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का विकास Published: July 30, 2017 doi: 10.3791/55272
Automatic Translation
1, 1, 1
1Biochemical Sciences Division, CSIR-National Chemical Laboratory

Summary

यहाँ, हम अलगाव, पहचान, स्क्रीनिंग, और चयन "सबसे फिट" entomopathogenic कवक, Metarhizium anisopliae के सहित एक प्रभावी mycoinsecticide की ज्ञान आधारित विकास में शामिल विभिन्न चरणों, रिपोर्ट, कृषि के क्षेत्र में कीटों के नियंत्रण के लिए ।

Abstract

जब वाणिज्यिक म्यूकोइंटेक्टिसाइड विकसित होते हैं, तो एक प्रमुख चिंता है कि रासायनिक कीटनाशकों की तुलना में मार गति है। इसलिए, फास्ट-अभिनय, अत्यधिक घातक एंटोमोथाइडोजेनिक कवक के चयन के लिए अलगाव और स्क्रीनिंग महत्वपूर्ण कदम हैं। इस तरह के Metarhizium, Beauveria, और Nomurea रूप Entomopathogenic कवक, है, जो संपर्क में आने से काम करते हैं, बेहतर बेसिलस thuringiensis या nucleopolyhedrosis वायरस (NPV) है, जो कीट कीट द्वारा किया जाता किया जाना चाहिए की तुलना में अनुकूल हैं। वर्तमान कार्य में, हमने 68 मिट्टीहिज़ियम उपभेदों को संक्रमित कीड़ों से मिट्टी के कमजोर पड़ने और चारा विधि का उपयोग करके अलग किया। आईओएस 1-5.8 एस-आईटीएस 2 और 26 एस आरडीएनए क्षेत्र की प्रवर्धन और अनुक्रमण द्वारा पृथक की पहचान की गई। मेटारिज़ियम अनिसोप्लीय के सबसे जहरीले तनाव का चयन मध्यकालीन घातक एकाग्रता (एलसी 50 ) और समय (एलटी 50 ) के आधार पर कीट बायोसास में प्राप्त किया गया था, जो कि हेलिकेवारापा आर्गेरा के तृतीय-इन्स्टार लार्वा के खिलाफ था ।चयनित तनाव द्वारा बीजाणुओं का बड़े पैमाने पर उत्पादन 14 दिनों के लिए सब्सट्रेट के रूप में चावल का उपयोग करके ठोस-राज्य किण्वन (एसएसएफ) के साथ किया गया था। स्पोर्टेड बायोमास से 0.1% टिन -80 का उपयोग करके बीजाणु निकाले गए, और बीजाणुओं के विभिन्न फार्मूले तैयार किए गए। डिब्बाबंद मटर में एक एच। बार्गेरा infestation के नियंत्रण के लिए फार्मूले के फील्ड परीक्षण यादृच्छिक ब्लॉक डिजाइन द्वारा किया गया। तेल और जलीय योगों (क्रमशः 78.0% और 70.9%) के साथ प्राप्त अवरोध नियंत्रण स्तर रासायनिक कीटनाशक से प्राप्त 63.4% से बेहतर थे।

Introduction

भारत में 1940 के दशक में organochlorine कीटनाशकों की शुरूआत से, कीटनाशकों के प्रयोग फसल कीट अभी भी कृषि उत्पादन में उपज हानि के मामले में रुपए 2 सालाना अरबों की लागत से कई गुना बढ़ गया है 1,। सिंथेटिक कीटनाशकों के व्यापक और गैर-न्यायिक उपयोग पर्यावरण और मानव स्वास्थ्य के लिए एक निरंतर खतरा है 1 । कीटनाशकों का अंधाधुंध उपयोग मिट्टी में अवशेषों की ओर जाता है और प्राकृतिक कीट शिकारियों की कमी है। यह कीट आबादी के आनुवंशिक मेकअप को बदलने के लिए एक शक्तिशाली चयन दबाव के रूप में भी कार्य करता है, जिससे प्रतिरोध 1 के विकास में वृद्धि हो सकती है। हरित क्रांति के भारी लाभ के बावजूद, जो उर्वरक और कीटनाशकों जैसे उच्च निविष्टियों की आवश्यकता होती है, कीटनाशक एक प्रमुख जैविक बाधा बने रहती हैं। भारत और दुनिया भर में रिकॉर्ड वार्षिक फसल हानियों का सामान्य अनुमान 12 अरब अमेरिकी डॉलर हैईएफई "> 2 और यूएसडी 2,000 बिलियन 3 , क्रमशः।

कीट कीटनाशकों को नियंत्रित करने के लिए जब रासायनिक कीटनाशकों के हानिकारक प्रभाव पड़ते हैं, तो वैकल्पिक तरीकों की खोज करना जरूरी हो जाता है जो पारिस्थितिक रूप से ध्वनि, विश्वसनीय, आर्थिक और टिकाऊ होते हैं। जैविक नियंत्रण एक उपयुक्त विकल्प प्रदान करता है और इसमें परजीवी, शिकारी, और माइक्रोबियल रोगजनक 4 का उपयोग शामिल है। मिसाल के तौर पर फंगी, किट कीटों की एक विस्तृत श्रृंखला को संक्रमित करने के लिए जाने जाते हैं, जिसमें लेपिडोप्टेरन्स, हाइमनोप्टेरैन्स, कोलेप्टेरैन्स और डिप्टेरेंस शामिल होते हैं, जो अक्सर प्राकृतिक एपिटॉयटिक्स होते हैं। इसके अलावा, अन्य बैक्टीरिया और वायरल कीट नियंत्रण एजेंटों के विपरीत, कीट रोगजनक कवक की कार्रवाई का तरीका संपर्क 5 से है । ये कवक 100 से अधिक प्रजातियों के एक हेल्टेरोजेनस ग्रुप में शामिल हैं, लगभग 750 प्रजातियां अलग-अलग कीड़ों में दर्ज हैं। महत्वपूर्ण फंगल रोगजनकों हैं: मेटारिज़ियम एसपी, बीवेरिया एसपी।, नोमुरेइया रिलेई , लेकिनिसिलियम लेकानी , और हिरसटेलला स्पॉ ।, कुछ नाम करने के लिए 6 एम। अनिसोप्लिआई (मेट्चनिकॉफ़) सोरोकिन, बायोकैंट्रोल में दूसरे सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया एंटोमोथाइडोजेनिक कवक है। यह कीड़ों की 200 प्रजातियों पर हमला करने के लिए जाना जाता है 7

