Summary
Denne protokollen beskriver ekkokardiografisk karakterisering av høyre ventrikkelmorfologi og funksjon i en rottemodell av pulmonal arteriell hypertensjon.
Abstract
Pulmonal arteriell hypertensjon (PAH) er en progressiv sykdom forårsaket av vasokonstriksjon og remodellering av de små arteriene i lungene. Denne remodelleringen fører til økt pulmonal vaskulær motstand, forverret høyre ventrikkelfunksjon og for tidlig død. For tiden er godkjente terapier for PAH i stor grad rettet mot pulmonale vasodilatorveier; Imidlertid er nyere fremvoksende terapeutiske modaliteter fokusert på andre nye veier involvert i patogenesen av sykdommen, inkludert remodellering av høyre ventrikkel (RV). Imaging teknikker som tillater longitudinell vurdering av nye terapier er svært nyttige for å bestemme effekten av nye legemidler i prekliniske studier. Ikke-invasiv transtorakal ekkokardiografi er fortsatt standard tilnærming til evaluering av hjertefunksjon og er mye brukt i gnagermodeller. Imidlertid kan ekkokardiografisk evaluering av bobilen være utfordrende på grunn av dens anatomiske posisjon og struktur. I tillegg mangler standardiserte retningslinjer for ekkokardiografi i prekliniske gnagermodeller, noe som gjør det vanskelig å gjennomføre en enhetlig vurdering av RV-funksjon på tvers av studier i ulike laboratorier. I prekliniske studier er monokrotalin (MCT) skademodell hos rotter mye brukt til å evaluere legemiddeleffekt for behandling av PAH. Denne protokollen beskriver ekkokardiografisk evaluering av bobilen hos naive og MCT-induserte PAH-rotter.
Introduction
PAH er en progressiv sykdom definert som et gjennomsnittlig pulmonalt arterielt trykk i hvile på mer enn 20 mmHg1. Patologiske endringer i PAH inkluderer lungearterie (PA) remodellering, vasokonstriksjon, betennelse og fibroblastaktivering og proliferasjon. Disse patologiske endringene fører til økt pulmonal vaskulær motstand og følgelig remodellering av høyre ventrikkel, hypertrofi og svikt2. PAH er en kompleks sykdom som involverer crosstalk mellom flere signalveier. De for tiden godkjente legemidlene for behandling av PAH retter seg hovedsakelig mot vasodilatorveier, inkludert nitrogenoksid-syklisk guanosinmonofosfatvei, prostacyklinvei og endotelinvei. Terapeutika rettet mot disse veiene har blitt brukt som både monoterapier og i kombinasjonsterapier 3,4. Til tross for fremskritt i behandlingen av PAH det siste tiåret, viser funn fra det USA-baserte REVEAL registeret en dårlig 5 års overlevelse for nydiagnostiserte pasienter5. Mer nylig har nye terapeutiske modaliteter fokusert på sykdomsmodifiserende midler som kan påvirke den multifaktorielle patofysiologien til vaskulær remodellering som forekommer i PAH i håp om å forstyrre sykdommen6.
Dyremodeller av PAH er uvurderlige verktøy for å vurdere effekten av nye medikamentelle behandlinger. Den MCT-induserte PAH-rottemodellen er en mye brukt dyremodell preget av remodellering av lungearterielle kar, som igjen fører til økt pulmonal vaskulær motstand og høyre ventrikulær hypertrofi og dysfunksjon 7,8. For å vurdere effekten av nye behandlinger, fokuserer forskere normalt på den terminale vurderingen av RV-trykk uten å vurdere den langsgående evalueringen av PA-trykk, RV-morfologi og RV-funksjon. Bruk av ikke-invasive og ikke-terminale avbildningsteknikker er avgjørende for en omfattende undersøkelse av sykdomsprogresjon i dyremodeller. Transtorakal ekkokardiografi er fortsatt standard tilnærming til evaluering av hjertemorfologi og funksjon i dyremodeller på grunn av lave kostnader og brukervennlighet sammenlignet med andre bildebehandlingsmodaliteter, for eksempel magnetisk resonansbilder. Imidlertid kan ekkokardiografisk evaluering av bobilen være utfordrende på grunn av RV-plasseringen under brystbensskyggen, dens velutviklede trabekulasjon og dens anatomiske form, som alle gjør det vanskelig å avgrense endokardialgrensen 9,10,11.
Denne artikkelen tar sikte på å beskrive en omfattende protokoll for å evaluere RV-dimensjoner, områder og volumer, og systolisk og diastolisk funksjon i naive og MCT-induserte PAH hos Sprague Dawley (SD) rotter. I tillegg beskriver denne protokollen en metode for å vurdere ekkokardiografiske dimensjoner i det normale og utvidede høyre atriumet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle eksperimenter i denne protokollen ble utført i henhold til retningslinjene for dyrepleie fra University of Illinois i Chicago, Chicago Institutional Animal Care and Use Committee. Hannrotter av Sprague Dawley (SD) veide mellom 0,200-0,240 kg ved tidspunktet for MCT-injeksjon; Protokollen beskrevet i denne artikkelen kan imidlertid brukes med et bredere kroppsvektområde. Dyrene ble hentet fra en kommersiell kilde (se materialtabell).
1. Studiedesign
- Dyr
- Få mannlige SD-rotter og la dem akklimatisere seg i 4-7 dager. Gruppehus rottene av eksperimentgruppen i rene bur og hold dem i et rom vedlikeholdt ved 20-26 ° C (68-79 ° F) og opplyst med fluorescerende lys tidsbestemt for å gi en 14 timers lys, 10 h mørk syklus.
- Gi rotter ad libitum tilgang til en standard diett og vann fra springen i løpet av forsøket.
- MCT-administrasjon
- På studiedag 0 administreres en subkutan dose (3,0 ml/kg) MCT (60 mg/kg i HCl/NaOH, pH 7,4; se materialfortegnelse. MCT-gruppe) eller kjøretøy (avionisert vann, pH 7,4; Kontrollgruppe).
MERK: På grunn av forholdsregler forbundet med MCT-dosering, bør alle rotter doseres på studiedag 0 i et rom for kjemisk fare og oppbevares der til studiedag 7. - På studiedag 7, overfør rottene tilbake til et generelt borom i løpet av studiet.
- På studiedag 0 administreres en subkutan dose (3,0 ml/kg) MCT (60 mg/kg i HCl/NaOH, pH 7,4; se materialfortegnelse. MCT-gruppe) eller kjøretøy (avionisert vann, pH 7,4; Kontrollgruppe).
- Kliniske observasjoner
- Utfør observasjoner på bursiden for generell helse og utseende en gang daglig. Observer dyrene for dødelighet og tegn på smerte og nød.
