Summary
Förstå emalj bildandet och eventuella förändringar krävs studier av ameloblast aktivitet. Här beskriver vi en tillförlitlig och konsekvent metod för att mikro-dissekera emalj organ som innehåller sekretion - och mognad-stegs ameloblasts som kan användas för ytterligare kvantitativa och kvalitativa experimentella rutiner.
Abstract
Emalj defekter uppkommer miljöförhållanden och livsföringar är folkhälsoproblem på grund av deras höga prevalensen. Dessa defekter resultat från förändrad aktivitet av celler som ansvarar för emalj syntes heter ameloblasts, som presenterar i emalj orgel. Under amelogenesis följer ameloblasts en specifika och exakta händelseförlopp av proliferation, differentiering och döden. En råtta som ständigt växande framtänderna är en lämplig experimentell modell att studera ameloblast aktivitet och differentiering stadier i fysiologiska och patologiska förhållanden. Här beskriver vi en tillförlitlig och konsekvent metod för att mikro-dissekera emalj organ av honråttor som exponerats för miljögifter. De micro-dissekeras dental epitel innehåller sekretion - och mognad-stegs ameloblasts som kan användas för kvalitativa experiment, såsom immunohistokemi analyser och i situ hybridisering, samt kvantitativa analyser såsom RT-qPCR, RNA-seq och Western blotting.
Introduction
Många utvecklande emalj defekter kan bero på exponering för miljögifter och/eller olämplig livsstil1,2,3,4. Karakterisering av störa händelser och molekyler av amelogenesis använder för närvarande beskrivs förfarandet kommer att främja användningen av resulterande emalj defekter som tidiga markörer för exponering för flera ämnen, och kan hjälpa till att rekonstruera historien om hälsa varje patient under den perinatala perioden när emaljen är synthetized1,2. Emalj syntes kan delas in i fyra huvudsakliga stadier beroende på ameloblast aktivitet5. Det första steget innefattar föregångare cell och pre-ameloblast spridning. Under det andra steget utsöndrar differentierade ameloblasts emalj matrix proteiner (EMPs), främst amelogenin, enamelin och ameloblastin, som bestämmer tjockleken på den slutliga emaljen. Således, störningar av EMP syntes leder till kvantitativa defekter av emalj. Efter nedfallet av full emalj tjocklek börjar mognad scenen. Under detta stadium kan apatit naturgrafiten tillväxt i bredd och tjocklek emaljen att nå högsta mineralisering förhållandet hittade i en biologisk vävnad, med upp till 96% av vikten. Hormonstörande händelser som inträffar under mognaden skede leda till kvalitativa emalj defekter. Slutligen, ameloblasts in i en fas av efter mognad, även kallad pigmentering hos gnagare och genomgå apoptos under tanderuption att göra emalj defekter (om någon) irreparabel och oåterkalleliga, defekter ger därmed potentiella retrospektiv registrering av ameloblast betonar. Hos gnagare följer amelogenesis en liknande händelseförlopp med särdragen som deras framtänder växer kontinuerligt, vilket gör dem en lämplig modell för att studera den allmänna processen av amelogenesis. Således, störningar i amelogenesis resulterar i förändringar av emalj kvalitet eller kvantitet, beroende på tid-fönstret av hormonstörande händelsen. I det avseendet exponering för dioxin, bly och hormonstörande kemikalier (hormonstörande ämnen) som bisfenol A (BPA), genistein och vinklozolin, har visat sig generera emalj hypomineralizations1,2,3 ,6,7,8. Asymmetrisk vit ogenomskinlig ställen identifierades på på framtänderna hos råttor som utsätts för en låg dos BPA dos under fostrets och den första månaden efter födseln1. Dessa emalj defekter hos råttor, och de av mänskliga molar framtand hypomineralization (MIH), har likartade kliniska, strukturella och biokemiska egenskaper. MIH är en nyligen beskriven tandemaljen patologi, för som etiologi är fortfarande oklart9,10 trots många orsaksfaktorer har hypoteser om9,10,11 ,12.