इस अध्ययन में, एम। अनिसोप्लीय का उपयोग करते हुए मायकोपेस्टेसाइड के ज्ञान-आधारित विकास में शामिल विभिन्न चरणों को प्रस्तुत किया गया है। इसमें शामिल हैं: 1) सूक्ष्म एंटोमोथायोजेन्स के लिए एक स्रोत की पहचान ( यानी, मिट्टी या mycosed कीड़े), 2) एंतोपोथाजन पहचान और चयन, 3) प्रयोगशाला जैवसै और क्षेत्र में उनके जहरीली प्रकृति और प्रभावशीलता को बनाए रखने के लिए रणनीतियों ) संक्रामक प्रचारकों के लागत प्रभावी तैयार करने, 5) जहरीले तैयारी के लिए अद्वितीय गुणवत्ता नियंत्रण मानकों का विकास, और 6) बायोप्रोस्पेक्टिंग और मूल्य अतिरिक्त।

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Protocol

1. एंतोपोथाजनिक कवक की अलगाव

  1. मिट्टी कमजोर पड़ने का तरीका
    1. विभिन्न फसल क्षेत्रों ( तालिका 1 ) से मिट्टी के नमूनों और मायकोटेड कीड़ों को एकत्र करें। मृदा नमूनों को चढ़ाना विधि 8 का उपयोग करके मिटटी नमूनों से एंटोमोथाइडोजेनिक कवक को अलग करें
      नोट: इस अध्ययन में, नमूने पुणे (18 ° 31'13 '' एन, 73 ° 51'24''इ) और बुलढाणा (1 9 ° 58'36''N 76 ° 30'30'' ई ) जिले, महाराष्ट्र, भारत
    2. प्रत्येक मिट्टी के नमूने के 10 ग्राम वजन करें और उन्हें अलग-अलग 90 एमएल बाँझ 0.1% (डब्ल्यू / वी) के बीच -80 में जोड़ें।
    3. मिट्टी कणों का पालन करने वाले बीजों को जारी करने के लिए 60 मिनट के लिए एक चुंबकीय उत्तेजक का उपयोग करके नमूनों को अच्छी तरह से मिलाएं।
    4. मिश्रण करने के बाद, प्रत्येक नमूने से 200- μL अल्कोट्स को फैले हुए चयनात्मक माध्यम (जी / एल) पर फैलाना: पेप्टाफोन, 10; ग्लूकोज, 20; अगर, 18; स्ट्रेप्टोमाइसिन, 0.6; टेट्रासाइक्लिन, 0.05; cycलोहेक्सामाइड, 0.05; और डोडाइन, 0.1 एमएल; पीएच 7.0 9 3-7 दिनों के लिए 28 डिग्री सेल्सियस पर प्लेटें सेते।
    5. शुद्ध संस्कृतियों को प्राप्त करने के लिए एक ही माध्यम पर व्यक्तिगत sporulating कालोनियों का चयन करें और उपसंस्कृति
  2. Mycosed कीड़े से
    1. क्षेत्र से mycosed कीड़े इकट्ठा
      नोट: एनोमोपैथोजेनिक कवक से एक कठिन लार्वा निकाय संक्रमित होने की संभावना है। जीवाणु या वायरल संक्रमण के साथ, मृत कीट शरीर नरम है।
    2. असामान्य व्यवहार, खराब समन्वय और झटकेदार आंदोलनों के साथ जीवित कीड़े एकत्रित करें।
    3. कीड़े को मृत्यु तक रखें और फिर उन्हें मैक्सासिस और स्पोर्यूलेशन के लिए नम कक्षों में स्थानांतरित करें, यदि कोई हो, तो 28 डिग्री सेल्सियस और 70-80% आरएच।
    4. उपर्युक्त चयनात्मक माध्यम पर छिछले शवों से बीजाणुओं को छिड़कें और एक ही माध्यम पर 2-3 गुणा अधिक उप-संस्कृति द्वारा शुद्ध संस्कृति प्राप्त करें।
  3. चारा विधि
    1. मेंशीशी (3.85 x 6.0 सेंटीमीटर) जिसमें 60 ग्राम मिट्टी के नमूने होते हैं, 4 चावल की पतलून लार्वा ( कोर्सेरा सेफ्लोनिका ) को जोड़ें और 14 दिनों की अवधि के लिए 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर शीशियों को रखें।
    2. शीशियों को हर दिन उल्टा मुड़ें। 14 दिनों के बाद, मीकोल्ड चावल की पतलून लार्वा की उपस्थिति के लिए मिट्टी के नमूनों को स्क्रीन करें। चयनात्मक माध्यम पर शवों को स्पोरुलेट करने से बीजाणुओं को आकर्षित करके एंटोमोथायोजेनिक कवक को अलग करें।
    3. शुद्ध संस्कृतियों को प्राप्त करने के बाद, आलू डिक्सट्रोज़ अजर (पीडीए) स्लंट्स को आइसोलेट्स को स्थानांतरित करें और 7 दिनों के लिए 28 डिग्री सेल्सियस और 70-80% आरएच में सेवन करें। स्पोलेशन के बाद, उपयोग की जाने तक 8 डिग्री सेल्सियस पर मां संस्कृतियों को बनाए रखें।

2. Entomopathogenic कवक की पहचान

  1. आकृति विज्ञान विशेषताओं, ( यानी, अलैंगिक बीजाणु आकार और आकार और कोडीयोफोरेस पर बीजाणुओं की व्यवस्था) एंटोमोथायोजेनिक कवक की पहचान करें; 3 मुख्य पीढ़ी के आइसोलेट्स, Metarhizium, Beauv एरिया , और नोमुरेआ , पहचान की जा सकती है।
  2. मेटाहिरजियम उपभेदों की आणविक पहचान के लिए, एक डीएनए अलगाव किट का उपयोग कर माईसेलियल बायोमास से जीनोमिक डीएनए निकालना; निर्माता के निर्देशों का पालन करें ( सामग्री की सारणी देखें)। 0.8% agarose जेल पर वैद्युतकणसंचलन द्वारा जीनोमिक डीएनए की गुणवत्ता की जांच करें।
    1. पीसीआर- ITS1-5.8 एस-आईटीएस 2 और 26 एस आरडीएनए क्षेत्र को बढ़ाना आईटीएस 1 फॉरवर्ड (टीसीसीजीटीजीएटीसीएटीसीसीजीजी) और आईटीएस 4 रिवर्स (टीसीटीसीसीसीटीसीटीटीजीटीएटीटी) जीएम 10 के साथ टेम्पलेट के रूप में जीनोमिक डीएनए का प्रयोग करें।
    2. एक जेल निष्कर्षण किट का उपयोग करते हुए जेल-योग्य और अपेक्षित आकार के एम्प्लिकिक्स को शुद्ध करना; निर्माता के निर्देशों का पालन करें ( सामग्री की सारणी देखें)। शुद्ध एम्प्लिकॉन और अनुक्रम को बढ़ाएं
    3. सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके अनुक्रमों को पढ़ें और संपादित करें और एनसीबीआई जेनबैंक डाटा लाइब्रेरी में न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमों की एक ब्लेस्ट सर्च का प्रदर्शन करें जो करीब समरूपता का विश्लेषण करता है= "Xref"> 11
    4. प्रवेश संख्या को पुनः प्राप्त करने के लिए एनसीबीआई जेनबैंक डाटाबेस में पहचानी गई एतानोपैथोजेनिक आइसोलेट्स के दृश्य जमा करें।