- Registrer eventuelle uvanlige observasjoner notert i løpet av studien i notatboken for rådata.
- Kroppsvekt
- Registrer kroppsvekt på studiedag 0 (predose), ukentlig gjennom hele studien og på dagen for ekkokardiografi.
2. Ekkokardiografi
- Forberedelse
- På studiedag 23 etter MCT-dosering anesteserer du rottene med isofluran ved 2 %-3 %, drevet av 100 % oksygen (1 l/min) i et induksjonskammer (se materialfortegnelse).
- Fjern rottene fra kammeret når bevisstheten er tapt og overfør dem til avbildningsstasjonens dyreplattform (se materialtabell) i en dorsal-decubitus-posisjon. Administrer isofluran ved hjelp av en nesekjegle koblet til en fordamper som leverer 1-2 % isofluran drevet av 100 % oksygen (1 l/min).
- Påfør elektrodegel på hver pote og fest potene i elektrokardiogramblyplatene på dyreplattformen.
- Fjern pelsen ved å barbere brystet og bruke et hårfjerningsmiddel (se materialfortegnelse). Sikre en rektal temperatursonde (se materialfortegnelse) på plass. Plasser bomullsruller på dyrets høyre og venstre side og fest dem med tape for å opprettholde dyrets posisjon når plattformen er vippet.
- Overvåking
- Overvåk kroppstemperatur og hjertefrekvens (HR) via ultralydbildesystemet (se materialfortegnelse) gjennom hele prosedyren.
- Hold kroppstemperaturen på 37 ± 0,5 °C og hold om mulig pulsen på 350 slag per minutt eller høyere. Bruk varmebordet og en varmelampe for å opprettholde temperaturen.
- Anskaffelse av bilder
- Utfør transtorakal ekkokardiografi ved hjelp av et høyfrekvent ultralydbildesystem utstyrt med en solid-state array ultralydtransduser (se materialfortegnelse).
MERK: Alle retninger notert i ekkokardiografiske metoder refererer til høyre eller venstre for sonografen. - Venstre ventrikkelvisning (LV) av parasternal langakse (PLAX)
- Med rottene i dorsaldecubitusposisjon, vipp plattformen til venstre og før den kaudalt ned ca. 10°.
- Plasser svingeren i holderen i en halvlåst stilling med hakket pekende i kaudalretningen. Flytt svingeren slik at den peker mot venstre parasternale linje. Drei svingeren mot klokken ca. 30°-45° og vipp kranialt litt langs y-aksen (lateral transduserakse).
- Påfør varm ultralydgel (se materialfortegnelse) på rottens bryst og senk transduseren til den er i kontakt med gelen.
- Flytt plattformen til høyre eller venstre for å få en visning av hele LV-en midt på skjermen. Juster bildedybden om nødvendig og flytt fokussonen til bakre vegg.
- Gjør finjusteringer i plattformposisjonen for å sikre at aorta og apex er i samme horisontale plan, og LV-utstrømningskanalen er synlig.
- Trykk på Cine Store for å registrere dataene. Eksempler på PLAX-visninger av LV-bildene er vist i figur 1A.
MERK: Imaging LV gir mulighet for kjennskap til hjertets stilling i brystet. En utvidet bobil kan fortrenge LV.
- Modifisert PLAX-visning av høyre ventrikkels utløpskanal
- Vipp plattformen mot høyre ca. 10°-15° og før den kaudalt ned ca. 5°.
- Beveg svingeren slik at den peker mot rottens høyre parasternale linje. Drei svingeren mot klokken ved ca. 30°.
- Påfør ultralydgel på rottens bryst og senk transduseren til den er i kontakt med gelen.
- Flytt plattformen til venstre eller høyre til bobilen er synlig. I denne modifiserte PLAX-visningen er RV-veggen og interventrikulær septum (IVS) tydelig synlige, som vist i figur 1B.
- Drei transduseren mot klokken om nødvendig for å sikre at aorta og mitralventilen er synlige.
- Flytt fokussonen til bobilområdet for fri vegg for å forbedre endokardial grensedefinisjon og juster forsterkningen om nødvendig.
- Trykk på Cine Store for å registrere dataene.
- Plasser prøvevolumlinjen for M-modus i regionen der bobilen er bredest, og juster porten slik at den omfatter bobilen og LV. Prøvevolumlinjen er vanligvis plassert mellom skyggen av to sammenhengende ryggvirvler hos rotter.
- Trykk Oppdater , og trykk deretter Cine Store for å registrere dataene. Eksempler på M-modus ved de modifiserte PLAX-visningsbildene er vist i figur 1C, og disse bildene brukes til å analysere RVs indre diameter under diastol (RVIDd), RV indre diameter under systole (RVIDs) og RV fri veggtykkelse (RVFWT).
- Løft svingeren og flytt den slik at den bare er litt tilbøyelig mot rottens høyre parasternale linje. Flytt plattformen til en posisjon som bare er litt skråstilt mot høyre.
- Senk transduseren til den er i kontakt med gelen.
- Flytt plattformen kaudalt og til høyre eller venstre til bobilens utløpsspor er synlig og lungeventilen (PV) er i fokus og godt synlig.
- Trykk på Cine Store for å registrere dataene. Eksempler på B-modus ved modifisert PLAX-visning på nivå med bilder av høyre ventrikkelutløpskanal er vist i figur 2A; Disse bildene brukes til å analysere PV-diameteren.
- Hvis du beholder den samme bildeplasseringen i B-modus, trykker du på Farge for å gjøre det enklere å identifisere flyten gjennom PV-en. Juster hastigheten for å optimalisere aliasing, slik at det høyeste hastighetspunktet er synlig. Øk om nødvendig bildefrekvensen ved å redusere størrelsen på fargedopplerbildeboksen.
- Trykk på PW (pulserende bølge) for å kvantifisere blodstrømsspekteret. Øk størrelsen på prøvevolumporten til maksimum.
- Juster baselinehastigheten og Doppler-forsterkningen, om nødvendig, slik at strømningen er synlig.
- Juster PW-vinkelen parallelt med strømningsretningen gjennom PV-en. Plasser prøvevolumet med høyeste hastighet (punktet for aliasing) eller på spissen av PV-pakningsvedlegget.
- Trykk på Oppdater for å vise lungehastighetene.
- Trykk på Cine Store for å registrere dataene. Eksempler på PV PW Doppler-bilder er vist i figur 2B; Disse bildene brukes til å analysere pulmonal ejeksjonstid (PET), pulmonal akselerasjonstid (PAT), pulmonal topp systolisk hastighet (PV PSV), hjerteutgang (PV CO), slagvolum (PV SV), HR og hjertesykluslengde (CL).