En annan viktig emalj hypomineralization patologi på grund av miljöfaktorer är dental fluoros (DF), som är en följd av överdriven fluor absorption (> 0,1 mg/kg/dag)13,14. Den huvudsakliga källan av fluorid är dricksvatten som är antingen kompletteras eller naturligt berikad med fluor. Fluor är också ofta ordineras för att förhindra karies, men profylaktisk dosen är endast 50% lägre än giftiga one (≤0.05 mg/kg/dag). MIH och DF, två täta patologier som följd av exponering för miljöfaktorer, kan lägga fram gemensamma funktioner som behöver att präglas på grund av potentiering av hypomineralizing effekterna av fluor i kombination med andra gifter såsom hormonstörande ämnen2 eller amoxicillin15.
Micro-dissektion av råtta emalj organ som innehåller ameloblasts olika differentiering skeden hjälper till att förstå verkningsmekanismen av molekyler kan störa ameloblast aktivitet och orsaka emalj defekter ska diagnostiseras efter tanderuption. Med andra ord, karakterisering av förändringar i emalj gen uttryck och emalj matrix sammansättningen på grund av miljögifter kan beredning av historien av exponering för gifter och underlättar miljösäkerhet övervakning för allmänheten hälsa.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla djur som används i den aktuella studien bibehölls enligt riktlinjer för skötsel och användning av försöksdjur från det franska ministeriet för jordbruk (A-75-06-12).
1. djurs exponering för gifter
- Innan du utför detta protokoll, erhålla nödvändiga institutionella godkännande och se till att följa alla djurvård riktlinjer.
- Gäller utformningen av protokollet forskning så att konstitutionen av olika experimentella grupper för att testa effekterna av den molecule(s) som undersökt på ameloblast sekretion etapp och den ameloblast mognad. Fyra grupper av manliga Wistar råttor utgj橬一j här, beroende på deras exponering för fluor (NaF) i kombination eller inte med BPA (figur 1A)2. Alla djur var observerade och dissekerade dag 65 (figur 1B).
2. dissekering av Hemi-Underkäkar från vuxna råttor
- Avliva råttor av CO2 kvävning, eventuellt följt av halshuggning i separata huvudet från resten av kroppen. Exponera råttor till CO2 för 5 min i en särskild ruta16.
- Ta bort alla hud från nedre läpparna med en #11 skalpell för att få enkel tillgång till de nedre framtänderna.
- Med den samma skalpell, gör ett snitt mellan de två nedre framtänderna med ett lätt tryck och underkäken kommer att delas i två halvor.
- Skär den temporal mandibular joint med en skalpell ta loss käken, och håll hemi-underkäken med fin pincett.
- Skär omgivande mjukdelar med en skalpell och ta bort alla muskler, senor och ligament som med en skrapa tills benet är helt ren.
3. isolering av framtand17,18
- Noggrant raka bort benet genom att placera bladet parallellt med stora längdaxel framtand. Börja på beniga åsen nära tips av framtand (proximala änden) fram till slutet av framtand nära cervikal slingan. Snitt rörelse intäkter från den proximala i distal riktning.
- Göra en första snittet distalt till livmoderhalscancer slingan med en skalpell att ta bort gonion av hemi-underkäken och tillåta lyfter framtand enkelt utan att skada den cervikala loopen eller den sekretoriska fasen av ameloblasts (röda linjen i figur 2).
- Göra ett andra snitt under andra molar och infoga skalpell mellan benet och den mediala ytan av en framtand. När alla basala benet lyfts, rotera utåt framtand och ta bort det försiktigt för att undvika emalj orgel vävnad försämra med fin pincett.
4. micro-dissekering av emalj orgel under Binocular lins
- Släppa 200 µL saltlösning fosfatbuffert (PBS 1 X) på den framtand med pipett. Ta framtand med fin pincett med labial ytan vänd uppåt. Göra en skalpell mark mellan den färglösa och orange delar av vävnad. Detta märke motsvarar den underliggande vita fläcken som är observerbar efteråt (figur 2).
- Skrapa, med en grävmaskin eller motsvarande verktyg, cellens yta från skalpell mark till apikala delen motsvarande till sekretion scenen (färglös) ameloblasts och skalpell märket till spetsen av framtand för den mognad scenen (orange) ameloblasts.
- Ta bort 2 mm vävnaden motsvarar övergångsfasen, som tidigare beskrivits19. Öppna inte framtand under emalj orgel dissektion att undvika kontaminering av mesenchyme.
- Skär cervikal slingan ligger omedelbart på den apikala delen av framtand (figur 2) som tidigare beskrivits20.