3. एच। अरिगेरा के खिलाफ मेटहरिज़ियम अलगाव के स्क्रीनिंग

  1. कीट पालन
    1. क्षेत्र से कीट के स्वस्थ लार्वा और पिल्ला इकट्ठा करके एच। आरम्बिगेरा की प्रारंभिक संस्कृति की स्थापना करें।
    2. पालन ​​करने के लिए, लार्वा को व्यक्तिगत रूप से बाँझ पॉलिप्रोपिलिन शीशियों (3.85 x 6.0 सेंटीमीटर, 50-एमएल क्षमता) में बढ़ाना, जिसमें 10 मिनट 12 के लिए 0.5% (वी / वी) सोडियम हाइपोक्लोराइट के साथ कीटाणुशोधन के भस्मों के टुकड़े शामिल हैं।
    3. पालन ​​के दौरान रखी कीटों को इकट्ठा करें और उन्हें 0.5% (वी / वी) सोडियम हाइपोक्लोराइट के साथ बाधा डालें।
    4. लार्वा को 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस और 65 ± 5% आरएच बनाए रखें।
  2. कीट बायोसाय
    नोट: कीट बायोसाय के लिए, बीजाणुओं का उत्पादन,और फील्ड प्रदर्शन अध्ययन, mycosed एच। Armigera लार्वा से Metarhizium उपभेदों के पहले उपसंस्कृतियों का उपयोग किया गया, जब तक अन्यथा नोट नहीं किया
    1. कीट बायोसास के लिए, एच। अरिगेरा के तृतीय-इन्स्टार लार्वा का उपयोग करें।
    2. मार्जिरिज़ियम के 10-एमएल बीजाणु निलंबन में व्यक्तिगत रूप से 30 लार्वा का एक सेट अलग से 5 सेकंड के लिए (1 एक्स 10 7 बीम / एमएल, जब तक कि अन्यथा उल्लेख नहीं किया गया है; व्यवहार्यता> 90%)
    3. उपचार के बाद, प्रत्येक लार्वा व्यक्तिगत रूप से नरभक्षण से बचने के लिए एक अलग, बाँझ शीशी में स्थानांतरण करें। प्रत्येक शीशी के लिए, नमक वाला हैमैन फिल्टर पेपर नंबर 1 और फीड के रूप में कीटाणुरहित भेंक का एक टुकड़ा जोड़ें। वैकल्पिक दिनों पर कागज और फ़ीड को बदलें
    4. 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस, 65 ± 5% आरएच, और 16: 8 लार्वा पर लार्वा रखें: 14 दिन तक अंधेरा या मरने तक।
    5. मृत लार्वा को पेटी प्लेटों में बाँझ डालें, जिसमें नम कपास झाड़ू होता है और उन्हें 30 डिग्री सेल्सियस और 70-80% आरएच 3-7 दिनों के लिए रखें ताकि मैसीलिया और बीजाणु की अनुमति हो।शवों के ऊपर गठन
    6. एक नियंत्रण के लिए, 0.1% (डब्ल्यू / वी) बाईबल डिस्टिल्ड वॉटर में ट्विन -80 के साथ 30 लार्वा के सेट को तीन गुना में रखें।
    7. ताजा तैयार बीजाणु निलंबन का उपयोग करके तीनों प्रतियों का प्रयोग करें। औसत मूल्य प्राप्त करने के लिए तीन प्रयोगों से प्रतिशत मृत्यु दर पर आंकड़े इकट्ठा और जमा करें। एबॉट के सूत्र 13 का उपयोग करके सही प्रतिशत मृत्यु दर की गणना करें।
    8. एक यादृच्छिक पूर्ण ब्लॉक डिजाइन (आरसीबीडी) लेआउट का उपयोग करते हुए प्रयोगों को पूरा करें, प्रत्येक उपचार में 30 लार्वा के एक सेट में तीन प्रतियों के साथ। एच। बार्गेरा के खिलाफ प्रतिशत मृत्यु दर के आधार पर, व्यावसायिक उत्पादन के लिए सर्वश्रेष्ठ पृथक की अधिक स्क्रीनिंग के लिए मेटारिज़ियम अलग-अलग का चयन करें।
    9. एच। अरिगेरा III- इन्स्टार लार्वा के खिलाफ 90% मृत्यु दर का प्रदर्शन करने वाले आइसोलेट्स का चयन करें।
      नोट: यहां, 12 आइसोलेट्स का चयन किया गया था।
    10. इन अलगाव के एलटी 50 निर्धारित करें और आइसोलेट्स डिस्स्टेंट का चयन करेंसबसे तेज हत्या (कम समय में) रेटिंग
      नोट: यहां, 12 सबसे शक्तिशाली आइसोलेट से 5 अलग-अलग का चयन किया गया था।
    11. एलओसी 50 अलग-अलग सांद्रता (यानी, 1 × 10 3 , 1 × 10 5 , 1 × 10 7 , और 1 × 10 9 बीजाणु / एमएल) बीजाणु निलंबन का उपयोग कर चयनित आइसोलेट के मूल्यों को निर्धारित करें।
    12. निर्धारित करें कि मेटारिज़ियम का एलसी 50 एच। आरिगेरा के तृतीय-इन्स्टार लार्वा के खिलाफ अलग-थलग होता है जिससे उच्च मृत्यु दर के साथ पृथक होने वाले विषाणुओं में अंतर को पहचानने की संभावना बढ़ जाती है, जो केवल एक ही खुराक का उपयोग नहीं कर पाता है।