- RV fokusert apikal fire-kammer visning
- Vipp plattformen til venstre hjørne og ned kranialt så langt det kan gå.
- Drei svingeren mot klokken 30°-45°, og beveg svingeren slik at den peker mot dyrets høyre skulder/øre.
- Senk transduseren til den er i kontakt med gelen. Denne posisjonen tillater en typisk firekammervisning der LV og venstre atria (LA) er synlige, men brystbenets skygge er over den RV-frie veggen.
- Juster den apikale firekammervisningen for å få RV-fokusert visning ved å plassere svingeren litt lateralt til det sanne toppunktet. Gjør finjusteringer til maksimumsplanet er oppnådd. Flytt plattformen litt kaudalt om nødvendig. I denne utsikten er skyggen av brystbenet plassert i septum, og den RV-frie veggen er tydelig synlig.
- Kontroller at bobilen, høyre atri (RA) og trikuspidalklaffen (TV) er synlige i det akustiske vinduet.
MERK: Hvis RV-kammeret er veldig utvidet, kan det hende at LV-kammeret ikke er helt synlig. Å holde svingeren manuelt tillater finjustering av svingervinkelen for å forbedre RV-visualiseringen. - Forsikre deg om at bobilen ikke er forkortet og at LV-utstrømningskanalen ikke er åpnet.
- Trykk på Cine Store for å registrere dataene. Eksempler på B-modus ved RV-fokuserte apikale firekammervisningsbilder er vist i figur 3A,B; Disse bildene brukes til å analysere høyre atrieområde (RAA), RV endediastolisk område (RVEDA) og RV end-systolisk område (RVESA).
- Plasser M-mode-markøren gjennom trikuspidalringrommet på den bobilfrie veggen. Sørg for å ha optimal bildeorientering for å unngå undervurdering av hastigheter. Trykk på Oppdater og Cine Store for å registrere dataene.
MERK: Eksempler på tricuspid annulus bevegelsesbilder er vist i figur 4A,B; Disse bildene brukes til å analysere tricuspid ringformet plan systolisk ekskursjon (TAPSE). - Trykk på B-modus og trykk deretter på Farge for å hjelpe til med å identifisere flyten gjennom TV-en. Juster hastigheten for å optimalisere aliasing, slik at det høyeste hastighetspunktet er synlig. Øk bildefrekvensen ved å redusere størrelsen på fargedopplerbildeboksen.
- Trykk på PW for å kvantifisere blodstrømsspekteret. Øk størrelsen på prøvevolumporten til maksimum.
- Juster grunnlinjehastigheten og dopplerforsterkningen om nødvendig.
- Juster PW-vinkelen parallelt med retningen for bobilinnstrømningen. Plasser prøvevolumet med høyeste hastighet (punktet for aliasing) eller på tuppen av trikuspidalpakningsvedlegget.
MERK: Avbildning av trikuspidalinnstrømningshastighetene kan være utfordrende; Finjustering av svingerposisjonen kan være nødvendig. - Trykk på Oppdater for å vise trikuspidalinnstrømningshastighetene.
- Trykk på Cine Store for å registrere dataene. Eksempler på trikuspidale PW Doppler-bilder er vist i figur 5A,B; Disse bildene brukes til å analysere hastigheten på blodstrømmen over TV-en under tidlig diastolisk fylling (E), hastigheten på blodstrømmen over TV-en under sen diastolisk fylling (A), trikuspidallukking åpen tid (TCO) og utkastingstid (ET).
- Gå tilbake til B-modus og trykk på Vev. Juster plattformen litt for å sikre at trikuspidalringrommet er godt synlig, og plasser vevsdopplerprøvevolumporten ved trikuspidalringrommet ved bobilfriveggen. Øk prøvevolumporten til maksimal bredde.
- Juster grunnlinjehastigheten og dopplerforsterkningen om nødvendig.
- Trykk på Oppdater for å vise vevsdopplerbildet.
- Trykk på Cine Store for å registrere dataene. Eksempler på vevsdopplerbilder er vist i figur 6A,B; Disse bildene brukes til å analysere trikuspidalens ringformede hastighet ved tidlig diastol (E'), trikuspidalens ringformede hastighet ved sen diastol (A') og trikuspidalhastighet ved systole (S').
MERK: TAPSE og vevsdoppler måles alltid ved RV-fri vegg og ikke ved interventrikulær septum.
- Utfør transtorakal ekkokardiografi ved hjelp av et høyfrekvent ultralydbildesystem utstyrt med en solid-state array ultralydtransduser (se materialfortegnelse).
- Bildeanalyse
- Utfør bildeanalyse offline ved hjelp av instrumentkompatibel programvare (se Materialfortegnelse).
- Unngå områder der det oppstår inspirasjon for alle målinger, og ta alltid minst tre målinger for hver parameter som skal analyseres.
- Modifisert parasternalt langaksebilde av høyre ventrikkel M-modus
- Velg et bilde hentet fra den modifiserte parasternale langaksevisningen av høyre ventrikkel M-modus og analyser RVIDd (mm), RVIDs (mm) og RVFWT (mm).
- Velg Dybde fra de generelle måleverktøyene.
- Spor den indre diameteren til RV-kammeret ved diastol og systole (figur 1C) og merk målingene som henholdsvis RVIDd og RVID.
- Velg dybdeverktøyet for å måle tykkelsen på den bobilfrie veggen. Juster markøren etter toppen av R-bølgen i EKG og spor veggen ved endediastolen (figur 1C). Ekskluder RV-trabekulasjoner og papillær muskel fra RV-endokardialgrensen, hvis den er til stede, for å måle RV-veggtykkelsen nøyaktig. Utelukk også epikardial fett, hvis det er tilstede, for å unngå feilaktig økte målinger.
MERK: RV trabeculations og papillær muskel viser som utgåtte linjer som følger RV veggen bevegelse. RVIDd-, RVID- og RVFWT-målinger vises i rapporten under delen Generisk pakke. Når det er en betydelig fortykning av perikardiet, kan måling av RV-veggen være vanskelig; Velg derfor analyseområdet nøye.
- PV B-modus
- Velg et bilde hentet fra PV B-modus og analyser PV-diameteren (mm).
- Velg RV og PV-funksjon fra rullegardinmenyen for hjertepakken.
- Velg PV diam og velg en ramme der ventilen er åpen. På ventilnivået, spore avstanden fra vegg til vegg, unngå ventilringrommet (figur 2A).
MERK: Målinger vises i rapporten under delen RV og PV funksjon.