- Samla det i 10% formalin eller Lys lösning för vidare utredning (se Tabell för material).
5. insamling av separerade emalj Organ vävnader för ytterligare undersökningar
- Släppa 200 µL PBS 1 X buffert på en framtand.
- Med #11 skalpell blad, försiktigt loss dental epitelceller gradvis i bufferten, separat för varje etapp med hjälp av skalpell märket gjort tidigare.
- För cell RNA och protein extraktioner, sätta vävnaden i en Lys-lösning som gör utvinning av både proteiner och RNA (se Tabell för material).
Obs: Förbereda hög kvalitet RNAs genom att vrida den vävnad-grävmaskinen i röret, och sedan slipning cellerna tills en homogen blandning. Blandningen är klar för RNA och protein extraktioner enligt tillverkarens förfarande, som var tidigare beskrivna2,8,17. Vanligtvis, om 5-10 µg totalt RNAs och 150 µg totalt proteiner erhölls för tillredningen. - För histologiska analyser lägga immunhistokemi (IHC), och i situ hybridisering (ISH), det cell-lagret i 10% formalin för 2 h, sedan förvaras vid 4 ° C i PBS 1 X. Vävnaden kan sedan bäddas in vax/paraffin eller vävnad OCT för frusna snitt.
- För EMP extraktioner, ta framtand med fin pincett. Efter en kort exponering för luft (liten uttorkning) syns en vit fläck runt mittendelen av labial yta på framtand, som representerar inledandet av emalj mineraliseringen. Denna vita fläcken motsvarar till den övergång- / tidigt mognad-skede av ameloblasts, så Använd den som en indikator för utvinning av EMPs21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Många emalj defekter, såsom dental fluoros12,13, kan resultera från miljöförhållanden på grund av alltför stor fluor absorption eller emalj hypomineralization liknar MIH på grund av exponering för vissa hormonstörande ämnen1, 7,22. Dessa utvecklingsmässiga emalj defekter får reproduceras experimentellt på råttor (figur 1)1,2,7,23,24. Rat hemi-underkäken innehåller en enda framtand separerade från tre molarer av ett gap som kallas diastemaen. Den ständigt växande framtand innehåller två mineraliserade vävnader, dentinen produceras av odontoblaster och emaljen produceras av ameloblasts närvarande i emalj orgel med andra epitelceller (figur 2). Den gnagare framtand verkar vara en lämplig modell för att studera amelogenesis som, tvärtemot kindtänderna, den innehåller alla ameloblast spridning/differentiering stadier under hela djurets liv.
Micro-dissekeras emalj orgel från råtta framtand kan separeras enligt ameloblast differentiering scenen med hjälp av en vit fläck som visas efter en liten uttorkning, och detta kan användas som en indikator på övergång-scenen mellan sekretion - och mognad-steg19,21,25. Kvaliteten på mikro-dissekeras emaljen vävnader kan kontrolleras genom trikrom Masson är färgning (figur 3A). Mikroskopisk observation visade typisk emalj epitelceller och ameloblast palisade. Frånvaron av mesenkymala kontamination intygades av avsaknaden av kollagen grön färgning (figur 3A) och yttrandefrihet (figur 3B). Dessa mikro-dissekeras vävnader kan användas för qualitative analyses såsom IHC (figur 3 c) och ISH och kvantitativa analyser som RT-qPCR (figur 3B), RNA-seq och Western blotting. Till exempel androgenreceptorn specifikt var lokaliserade i den mognad-steg ameloblasts använder en specifik antikropp riktad mot detta protein (se Tabell för material) (figur 3 c)8. De huvudsakliga ameloblast differentiering stadierna kännetecknas av specifik gen uttryck mönster26 som kan identifieras på mikro-dissekeras emalj orgel. Till exempel sekretion-steg ameloblasts express enamelin2 och mognad-steg ameloblasts express Kallikrein 4 (KLK4) (figur 3B). De innehåller höga halter av ferritin som ger möjlighet att lagra stora mängder järn, som ansvarar för den orange färgen emalj27.
