Summary
Detta protokoll beskriver ekokardiografisk karakterisering av högerkammarmorfologi och funktion i en råttmodell av pulmonell arteriell hypertension.
Abstract
Pulmonell arteriell hypertension (PAH) är en progressiv sjukdom som orsakas av vasokonstriktion och ombyggnad av de små artärerna i lungorna. Denna ombyggnad leder till ökat pulmonellt vaskulärt motstånd, försämrad högerkammarfunktion och för tidig död. För närvarande godkända terapier för PAH riktar sig till stor del mot pulmonella vasodilaterande vägar; De senaste framväxande terapeutiska modaliteterna är dock inriktade på andra nya vägar som är involverade i patogenesen av sjukdomen, inklusive remodellering av höger kammare (RV). Bildtekniker som möjliggör longitudinell bedömning av nya terapier är mycket användbara för att bestämma effekten av nya läkemedel i prekliniska studier. Icke-invasiv trans-thoraxekokardiografi är fortfarande standardmetoden för att utvärdera hjärtfunktionen och används ofta i gnagarmodeller. Ekokardiografisk utvärdering av RV kan dock vara utmanande på grund av dess anatomiska position och struktur. Dessutom saknas standardiserade riktlinjer för ekokardiografi i prekliniska gnagarmodeller, vilket gör det svårt att genomföra en enhetlig bedömning av RV-funktionen mellan studier i olika laboratorier. I prekliniska studier används monokrotalin (MCT) skademodellen hos råttor i stor utsträckning för att utvärdera läkemedelseffekt för behandling av PAH. Detta protokoll beskriver den ekokardiografiska utvärderingen av RV hos naiva och MCT-inducerade PAH-råttor.
Introduction
PAH är en progressiv sjukdom som definieras som ett genomsnittligt pulmonellt arteriellt tryck i vila på mer än 20 mmHg1. Patologiska förändringar i PAH inkluderar remodellering av lungartären (PA), vasokonstriktion, inflammation och fibroblastaktivering och proliferation. Dessa patologiska förändringar leder till ökat pulmonellt vaskulärt motstånd och följaktligen höger ventrikulär remodellering, hypertrofi och misslyckande2. PAH är en komplex sjukdom som innebär överhörning mellan flera signalvägar. De för närvarande godkända läkemedlen för behandling av PAH riktar sig mestadels mot vasodilaterande vägar, inklusive kväveoxidcyklisk guanosinmonofosfatväg, prostacyklinväg och endotelinväg. Terapier riktade mot dessa vägar har använts både som monoterapier och i kombinationsterapier 3,4. Trots framstegen inom behandling av PAH under det senaste decenniet visar fynd från det USA-baserade REVEAL-registret en dålig 5-årsöverlevnad för nydiagnostiserade patienter5. På senare tid har framväxande terapeutiska modaliteter fokuserat på sjukdomsmodifierande medel som kan påverka den multifaktoriella patofysiologin hos den vaskulära ombyggnaden som förekommer vid PAH i hopp om att störa sjukdomen6.
Djurmodeller av PAH är ovärderliga verktyg för att bedöma effekten av nya läkemedelsbehandlingar. Den MCT-inducerade PAH-råttmodellen är en allmänt använd djurmodell som kännetecknas av ombyggnad av lungartärkärlen, vilket i sin tur leder till ökat pulmonellt vaskulärt motstånd och högerkammarhypertrofi och dysfunktion 7,8. För att bedöma effekten av nya behandlingar fokuserar forskare normalt på den terminala bedömningen av RV-tryck utan att överväga den longitudinella utvärderingen av PA-tryck, RV-morfologi och RV-funktion. Användningen av icke-invasiva och icke-terminala avbildningstekniker är avgörande för en omfattande undersökning av sjukdomsprogression i djurmodeller. Transthoracic ekokardiografi är fortfarande standardmetoden för att utvärdera hjärtmorfologi och funktion i djurmodeller på grund av dess låga kostnad och användarvänlighet jämfört med andra avbildningsmetoder, såsom magnetisk resonansbildning. Ekokardiografisk utvärdering av RV kan dock vara utmanande på grund av RV-positioneringen under bröstbensskuggan, dess välutvecklade trabekulering och dess anatomiska form, som alla gör det svårt att avgränsa endokardgränsen 9,10,11.
Denna artikel syftar till att beskriva ett omfattande protokoll för att utvärdera RV-dimensioner, områden och volymer, och systolisk och diastolisk funktion hos naiva och MCT-inducerade PAH hos Sprague Dawley (SD) råttor. Dessutom beskriver detta protokoll en metod för att bedöma ekokardiografiska dimensioner i det normala och utvidgade högra atriumet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla experiment i detta protokoll utfördes enligt riktlinjerna för djurvård vid University of Illinois i Chicago, Chicago Institutional Animal Care and Use Committee. Hanråttor av typen Sprague Dawley (SD) vägde mellan 0,200–0,240 kg vid tidpunkten för MCT-injektionen. Protokollet som beskrivs i den här artikeln kan dock användas med ett bredare kroppsviktsintervall. Djuren erhölls från en kommersiell källa (se Materialförteckning).
1. Studiens utformning
- Djur
- Skaffa manliga SD-råttor och låt dem acklimatisera i 4-7 dagar. Gruppera råttorna av experimentgruppen i rena burar och förvara dem i ett rum som hålls vid 20-26 ° C (68-79 ° F) och upplyst med lysrör som är tidsinställda för att ge en 14 timmars ljus, 10 timmars mörk cykel.
- Ge råttor ad libitum tillgång till en vanlig diet och kranvatten under hela experimentet.
- MCT-administration
- På studiedag 0, administrera till råttorna en subkutan dos (3,0 ml/kg) MCT (60 mg/kg i HCl/NaOH, pH 7,4; se Materialtabell; MCT-grupp) eller vehikel (avjoniserat vatten, pH 7,4; Kontrollgrupp).
OBS: På grund av hanteringsförsiktighetsåtgärder i samband med MCT-dosering ska alla råttor doseras på studiedag 0 i ett förvaringsrum för kemisk fara och inhysas där fram till studiedag 7. - På studiedag 7, överför råttorna tillbaka till ett allmänt bostadsrum under hela studien.
- På studiedag 0, administrera till råttorna en subkutan dos (3,0 ml/kg) MCT (60 mg/kg i HCl/NaOH, pH 7,4; se Materialtabell; MCT-grupp) eller vehikel (avjoniserat vatten, pH 7,4; Kontrollgrupp).