- PV PW Doppler
- Velg et bilde hentet fra PV PW Doppler for å analysere PET (ms), PAT (ms), PV PSV (mm / s), HR (slag per min), CL (ms), PAT / PET-forhold, hjerteutgang (PV CO; ml / min), slagvolum (PV SV; μL) og PAT / CL-forhold.
- Velg RV og PV-funksjon fra rullegardinmenyen for hjertepakken, og velg minst tre representative PA-hastigheter.
- Velg PAT og spor PA-strømningshastigheten som starter ved akselerasjonspunktet og slutter ved toppen av hastigheten.
- Velg PET og begynn målingen fra akselerasjonspunktet og avslutt når signalet når grunnlinjen.
- Velg PV peak vel, plasser markøren på det høyeste hastighetspunktet, og venstreklikk.
- Hvis du vil angi PV-hastighetstidsintegralmåling (PV VTI), velger du det negative alternativet under det øverste Vevo-verktøyet.
MERK: Deteksjonsfølsomheten kan endres, men en konstant verdi bør opprettholdes gjennom hele studien. - Velg PV VTI fra rullegardinmenyen. Start målingen ved å venstreklikke på starten av toppen og avslutte ved å høyreklikke på slutten av toppen for å fullføre målingen. Juster toppomrisset ved å flytte linjene etter behov.
- Plasser markøren på en PV VTI-måling og høyreklikk for å velge Egenskaper, og aktiver deretter HR-måling i parameteralternativet. Gjenta dette trinnet for alle tre VTI-målingene for PV VTI.
- Velg Tid fra de generiske måleverktøyene, og spor tiden fra akselerasjonspunktet for en syklus til akselerasjonspunktet for neste syklus for å beregne CL (figur 2B).
MERK: Målinger vises i rapporten under delen RV og PV funksjon. PAT / PET-forhold, PV CO og PV SV beregnes av instrumentprogramvaren.
- RV fokusert apikal fire-kammer visning B-modus
- Velg et bilde hentet fra RV-fokusert apikal firekammervisning B-modus for å analysere RAA (mm 2), RVEDA (mm 2), RVESA (mm 2) og RV brøkområdeendring [RVFAC = (RVEDA-RVESA) / RVEDA, %].
- Velg SAX (parasternal kortakse) fra rullegardinmenyen for hjertepakken.
- Velg et B-modusbilde på endediastolen fra RV-fokusert apikal firekammervisning. Sørg for at hele bobilen er i sikten, inkludert toppunktet og sideveggen.
- Velg ENDOarea;d og spor RV-endokardiet fra ringrommet, langs friveggen til toppunktet, og deretter tilbake til ringrommet langs interventrikulær septum, unntatt trabekulasjoner hvis de er tilstede.
- Velg et B-modusbilde ved end-systole, velg ENDOarea;s fra rullegardinvinduet SAX B-mode, og gjenta sporet av bobilen. Bruk det samme bildet, velg 2D-området fra de generiske måleverktøyene og spor RA ved å følge endokardiet og ekskludere vena cava og RA-appendage. Arealet mellom brosjyrene til trikuspidalklaffen og ringrommet er også utelatt (figur 3).
- Gjenta ENDO-områdemålingen ved diastol- og systol- og RA-områdemåling i ytterligere to bilder.
MERK: Målinger av bobilområdet ved diastol og systole vil bli vist i rapporten under SAX-B-modusdelen. RA-området vises under de generiske pakkemålingene. RVFAC beregnes ved hjelp av formelen RVFAC = (RVEDA-RVESA)/RVEDA10.
- M-modus ved lateral del av tricuspid ringrommet
- Velg et M-modusbilde hentet fra den laterale delen av trikuspidalringrommet for å analysere TAPSE (mm).
- Velg Dybde fra de generiske måleverktøyene, og velg et område med minst tre påfølgende hjertesteder uten inspirasjonsforstyrrelser.
- Spor avstanden fra endediastol til toppsystole av RV-ringformet segment i tre påfølgende hjertesykluser (figur 4).
MERK: Målinger vises i rapporten under delen generisk pakke.
- TV PW Doppler
- Velg et bilde hentet fra TV PW-doppleren for å analysere E (mm/s), A (mm/s), TCO (ms), ET (ms) og RV myocardial performance index [RVMPI = (TCO-ET)/ET]11.
- Velg TV Flow fra rullegardinmenyen for hjertepakken, og velg minst tre representative TV-hastigheter.
- Velg TV E (tricuspid early filling), plasser markøren på det høyeste hastighetspunktet på E-bølgen, og venstreklikk; En linje trekkes fra den høyeste hastigheten til grunnlinjen. På samme måte velger du TV A (tricuspid sen fylling), plasser markøren med den høyeste hastigheten til A-bølgen, og venstreklikk; en annen linje trekkes fra høyeste hastighet til grunnlinjen (figur 5).
- Hvis du vil måle utkastingstiden (ET), velger du tidsverktøyet fra de generelle måleverktøyene og måler tiden fra begynnelsen (forkanten) til opphør (bakkanten) av trikuspidalinnstrømningen (et område der strømmen stråler ut). Merk målingene som ET (figur 5).
- Hvis du vil måle TCO-tiden, velger du tidsverktøyet og sporer tiden fra slutten av trikuspidalen En bølge av en syklus til begynnelsen av tricuspid E-bølgen i neste syklus. Merk målingene som TCO (figur 5).
MERK: Målinger av TV E og TV A vises i rapporten under TV Flow-delen. ET- og TCO-målinger vil bli vist under de generiske pakkemålingene. RVMPI beregnes som (TCO-ET)/ET11. E, ET og TCO måles med et konstant R-R-intervall for å minimere feil. ET-målinger kan også utføres fra midtkanten til bakkanten; Konsistens i hvordan målingen er anskaffet gjennom analysen er viktigst.
- RV lateral tricuspid annulus vev Doppler
- Velg et bilde hentet fra RV lateral tricuspid annulus vev Doppler for å analysere E '(mm / s), A '(mm / s), S '(mm / s) og E / E 'forhold.
- Velg TV Flow fra rullegardinmenyen for hjertepakken, og velg minst tre representative frie veggvevshastigheter.
- Velg TV LW E, plasser markøren på det høyeste hastighetspunktet på E '-bølgen, og venstreklikk; En linje trekkes fra den høyeste hastigheten til grunnlinjen. På samme måte velger du TV LW A, plasserer markøren på det høyeste hastighetspunktet på A-bølgen, og venstreklikk; en annen linje trekkes fra høyeste hastighet til grunnlinjen (figur 6).
- Velg MV Flow fra rullegardinmenyen for hjertepakken, og velg S WAVE.
- Plasser markøren med høyeste systoliske hastighet under utkastfasen, uten å få Doppler-konvolutten, og venstreklikk; en linje trekkes fra den høyeste hastigheten til grunnlinjen (figur 6).
