Bu, özel tek kullanımlık kültür kapları kullanarak simüle edilmiş mikro yerçekiminde lenfositleri kültürlemek için ticari olarak temin edilebilen bir döner hücre kültürü sistemi kullanmak için adım adım bir kılavuzdur. Bu kültürleme yöntemi herhangi bir süspansiyon tipi hücre kültürüne uygulanabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Döner Hücre Kültür Sistemi Kullanarak Simüle Edilmiş Mikrogravitede Lenfositlerin Kültürlenmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Uzayda biyolojik araştırma yapmanın mevcut sınırlamaları göz önüne alındığında, hücre kültürünü Dünya'daki simüle edilmiş mikro yerçekimine (SMG) maruz bırakmak için birkaç seçenek vardır. Bu seçenekler yöntemlerine, prensiplerine ve süspansiyon hücre kültürü ile kullanıma uygunluklarına göre değişir. Burada, lenfositleri, 2D klinostat veya dönen duvar kabı (RWV) cihazı olarak da bilinen, ticari olarak temin edilebilen bir döner hücre kültürü sistemi kullanarak simüle edilmiş mikro yerçekimine maruz bırakmak için bir hücre kültürü yöntemi açıklanmaktadır. Bu hücre kültürü yöntemi, hücreleri yatay bir eksende döndürerek mikro yerçekimini simüle etmek için zaman ortalamalı yerçekimi vektörü nullifikasyonu prensibini kullanır. Bu sistemde kültürlenen hücreler, simüle edilmiş mikro yerçekiminin hücresel fonksiyon ve fizyoloji üzerindeki etkilerini değerlendirmek için birçok farklı deneysel tahlilde toplanabilir ve kullanılabilir. Kültürleme tekniği, kullanılan hücre tipine veya çizgisine bağlı olarak biraz değişebilir, ancak burada açıklanan yöntem herhangi bir süspansiyon tipi hücre kültürüne uygulanabilir.
Giriş
Uzay uçuşunun, bağışıklık sistemi de dahil olmak üzere insan fizyolojisinin birçok yönünü etkilediği gösterilmiştir. Birçok çalışma, in vivo uzay uçuşu ve in vitro 1,2,3,4 simüle edilmiş mikro yerçekimine (SMG) maruz kalmanın bir sonucu olarak immün disregülasyonun kanıtlarını göstermiştir. İnsan fizyolojisini etkileyen uzay ortamının önemli bir yönü mikro yerçekimidir. Mikro yerçekimi, uzay ortamındaki düşük yerçekimi kuvvetleri nedeniyle yaşanan "ağırlıksızlığı" ifade eder5. İnsanlık Ay v....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: Aşağıdaki adımlar steril bir biyolojik güvenlik kabini içinde tamamlanmalıdır.
1. Hücre kültürü için damarların hazırlanması
- Kültür kaplarını plastik ambalajdan çıkarın. Janttaki her bir damarı, hangi hücre tipinin / hattının kullanıldığına, kontrol (1G) veya tedavi (SMG) olup olmadığına ve diğer ilgili bilgilere göre etiketleyin.
- Kabı stabilize edin ve dolum portu kapağı mandalına/O-ringine dokunmadan dolum portunu dikkatlice açın. Kapağı, kap doldurulurken mandal / O-ring yukarı bakacak şekilde bir etanol pedi üzerine yerleştirin. Kapakları şırınga bağlantı noktalarından çıkarmayın.
NOT: Mandal....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu kültürleme yöntemi, 1) hücrelerin çoğalması kontrol grupları (ve ideal olarak tüm deney grupları) arasında yaklaşık olarak tutarlıysa, 2) tohumlama yoğunluğu, tedavinin uzunluğu ve hücre tipinin / hattının iki katına çıkma süresi göz önüne alındığında çoğalma uygunsa ve 3) hasat edilen hücrelerin yaşayabilirliği% 85 veya daha yüksekse başarılı kabul edilir (Tablo 1 ). İdeal olarak, elde edilen hücreler, özellikle sonraki deneylerde ve tahlillerde kullanılmak üzere standart hücre kültüründe olduğu kada.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İnsanlık Ay ve Mars'a daha uzun uzay görevlerine hazırlanırken, astronotlardaki ciddi sağlık risklerini azaltmak için daha fazla araştırma yapılması gerekiyor. İnsan fizyolojisini etkileyen uzay ortamının önemli bir yönü mikro yerçekimidir. Burada, ticari olarak temin edilebilen bir döner hücre kültürü sistemi kullanılarak lenfositleri SMG'ye maruz bırakmak için bir hücre kültürü yöntemi tanımlanmıştır.
Bu protokol, kullanılan hücre türüne veya satıra bağlı olarak en iyi duruma getirilmesi ger.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma Kanada Uzay Ajansı (CSA), araştırma hibesi (17ILSRA3, İmmüno Profil) tarafından desteklenmektedir. Yazarlar, Dr. Roxanne Fournier (Toronto Üniversitesi), Dr. Randal Gregg (Lincoln Memorial Üniversitesi) ve Preteesh Mylabathula'ya (Arizona Üniversitesi) bu protokolün ilk sorun giderme konusundaki yardımları için teşekkür etmek ve teşekkür etmek ister.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Tek Kullanımlık Yüksek En Boy Oranlı Kap (HARV) (10 mL) | Synthecon | D-410 | Gama sterilize kültür kapları (4/kutu) |
| Luer-Lok uçlu şırıngalar (3 mL) | BD | 309657 | 10 mL HARV'lara takmak için |
| NK92 Hücre hattı | ATCC | CRL-2407 | |
| Döner Hücre Kültürü Sistemi (RCCS) | Synthecon | RCCS-4D | Döner duvar kabı cihazı; 2D klinostat |
| Sarsedt 15 mL konik tüpler | Fisher Scientific | 50-809-220 | |
| Sarsedt 50 mL konik tüpler | Fisher Scientific | 50-809-218 | |
| Sarsedt steril serolojik pipetler | Fisher Scientific | 86.1254.001 | |
| T25 süspansiyon kültürü şişeleri | Sarsedt | 83.3910.502 | Şişe kontrolü için |
Kaynaklar
- ElGindi, M., et al. May the force be with you (or not): the immune system under microgravity. Cells. 10 (8), 1941(2021).
- Choukèr, A., Ullrich, O. The Immune System in Space: Are we Prepared. , Springer International Publishing. Cham. (2016).
- Crucian, B. E., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