- Kliniska observationer
- Utför bur sida observationer för allmän hälsa och utseende en gång dagligen. Observera djuren för dödlighet och tecken på smärta och ångest.
- Registrera eventuella ovanliga observationer som noterats under hela studien i anteckningsboken för rådata.
- Kroppsvikt
- Registrera kroppsvikter på studiedag 0 (fördosering), varje vecka under hela studien och på dagen för ekokardiografi.
2. Ekokardiografi
- Förberedelse
- På studiedag 23 efter MCT-dosering, bedöva råttorna med isofluran vid 2%-3%, driven av 100% syre (1 l/min) i en induktionskammare (se materialtabell).
- Ta bort råttorna från kammaren när medvetandet har förlorats och överför dem till bildstationens djurplattform (se Materialförteckning) i en dorsal decubitusposition. Administrera isofluran med hjälp av en noskon ansluten till en förångare som levererar 1%-2% isofluran driven av 100% syre (1 l/min).
- Applicera elektrodgel på varje tass och säkra tassarna i elektrokardiogramplattan på djurplattformen.
- Ta bort pälsen genom att raka bröstet och använda ett hårborttagningsmedel (se Materialförteckning). Säkra en rektal temperatursond (se materialtabell) på plats. Placera bomullsrullar på djurets högra och vänstra sida och säkra dem med tejp för att bibehålla djurets position när plattformen lutas.
- Övervakning
- Övervaka kroppstemperatur och hjärtfrekvens (HR) via ultraljudsavbildningssystemet (se materialförteckning) under hela proceduren.
- Håll kroppstemperaturen vid 37 ± 0,5 °C och håll pulsen på 350 slag per minut eller högre, om möjligt. Använd värmebordet och en värmelampa för att hålla temperaturen.
- Bildinsamling
- Utför transtorakal ekokardiografi med hjälp av ett högfrekvent ultraljudsbildsystem utrustat med en ultraljudsgivare med solid state-array (se materialförteckning).
OBS: Alla riktningar som anges i ekokardiografiska metoder hänvisar till höger eller vänster om sonografen. - Vy över vänster kammare (LV) parasternal långaxel (PLAX)
- Med råttorna i dorsal decubitus-position, luta plattformen åt vänster och för den kaudalt ner ca 10 °.
- Placera givaren i hållaren i ett halvlåsläge med skåran pekande i stjärtriktningen. Flytta givaren så att den pekar mot vänster parasternal linje. Vrid givaren moturs ungefär 30°-45° och luta något kraniellt längs y-axeln (sidogivaraxeln).
- Applicera varm ultraljudsgel (se materialförteckning) på råttans bröstkorg och sänk givaren tills den är i kontakt med gelén.
- Flytta plattformen åt höger eller vänster för att få en vy över hela LV i mitten av skärmen. Justera bilddjupet om det behövs och flytta fokalzonen till den bakre väggen.
- Gör finjusteringar i plattformspositionen för att säkerställa att aorta och apex är i samma horisontella plan och LV-utflödeskanalen är synlig.
- Tryck på Cine Store för att spela in data. Exempel på PLAX-vyer av LV-bilderna visas i figur 1A.
OBS: Avbildning av LV möjliggör förtrogenhet med hjärtats position i bröstet. En dilaterad husbil kan förskjuta LV.
- Modifierad PLAX-vy av höger ventrikulär utflödeskanal
- Luta plattformen åt höger ca 10°-15° och för den stjärtat ner ca 5°.
- Flytta givaren så att den pekar på råttans högra parasternala linje. Vrid givaren moturs i cirka 30°.
- Applicera ultraljudsgel på råttans bröstkorg och sänk givaren tills den är i kontakt med gelén.
- Flytta plattformen åt vänster eller höger tills husbilen visas. I denna modifierade PLAX-vy är RV-väggen och interventrikulär septum (IVS) tydligt synliga, som visas i figur 1B.
- Vrid givaren moturs om det behövs för att säkerställa att aorta och mitralisklaffen är synliga.
- Flytta fokuszonen till RV-fri väggregion för att förbättra definitionen av endokardiell kant och justera förstärkningen vid behov.
- Tryck på Cine Store för att spela in data.
- Placera M-mode-provvolymlinjen i det område där RV är bredast och justera grinden så att den omfattar RV och LV. Provvolymlinjen placeras vanligtvis mellan skuggan av två sammanhängande kotor hos råttor.
- Tryck på Uppdatera och tryck sedan på Cine Store för att registrera data. Exempel på M-läge vid de modifierade PLAX-vybilderna visas i figur 1C, och dessa bilder används för att analysera RV: s inre diameter under diastol (RVIDd), RV inre diameter under systol (RVID) och RV-fri väggtjocklek (RVFWT).
- Lyft givaren och flytta den så att den bara lutar något mot råttans högra parasternala linje. Flytta plattformen till en position som bara lutar något åt höger.
- Sänk givaren tills den är i kontakt med gelen.
- Flytta plattformen kaudalt och åt höger eller vänster tills RV-utflödesspåret är synligt och lungventilen (PV) är i fokus och tydligt synlig.
- Tryck på Cine Store för att spela in data. Exempel på B-läge vid den modifierade PLAX-vyn i nivå med bilderna av utflödeskanalen för höger kammare visas i figur 2A. dessa bilder används för att analysera PV-diametern.
- Om du bibehåller samma B-lägesbildplats trycker du på Färg för att underlätta identifieringen av flödet genom solcellsenheten. Justera hastigheten för att optimera aliasen så att den högsta hastighetspunkten syns. Öka bildfrekvensen om det behövs genom att minska storleken på färgrutan med dopplerbild.
- Tryck på PW (pulsad våg) för att kvantifiera blodflödesspektrumet. Öka provvolymens grindstorlek till maximalt.
- Justera baslinjehastigheten och dopplerförstärkningen vid behov så att flödet syns.
- Rikta in PW-vinkeln parallellt med flödesriktningen genom solcellsenheten. Placera provvolymen vid högsta hastighet (aliaspunkt) eller vid spetsarna på solcellsbroschyren.
- Tryck på Uppdatera för att visa lunghastigheterna.
- Tryck på Cine Store för att spela in data. Exempel på PV PW Doppler-bilder visas i figur 2B; dessa bilder används för att analysera lungutkastningstiden (PET), lungaccelerationstiden (PAT), systolisk lungtopphastighet (PV PSV), hjärtminutvolym (PV CO), slagvolym (PV SV), HR och hjärtcykellängd (CL).
- RV-fokuserad apikal fyrkammarvy
- Luta plattformen till vänster hörn och ner kraniellt så långt det går.