MERK: Målinger vises i rapporten under delene TV Flow og MV Flow. E/E-forholdet beregnes manuelt.
- Nekropsi
- Avliving av rottene ved ekssanguinering under overdosering av isofluran på studiedag 24 etter MCT-dosering etter institusjonelt godkjent protokoll.
- Fjern hjerte-lungeblokken og fyll forsiktig via vaskulaturen med iskaldt saltvann til parfysatet er klart. Separat hjertet og lungene og fjern overflødig saltvann.
- Vei hvert organ separat.
- Fjern atriene og kast.
- Separer LV med septum (LV + S) fra bobilen og vei ventriklene separat.
- Fjern venstre tibia og skille den fra bløtvevet.
- Få en longitudinell måling av tibia ved hjelp av en digital tykkelse (se materialfortegnelse).
- Kast det dissekerte hjertet, lungene og tibia med resten av.
MERK: Hjertevekten (HW), lungevekten (LW), LV + S-vekten og RV-vekten normaliseres av tibialengden (TL). RV-hypertrofien vurderes av Fultons indeks, der bobilvekten normaliseres med LV+S-vekten [Fulton-indeks = RV/(LV+S)]12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I denne studien ble MCT-behandlede rotter brukt som modell for PAH. Ekkokardiografisk analyse ble utført på studiedag 23 etter MCT-administrasjon, og alle målinger og beregninger representerte gjennomsnitt fra tre påfølgende sykluser. Ekkokardiografiske parametere fra kontrollrotter (vehikkel: avionisert vann) og MCT-behandlede rotter (60 mg/kg) er vist i tabell 1.
Representative bilder av PLAX-visningen i kontroll og MCT-behandlede rotter er vist i figur 1A. Disse bildene brukes som en innledende vurdering av hjertets posisjon og LV-morfologi. Kvantitative vurderinger av RV er oppnådd i en modifisert PLAX-visning, fordi dette tillater visualisering av RV (figur 1B). I modifisert PLAX-visning viser de MCT-behandlede rottene en forstørret høyre ventrikkel og venstre ventrikkel ser ut til å være forskjøvet fra sin posisjon sammenlignet med kontrollrottene (figur 1B). M-modus oppnås i den modifiserte PLAX-visningen på det bredeste området av bobilen og brukes til å måle RVIDd, RVID og RVFWT (figur 1C). RVIDd, RVID og RVFWT måles, unntatt trabekulasjon i veggen, og RVFWT oppnås på toppen av R-bølgen i EKG. Som forventet er det observert en signifikant økning i RVIDd, RVID og RVFWT hos MCT-behandlede rotter (figur 1C og tabell 1), noe som indikerer RV-dilatasjon og fortykkelse av RV-friveggen.
Doppleravbildning brukes til å måle PA-strømningshastigheter (figur 2B). Hos kontrollrotter viser lungestrømmen en symmetrisk V-form, med en topphastighet som oppstår i midten av systolen (figur 2B, øvre panel). I motsetning til dette, hos MCT-behandlede rotter, er maksimal hastighet langsommere og skjer tidligere i systole, noe som resulterer i en signifikant forkortet PAT og mindre PAT / PET og PAT / CL-forhold (tabell 1). I tillegg viser MCT-behandlede rotter et hakk i sen systole (figur 2B, nedre panel). PV PW Doppler brukes til å måle PV VTI (figur 2B); PV CO og PV SV beregnes ved hjelp av henholdsvis PV VTI og PV diameter målinger. PV CO og PV SV er signifikant lavere hos MCT-behandlede rotter (tabell 1), noe som indikerer nedsatt systolisk funksjon. HR er hentet fra PV PV Doppler-målingene og er sammenlignbar mellom kontroll- og MCT-behandlede rotter (tabell 1).
RV-fokusert apikal firekammervisning brukes til å måle RVEDA, RVESA og RAA (figur 3), og RVFAC beregnes fra RVEDA og RVESA. Som nevnt tidligere, må trabekulasjoner i veggen, hvis de er til stede, utelukkes fra disse målingene. RVFAC er signifikant redusert hos MCT-behandlede rotter (tabell 1), noe som tyder på systolisk dysfunksjon i RV. MCT-behandlede rotter viser også RA-dilatasjon på grunn av økt PA-trykk (figur 3A, B, høyre panel og tabell 1). Under normale forhold har LV-hulrommet et høyere trykk enn RV, noe som resulterer i en septalkurvatur av LV gjennom hele hjertesyklusen (figur 3A, B, venstre paneler). Når bobiltrykket patologisk øker i PAH, går denne normale krumningen tapt, og interventrikkelseptum fremstår som "flattrykt"13, som vist i figur 3A,B (høyre paneler). RV-fokusert apikal firekammervisning brukes også til å måle TAPSE fra M-mode-avhøret av trikuspidalringrommet (figur 4). TAPSE er signifikant redusert hos MCT-behandlede rotter (figur 4B og tabell 1), noe som tyder på kompromittert RV-funksjon.
Diastolisk funksjon vurderes fra PW Doppler-evalueringen av TV-strømmen og lateral TV lateral annulus vev Doppler. MCT-behandlede rotter viser signifikant høyere E-bølge og RVMPI og tendens til økt E/E-ratio (figur 5 og tabell 1), noe som tyder på nedsatt diastolisk funksjon. TV-ringrommet for dopplervisning brukes også til å måle E' og S' (figur 6B). MCT-behandlede rotter viser signifikant langsommere S', noe som bekrefter redusert RV systolisk funksjon (også demonstrert ved en reduksjon i PV CO og PV SV). Ingen signifikant endring i E' er observert hos MCT-behandlede rotter. A og A' kan også fås fra henholdsvis TV-strømmen PW Doppler og lateral TV lateral annulus vev Doppler. Disse parametrene er ikke omtalt i denne artikkelen.
Massemålinger av hjertevev ved terminal høsting og ekkokardiografiske analyser støtter RV-hypertrofi hos MCT-behandlede rotter sammenlignet med kontrollrotter. Som vist i tabell 2 er Fulton-indeksen og RV/TL-forholdet signifikant økt hos MCT-behandlede rotter sammenlignet med kontrollrotter. I tillegg viser MCT-behandlede rotter et økt LV + S / TL-forhold, noe som indikerer LV-hypertrofi. MCT-behandlede rotter viser også et økt LW / TL-forhold, noe som tyder på lungeødem.