Fluorid störningar av amelogenesis kan enkelt följas genom observation av cell lysates för RNA extraktioner: styra mognad-steg lysates var orange, medan fluor-behandlade dem var ljus gul till färglös (figur 4A). Analys av RNA-nivåer som utvinns från mikro-dissekeras mognad-scenen emalj organ visade KLK4 down-förordning vid fluor behandling (figur 4B), som var också framgår av en storskalig transcriptomic analys rapporterade nyligen2. Specifika proteiner uttrycks antingen genom sekretion eller mognad-steg ameloblasts kan också lokaliseras med hjälp av mikro-dissekeras emalj orgel28. Exempelvis var androgenreceptorn specifikt lokaliserade använder mikro-dissekeras emalj orgel8,28.
Figur 1: emalj defekter som observerats på honråttor som exponerats för fluor (NaF) i kombination eller inte med bisfenol A (BPA). (A) Schematisk bild av de fyra experimentella grupperna av Wistar råttor utgjorde för den aktuella studien, grupper som berodde på de olika miljömässiga villkor tillämpas på råttorna. Från graviditetsdiabetes dag 1 (betäckning) fram till avvänjning dag 21 (P21), var 5 µg/kg BPA i 0,5 mL av majsolja oralt genom sondmatning dagligen till dräktiga och digivande honor, medan majsolja ensam administrerades till kontrollgruppen. Efter avvänjning, varje dam identifierades och slumpmässigt fördelade i en av de motsvarande två grupperna. Hanråttor valdes ut för denna studie och utsätts för 5 µg/kg/dag BPA ensam, 5 mM NaF ensam, eller båda på samma dos tills 65 dagar efter födseln (P65). Kontrollgruppen fick lösningsmedel ensam. (B) vid postnatal dag 30 (P30), uppvisade råttor kroniskt exponeras för låg dos BPA vita ogenomskinliga fläckar och en längre uppenbar dental fenotyp identifierades för vuxna råttor (P65). Alternerande vita och orange band av typiska dental fluoros (DF) observerades hos råttor som behandlades med NaF. En mer allvarlig fenotyp som kännetecknas av en viktig framtand missfärgning identifierades hos råttor som utsätts för både agenter. Homogen orange incisala emalj kännetecknas kontroll råttor. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: schematisk representation av förfarandet. Isolering av ameloblasts från sekretion - och mognad-stadier från mikro-dissekeras emalj orgel. Rat hemi-underkäken innehåller tre kindtänder och en ständigt växande framtand med två mineraliserade vävnader, dentinen produceras av odontoblaster (i gult) och emaljen produceras av ameloblasts (i orange). När framtand är isolerade och något uttorkad, är en vit fläck nära den apikala delen av labial ytan observerbara. Det hjälper till att identifiera ameloblast skede av differentiering, eftersom det omfattar övergångsfasen mellan de sekretion - och mognad-stadier. Emalj orgeln är noggrant mikro-dissekeras, separerade i 3 delar beroende på ameloblast differentiering stadier och används antingen för kvalitativa (histologisk) analys eller kvantitativa experimentella metoder (mRNA och protein analyser av RT-qPCR och Western blotting, respektive).
Figur 3: kvalitetskontroll av mikro-dissekeras sekretion - och mognad-stadier av emalj orgel. Rat emalj orgel separeras i 3 delar som innehåller cervikal slingan, sekretion-steg ameloblasts och mognad scenen ameloblasts. (A) trikrom Masson färgning av mikro-dissekeras delar visade olika epitelceller och avsaknad av mesenkymala celler. Skala bar, 100 µm. (B) gen uttryck analys av RT-qPCR experiment av RNAs utvinns ur sekretion - och mognad-stegs emalj orgel. Ett typiskt mönster av enamelin och KLK4 uttryck observerades, liksom avsaknaden av kollagen 1 förväntat i mesenkymala celler. (C) fluorescerande färgning används en antikropp (se Tabell för material) specifikt riktade mot androgenreceptorn uttryckas genom mognad-steg ameloblasts. Skala bar, 20 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 4: representativa resultat erhålls med mikro-dissekeras råtta emalj orgel. (A) När celler var resuspended i en lyseringsbuffert för RNA-extraktion (se Tabell för material), mognad-scenen vävnad som innehåller pigmenterade ameloblasts verkade orange i kontroll - och BPA-behandlade villkor. Utsöndring-scenen portion är gula oavsett villkoren. I NaF behandling, alla lysates var ljus gul till färglös. (B) exempel på RT-qPCR-data som erhållits med RNA preparat från emalj organ rats in till olika miljöförhållanden. NaF down-reglerad KLK4 i mognad-scenen, och BPA ökat enamelin uttryck i sekretion-scenen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Förändrad ameloblast aktivitet och/eller störd ameloblast proliferation, differentiering och mognad processer leder till oåterkalleliga emalj defekter och i sin tur, karakterisering av emalj defekter kan bidra till att utveckla förståelse för den förändrade ameloblast aktivitet under amelogenesis. Studierna på isolerade emalj orgel är således avgörande att belysa patologiska händelserna som ledde till emalj defekter oavsett deras ursprung, miljömässiga eller genetiska.