- Vrid givaren moturs 30°-45° och flytta givaren så att den pekar mot djurets högra axel/öra.
- Sänk givaren tills den är i kontakt med gelen. Denna position möjliggör en typisk fyrkammarvy där LV och vänster förmak (LA) är synliga, men bröstbenskuggan är över RV-fri vägg.
- Justera den apikala fyrkammarvyn för att få den RV-fokuserade vyn genom att placera givaren något i sidled mot den sanna toppen. Gör finjusteringar tills maxplanet erhålls. Flytta plattformen något kaudalt om det behövs. I denna vy är bröstbenets skugga placerad i septum, och den RV-fria väggen är tydligt synlig.
- Se till att RV, höger atria (RA) och tricuspidventil (TV) är synliga i det akustiska fönstret.
OBS: Om RV-kammaren är mycket dilaterad kanske LV-kammaren inte är helt synlig. Genom att hålla givaren manuellt kan du finjustera givarvinkeln för att förbättra RV-visualiseringen. - Se till att RV inte förkortas och att LV-utflödeskanalen inte öppnas.
- Tryck på Cine Store för att spela in data. Exempel på B-läge vid RV-fokuserade apikala fyrkammarvybilder visas i figur 3A, B; dessa bilder används för att analysera rätt förmaksområde (RAA), RV end-diastoliskt område (RVEDA) och RV end-systoliskt område (RVESA).
- Placera M-lägesmarkören genom tricuspidringen vid RV-friväggen. Se till att ha optimal bildorientering för att undvika underskattning av hastigheter. Tryck på Uppdatera och Cine Store för att registrera data.
OBS: Exempel på tricuspid annulus rörelsebilder visas i figur 4A, B; dessa bilder används för att analysera tricuspid ringformiga plan systoliska utflykt (TAPSE). - Tryck på B-Mode och tryck sedan på Color för att underlätta identifieringen av flödet genom TV:n. Justera hastigheten för att optimera aliasen så att den högsta hastighetspunkten syns. Öka bildfrekvensen genom att minska storleken på färgdopplerbildrutan.
- Tryck på PW för att kvantifiera blodflödesspektrumet. Öka provvolymens grindstorlek till maximalt.
- Justera baslinjehastigheten och dopplerförstärkningen vid behov.
- Rikta in PW-vinkeln parallellt med RV-inflödets riktning. Placera provvolymen med högsta hastighet (aliaspunkt) eller vid spetsarna på tricuspidbipacksedeln.
OBS: Avbildning av tricuspidinflödeshastigheterna kan vara utmanande; Finjustering av givarens läge kan vara nödvändig. - Tryck på Uppdatera för att visa tricuspidinflödeshastigheterna.
- Tryck på Cine Store för att spela in data. Exempel på tricuspid PW Doppler-bilder visas i figur 5A, B; dessa bilder används för att analysera hastigheten på blodflödet över TV: n under tidig diastolisk fyllning (E), hastigheten på blodflödet över TV: n under sen diastolisk fyllning (A), tricuspid stängning öppen tid (TCO) och utkastningstid (ET).
- Gå tillbaka till B-läge och tryck på Vävnad. Justera plattformen något för att säkerställa att tricuspid annulus är tydligt synlig och placera vävnadsdopplerprovets volymgrind vid tricuspid annulus vid RV-fri vägg. Öka provvolymgrinden till maximal bredd.
- Justera baslinjehastigheten och dopplerförstärkningen vid behov.
- Tryck på Uppdatera för att visa vävnadsdopplerbilden.
- Tryck på Cine Store för att spela in data. Exempel på vävnadsdopplerbilder visas i figur 6A,B; dessa bilder används för att analysera tricuspid ringformig hastighet vid tidig diastol (E '), tricuspid ringformig hastighet vid sen diastol (A ') och tricuspid ringformig hastighet vid systole (S ').
OBS: TAPSE och vävnadsdoppler mäts alltid vid RV-fri vägg och inte vid interventrikulär septum.
- Utför transtorakal ekokardiografi med hjälp av ett högfrekvent ultraljudsbildsystem utrustat med en ultraljudsgivare med solid state-array (se materialförteckning).
- Bildanalys
- Utför bildanalys offline med hjälp av den instrumentkompatibla programvaran (se Materialförteckning).
- Undvik områden där inspiration uppstår för alla mätningar och gör alltid minst tre mätningar för varje parameter som ska analyseras.
- Modifierad parasternal långaxelvy av höger ventrikulär M-läge
- Välj en bild som erhållits från den modifierade parasternala långaxelvyn av höger ventrikulär M-läge och analysera RVIDd (mm), RVIDs (mm) och RVFWT (mm).
- Välj Djup bland de allmänna mätverktygen.
- Spåra RV-kammarens innerdiameter vid diastol och systol (figur 1C) och märk mätningarna som RVIDd respektive RVID.
- Välj djupverktyget för att mäta tjockleken på den husbilsfria väggen. Rikta in markören mot toppen av EKG: s R-våg och spåra väggen vid änddiastolen (figur 1C). Uteslut RV-trabekulationer och papillärmuskel från RV-endokardiell gräns, om sådan finns, för att noggrant mäta RV-väggtjockleken. Uteslut också epikardiellt fett, om det finns, för att undvika felaktigt ökade mätningar.
OBS: RV-trabekulationer och papillärmuskel visas som avvecklade linjer som följer RV-väggens rörelse. RVIDd-, RVID- och RVFWT-mätningar visas i rapporten under avsnittet generiskt paket. När det finns en signifikant förtjockning av perikardiet kan mätningen av RV-väggen vara svår; Välj därför analysområdet noggrant.
- PV B-läge
- Välj en bild som erhållits från PV B-läget och analysera PV-diametern (mm).
- Välj RV och PV-funktion från rullgardinsmenyn för hjärtpaket.
- Välj PV diam och välj en ram där ventilen är öppen. På ventilens nivå, spåra avståndet från vägg till vägg och undvik ventilringen (figur 2A).
OBS: Mätningar kommer att visas i rapporten under avsnittet RV och PV-funktion.
- PV PW Doppler
- Välj en bild som erhållits från PV PW Doppler för att analysera PET (ms), PAT (ms), PV PSV (mm / s), HR (slag per min), CL (ms), PAT / PET-förhållande, hjärtminutvolym (PV CO; ml / min), slagvolym (PV SV; μL) och PAT / CL-förhållande.
- Välj RV - och PV-funktion från rullgardinsmenyn för hjärtpaket och välj minst tre representativa PA-hastigheter.