Figur 1: Parasternal langakse (PLAX) visninger. (A) Representative bilder av konvensjonell PLAX for å visualisere venstre ventrikkel (LV) utstrømning, venstre atri (LA), høyre atri (RA) og aortaklaffen (AV) i en kontrollrotte (venstre panel) og monokrotalin (MCT)-behandlet rotte (høyre panel). (B) Representative bilder av modifisert PLAX-visning for å visualisere utstrømningskanalen i høyre ventrikkel (RV), interventrikulær septum (IVS), LV og AV i en kontrollrotte (venstre panel) og MCT-behandlet rotte (høyre panel). Hos rotter er prøvevolumlinjen for M-modus vanligvis plassert mellom skyggen av to sammenhengende ryggvirvler (vist med blå piler). (C) Eksempler på M-mode-målinger i en kontrollrotte (topppanel) og MCT-behandlet rotte (nederste panel). Målinger inkluderer RV fri veggtykkelse (RVFWT), RV indre diameter under diastol (RVIDd), og RV indre diameter under systole (RVIDs). For enkel visning vises målingene av bare én hjertesyklus. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: PV-diameter og strømningshastigheter i lungearterien. (A) Representative bilder av modifisert PLAX-visning for å visualisere lungearterien og for å måle lungeklaffens (PV) diameter i en kontrollrotte (venstre panel) og monokrotalin (MCT)-behandlet rotte (høyre panel). (B) Pulmonal ejeksjonstid (PET) måles fra akselerasjonspunktet til returpunktet til baseline hos en kontrollrotte (topppanel) og MCT-behandlet rotte (nederste panel). Pulmonal akselerasjonstid (PAT) er tidsintervallet mellom akselerasjonspunktet til hastighetstoppen. Pulmonal ventil peak systolisk hastighet (PV PSV) måles på toppen av Doppler-strømmen. PV-hastighetstidsintegral (PV VTI) spores i blått ved hjelp av programvarealternativet. Hjertesykluslengde (CL) måles fra akselerasjonspunktet for en syklus til akselerasjonspunktet for neste syklus. Sen systole hakking observeres hos MCT-behandlede rotter. Pilene angir de tre påfølgende syklusene som ble vurdert for beregninger. Representative målinger vises i forskjellige sykluser for enkel visning, men alle målinger ble tatt i hver av de tre syklusene. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: RV-fokusert apikal firekammervisning. (A) Representative bilder av høyre ventrikkels endesystoliske område (RVESA) og høyre atrieområde (RAA) i en kontrollrotte (venstre panel) og monokrotalin (MCT)-behandlet rotte (høyre panel). Øvre paneler viser bilder uten sporing, og nedre paneler viser sporede områder. Målinger ble tatt ved hjelp av ENDOarea;s og 2D-områdeverktøy for å beregne henholdsvis RVESA og RAA. (B) Eksempelbilder av høyre ventrikkels endediastoliske område (RVEDA) ved hjelp av programvareverktøyet ENDOarea;d i en kontrollrotte (venstre panel) og MCT-behandlet rotte (høyre panel). Øvre paneler viser bilder uten sporing, og nedre paneler viser sporede områder. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4 Tricuspid ringformet plan systolisk ekskursjon (TAPSE). (A) Øvre panel: høyre ventrikkelfokusert apikal firekammervisning i en kontrollrotte. Høyre ventrikkel (RV), høyre atri (RA) og trikuspidalklaff (TV) visualiseres. Nedre panel: M-modus avhør av trikuspidalringrommet for å måle TAPSE hos kontrollrotter. (B) Øvre panel: høyre ventrikkelfokusert apikal firekammervisning i en monokrotalin (MCT)-behandlet rotte. Nedre panel: M-mode undersøkelse av trikuspidalringrommet for å måle TAPSE hos en MCT-behandlet rotte. Pilene angir de tre påfølgende målingene som ble vurdert for beregninger. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 5: Pulserende bølgedoppler av trikuspidalinnstrømning. Eksempel på pulserende Doppler-registreringer av trikuspidalinnstrømning for å måle blodinnstrømningshastigheten over trikuspidalklaffen under tidlig diastolisk fylling (E, i blått), sen diastolisk fylling (A, i blått), trikuspidallukkingsåpen tid (TCO) og utkastingstid (ET) hos (A) en kontrollrotte og i (B) en monokrotalin (MCT)-behandlet rotte. Pilene angir de tre påfølgende syklusene som ble vurdert for beregninger. Representative målinger vises i en syklus for enkel visning, men alle målinger ble tatt i hver av de tre syklusene. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 6 Vevsdoppler av lateral tricuspidalring. Vevsdopplerprøvebilder av maksimal systolisk myokardhastighet ved lateral tricuspidalringsrom (S', i blått) og maksimal myokardrelaksasjonshastighet ved tidlig diastol (E', i blått) og sen diastol (A', i blått) i (A) en kontrollrotte og i (B) en monokrotalin (MCT)-behandlet rotte. Pilene angir de tre påfølgende syklusene som ble vurdert for beregninger. Representative målinger vises i en syklus for enkel visning, men alle målinger ble tatt i hver av de tre syklusene. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Ekkokardiografiske parametere | Eksperimentelle grupper | ||||
| Kontroll (kjøretøy) | MCT (60 mg/kg) | ||||
| bety ± SD | n | bety ± SD | n | ||
| Boby vektområde (kg) | 0.352-0.431 | 8 | 0.231-0.296 | 9 | |
| Morfologi | RVIDd (mm) | 2,72 ± 0,43 | 8 | 5,04 ± 1,68* | 9 |
| RVIDs (mm) | 1,77 ± 0,52 | 8 | 4,04 ± 1,58* | 9 | |
| RVFWT (mm) | 0,59 ± 0,13 | 8 | 1,38 ± 0,30* | 9 | |
| PV-diameter (mm) | 3,72 ± 0,38 | 8 | 3,50 ± 0,24 | 9 | |
| RAA (mm2) | 17,97 ± 3,14 | 5 | 34,46 ± 12,15* | 8 | |
| RVEDA (mm2) | 37,97 ± 6,57 | 5 | 52,78 ± 7,41* | 8 | |
| RVESA (mm2) | 21.68 ± 8.41 | 5 | 44,40 ± 5,04* | 8 | |
| Systolisk funksjon | RVFAC (%) | 44.16 ± 16.55 | 5 | 15,49 ± 5,07* | 8 |
| PET (ms) | 70,78 ± 5,89 | 8 | 74,52 ± 7,65 | 9 | |
| PAT (ms) | 32,56 ± 6,01 | 8 | 20,23 ± 4,21* | 9 | |