4. फील्ड प्रदर्शन स्टडीज के लिए एक मेटारिज़ियम के बीजाणुओं का उत्पादन

  1. एसएसएफ़ द्वारा मेटारिज़ियम स्पोर्स का उत्पादन
    1. एसएसएफ के लिए, की Metarhizium को अलग कर 2 एक्स 10 7 बीजाणुओं जोड़कर inoculum तैयार200 मिलीलीटर YPG (0.3% खमीर निकालने, 0.5% पेप्टाइन और 1.0%, ग्लूकोज) मध्यम। 48 घंटे के लिए झटकों (180 आरपीएम) के साथ फ्लास्क 28 डिग्री सेल्सियस से उतारना
    2. एसएसएफ़ द्वारा बीजाणुओं के बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए, एक सब्सट्रेट के रूप में चावल का उपयोग करें जब तक अन्यथा नोट नहीं किया जाता है।
    3. एसएसएफ़ के लिए, 2 किलो चावल के साथ आटोक्लेव बैग (0.5 माइक्रोन के एक माइक्रोवेव फिल्टर के साथ प्रकार / 14, 2 किलो क्षमता; 64 × 36 सेमी) भरें। बैग में चावल को 1,000 मि.ली. आसुत पानी जोड़ें और रात भर 14 सोखें। 45 मिनट 15 के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर लथपथ चावल के साथ बैग आटोक्लेव करें
    4. 48-एच-पुराने माइसीलियल इनोकुल्कम (10% इनोकुल्कम, 2 किलोग्राम चावल के लिए 200 एमएल) के साथ बैग को टीका डालना और 28 दिनों के लिए और 70-80% आरएच से 14 दिन तक का सेवन करें।
    5. 0.1% बीच 80 का उपयोग करते हुए तरल निष्कर्षण द्वारा बीजाणु काटा। इसके लिए, बैग की सामग्री को 0.1% ट्विल -80 (1 लीटर प्रति किलो चावल) में जोड़ें, अच्छी तरह से मिलाएं, तरल से स्प्रे को अलग करें, और 2 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर शुष्क करें। / Li>
    6. वैकल्पिक रूप से, नमी सामग्री (<20%) को कम करने के लिए 2 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर बीजाणुओं और कुछ मायसेलिया युक्त चावल युक्त बैग सूखा। एक मिको-फसल काटने वाले या विब्रो-सीफटर का प्रयोग करके बीजाणु काटा।
  2. व्यवहार्यता अध्ययन
    1. विभिन्न तरीकों का उपयोग कर कटा हुआ बीजों की प्रतिशत व्यवहार्यता निर्धारित करें 15 इसके लिए, 0.1% (डब्ल्यू / वी) के बीच -80 में बीजाणु निलंबन तैयार करें और गिनती को 1 × 10 3 बीमोड / एमएल में समायोजित करें।
    2. पीडीए प्लेटों पर बीजाणु निलंबन (0.1 एमएल) को तीन डिग्री में फैलाना और 72 डिग्री सेल्सियस के लिए 28 डिग्री सेल्सियस और 70-80% आरएच में सेते हैं।
    3. स्वतः पृथक कालोनियों की गणना करें और संबंधित नमूने के लिए कुल व्यवहार्य गणना करें।
  3. बीजाणु अवसादन दर
    1. एक समान खुराक के लिए, समरूप बीजाणु निलंबन की आवश्यकता है; जैसा कि वर्णित है Metarhizium के लिए बीजाणु अवसादन दर निर्धारित करता है Iolates"Xref"> 16 0.2 एम अमोनियम सल्फेट में बीजों की अवसादन दर और 0.1% बीच 80 की जांच करें।
    2. बीजाणु निलंबन की संख्या को समायोजित करने के लिए ~ 7 × 10 7 बीजाणु / एमएल के लिए प्रारंभिक absorbance प्राप्त करने के लिए 0.6 पर 540 एनएम। क्यूवेट्स को बीजाणुओं के लिए 6 घंटे के लिए बिना खड़े होने की अनुमति दें
    3. अप करने के लिए 6 घंटे के लिए absorbance रिकॉर्ड प्रतिशत में अवसादन दर को व्यक्त करें और 50% अवसादन (एसटी 50 ) के लिए आवश्यक समय की गणना करें। ताज़ा तैयार बीजाणु निलंबन के प्रयोग से तीन बार दोहराएं।

5. चयनित एम। एनिसप्लीय की क्षमता की फील्ड प्रदर्शन अध्ययन, एच। बार्गेरा को कबूतर मटर पर नियंत्रण करने के लिए पृथक करना