- Välj PAT och spåra PA-flödeshastigheten som börjar vid accelerationspunkten och slutar vid hastighetstoppen.
- Välj PET och börja mätningen från accelerationspunkten och avsluta när signalen når baslinjen.
- Välj PV peak vel, placera markören vid den högsta hastighetspunkten och vänsterklicka.
- För att få PV VTI-mätning (PV velocity time integral), välj det negativa alternativet under Vevo-toppverktyget.
OBS: Detektionskänsligheten kan ändras, men ett konstant värde bör bibehållas under hela studien. - Välj PV VTI i rullgardinsmenyn. Starta mätningen genom att vänsterklicka på början av toppen och avsluta genom att högerklicka i slutet av toppen för att slutföra mätningen. Justera toppkonturen genom att flytta linjerna efter behov.
- Placera markören vid en PV VTI-mätning och högerklicka för att välja Egenskaper och aktivera sedan HR-mätning i parameteralternativet. Upprepa detta steg för alla tre VTI-mätningarna.
- Välj Tid från de allmänna mätverktygen och spåra tiden från accelerationspunkten för en cykel till accelerationspunkten för nästa cykel för att beräkna CL (figur 2B).
OBS: Mätningar kommer att visas i rapporten under avsnittet RV och PV-funktion. PAT/PET-förhållandet, PV CO och PV SV beräknas av instrumentprogramvaran.
- RV-fokuserad apikal fyrkammarvy B-läge
- Välj en bild som erhållits från det RV-fokuserade apikala fyrkammarvyläget B-läge för att analysera RAA (mm 2), RVEDA (mm 2), RVESA (mm2) och RV fraktionerad areaändring [RVFAC = (RVEDA-RVESA)/RVEDA, %].
- Välj SAX (parasternal short axis) från rullgardinsmenyn för hjärtpaket.
- Välj en B-lägesbild vid änddiastol från den RV-fokuserade apikala fyrkammarvyn. Se till att hela husbilen är i sikte, inklusive toppen och sidoväggen.
- Välj ENDOarea;d och spåra RV-endokardiet från ringformen, längs den fria väggen till toppen och sedan tillbaka till ringröret längs interventrikulär septum, exklusive trabekulationer om de är närvarande.
- Välj en B-lägesbild vid slutet av systolen, välj ENDOarea;s i listrutan SAX B-mode och upprepa RV-spåret. Använd samma bild, välj 2D-området från de generiska mätverktygen och spåra RA genom att följa endokardiet och utesluta vena cava och RA-appendage. Området mellan tricuspidventilens broschyrer och ringröret är också uteslutet (figur 3).
- Upprepa ENDO-områdesmätningen vid diastole och systol och RA-områdesmätning i ytterligare två bilder.
OBS: Mätningar av RV-området vid diastole och systol visas i rapporten under avsnittet SAX-B-läge. RA-området visas under de generiska förpackningsmåtten. RVFAC beräknas med formeln RVFAC = (RVEDA-RVESA)/RVEDA10.
- M-läge vid den laterala delen av tricuspid annulus
- Välj en M-lägesbild som erhållits från den laterala delen av tricuspid annulus för att analysera TAPSE (mm).
- Välj Djup från de generiska mätverktygen och välj ett område med minst tre på varandra följande hjärtplatser som är fria från inandningsstörningar.
- Spåra avståndet från änddiastol till toppsystol i RV-ringformiga segmentet i tre på varandra följande hjärtcykler (figur 4).
OBS: Mätningar kommer att visas i rapporten under det generiska paketavsnittet.
- TV PW Doppler
- Välj en bild som erhållits från TV PW-dopplern för att analysera E (mm / s), A (mm / s), TCO (ms), ET (ms) och RV myokardiellt prestandaindex [RVMPI = (TCO-ET) / ET] 11.
- Välj TV Flow från rullgardinsmenyn för hjärtpaket och välj minst tre representativa TV-hastigheter.
- Välj TV E (tricuspid tidig fyllning), placera markören vid E-vågens högsta hastighetspunkt och vänsterklicka; En linje dras från den högsta hastigheten till baslinjen. På samma sätt väljer du TV A (tricuspid sen fyllning), placerar markören med A-vågens högsta hastighet och vänsterklickar; En annan linje dras från den högsta hastigheten till baslinjen (figur 5).
- För att mäta utkastningstiden (ET), välj tidsverktyget från de generiska mätverktygen och mät tiden från början (framkant) till upphörandet (bakkanten) av tricuspidinflödet (ett område där flödet matas ut). Märk mätningarna som ET (figur 5).
- För att mäta TCO-tiden, välj tidsverktyget och spåra tiden från slutet av tricuspid En våg av en cykel till början av tricuspid E-vågen i nästa cykel. Märk mätningarna som TCO (figur 5).
OBS: Mätningar av TV E och TV A visas i rapporten under avsnittet TV Flow. ET- och TCO-mätningar visas under de generiska paketmätningarna. RVMPI beräknas som (TCO-ET)/ET11. E, ET och TCO mäts med ett konstant R-R-intervall för att minimera fel. ET-mätningar kan också utföras från mittkanten till bakkanten; Konsekvens i hur mätningen förvärvas genom hela analysen är viktigast.
- RV lateral tricuspid annulus vävnad Doppler
- Välj en bild som erhållits från RV lateral tricuspid annulus tissue Doppler för att analysera förhållandet E '(mm / s), A '(mm / s), S '(mm / s) och E / E' Ratio.
- Välj TV Flow från rullgardinsmenyn för hjärtpaket och välj minst tre representativa fria väggvävnadshastigheter.
- Välj TV LW E, placera markören vid den högsta hastighetspunkten för E-vågen och vänsterklicka; En linje dras från den högsta hastigheten till baslinjen. På samma sätt väljer du TV LW A, placerar markören vid den högsta hastighetspunkten för A-vågen och vänsterklickar; En annan linje dras från den högsta hastigheten till baslinjen (figur 6).
- Välj MV Flow i rullgardinsmenyn för hjärtpaket och välj S WAVE.
- Placera markören vid den högsta systoliska hastigheten under utkastningsfasen, utan att överfå dopplerhöljet och vänsterklicka; en linje dras från den högsta hastigheten till baslinjen (figur 6).
OBS: Mätningar visas i rapporten under avsnitten TV Flow och MV Flow. E/E'-förhållandet beräknas manuellt.
- Obduktion
- Avliva råttorna genom exsanguination under överdosering av isofluran på studiedag 24 efter MCT-dosering enligt institutionellt godkänt protokoll.