| PAT / PET-forhold | 0,46 ± 0,10 | 8 | 0,27 ± 0,05* | 9 | |
| PV PSV (mm/s) | 1032,35 ± 100,76 | 8 | 605,85 ± 170,29* | 9 | |
| PVCO (ml/min) | 179,03 ± 39,92 | 8 | 73,04 ± 36,57* | 9 | |
| PVSV (μL) | 505,53 ± 114,04 | 8 | 215,97 ± 99,58* | 9 | |
| HR (bpm) | 358,52 ± 43,14 | 8 | 324,69 ± 42,35 | 9 | |
| CL (ms) | 169,86 ± 22,60 | 8 | 185,84 ± 22,56 | 9 | |
| PAT / CL-forhold | 0,20 ± 0,05 | 8 | 0,11 ± 0,02* | 9 | |
| TAPSE (mm) | 3,33 ± 0,63 | 7 | 1,47 ± 0,49* | 8 | |
| ET (ms) | 77,83 ± 11,16 | 7 | 78,52 ± 7,82 | 8 | |
| TCO (ms) | 92,93 ± 9,58 | 7 | 107,96 ± 11,77* | 8 | |
| RVMPI | 0,20 ± 0,09 | 7 | 0,39 ± 0,19* | 8 | |
| S' (mm/s) | 62,62 ± 12,78 | 6 | 25,90 ± 8,26* | 7 | |
| Diastolisk funksjon | E (mm/s) | 460,33 ± 82,90 | 7 | 684,89 ± 177,53* | 8 |
| E' (mm/s) | 53.07 ± 26.35 | 6 | 40,82 ± 23,34 | 7 | |
| E/E' | 9,79 ± 3,18 | 6 | 23.79 ± 17.34 | 7 | |
Tabell 1: Ekkokardiografiske parametre i høyre ventrikkel ved dag 24 etter MCT (MCT-gruppe) eller vehikkeladministrasjon (kontrollgruppe) hos Sprague Dawley-rotter. Data presentert som gjennomsnitt ± SD. Student t-test ble brukt til å analysere data. *p < 0,05. Forkortelser: Monokrotalin (MCT), RV indre diameter under diastol (RVIDd), RV indre diameter under systole (RVIDs), RV fri veggtykkelse (RVFWT), høyre atrieområde (RAA), høyre ventrikkel ende-diastolisk område (RVEDA), høyre ventrikkel ende-systolisk område (RVESA), RV fraksjonert arealendring (RVFAC), pulmonal ejeksjonstid (PET), pulmonal akselerasjonstid (PAT), pulmonal topp systolisk hastighet (PV PSV), hjerteminuttvolum (PV CO), slagvolum (PV SV), hjertefrekvens (HR), hjertesykluslengde (CL), trikuspidalplan systolisk ekskursjon (TAPSE), ejeksjonstid (ET), trikuspidal lukketid (TCO), RV myokardytelsesindeks (RVMPI), trikuspidal ringformet hastighet ved systole (S'), hastighet på blodstrømmen over TV under tidlig diastolisk fylling (E) og trikuspidalhastighet ved tidlig diastol (E').
| Nekropsy parametere | Eksperimentelle grupper | |
| Kontroll (Kjøretøy, n = 6-8) |
MCT (60 mg/kg, n = 7-9) |
|
| HW/TL (mg/mm) | 29,4 ± 2,40 | 30,8 ± 3,22 |
| LW/TL (mg/mm) | 40,3 ± 2,03 | 55,8 ± 6,75* |
| (LV+S)/TL (mg/mm) | 20,6 ± 1,81 | 16,1 ± 1,00* |
| RV/TL (mg/mm) | 5,76 ± 0,53 | 10,6 ± 2,39* |
| RV/(LV+S) | 0,28 ± 0,03 | 0,66 ± 0,16* |
| TL (mm) | 39,3 ± 1,03 | 38,7 ± 1,74 |
Tabell 2: Organmålinger ved dag 24 etter MCT (MCT-gruppe) eller vehikkeladministrasjon (kontrollgruppe) hos Sprague Dawley-rotter. Data presentert som gjennomsnitt ± SD. Student t-test ble brukt til å analysere data. *p < 0,05. Forkortelser: Monocrotaline (MCT), hjertevekt (HW), lungevekt (LW), høyre ventrikkel (RV), venstre ventrikkel (LV) og tibialengde (TL).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ekkokardiografisk evaluering av bobilen er et verdifullt oppdagelsesverktøy for screening av effektiviteten av nye behandlinger i dyremodeller av PAH. Dyptgående karakterisering av bobilens struktur og funksjon er nødvendig som nye mål for behandling av PAH adresse RV remodeling 4,14. Denne studien beskriver en detaljert protokoll som muliggjør vellykket karakterisering av RV-struktur og funksjon.
Den komplekse strukturelle geometrien og posisjoneringen bak brystbenet gjør ekkokardiografisk karakterisering av RV vanskelig; Dermed brukes modifiserte ekkokardiografiske visninger for å lette RV-visualisering og for å bistå i presis identifisering av RV-endokardielle grenser under analyser. I denne forbindelse brukes modifisert PLAX for bedre visualisering og for å oppnå lungestrømningshastigheter og morfologiske målinger av RV. Andre protokoller har beskrevet bruken av parasternale kortaksevisninger for å måle lungestrøm og RV-veggtykkelse15; Bruken av modifisert PLAX tillater imidlertid konsistente representative visninger av lungestrømningshastighetene som skal oppnås, og forbedrer også RV-friveggdefinisjonen. I tillegg brukes den RV-fokuserte firekammer-apikale visningen til å forbedre visualiseringen av RA- og RV-kammerveggene og konsekvent oppnå målinger av RVs systoliske og diastoliske parametere.
Følgende parametere anbefales for å vurdere RV systolisk funksjon: TAPSE, RVFAC, RIM og S'. TAPSE er et mål på RV langsgående kontraksjon og har blitt rapportert å korrelere med graden av RV dysfunksjon16; TAPSE evaluerer imidlertid bare langsgående kontraksjon uten å ta hensyn til den radiale komponenten av sammentrekning som blir relevant i en dilatert RV11. Til tross for begrensningen forblir TAPSE en rutinemessig oppnådd parameter, da den er lettere å skaffe seg sammenlignet med RVFAC og RIMP; En fullstendig evaluering av graden av systolisk dysfunksjon bør imidlertid inkludere vurdering av S', RIMP og RVFAC. S 'er lett målt, pålitelig og reproduserbar, men det evaluerer bare langsgående systolisk funksjon. Hos mennesker korrelerer RVFAC godt med RV-ejeksjonsfraksjon (EF)10 og er en mer nøyaktig måling av RV-funksjon enn TAPSE. RIMP, definert som [TCO-ET]/ET, er en indeks for global RV-ytelse, reflekterer både RV systolisk og diastolisk funksjon, og er en prognostisk markør hos pasienter med PAH17. RIMP måles fra TV PW Doppler siden det lettere kan oppnås, selv om det også kan måles fra vevsdoppleren av lateral tricuspid annulus. Det er viktig å bruke flere indekser for RV systolisk funksjon når man vurderer effektiviteten av medikamentell behandling i PAH dyremodeller for å overvinne begrensningen av hver måling. Bruk av RVEF som måling av systolisk funksjon anbefales ikke på grunn av kompleksiteten til RV-geometrien, noe som fører til grovt undervurderte volumer10.