  1. एम। अनिसोप्लीय एम 34412 बीजों की वेटेबल पाउडर तैयार करना
    1. तालक के साथ बीजाणुओं को मिलाकर 2.5-5% शराबी पाउडर तैयार करें।
    2. अंतिम व्यवहार्य गिनती (टीवीसी) को 1 x 10 12 बिग को समायोजित करेंतैयार प्रति किलोग्राम का आकार
  2. एम। अनिसोप्लीआए एम 34412 बीजों के फील्ड प्रदर्शन अध्ययन
    1. चयनित एम। एनिसोप्लीय की क्षमता के क्षेत्र के प्रदर्शन के अध्ययन के लिए कबूतर के मटर में एच। आर्मिगेरा के उपद्रव को नियंत्रित करने के लिए पृथक किया गया, चार आरपीबीडी के साथ एक आरसीबीडी का उपयोग करें।
      नोट: यहां, महात्मा फुले कृषि विद्यापाठ (एमपीकेवी), राहुरी (1 9 .3 9 27 डिग्री एन, 74.6488 डिग्री ई) में प्रदर्शन किया।
    2. दो अलग-अलग स्प्रे फार्मूलों का उपयोग करें, बीजों का एक तेल तैयार (5 एक्स 10 12 बीजाणु / 3 एल डीजल: सूरजमुखी तेल, 7: 3) और ट्विन -80 (0.1%) में जलीय सूत्रीकरण। एक अल्ट्रा-कम वॉल्यूम (यूएलवी) स्प्रेयर (70 मिनट; 3 एल / हे।) के साथ तेल तैयार करने के लिए स्प्रेयर को नीपर स्प्रेयर (5 x 10 12 बीम, 500 एल / हे।
      नोट: यहां, लार्वल आबादी को स्प्रे से एक दिन पहले और 3 और 7 दिन बाद प्रत्येक स्प्रे के आवेदन के बाद 5 अनियमित चुना हुआ पौधों को दर्ज किया गया था। कुल आबादी टी थीसांख्यिकीय विश्लेषण के लिए n + 1 के वर्गमूल के लिए ransformed
      1. कबूतर मटर की खेती के लिए कृषि प्रथाओं के अनुसार, अंडा बिछाने के बाद 10 और 15 घ के बीच पहले छिड़काव और 14 दिन की अंतराल के साथ दो बार बार-बार प्रदर्शन करें। 16:00 और 18:00 एच आईएसटी के बीच छिड़काव करें। हवा की दिशा की निगरानी करें और, यदि आवश्यक हो, पड़ोसी भूखंडों के बीजों के बहाव से बचने के लिए कपड़ा पर्दे का उपयोग करें।
    3. तुलना करने के लिए, हाथ की संपीड़न के टुकड़े टुकड़े स्प्रेयर के साथ रासायनिक कीटनाशकों स्प्रे करें।
    4. एच। अरिगेरा लार्वा 0, 3, 5, 7, और छिड़काव के 14 दिन बाद इकट्ठा करके क्षेत्र में इनोकुल्म की दृढ़ता निर्धारित करें।
    5. इन लार्वा को 14 दिनों की अवधि के लिए निरीक्षण और मृत्यु के बाद रखें, उन्हें नम फिल्टर पेपर युक्त एक प्लास्टिक शीशी में स्थानांतरित करें। माइकोसिस का निरीक्षण करने के लिए 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस और 70 ± 10% आरएच सेते हैं।
    6. पी के आधार पर लार्वा जनसंख्या पर इनोकुल्म की दृढ़ता निर्धारित करें छिड़काव के बाद क्षेत्र से एकत्र लार्वा के उत्थान मृत्यु दर आंकड़े।
    7. प्रतिशत प्रभावकारिता 17 , प्रतिशत पॉड क्षति के आधार पर क्षेत्रीय अध्ययनों का मूल्यांकन करें, और प्रतिशत उपज 18 ।
      नोट: यहां, तापमान, आर्द्रता, पवन वेग (किमी / घंटा), धूप (एच), वर्षा (मिमी), बरसात के दिनों और वाष्पीकरण (एमएम) जैसी मापदंडों के लिए डेटा एक परीक्षण के दौरान दर्ज किया गया था कृषि विश्वविद्यालय (महात्मा फुले कृषि विद्यापीठ, राहुरी, 1 9 .3 9 27 डिग्री एन, 74.6488 डिग्री ई)
  3. किसानों की भागीदारी कार्यक्रम
    1. प्रदर्शन परीक्षणों के लिए किसानों की संख्या का चयन करें। किसानों के लिए उर्वरक के साथ कबूतर मटर के बीज (बीएसएमआर -736) की आपूर्ति करें।
      नोट: इस अध्ययन में, 20 किसान शामिल थे गांव: देवलाली प्रवरा, (1 9 .4373 ° ऩ 74.6 डिग्री ई)
    2. चरण 5 में समान स्प्रे फॉर्मूलेशन और स्प्रे की संख्या का प्रयोग करें।
6. गैर-लक्ष्यित जीवों पर प्रभाव

  1. कबूतर मटर के पत्तों पर, यदि कोई हो, म्यूकोइंसेक्टिसाइड स्प्रे का प्रभाव देखें।
  2. अनुपचारित भूखंडों में प्रत्येक उपचार के बाद और एम। अनिसोप्लीय के साथ इलाज किए गए भूखंडों में मृदा आवास आर्थथोपोड्स और पत्थरों में रहने वाले कीड़ों को इकट्ठा करें।
  3. इलाज के 24 घंटों के भीतर मिट्टी के रहने वाले आर्थ्रोपोड्स को इकट्ठा करें और उपचार के बाद सुबह ( जैसे, उपचार के बाद लगभग 15-18 घंटे के बाद) पर एक स्वीप नेट के साथ पत्ती पर रहने वाले कीड़े इकट्ठा करें।
  4. उन्हें व्यक्तिगत रूप से बेलनाकार प्लास्टिक के बक्से में 3.5 सेमी और 4.0 सेंटीमीटर ऊंचाइयों के व्यास में रखें। कीड़ों को संक्रमण के लिए दैनिक जांचें और उन्हें उचित भोजन के साथ भोजन करें।
  5. एम। अनिसोप्लीय की उपस्थिति को रिकॉर्ड करें, यदि सभी पर, और कवक को अलग करें।

7. गुणवत्ता नियंत्रण पैरामीटर की पहचान

  1. पीडीए पर बीसों के अंकुरण को 28 डिग्री से मापकर बीजाणु व्यवहार्यता की जांच करें;सी।
  2. पहले 15 के अनुसार वर्णित के रूप में, वाईपीजी और चिटिन मीडिया में उत्पादित चिटिनसे, चिटीन डेसेटीलेज़, चिटोज़ानस, प्रोटीज और लाइपेस के रूप में छेड़छाड़ की विकारजनक एंजाइम गतिविधियों को मापें।
  3. एच। बार्गेरा की प्रतिशत मृत्यु दर एक प्रयोगशाला जैवसै 15 में निर्धारित करें।
  4. डाह एम anisopliae के लिए जिम्मेदार बताते हैं के रूप में, इस तरह के Chitinases की एक पीसीआर RFLP पैटर्न (चिट 1, 2, और 4) और प्रोटीज (Pr1A) जीन के रूप में आणविक मार्कर, का प्रयोग करें।
    1. डीएनए अलगाव किट 15 का इस्तेमाल करते हुए मायसेलिया बायोमास से जीनोमिक डीएनए निकालें पीपीआर- प्राइमर जोड़े चिप 1 एफ / चिप 1 आर (सीटीसीटीजीसीएजीजीसीसीएक्टसीटीसीजीजीटी / AGCCATCTGCTTCCTCATAT) और चिट 2 एफ / चिट 2 आर (जीएसीएएजीसीएसीसीजीजीएजीसीजीसी / जीसीसीटीटीजीटीटीजीएसीसीटीटीजीजीटीएए) के साथ एक टेम्पलेट के रूप में जीनोमिक डीएनए का इस्तेमाल करते हुए चिप 1 और चिट 2 जीन के टुकड़े बढ़ाएं। चिट 4 के लिए , प्राइमर जोड़ी चिट 4 एफ / चिट 4 आर (एटीसीसीजीसीएजीसीएसीजीजीसीटीएसी / सीटीटीजीजीएटीसी CGTCCCAGTTG) का उपयोग करें।
    2. प्र 1 ए जीन के प्रवर्धन के लिए, एमईटीपीआर 2 और एमईटीपीआर 5 प्राइमर जोड़ी (एजीजीजीजीसीएजीसीएसीसीएसीएसीजीजीसी / टीजीसीसीएक्टैटटीजीजीसीसीजीजीसीजीसीजी) का उपयोग करें।
    3. BsaJI, BstUI, और ScrFI साथ Chit1 जीन के प्रतिबंध पाचन 19 प्रदर्शन करना; Alui, HpyCH4IV, और HpyCH4V, साथ और BstUI, HaeIII, और Mboi साथ Chit4 जीन की Chit2 जीन की। Pr1A जीन के पाचन के लिए, RsaI, DdeI, और MSPI 20 का उपयोग करें।
    4. प्रतिबंध विखंडन लंबाई बहुरूपता (आरएफएलपी) पैटर्न 1.5% agarose जेल पर वैद्युतकणसंचलन द्वारा प्रत्येक विषाणु तनाव (> 90% मृत्यु दर) के लिए प्रत्येक जीन के लिए देखें; यह एम। एनिसोप्लिआई के चयन के लिए एक विषमता मार्कर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