Denna teknik har ursprungligen beskrivits av Hiller o.a. 17 och Robinson et al. 18, och används för att påvisa specifika effekter på varje etapp av emalj orgel differentiering. Det har sedan anpassats för EMP extraktioner19,24,25. Vi använder för närvarande proceduren att separera de viktigaste delarna av emalj orgeln och samla de biologiska proverna i olika miljöförhållanden att analysera RNAs och proteiner (möjligen intra - och extra - celler proteiner med hjälp av kvantitativa och kvalitativa) tekniker.
Precisionen i mikro-dissektion kräver betydande utbildning innan dess tillämpning, att tillåta insamling av bevarade emalj organ och att undvika mesenkymala kontaminering och någon vävnad förstörs. Dessutom är det ganska svårt att lyckas med möss eller små råttor. Faktiskt är den svåraste delen av förfarandet att bevara den vävnad morfologi, histologi och orientering i IHC och ISH, i motsats till klassisk tekniker ofta utförs på framtänder för dessa två metoder.
En av de främsta fördelarna med att använda mikro-dissekeras emalj orgeln jämfört med demineraliserat hela hemi-underkäken är underhåll av emalj RNAs och proteiner tack vare avsaknaden av någon behandling efter samling. Micro-dissekeras emalj orgeln kan direkt användas för alla tekniker av molekylär biologi och biokemi utan att välja eller odla celler. Fördelen med detta förfarande är de direkta mätningarna av RNA och protein nivåer som återspeglar deras kvantiteter i särskilda ameloblasts i vivo i fysiologiska eller patologiska förhållanden. Dessutom fungera vissa gifter på en differentiering scenen specifikt, vilket är fallet med fluor, som agerar på mognad-steg ameloblasts och inte på sekretion-scenen de23,24. Micro-dissektion av de olika regionerna av emalj orgeln tillåter studier av verkningsmekanismen av några gifter eller specifika gener vars effekter kan vara omöjlig att upptäcka på hela emalj orgel eller på isolerade celler. Faktiskt differentierade ameloblasts, särskilt kära, är svåra att samla in och kultur in vitro som intygas till av bristen på studier rapporterade i ämnet. Endast tandvård epitelceller som kan isoleras är pre-ameloblasts och stamceller från livmoderhalscancer slinga20. Dessutom, de rapporterade ameloblastic cellinjer, främst råtta HAT-729, mus LS830, ALC31och mänskliga AM-132, ofta förlorar de differentiering som kännetecknar i vivo ameloblasts: de uttrycker extracellulära matrix proteiner (EMPs) såsom ameloblastin på samma sätt som sekretion-stegs ameloblasts, och också KLK4 eller SLC26A4/pendrin, såsom mognad-stage ameloblasts8, men är mer eller mindre oförmögen att uttrycka amelogenin och mineralize den matris för att producera emalj. Isolering av dental epitelial stamceller och embryonala ameloblasts kan utgöra ett alternativ för att studera de första stadierna av ameloblast differentiering, men studierna på terminal emalj mineralisering processen inte kan utföras på ett annat sätt än med i vivo modeller. Denna sista del av amelogenesis är avgörande för emalj kvalitet. Viktiga faktorer med tand utveckling, såsom Bmp, Msx, Fgf, Notch, Shh, Wnt är väl beskrivna33,34, tätt inblandade i emalj kvalitet är fortfarande bristfällig. Karakterisering av de viktigaste faktorerna i emalj kvalitet krävs att dechiffrera karies och upptäck innovativa botande eller förebyggande behandling av karies, som utgör ett stort folkhälsoproblem som 92% av 20 – 64 år gamla vuxna i världen har eller har haft minst en karies35,36,37.
