forskere som er kjent med prosedyren sørger også for å få reproduserbare og konsistente ballong skade resultater.
Etter vårt syn narkotika og / eller terapi som negere neointimal vekst er best administreres umiddelbart etter ballong skade for å oppveie betennelse på tidlig stadium. Noen reagenser kan ha behov for å bli administrert kontinuerlig i løpet av de påfølgende dager med utvinning for å oppnå effekten. En tidlig intervensjon bidrar til å blokkere eller redusere den påfølgende vaskulær remodelle 13,22,24.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende økonomiske interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 F Fogarty balloon embolectomy catheter | Edwards Lifesciences | ||
| Standard scalpel | Fine Science Tools | ||
| Small curved forceps (Large radius Dumont#7shanks curved) | Fine Science Tools | ||
| Large, medium and small micro-scissors | Roboz | ||
| Needles (20 G) | TycoHealthcare | ||
| Micro-surgery forceps with micro-blunted atraumatic tips | Fine Science Tools | ||
| Atraumatic straight small arterial clamps | Fine Science Tools | ||
| Retractor with maximum spread 5.5 cm long blunt teeth | Fine Science Tools | ||
| Silk suture (4.0 and 6.0 ) | Fine Science Tools | ||
| Syringe (1.0 ml) | BD | ||
| Curity gauze sponges | AllegroMedical | ||
| Cotton tip applicators sterile and non-sterile | Puritan Medical Products | ||
| Compact hot bead sterilizer | Fine Science Tools | ||
| Self-regulating heating pad | Fine Science Tools | ||
| ADS200 anesthesia system/ventilator | Paragon Medical | ||
| Isoflurane (forane), liquid form | Baxter | ||
| Sodium chloride 0.9% (Saline) | Hospira | ||
| Buprenex (buprenorphine) | Reckitt Benckiser Healthcare (UK) Ltd. | ||
| 70% alcohol | Fisher | ||
| 1:10 Betadine | Fisher |
References
- Chaabane, C., Otsuka, F., Virmani, R., Bochaton-Piallat, M. L.
- Goel, S. A., Guo, L. W., Liu, B., Kent, K. C.
- Khan, R., Agrotis, A., Bobik, A. Understanding the role of transforming growth factor-beta1 in intimal thickening after vascular injury. Cardiovasc Res. 74, 223-234 (2007).
- Schillinger, M., Minar, E. Restenosis after percutaneous angioplasty: the role of vascular inflammation. Vasc Health Risk Manag. 1, 73-78 (2005).
- Katz, G., Harchandani, B., Shah, B. Drug-eluting stents: the past, present, and future. Curr Atheroscler Rep. 17, 485 (2015).
- Jain, M., Singh, A., Singh, V., Barthwal, M. K. Involvement of Interleukin-1 Receptor-Associated Kinase-1 in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation and Neointimal Formation After Rat Carotid Injury. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2015).
- Lee, K. P., et al. Carvacrol inhibits atherosclerotic neointima formation by downregulating reactive oxygen species production in vascular smooth muscle cells. Atherosclerosis. 240, 367-373 (2015).
- Li, G., Chen, S. J., Oparil, S., Chen, Y. F., Thompson, J. A. Direct in vivo evidence demonstrating neointimal migration of adventitial fibroblasts after balloon injury of rat carotid arteries. Circulation. 101 (12), 1362-1365 (2000).
- Noda, T., et al. New endoplasmic reticulum stress regulator, gipie, regulates the survival of vascular smooth muscle cells and the neointima formation after vascular injury. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (5), 1246-1253 (2015).
- Deuse, T., et al. Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury. Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).
- Guo, J., et al. p55gamma functional mimetic peptide N24 blocks vascular proliferative disorders. J Mol Med (Berl). , (2015).
- Oh, C. J., et al. Dimethylfumarate attenuates restenosis after acute vascular injury by cell-specific and Nrf2-dependent mechanisms. Redox Biol. 2, 855-864 (2014).
- Tae, H. J., et al. The N-glycoform of sRAGE is the key determinant for its therapeutic efficacy to attenuate injury-elicited arterial inflammation and neointimal growth. J Mol Med (Berl. 91 (12), 1369-1381 (2013).
- Zhou, Z., et al. Receptor for AGE (RAGE) mediates neointimal formation in response to arterial injury. Circulation. 107 (17), 2238-2243 (2003).
- Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A.
- Le, V., Johnson, C. G., Lee, J. D., Baker, A. B. Murine model of femoral artery wire injury with implantation of a perivascular drug delivery patch. J Vis Exp. (96), e52403 (2015).
- Iannaccone, P. M., Jacob, H. J.
- Fu, Y., Sander, J. D., Reyon, D., Cascio, V. M., Joung, J. K. Improving CRISPR-Cas nuclease specificity using truncated guide RNAs. Nat Biotechnol. 32 (3), 279-284 (2014).
- Sander, J. D., Joung, J. K. CRISPR-Cas systems for editing, regulating and targeting genomes. Nat Biotechnol. 32 (4), 347-355 (2014).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Zhang, W., Trebak, M. Vascular balloon injury and intraluminal administration in rat carotid artery. J Vis Exp. (94), (2014).
- Tae, H. J., et al. Vessel ultrasound sonographic assessment of soluble receptor for advanced glycation end products efficacy in a rat balloon injury model. Curr Ther Res Clin Exp. 76, 110-115 (2014).
- Tae, H. J., et al. Chronic treatment with a broad-spectrum metalloproteinase inhibitor, doxycycline, prevents the development of spontaneous aortic lesions in a mouse model of vascular Ehlers-Danlos syndrome. J Pharmacol Exp Ther. 343 (1), 246-251 (2012).
- Sakaguchi, T., et al. Central role of RAGE-dependent neointimal expansion in arterial restenosis. J Clin Invest. 111 (7), 959-972 (2003).