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Representative Results

जांच के दौरान, Metarhizium, Beauveria, और Nomuraea के अलग उपभेदों विभिन्न अलगाव तरीकों से पृथक किया गया (डेटा नहीं दिखाया गया है) 6, 14 Metarhizium उपभेदों के रूप में एच armigera, दाल 6 में एक भयानक कीट, 14 को नियंत्रित करने में अधिक प्रभावी पाए गए , अलग अलग फसल के खेतों और कीड़ों ( तालिका 1 ) से मेटहरिज़ियम उपभेदों को अलग करने के लिए आगे अलग-अलग को लक्षित किया गया था। प्राप्त की गई 68 मेटारिज़ियम आइसोलेट्स की कुल सांस्कृतिक और रूपात्मक विशेषताओं द्वारा पहचानी गई थी और इसका 1-5.8 एस-आईटीएस 4 अनुक्रमण प्रयोगशाला जैवसैस में एच। आररिगेरा की 90% मृत्यु दर के आधार पर, 12 माधेशाइज आइसोलेट का आगे बीमारी का उत्पादन, व्यवहार्यता, एलसी 50 , एलटी 50 और एसटी 50 के लिए परीक्षण किया गया। तालिका 2 डेटा का वर्णन करता है3 संभावित आइसोलेट्स, एम 34311, एम 34412 और एम 81123 के लिए; M34412 सबसे अच्छा प्रदर्शन करने वाला अलग पाया गया

जैसे चावल, बाजरा, मक्का, गेहूं के रूप में परीक्षण substrates, के अलावा, चावल समर्थित Metarhizium के मामले में अधिकतम sporulation आइसोलेट्स (बीजाणुओं / kg की 60-75 ग्राम, 4-4.4 x 10 10 बीजाणुओं / बीजाणु पाउडर के छ) ।

कबूतर मटर में एच। अरिगेरा के नियंत्रण के क्षेत्र में फील्ड परीक्षण के दौरान, क्रमशः एम। एनिसोप्लीएई एम 34412 तेल और जलीय फार्मूलों से 78.0% और 70.9% व्यंजन प्राप्त किये गये थे । एम। अनिसोप्लीय-ट्रीटेट प्लॉट्स में पोड क्षति अनुपचारित नियंत्रण भूखंड (23.63%) और रासायनिक उपचार वाले भूखंडों (10.24%) की तुलना में कम (8.76%) पाया गया था। अनुपचारित नियंत्रण में औसत उपज (क्यू / हेक्टेयर) 7.31 क्विं / हेक्टेयर था, जो एम। एनिसोपिलिया एम 34412 उपचार (14.04 क्विं / है।) के बाद की तुलना में कम था। रासायनिक पदार्थों के साथ इलाज ने 12.78 क्विं / हेक्टेयर ( तालिका 3 ) की उपज दी।

Phytotoxicity लक्षणों के लिए दर्ज टिप्पणियों से पता चला है कि कोई इलाज एम। Anisopliae तैयार करने के 3 स्प्रे के बाद कबूतर मटर फसल पर एक phytotoxic प्रभाव दिखाया। 57 एकत्रित मृदा-आवास आर्थ्रोपोड्स (फील्ड क्रिक और मकड़ियों) में से कोई भी संक्रमित नहीं हुआ था। 590 एकत्रित चंदवा-निवासित आर्थ्रोपोड में से, ऑर्डर ऑफ होटरोप्टेरा (एकत्रित आर्थ्रोपोड्स का = 0.3%) के दो व्यक्ति एम। अनिसोप्लीय ( तालिका 4 ) से संक्रमित पाए गए थे। न तो मकड़ियों और न ही कोकाइनाइलिड्स फंगस तक पहुंच गईं।

मिट्टी (58 आइसोलेट्स)
अलग नहीं फ़सल आइसोलेट्स की संख्या
एम 1311, एम 1322, एम 1333, एम 2104, एम 2305, एम 2416, एम 2427, एम 2508, एम 42014, एम 45115, एम 45216, एम45317, एम 7 9 20, एम 7 9 221, एम 7 9 322 टमाटर 15
एम 3419, एम 34210, एम 34311, एम 34412, एम 34513, एम 171264 शरीफा 6
M81123, एम 9 1124, एम 9 1225, एम 91326, एम 9 1528, एम 9 1427, एम 9 1629, एम 9 1730, एम 9 1831, एम 9 1 9 32, एम 111145 गन्ना 1 1
एम -101133, एम -101234, एम -101335, एम -101436, एम -101537, एम -101638, एम -101739, एम 1 101840, एम -101 9 41, एम 102042, एम 102143, एम 102244 बैंगन 12
एम 51118, एम 51219 ओकरा 2
एम 131150, एम 141151, एम 141252, एम 151153 कबूतर मटर 4
एम 121146, एम 121247, एम 121348, एम 121449 काबुली चना 4
M183365 कपास 1
M193166 Jawar 1
कीट मेजबान (10 पृथक)
एम 16255, एम 16356, एम 16457, एम 16558, एम 1665 9 कबूतर मटर-चिकना कटोरा 5
एम 16154, एम 16760 गन्ना-मीली बग 2
M16861 गन्ना-सफेद ग्रब 1
M16962 गन्ना-बीटल 1
M161063 गन्ने-पिरिला पेपरसिला 1