Gnagare som exponeras för miljögifter kan störa amelogenesis och förändra emalj kvalitet kan utgöra en bra modell för studier av miljöfaktorer. Liknande förfaranden skulle också kunna användas för funktionella studier av gener av intresse direkt eller indirekt involverade i amelogenesis. Micro-dissekeras emalj orgeln är ett lämpligt material att karakterisera verkningsmekanismer av gifter och deras mål gener i vivo undvika några experimentella bias. När utvecklingsmässiga emalj defekter kommer att karakteriseras, skulle en sådan metod kunna användas som en förutsägande modell av romanen föroreningar eventuella patologiska effekter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga intressekonflikter avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete finansierades av den vid Université Paris-Diderot, franska National Institute of Health och medicinsk forskning (INSERM) och franska institutet för odontologisk forskning (IFRO).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bisphenol A | Sigma Aldrich, Saint Louis MO | 239658 | |
| formalin 10% | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | HT5012 | |
| Tri-Reagent | Euromedex, France | TR118 | |
| RLT buffer | Qiagen, Les Ulis, France | 74126 | RNeasy Protect Mini Kit |
| Androgen receptor antibody | Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) | sc-816 | rabbit polyclonal antibody |
| PBS 10x | EUOMEDEX | ET330.A | |
| Sodium fluoride (NaF) | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | S-1504 | |
| paraplast regular | Leica microsystems, Nanterre cedex, France | 39601006 | called was/parafin in the text |
| tissue OCT | VWR, Fontenay-sous-Bois, France | 411243 | |
| Extra Fine Bonn Scissors - Straight/8.5 cm | PHYMEP , Paris, France | 14084-08 | |
| Handle for Scalpel Blades - 12.5 cm | PHYMEP, Paris, France | 10035-12 | |
| Curved Scalpel Blade | PHYMEP , Paris, France | 10035-20 | |
| Dissecting Knife - Fine/Straight Tip | PHYMEP , Paris, France | 10055-12 | |
| Circle Knife | PHYMEP, Paris, France | 10059-15 | |
| scalpel blades n°11 Swann-Morton | VWR, Fontenay-sous-Bois, France | 233-0024 | |
| binocular lens | Leica biosystems, Nanterre cedex, France | MZFLIII |
References
- Jedeon, K., et al. Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A. Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).
- Jedeon, K., et al. Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats. J Bone Miner Res. 31, 1955-1966 (2016).
- Alaluusua, S., et al. Developmental dental aberrations after the dioxin accident in Seveso. Environ Health Perspect. 112, 1313-1318 (2004).
- Chapple, I. L., et al. Interaction of lifestyle, behaviour or systemic diseases with dental caries and periodontal diseases: consensus report of group 2 of the joint EFP/ORCA workshop on the boundaries between caries and periodontal diseases. J Clin Periodontol. 44, S39-S51 (2017).
- Nanci, A. Enamel: Composition, Formation, and Structure. Ten Cate's Oral Histology Development, Structure, and Function. , 8th ed, Elsevier mosby. 122-164 (2012).
- Leite, G. A., Sawan, R. M., Teofilo, J. M., Porto, I. M., Sousa, F. B., Gerlach, R. F. Exposure to lead exacerbates dental fluorosis. Arch Oral Biol. 56, 695-702 (2011).
- Jedeon, K., et al. Enamel hypomineralization due to endocrine disruptors. Connect Tiss Res. 55, 1-5 (2014).
- Jedeon, K., et al. Androgen receptor involvement in rat amelogenesis: an additional way for endocrine disrupting chemicals to affect enamel synthesis. Endocrinology. 157, 4287-4296 (2016).
- Weerheijm, K. L., Jalevik, B., Alaluusua, S. Molar-incisor hypomineralisation. Caries Res. 35, 390-391 (2001).
- Jälevik, B. Prevalence and Diagnosis of Molar-Incisor- Hypomineralisation (MIH): A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 59-64 (2010).
- Alaluusua, S. Aetiology of Molar-Incisor Hypomineralisation: A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 53-58 (2010).
- Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. The tooth, target organ of Bisphenol A, could be used as a biomarker of exposure to this agent. Bisphenol A: Sources, Risks of Environmental Exposure and Human Health Effects. Gibert, Y. , Nova Science Publishers. 205-225 (2015).
- Fejerskov, O., Larsen, M. J., Richards, A., Baelum, V.