RV-diastolisk funksjon hos rotter er et understudert område på grunn av de tekniske vanskelighetene med å skaffe TV-strømningshastighetene og TV-laterale ringromsvevdoppler. Ved å bruke RV-fokusert firekammer apikal visning som angitt i denne protokollen, kan konsistente ekkokardiografiske visninger med god endokardial grensedefinisjon oppnås. E / E 'ratio og RAA bør brukes som et mål på RV diastolisk funksjon i tidlig RV dysfunksjon. Belastningsanalyse har blitt et kraftig verktøy for å få tilgang til LV systolisk dysfunksjon i begynnelsen av LV dysfunksjon; Imidlertid bruker bare noen få studier denne typen analyse for å evaluere RV14,18, på grunn av vanskelighetene som oppstår ved å visualisere hele veggen og oppnå ekkokardiografiske bilder av høy kvalitet som er nødvendige for belastningsanalyse. Selv om belastningsanalyser ikke ble utført i denne studien, er kvaliteten på bildene oppnådd etter denne protokollen tilstrekkelig til å utføre denne typen analyser, om nødvendig.
Til slutt gir denne protokollen en detaljert beskrivelse av ekkokardiografiske visninger som er nødvendige for å vurdere RV- og RA-morfologi, samt å karakterisere RV systolisk og diastolisk funksjon. Disse dataene gir en forbedret evaluering av effekten av nye forbindelser for å forstyrre PAH-utviklingen i gnagerdyrmodeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av NHLBI K01 HL155241 og AHA CDA849387 tildelt forfatteren P.C.R.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% sodium cloride injection USP | Baxter | 2B1324 | |
| Braided cotton rolls | 4MD Medical Solutions | RIHD201205 | |
| Depilating agent | Wallgreens | Nair Hair Remover | |
| Electrode gel | Parker Laboratories | 15-60 | |
| High frequency ultrasound image system and imaging station | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Vevo 2100 | |
| Isoflurane | MedVet | RXISO-250 | |
| Male sprague Dawley rats | Charles River Laboratories | CD 001 | CD IGS Rats (Crl:CD(SD)) |
| Monocrotaline (MCT) | Sigma-Aldrich | C2401 | |
| Rectal temperature probe | Physitemp | RET-3 | |
| Sealed induction chambers | Scivena Scientific | RES644 | 3 L size |
| Solid-state array ultrasound transducer | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Vevo MicroScan transducer MS250S | |
| Stainless steel digital calipers | VWR Digital Calipers | 62379-531 | |
| Ultrasound gel | Parker Laboratories | 11-08 | |
| Vevo Lab software | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Verison 5.5.1 |
References
- Galie, N., McLaughlin, V. V., Rubin, L. J., Simonneau, G. An overview of the 6th World Symposium on Pulmonary Hypertension. European Respiratory Journal. 53 (1), 1802148 (2019).
- Tyagi, S., Batra, V. Novel therapeutic approaches of pulmonary arterial hypertension. International Journal of Angiology. 28 (2), 112-117 (2019).
- Hoeper, M. M., et al. Targeted therapy of pulmonary arterial hypertension: Updated recommendations from the Cologne Consensus Conference 2018. International Journal of Cardiology. 272, 37-45 (2018).
- Sommer, N., et al. Current and future treatments of pulmonary arterial hypertension. British Journal of Pharmacology. 178 (1), 6-30 (2021).
- Farber, H. W., et al. Five-year outcomes of patients enrolled in the REVEAL registry. Chest. 148 (4), 1043-1054 (2015).
- Zolty, R. Novel experimental therapies for treatment of pulmonary arterial hypertension. Journal of Experimental Pharmacology. 13, 817-857 (2021).
- Jasmin, J. F., Lucas, M., Cernacek, P., Dupuis, J. Effectiveness of a nonselective ET(A/B) and a selective ET(A) antagonist in rats with monocrotaline-induced pulmonary hypertension. Circulation. 103 (2), 314-318 (2001).
- Stenmark, K. R., Meyrick, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 297 (6), 1013-1032 (2009).
- Muresian, H. The clinical anatomy of the right ventricle. Clinical Anatomy. 29 (3), 380-398 (2016).
- Rudski, L. G., et al. Guidelines for the echocardiographic assessment of the right heart in adults: a report from the American Society of Echocardiography endorsed by the European Association of Echocardiography, a registered branch of the European Society of Cardiology, and the Canadian Society of Echocardiography. Journal of the American Society of Echocardiography. 23 (7), 685-713 (2010).
- Jones, N., Burns, A. T., Prior, D. L. Echocardiographic assessment of the right ventricle-state of the art. Heart Lung and Circulation. 28 (9), 1339-1350 (2019).
- Spyropoulos, F., et al. Echocardiographic markers of pulmonary hemodynamics and right ventricular hypertrophy in rat models of pulmonary hypertension. Pulmonary Circulation. 10 (2), 2045894020910976 (2020).
- Armstrong, W. F., Ryan, T., Feigenbaum, H. Feigenbaum's echocardiography. 7th edn. , Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins. (2010).
- Kimura, K., et al. Evaluation of right ventricle by speckle tracking and conventional echocardiography in rats with right ventricular heart failure. International Heart Journal. 56 (3), 349-353 (2015).
- Cheng, H. W., et al. Assessment of right ventricular structure and function in mouse model of pulmonary artery constriction by transthoracic echocardiography. Journal of Visualized Experiments. 84, e51041 (2014).
- Mazurek, J. A., Vaidya, A., Mathai, S. C., Roberts, J. D., Forfia, P. R. Follow-up tricuspid annular plane systolic excursion predicts survival in pulmonary arterial hypertension. Pulmonary Circulation. 7 (2), 361-371 (2017).
- Grapsa, J., et al. Echocardiographic and hemodynamic predictors of survival in precapillary pulmonary hypertension: seven-year follow-up. Circulation: Cardiovascular Imaging. 8 (6), 002107 (2015).
- Bernardo, I., Wong, J., Wlodek, M. E., Vlahos, R., Soeding, P. Evaluation of right heart function in a rat model using modified echocardiographic views. PLoS One. 12 (10), 0187345 (2017).