तालिका 1. मेटारिज़ियम उपभेदों की उत्पत्ति। 68 माधेशाइज उपभेदों को विभिन्न फसलों के खेतों (58 प्रजातियों) से अलग किया गया था और फसल क्षेत्रों (10 प्रजातियों) से की गई कीड़े कीड़े।

पृथक यील्ड (जी / किग्रा चावल) व्यवहार्यता (%) 50 टी 80 में (एच) एलसी 50 (एक्स 103 बीमोड / एमएल) एलटी 50 (दिन) मृत्यु दर (%)
मतलब ± एसडी मतलब ± एसडी (फिड्यूशियल लिमिट) (फिड्यूशियल लिमिट) (फिड्यूशियल लिमिट)
M34311 60.00 ± 2.64a 92.00 ± 2.64a 2.47 (2.26-2.6 9) 2 (0.4-10.3) 3.5 (3.2-3.7) 96.67
M34412 67.00 ± 3.46b 97.00 ± 1.73a 2.3 (2.11-2.52) 1.4 (0.1-1.9) 3.3 (3.0-3.6) 96.67
M81123 75.00 ± 3.60c 93.00 ± 1.73a 2.65 (2.43-2. ​​90) 5.7 (1.2-26.7) 3.3 (3.1-3.6) 95.56
कॉलम के भीतर एक ही पत्र के बाद नंबर सांख्यिकीय नहीं है।
अनुसूचित जनजाति 50 , 0.1% (डब्ल्यू / वी) में 80% स्पोर्स के अवसादन के लिए आवश्यक समय 80
कॉलम के भीतर एक ही पत्र के बाद नंबर सांख्यिकीय नहीं है। एसडी, मानक विचलन T80, बीच 80 (0.1%, w / v)
एलसी 50 , मस्तिष्क की मस्तिष्क की घातक एकाग्रता 14 दिनों के बाद एच। आररिगेरा की 50% मृत्यु दर के कारण गणना की गई।
एलटी 50 , मस्तिष्क के मस्तिष्क घातक समय को एच। आरिगेरा की 50% मृत्यु दर के कारण गणना की गई।

तालिका 2. तीन सर्वश्रेष्ठ प्रदर्शन वाले मेटारिज़ियम का चयन अलग है। एच के साथ कीट bioassays में प्रदर्शन के आधार पर चयन किया गया था 3 -instar लार्वा armigera।

प्रदर्शन के परीक्षण (किसान 'सहभागिता कार्यक्रम) $ $ $
फ़ील्ड परीक्षण $
इलाज % प्रभावकारिता * यील्ड (क्यू / हेक्टेयर)
एक्कोस एम। एनिसोप्लीयाई एम 34412 (5x 10 12 बीजा / हेक्टेयर) 500 एल 70.93 ± 4.1 9 14.04
तेल तैयार करना ( एम। एनिसोप्लीय ) (5x 10 12 बीमोड / हेक्टेयर) 3 एल 78.02 ± 4.61 15.53
रासायनिक कीटनाशक / किसान अभ्यास (2ml / एल, 500 एल / हेक्टर) 63.43 ± 0.85 12.78
अनुपयुक्त नियंत्रण - 7.31
इलाज % क्षतिपूर्ति यील्ड (क्यू / हेक्टेयर)
जलीय संरचना ( एम। एनिसोप्लीआ ); क्षेत्र 4.2 हेक्टेयर 15.9 ± 1.26 10.75
तेल तैयार करना ( एम। एनिसोपलिआ ); क्षेत्र 0.4 हेक्टेयर 17.74 12.5
किसानों का अभ्यास; क्षेत्र 11ha 22.72 ± 3.37 7.55
सिंचित फसली
$ यादृच्छिक ब्लॉक डिजाइन
* हेंडरसन और टिल्टन के बाद (1 9 55)
# हेएनपीवी, एच। आर्मिगेरा न्यूक्लेप्लोहाइड्रोवायरस
$$ एनप्रदर्शन परीक्षणों में शामिल किसानों की संख्या 20 थी। कबूतर मटर बीज (बीएसएमआर -736) किसानों को उर्वरकों के साथ आपूर्ति की गई थी। गांव: देवलाली प्रवरा, ताल राहुरी। जिला। ए'नगर (एमएस)
(19.473 डिग्री एन 74.6 डिग्री ई)

तालिका 3. एम। एनोस्प्लिया ( एम 34412) एच । आरिगेरा के खिलाफ तनाव का क्षेत्रफल। एम। एनिसोपिया के विभिन्न फार्मूले के व्यंजनों को क्षेत्रीय परिस्थितियों के अंतर्गत कबूतर मटर में एच। बार्गेरा infestation के खिलाफ रासायनिक कीटनाशक उपचार के साथ तुलना की गई थी।

पैरामीटर फ़ील्ड 1 फ़ील्ड 2 फ़ील्ड 3
प्लॉट का आकार (मी) 12 x 17 10 x 10 10 x 15
प्रतिकृति 2 2 2
# पेथफॉल जाल से आर्थथोड्स का परीक्षण किया गया 20 22 15
% एम। एनिसोपलिआ (पीटफॉल जाल) से संक्रमित एन डी एन डी एन डी
# स्वीप नेट कलेक्शन से आर्थ्रोपोड्स का परीक्षण किया गया 193 171 226
% एम। एनिसोपलिआ (स्वीप नेट कलेक्शन) से संक्रमित एन डी एन डी 0.9
एनडी, पता नहीं चला
फील्ड 1, कृषि महाविद्यालय, पुणे; फील्ड 2, एनजीओ 1, तुलपुर, पुणे; फील्ड 3, एनजीओ 2, आलैंडी, पुणे
"> तालिका 4. गैर-लक्ष्यित आर्थ्रोपोड्स पर एम। अनिसोप्लीय उपचार के प्रभाव। दो अलग-अलग प्रतिकृतियों में तीन अलग-अलग क्षेत्रों में टिप्पणियां दर्ज की गईं। एकत्र किए गए किसी भी गैर-लक्षित कीड़े पर कोई प्रभाव नहीं देखा गया।

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Discussion

1880 के दशक के दौरान, पहला प्रयास scarab बीटल, Anisoplia austriaca, और चुकंदर curculio नियंत्रित करने के लिए Metarhizium उपयोग करने के लिए बनाया गया था, Cleonis 21 punctiventris। इस प्रोटोकॉल में, किसी एक चीज में से एक को जहरीले तनाव को अलग करना था, या तो मिट्टी से या संक्रमित कीड़ों से दरअसल, एलसी 50 , एलटी 50 और एसटी 50 जैसी अन्य मापदंडों ने उत्पाद 22 , 23 की लागत-प्रभावशीलता में महत्वपूर्ण योगदान दिया। बीजाणु के उत्पादन के अनुकूलन के लिए, बीजाणुओं, व्यवहार्यता और विषमता की संख्या के बीच एक नाजुक संतुलन 24 को बनाए रखा गया था।