- Ta bort hjärt-lungblocket och infusera försiktigt via vaskulaturen med iskall saltlösning tills perfusatet är klart. Separera hjärtat och lungorna och ta bort överflödig saltlösning.
- Väg varje organ separat.
- Ta bort förmaken och kassera.
- Separera LV med septum (LV + S) från RV och väg ventriklerna separat.
- Ta bort vänster skenben och separera den från mjukvävnaden.
- Skaffa en longitudinell mätning av skenbenet med hjälp av en digital bromsok (se materialförteckning).
- Kassera det dissekerade hjärtat, lungorna och skenbenet med resten av slaktkroppen.
OBS: Hjärtvikten (HW), lungvikten (LW), LV + S-vikten och RV-vikten normaliseras av skenbenets längd (TL). RV-hypertrofi bedöms av Fultons index, där RV-vikten normaliseras av LV + S-vikten [Fulton index = RV / (LV + S)]12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I denna studie användes MCT-behandlade råttor som modell för PAH. Ekokardiografisk analys utfördes på studiedag 23 efter MCT-administrering, och alla mätningar och beräkningar representerade medelvärden från tre på varandra följande cykler. Ekokardiografiska parametrar erhållna från kontrollråttor (vehikel: avjoniserat vatten) och MCT-behandlade råttor (60 mg/kg) visas i tabell 1.
Representativa bilder av PLAX-vyn hos kontrollråttor och MCT-behandlade råttor visas i figur 1A. Dessa bilder används som en första bedömning av hjärtats position och LV-morfologi. Kvantitativa bedömningar av RV erhålls i en modifierad PLAX-vy, eftersom detta möjliggör visualisering av RV (figur 1B). I den modifierade PLAX-vyn uppvisar de MCT-behandlade råttorna en förstorad höger kammare och vänster kammare verkar förskjuten från sin position jämfört med kontrollråttorna (figur 1B). M-läge erhålls i den modifierade PLAX-vyn vid RV:s bredaste område och används för att mäta RVIDd, RVID och RVFWT (figur 1C). RVIDd, RVID och RVFWT mäts, exklusive trabekulering i väggen, och RVFWT erhålls vid toppen av EKG: s R-våg. Som förväntat observeras en signifikant ökning av RVIDd, RVID och RVFWT hos MCT-behandlade råttor (figur 1C och tabell 1), vilket indikerar RV-utvidgning och förtjockning av RV-fri vägg.
Doppleravbildning används för att mäta PA-flödeshastigheter (figur 2B). Hos kontrollråttor uppvisar lungflödet en symmetrisk V-form, med en topphastighet som uppträder i mitten av systolen (figur 2B, övre panelen). Däremot är topphastigheten långsammare hos MCT-behandlade råttor och händer tidigare i systole, vilket resulterar i en signifikant förkortad PAT och mindre PAT / PET- och PAT / CL-förhållanden (tabell 1). Dessutom uppvisar MCT-behandlade råttor ett hack i sen systol (figur 2B, nedre panelen). PV PW Doppler används för att mäta PV VTI (figur 2B); PV CO och PV SV beräknas med hjälp av PV VTI respektive PV diametermätningar. PV CO och PV SV är signifikant lägre hos MCT-behandlade råttor (tabell 1), vilket indikerar nedsatt systolisk funktion. HR erhålls från PV PW Doppler-mätningarna och är jämförbar mellan kontrollråttor och MCT-behandlade råttor (tabell 1).
Den RV-fokuserade apikala fyrkammarvyn används för att mäta RVEDA, RVESA och RAA (figur 3), och RVFAC beräknas från RVEDA och RVESA. Som tidigare nämnts måste trabekulationer i väggen, om de finns, uteslutas från dessa mätningar. RVFAC minskar signifikant hos MCT-behandlade råttor (tabell 1), vilket tyder på systolisk dysfunktion hos RV. MCT-behandlade råttor uppvisar också RA-dilatation på grund av ökat PA-tryck (figur 3A, B, höger panel och tabell 1). Under normala förhållanden har LV-kaviteten ett högre tryck än RV, vilket resulterar i en septalkrökning av LV under hela hjärtcykeln (figur 3A, B, vänster paneler). När RV-trycket patologiskt ökar i PAH förloras denna normala krökning och interventrikulär septum verkar "tillplattad"13, som visas i figur 3A,B (högra paneler). Den RV-fokuserade apikala fyrkammarvyn används också för att mäta TAPSE från M-mode-förhöret av tricuspid annulus (figur 4). TAPSE reduceras signifikant hos MCT-behandlade råttor (figur 4B och tabell 1), vilket tyder på nedsatt RV-funktion.
Diastolisk funktion bedöms från PW Doppler-utvärderingen av TV-flödet och lateral TV lateral annulus tissue Doppler. MCT-behandlade råttor visar en signifikant högre E-våg och RVMPI och en tendens till ett ökat E/E'-förhållande (figur 5 och tabell 1), vilket tyder på nedsatt diastolisk funktion. TV-ringformad Dopplervy används också för att mäta E' och S' (figur 6B). MCT-behandlade råttor uppvisar signifikant långsammare S ', vilket bekräftar minskad RV systolisk funktion (demonstreras också av en minskning av PV CO och PV SV). Ingen signifikant förändring av E' observeras hos MCT-behandlade råttor. A och A' kan också erhållas från TV-flödet PW Doppler respektive lateral TV lateral annulus tissue Doppler. Dessa parametrar diskuteras inte i den här artikeln.
Hjärtvävnadsmassmätningar vid terminal skörd och ekokardiografiska analyser stöder RV-hypertrofi hos MCT-behandlade råttor jämfört med kontrollråttor. Som visas i tabell 2 är Fulton-index och RV/TL-kvoten signifikant förhöjda hos MCT-behandlade råttor jämfört med kontrollråttor. Dessutom visar MCT-behandlade råttor ett ökat LV + S / TL-förhållande, vilket indikerar LV-hypertrofi. MCT-behandlade råttor uppvisar också ett ökat LW / TL-förhållande, vilket tyder på lungödem.