- Robinson, C., Connell, S., Kirkham, J., Brookes, S. J., Shore, R. C., Smith, A. M. The effect of fluoride on the developing tooth. Caries Res. 38, 268-276 (2004).
- Sahlberg, C., Pavlic, A., Ess, A., Lukinmaa, P. L., Salmela, E., Alaluusua, S. Combined effect of amoxicillin and sodium fluoride on the structure of developing mouse enamel in vitro. Arch Oral Biol. 58, 1155-1164 (2013).
- Pritchett-Corning, K. R. Euthanasia of neonatal rats with carbon dioxide. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 23-27 (2009).
- Hiller, C. R., Robinson, C., Weatherell, J. A. Variations in the composition of developing rat incisor enamel. Calcif Tissue Res. 18, 1-12 (1975).
- Robinson, C., Kirkham, J., Nutman, C. A. Relationship between enamel formation and eruption rate in rat mandibular incisors. Cell Tissue Res. 254, 655-658 (1988).
- Smith, C. E., Nanci, A. A method for sampling the stages of amelogenesis on mandibular rat incisors using the molars as a reference for dissection. Anat Rec. 225, 257-266 (1989).
- Chavez, M. G., et al. Isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor. J Vis Exp. (87), (2014).
- Brookes, S. J., Kingswell, N. J., Barron, M. J., Dixon, M. J., Kirkham, J. Is the 32-kDa fragment the functional enamelin unit in all species? Eur J Oral Sci. 119, 345-350 (2011).
- Babajko, S., Jedeon, K., Houari, S., Loiodice, S., Berdal, A. Disruption of Steroid Axis, a New Paradigm for Molar Incisor Hypomineralization (MIH). Front Physiol. 8, 343 (2017).
- Houari, S., et al. Asporin and the mineralization process in fluoride-treated rats. J Bone Min Res. 29, 1446-1455 (2014).
- Denbesten, P., Li, W. Chronic fluoride toxicity: dental fluorosis. Monographs in oral science. 22, 81-96 (2011).
- Kirkham, J., Robinson, C., Phull, J. K., Shore, R. C., Moxham, B. J., Berkovitz, B. K. The effect of rate of eruption on periodontal ligament glycosylaminoglycan content and enamel formation in the rat incisor. Cell Tissue Res. 274, 413-419 (1993).
- Lacruz, R. S., et al. Identification of novel candidate genes involved in mineralization of dental enamel by genome-wide transcript profiling. J Cell Physiol. 227, 2264-2275 (2012).
- Wen, X., Paine, M. L. Iron deposition and ferritin heavy chain (Fth) localization in rodent teeth. BMC research notes. 6, 1 (2013).
- Houari, S., Loiodice, S., Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. Expression of Steroid Receptors in Ameloblasts during Amelogenesis in Rat Incisors. Front Physiol. 7, 503 (2016).
- Kawano, S., et al. Establishment of dental epithelial cell line (HAT-7) and the cell differentiation dependent on Notch signaling pathway. Connect Tissue Res. 43, 409-412 (2002).
- Zhou, Y. L., Snead, M. L. Identification of CCAAT/enhancer-binding protein alpha as a transactivator of the mouse amelogenin gene. J Biol Chem. 275, 12273-12280 (2000).
- Nakata, A., et al. Establishment and characterization of a spontaneously immortalized mouse ameloblast-lineage cell line. Biochem Biophys Res Commun. 308, 834-839 (2003).
- Harada, H., et al. Establishment of ameloblastoma cell line, AM-1. Journal of oral pathology & medicine: official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology. 27, 207-212 (1998).
- Jussila, M., Thesleff, I. Signaling networks regulating tooth organogenesis and regeneration, and the specification of dental mesenchymal and epithelial cell lineages. Cold Spring Harb Perspect Biol. 4, a008425 (2012).
- Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; how the embryo makes teeth. Nat Rev Genet. 5, 499-508 (2004).
- Vos, T., et al. Years lived with disability (YLDs) for 1160 sequelae of 289 diseases and injuries 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 380, 2163-2196 (2012).
- Marcenes, W., et al. Global burden of oral conditions in 1990-2010: a systematic analysis. J Dent Res. 92, 592-597 (2013).
- National Institute of Dental and Craniofacial Research. Dental Caries (Tooth Decay) in Adults (Age 20 to 64). , Available from: https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm (2017).