चूंकि कृषि एक उच्च मात्रा वाले कम लागत वाले उत्पाद हैं, गुणवत्ता की धारणा, अंत उपयोगकर्ताओं द्वारा स्वीकार्यता, और बीजाणुओं की शैल्फ जीवन प्रमुख चिंताएं हैं गैर-लक्ष्य प्रभाव से बचने के लिए मेजबान विशिष्टता फायदेमंद है= "Xref"> 14 कृत्रिम माध्यम पर दोहराए जाने वाले उपसंशोधन और कीट मेजबान के माध्यम से कभी-कभी पारित होने से बचाव क्षेत्र 22 में मेटहरिज़ियम बीजाणुओं की जबरदस्तता और प्रभावशीलता को बनाए रखा। प्रस्तुत दृष्टिकोण में सीमाएं हैं: तैयारी अधिक प्रभावी होती है जब आर्थिक दहलीज स्तर ~ 2-3 लार्वा प्रति संयंत्र होता है, और बीजाणु अंकुरण उच्च नमी और अपेक्षाकृत कम तापमान की उपस्थिति में अधिकतम होता है।

यहां, संपर्क के बाद कवक की तैयारी प्रभावी होती है, जबकि जीवाणु (बीटी) और वायरल तैयारी (-एचएएनपीवी) केवल पचाने पर प्रभावी होती है गुणवत्ता नियंत्रण मानकों के मुकाबले, पहली बार स्पोर्स की व्यवहार्यता के अलावा, यह सुझाव दिया गया है कि जैव रासायनिक और आणविक मार्करों को छल्ली-अपमानजनक एंजाइम गतिविधियों और एक ही एंजाइम जीन की विशिष्ट प्रतिबंध पाचन पद्धतियों पर आधारित प्रभाव में आश्वासन दिया जा सकता है। मैदान। गुणवत्ता-उलटओ एल मापदंडों का सुझाव है: (ए) बीजाणु व्यवहार्यता, बीजाणु अंकुरण के रूप में मापा जाता है (पीडीए पर 90% 28 डिग्री सेल्सियस और 70-80% आरएच के बाद होना चाहिए); (बी) एच। अरिगेरा की प्रतिशत मृत्यु दर (प्रयोगशाला जैवसै में 1 एक्स 10 7 बीजों के साथ> 90% होना चाहिए); (सी) 72 घंटे के बाद चिटिन मध्यम में चीटिनेज गतिविधि (3.5 एक्स 10 -3 यू / एमएल होना चाहिए); और (डी) पीसीआर-आरएफएलपी पैटर्न का उपयोग चिटिनस जीन के। इस पांडुलिपि में अनिवार्य रूप से प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है, जो कि एंटोमोथेथोजेनिक कवक के अलगाव से क्षेत्र में लक्षित कीट के खिलाफ प्रभावकारी डेटा की पीढ़ी तक है। भारत की केन्द्रीय कीटनाशक बोर्ड के साथ किसी बायोपेस्टीसाइड के फार्मूलेशन को पंजीकृत करने के लिए और, अंततः, व्यावसायीकरण के लिए यह एक शर्त है।

यहां वर्णित प्रयोगों की श्रृंखला एक संभावित म्यूकोइंसेटाइटीड के विकास के लिए उपयोगी होगी। इसके अलावा, बीजाणुओं की निकासी के बाद, अपशिष्ट मायसेलियल बायोमास का उपयोग इसके लिए किया जा सकता हैपौधे की वृद्धि को बढ़ावा देने या स्वास्थ्य सेवा अनुप्रयोगों के लिए चिटोजान या ग्लूकोस्माइन पॉलिमर के अलगाव के लिए।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

लेखक बायोटेक्नोलॉजी, नई दिल्ली के डिपार्टमेंट एंड कोऑपरेशन, बर्न, स्विटजरलैंड के बायोटेक्नोलॉजी (आईएससीबी) प्रोग्राम के इंडो-स्विस सहयोग से सहयोगियों के योगदान को स्वीकार करते हैं। मृदुसंस्कृति के विकास में शामिल परियोजना छात्रों और कर्मचारियों के योगदान, वंदना घोरमेड, पल्लवी नहर, प्रिया यादव, शुक्लंगी कुलकर्णी, मनीषा कपूर, संतोष चव्हाण, रवींद्र विधाता, शामला माने और अभिजीत लांडे सहित, को स्वीकार किया जाता है। ईकेपी और एसजीटी रिसर्च फेलोशिप के लिए, क्रमशः, विश्वविद्यालय अनुदान आयोग, भारत और भारतीय वैज्ञानिक और औद्योगिक अनुसंधान परिषद (सीएसआईआर) का धन्यवाद करते हैं। एमवीडी एमेरिटस साइंटिस्ट स्कीम के लिए औद्योगिक और वैज्ञानिक अनुसंधान परिषद, नई दिल्ली का समर्थन स्वीकार करता है। आईएससीबी और एसबीआईआई कार्यक्रमों के तहत वित्तीय सहायता के लिए लेखक बायोटेक्नोलॉजी, नई दिल्ली, भारत के लिए आभारी हैं। हम के लिए आभारी हैंउनके इनपुट के लिए समीक्षक

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agar Hi-Media RM666 Reagent
Ammonium sulphate  Thomas Baker 11645 Reagent
DNA analyzer  Applied biosystem ABI prism 3730   Instrument
DNA islation kit Qiagen 69104 Reagent
Dodine Sigma 45466 Reagent
Gel extraction kit Qiagen 28604 Reagent
Glucose Hi-Media GRM077 Reagent
Knapsac sparyer Kaypee HY-16L (1004) Instrument
Peptone Hi-Media RM006-500G Reagent
Polypropylene vials  Laxbro SV-50 Plasticware
Potato dextrose agar (PDA)  Hi-Media M096-500G Reagent
Tween-80 SRL 28940 Reagent
Ultra low volume sparyer Matabi INSECDISK Instrument
Unicorn-bags  Unicorn UP-140024-SMB Autoclavalbe bag for SSF
Yeast extract Hi-Media RM027-500G Reagent
Chromas 2.1 software

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References

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