Figur 1: Parasternala långaxelvyer (PLAX). (A) Representativa bilder av konventionell PLAX för att visualisera utflödet av vänster kammare (LV), vänster förmak (LA), höger förmak (RA) och aortaklaffen (AV) i en kontrollråtta (vänster panel) och monokrotalin (MCT)-behandlad råtta (höger panel). (B) Representativa bilder av modifierad PLAX-vy för att visualisera utflödeskanalen för höger kammare (RV), interventrikulär septum (IVS), LV och AV i en kontrollråtta (vänster panel) och MCT-behandlad råtta (höger panel). Hos råttor placeras M-mode-provvolymlinjen vanligtvis mellan skuggan av två sammanhängande ryggkotor (visas med blå pilar). (C) Exempel på M-modemätningar i en kontrollråtta (övre panelen) och MCT-behandlad råtta (nedre panelen). Mätningarna inkluderar RV-fri väggtjocklek (RVFWT), RV-innerdiameter under diastol (RVIDd) och RV-innerdiameter under systol (RVID). För enkel visning visas mätningarna av endast en hjärtcykel. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: PV-diameter och lungartärflödeshastigheter. (A) Representativa bilder av modifierad PLAX-vy för att visualisera lungartären och för att mäta lungventilens (PV) diameter i en kontrollråtta (vänster panel) och monokrotalin (MCT)-behandlad råtta (höger panel). (B) Pulmonell ejektionstid (PET) mäts med början vid accelerationspunkten till återgången till baslinjen hos en kontrollråtta (övre panelen) och MCT-behandlad råtta (nedre panelen). Lungaccelerationstid (PAT) är tidsintervallet mellan accelerationspunkten till hastighetstoppen. Pulmonell ventil topp systolisk hastighet (PV PSV) mäts vid toppen av dopplerflödet. PV velocity time integral (PV VTI) spåras i blått med hjälp av programvarualternativet. Hjärtcykellängd (CL) mäts från accelerationspunkten för en cykel till accelerationspunkten för nästa cykel. Sen systolhackning observeras hos MCT-behandlade råttor. Pilar anger de tre på varandra följande cyklerna som beaktades för beräkningar. Representativa mätningar visas i olika cykler för enkel visning, men alla mätningar gjordes i var och en av de tre cyklerna. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: RV-fokuserad apikal fyrkammarvy. (A) Representativa bilder av det högra ventrikulära ändsystoliska området (RVESA) och höger förmaksområde (RAA) i en kontrollråtta (vänster panel) och monokrotalin (MCT)-behandlad råtta (höger panel). Övre paneler visar bilder utan spårning och nedre paneler visar spårade områden. Mätningarna gjordes med hjälp av ENDOarea;s och 2D-areaverktyg för att beräkna RVESA respektive RAA. (B) Exempelbilder av höger kammares änddiastoliska område (RVEDA) med hjälp av programvaruverktyget ENDOarea;d i en kontrollråtta (vänster panel) och MCT-behandlad råtta (höger panel). Övre paneler visar bilder utan spårning och nedre paneler visar spårade områden. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Tricuspid ringformigt plan systolisk utflykt (TAPSE). (A) Övre panel: höger ventrikulär fokuserad apikal fyrkammarvy i en kontrollråtta. Höger kammare (RV), höger atria (RA) och tricuspidventil (TV) visualiseras. Nedre panelen: M-mode förhör av tricuspid annulus för att mäta TAPSE hos kontrollråttor. (B) Övre panel: höger ventrikulär fokuserad apikal fyrkammarvy i en monokrotalin (MCT) -behandlad råtta. Nedre panelen: M-mode undersökning av tricuspid annulus för att mäta TAPSE i en MCT-behandlad råtta. Pilar anger de tre på varandra följande mätningarna som beaktades för beräkningar. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 5: Pulsad vågdoppler för tricuspidinflöde. Exempel på pulsade dopplerregistreringar av tricuspidinflöde för att mäta blodinflödeshastigheten över tricuspidventilen under tidig diastolisk fyllning (E, i blått), sen diastolisk fyllning (A, i blått), tricuspid stängnings-öppen tid (TCO) och utkastningstid (ET) i (A) en kontrollråtta och i (B) en monokrotalin (MCT) -behandlad råtta. Pilar anger de tre på varandra följande cyklerna som beaktades för beräkningar. Representativa mätningar visas i en cykel för enkel visning, men alla mätningar gjordes i var och en av de tre cyklerna. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 6: Vävnadsdoppler i lateral tricuspid annulus. Vävnadsdopplerprovbilder av maximal systolisk myokardhastighet vid lateral tricuspid annulus (S ', i blått) och maximal myokardiell avslappningshastighet vid tidig diastol (E ', i blått) och sen diastol (A ', i blått) i (A) en kontrollråtta och i (B) en monokrotalin (MCT) -behandlad råtta. Pilar anger de tre på varandra följande cyklerna som beaktades för beräkningar. Representativa mätningar visas i en cykel för enkel visning, men alla mätningar gjordes i var och en av de tre cyklerna. Klicka här för att se en större version av denna figur.
| Ekokardiografiska parametrar | Experimentella grupper | ||||
| Manöverorgan (fordon) | MCT (60 mg/kg) | ||||
| medelvärde ± SD | n | medelvärde ± SD | n | ||
| Boby viktintervall (kg) | 0.352-0.431 | 8 | 0.231-0.296 | 9 | |
| Morfologi | RVIDd (mm) | 2,72 ± 0,43 | 8 | 5,04 ± 1,68* | 9 |
| RVIDs (mm) | 1.77 ± 0.52 | 8 | 4,04 ± 1,58* | 9 | |
| RVFWT (mm) | 0.59 ± 0.13 | 8 | 1,38 ± 0,30* | 9 | |
| Solcellsdiameter (mm) | 3.72 ± 0.38 | 8 | 3,50 ± 0,24 | 9 | |
| RAA (mm2) | 17.97 ± 3.14 | 5 | 34.46 ± 12.15* | 8 | |
| RVEDA (mm2) | 37,97 ± 6,57 | 5 | 52,78 ± 7,41* | 8 | |
| RVESA (mm2) | 21.68 ± 8.41 | 5 | 44,40 ± 5,04* | 8 | |
| Systolisk funktion | RVFAC (%) | 44.16 ± 16.55 | 5 | 15.49 ± 5.07* | 8 |
| PET (ms) | 70,78 ± 5,89 | 8 | 74.52 ± 7.65 | 9 | |
| PAT (ms) | 32.56 ± 6.01 | 8 | 20.23 ± 4.21* | 9 | |
| PAT/PET-förhållande | 0,46 ± 0,10 | 8 | 0,27 ± 0,05* | 9 | |
| PV PSV (mm/s) | 1032,35 ± 100,76 | 8 | 605,85 ± 170,29* | 9 | |
| PVCO (ml/min) | 179,03 ± 39,92 | 8 | 73,04 ± 36,57* | 9 | |
| PVSV (μL) | 505,53 ± 114,04 | 8 | 215,97 ± 99,58* | 9 | |
| HR (bpm) | 358,52 ± 43,14 | 8 | 324,69 ± 42,35 | 9 | |
| CL (ms) | 169,86 ± 22,60 | 8 | 185,84 ± 22,56 | 9 | |
| PAT/CL-förhållande | 0.20 ± 0.05 | 8 | 0,11 ± 0,02* | 9 | |
| KRAN (mm) | 3,33 ± 0,63 | 7 | 1,47 ± 0,49* | 8 | |
| ET (ms) | 77,83 ± 11,16 | 7 | 78,52 ± 7,82 | 8 | |
| TCO (ms) | 92,93 ± 9,58 | 7 | 107,96 ± 11,77* | 8 | |
| RVMPI | 0,20 ± 0,09 | 7 | 0,39 ± 0,19* | 8 | |
| S' (mm/s) | 62,62 ± 12,78 | 6 | 25,90 ± 8,26* | 7 | |
| Diastolisk funktion | E (mm/s) | 460,33 ± 82,90 | 7 | 684,89 ± 177,53* | 8 |
| E' (mm/s) | 53.07 ± 26.35 | 6 | 40,82 ± 23,34 | 7 | |
| E/E" | 9.79 ± 3.18 | 6 | 23,79 ± 17,34 | 7 | |
Tabell 1: Ekokardiografiska parametrar för höger kammare vid administrering dag 24 efter administrering av MCT (MCT Group) eller vehikel (kontrollgrupp) hos Sprague Dawley-råttor. Data presenteras som medelvärde ± SD. Studentens t-test användes för att analysera data. *p < 0,05. Förkortningar: Monokrotalin (MCT), RV innerdiameter under diastol (RVIDd), RV innerdiameter under systol (RVID), RV fri väggtjocklek (RVFWT), höger förmaksområde (RAA), höger kammare änddiastoliskt område (RVEDA), höger ventrikulär slutsystolisk area (RVESA), RV fraktionerad areaförändring (RVFAC), lungutkastningstid (PET), lungaccelerationstid (PAT), pulmonell topp systolisk hastighet (PV PSV), hjärtminutvolym (PV CO), slagvolym (PV SV), hjärtfrekvens (HR), hjärtcykellängd (CL), tricuspid ringformigt plan systolisk utflykt (TAPSE), utkastningstid (ET), tricuspid stängning öppen tid (TCO), RV myokardiellt prestandaindex (RVMPI), tricuspid ringformig hastighet vid systol (S '), blodflödeshastighet över TV: n under tidig diastolisk fyllning (E) och tricuspid ringformig hastighet vid tidig diastol (E ').
| Obduktion parametrar | Experimentella grupper | |
| Kontroll (Fordon, n = 6-8) |
MCT (60 mg/kg, n = 7-9) |
|
| HW/TL (mg/mm) | 29.4 ± 2.40 | 30.8 ± 3.22 |
| LW/TL (mg/mm) | 40.3 ± 2.03 | 55,8 ± 6,75* |
| (LV+S)/TL (mg/mm) | 20.6 ± 1.81 | 16.1 ± 1.00* |
| RV/TL (mg/mm) | 5.76 ± 0.53 | 10.6 ± 2.39* |
| RV/(LV+S) | 0.28 ± 0.03 | 0,66 ± 0,16* |
| TL (mm) | 39,3 ± 1,03 | 38,7 ± 1,74 |
Tabell 2: Organmätningar vid dag 24 efter administrering av MCT (MCT Group) eller vehikel (kontrollgrupp) hos Sprague Dawley-råttor. Data presenteras som medelvärde ± SD. Studentens t-test användes för att analysera data. *p < 0,05. Förkortningar: Monokrotalin (MCT), hjärtvikt (HW), lungvikt (LW), höger kammare (RV), vänster kammare (LV) och skenbenslängd (TL).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ekokardiografisk utvärdering av RV är ett värdefullt upptäcktsverktyg för screening av effektiviteten av nya behandlingar i djurmodeller av PAH. Fördjupad karakterisering av RV-strukturen och funktionen är nödvändig som nya mål vid behandling av PAH-adress RV-ombyggnad 4,14. Denna studie beskriver ett detaljerat protokoll som möjliggör framgångsrik karakterisering av RV-struktur och funktion.
Den komplexa strukturella geometrin och placeringen bakom bröstbenet gör ekokardiografisk karakterisering av RV svår; Således används modifierade ekokardiografiska vyer för att underlätta RV-visualisering och för att hjälpa till med exakt identifiering av RV-endokardiella gränser under analyser. I detta avseende används modifierad PLAX för bättre visualisering och för att erhålla lungflödeshastigheter och morfologiska mätningar av RV. Andra protokoll har beskrivit användningen av parasternala kortaxelvyer för att mäta lungflöde och RV-väggtjocklek15; Användningen av modifierad PLAX gör det emellertid möjligt att erhålla konsekventa representativa vyer av lungflödeshastigheterna och förbättrar också RV-fri väggdefinition. Dessutom används den RV-fokuserade apikala vyn med fyra kammare för att förbättra visualiseringen av RA- och RV-kammarväggarna och konsekvent få mätningar av RV-systoliska och diastoliska parametrar.
Följande parametrar rekommenderas för att bedöma RV systolisk funktion: TAPSE, RVFAC, RIMP och S '. TAPSE är ett mått på RV longitudinell kontraktion och har rapporterats korrelera med graden av RV dysfunktion16; TAPSE utvärderar dock endast longitudinell kontraktion utan att ta hänsyn till den radiella komponenten av kontraktion som blir relevant i en dilaterad RV11. Trots sin begränsning förblir TAPSE en rutinmässigt erhållen parameter, eftersom den är lättare att förvärva jämfört med RVFAC och RIMP; En fullständig utvärdering av graden av systolisk dysfunktion bör dock inkludera bedömningen av S', RIMP och RVFAC. S 'är lätt att mäta, pålitlig och reproducerbar, men den utvärderar bara längsgående systolisk funktion. Hos människor korrelerar RVFAC väl med RV-ejektionsfraktion (EF)10 och är en mer exakt mätning av RV-funktionen än TAPSE. RIMP, definierad som [TCO-ET] / ET, är ett index för global RV-prestanda, återspeglar både RV systolisk och diastolisk funktion och är en prognostisk markör hos patienter med PAH17. RIMP mäts från TV PW Doppler eftersom det lättare kan erhållas, även om det också kan mätas från vävnadsdopplern i lateral tricuspid annulus. Det är viktigt att använda flera index för RV systolisk funktion vid bedömning av effektiviteten av läkemedelsbehandling i PAH-djurmodeller för att övervinna begränsningen av varje mätning. Användningen av RVEF som ett mått på systolisk funktion rekommenderas inte på grund av RV-geometrins komplexitet, vilket leder till grovt underskattade volymer10.
RV diastolisk funktion hos råttor är ett understuderat område på grund av de tekniska svårigheterna att erhålla TV-flödeshastigheterna och TV-lateral ringformad vävnadsdoppler. Genom att använda den RV-fokuserade apikala vyn med fyra kammare som anges i detta protokoll kan konsekventa ekokardiografiska vyer med god endokardiell gränsdefinition erhållas. E / E '-förhållandet och RAA bör användas som ett mått på RV diastolisk funktion vid tidig RV dysfunktion. Stamanalys har blivit ett kraftfullt verktyg för att få tillgång till LV systolisk dysfunktion i de inledande stadierna av LV-dysfunktion; emellertid använder endast ett fåtal studier denna typ av analys för att utvärdera RV14,18, på grund av svårigheterna att visualisera hela väggen och att få högkvalitativa ekokardiografiska bilder som är nödvändiga för töjningsanalys. Även om töjningsanalyser inte utfördes i denna studie är kvaliteten på de bilder som erhållits enligt detta protokoll tillräcklig för att utföra denna typ av analys, om det behövs.
Slutligen ger detta protokoll en detaljerad beskrivning av de ekokardiografiska vyer som är nödvändiga för att bedöma RV- och RA-morfologi, samt att karakterisera RV systolisk och diastolisk funktion. Dessa data ger en förbättrad utvärdering av effekten av nya föreningar för att störa PAH-utvecklingen i djurmodeller på gnagare.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av NHLBI K01 HL155241 och AHA CDA849387 som tilldelades författaren P.C.R.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% sodium cloride injection USP | Baxter | 2B1324 | |
| Braided cotton rolls | 4MD Medical Solutions | RIHD201205 | |
| Depilating agent | Wallgreens | Nair Hair Remover | |
| Electrode gel | Parker Laboratories | 15-60 | |
| High frequency ultrasound image system and imaging station | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Vevo 2100 | |
| Isoflurane | MedVet | RXISO-250 | |
| Male sprague Dawley rats | Charles River Laboratories | CD 001 | CD IGS Rats (Crl:CD(SD)) |
| Monocrotaline (MCT) | Sigma-Aldrich | C2401 | |
| Rectal temperature probe | Physitemp | RET-3 | |
| Sealed induction chambers | Scivena Scientific | RES644 | 3 L size |
| Solid-state array ultrasound transducer | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Vevo MicroScan transducer MS250S | |
| Stainless steel digital calipers | VWR Digital Calipers | 62379-531 | |
| Ultrasound gel | Parker Laboratories | 11-08 | |
| Vevo Lab software | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Verison 5.5.1 |
References
- Galie, N., McLaughlin, V. V., Rubin, L. J., Simonneau, G. An overview of the 6th World Symposium on Pulmonary Hypertension. European Respiratory Journal. 53 (1), 1802148 (2019).
- Tyagi, S., Batra, V. Novel therapeutic approaches of pulmonary arterial hypertension. International Journal of Angiology. 28 (2), 112-117 (2019).
- Hoeper, M. M., et al. Targeted therapy of pulmonary arterial hypertension: Updated recommendations from the Cologne Consensus Conference 2018. International Journal of Cardiology. 272, 37-45 (2018).
- Sommer, N., et al. Current and future treatments of pulmonary arterial hypertension. British Journal of Pharmacology. 178 (1), 6-30 (2021).
- Farber, H. W., et al. Five-year outcomes of patients enrolled in the REVEAL registry. Chest. 148 (4), 1043-1054 (2015).
- Zolty, R. Novel experimental therapies for treatment of pulmonary arterial hypertension. Journal of Experimental Pharmacology. 13, 817-857 (2021).
- Jasmin, J. F., Lucas, M., Cernacek, P., Dupuis, J. Effectiveness of a nonselective ET(A/B) and a selective ET(A) antagonist in rats with monocrotaline-induced pulmonary hypertension. Circulation. 103 (2), 314-318 (2001).
- Stenmark, K. R., Meyrick, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 297 (6), 1013-1032 (2009).
- Muresian, H. The clinical anatomy of the right ventricle. Clinical Anatomy. 29 (3), 380-398 (2016).
- Rudski, L. G., et al. Guidelines for the echocardiographic assessment of the right heart in adults: a report from the American Society of Echocardiography endorsed by the European Association of Echocardiography, a registered branch of the European Society of Cardiology, and the Canadian Society of Echocardiography. Journal of the American Society of Echocardiography. 23 (7), 685-713 (2010).
- Jones, N., Burns, A. T., Prior, D. L. Echocardiographic assessment of the right ventricle-state of the art. Heart Lung and Circulation. 28 (9), 1339-1350 (2019).
- Spyropoulos, F., et al. Echocardiographic markers of pulmonary hemodynamics and right ventricular hypertrophy in rat models of pulmonary hypertension. Pulmonary Circulation. 10 (2), 2045894020910976 (2020).
- Armstrong, W. F., Ryan, T., Feigenbaum, H. Feigenbaum's echocardiography. 7th edn. , Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins. (2010).
- Kimura, K., et al. Evaluation of right ventricle by speckle tracking and conventional echocardiography in rats with right ventricular heart failure. International Heart Journal. 56 (3), 349-353 (2015).
- Cheng, H. W., et al. Assessment of right ventricular structure and function in mouse model of pulmonary artery constriction by transthoracic echocardiography. Journal of Visualized Experiments. 84, e51041 (2014).
- Mazurek, J. A., Vaidya, A., Mathai, S. C., Roberts, J. D., Forfia, P. R. Follow-up tricuspid annular plane systolic excursion predicts survival in pulmonary arterial hypertension. Pulmonary Circulation. 7 (2), 361-371 (2017).
- Grapsa, J., et al. Echocardiographic and hemodynamic predictors of survival in precapillary pulmonary hypertension: seven-year follow-up. Circulation: Cardiovascular Imaging. 8 (6), 002107 (2015).
- Bernardo, I., Wong, J., Wlodek, M. E., Vlahos, R., Soeding, P. Evaluation of right heart function in a rat model using modified echocardiographic views. PLoS One. 12 (10), 0187345 (2017).
