Summary
El presente protocolo describe la caracterización ecocardiográfica de la morfología y función del ventrículo derecho en un modelo de rata de hipertensión arterial pulmonar.
Abstract
La hipertensión arterial pulmonar (HAP) es una enfermedad progresiva causada por vasoconstricción y remodelación de las arterias pequeñas de los pulmones. Esta remodelación conduce a un aumento de la resistencia vascular pulmonar, empeoramiento de la función ventricular derecha y muerte prematura. Las terapias actualmente aprobadas para la HAP se dirigen principalmente a las vías vasodilatadoras pulmonares; sin embargo, las modalidades terapéuticas emergentes recientes se centran en otras vías novedosas involucradas en la patogénesis de la enfermedad, incluida la remodelación del ventrículo derecho (VD). Las técnicas de imagen que permiten la evaluación longitudinal de nuevas terapias son muy útiles para determinar la eficacia de nuevos fármacos en estudios preclínicos. La ecocardiografía transtorácica no invasiva sigue siendo el enfoque estándar para evaluar la función cardíaca y se usa ampliamente en modelos de roedores. Sin embargo, la evaluación ecocardiográfica del VD puede ser difícil debido a su posición y estructura anatómicas. Además, faltan guías estandarizadas para la ecocardiografía en modelos preclínicos de roedores, lo que dificulta la realización de una evaluación uniforme de la función del VD en estudios en diferentes laboratorios. En estudios preclínicos, el modelo de lesión por monocrotalina (MCT) en ratas se utiliza ampliamente para evaluar la eficacia del fármaco para tratar la HAP. Este protocolo describe la evaluación ecocardiográfica del VD en ratas con HAP ingenuas e inducidas por MCT.
Introduction
La HAP es una enfermedad progresiva definida como una presión arterial pulmonar media en reposo superior a 20 mmHg1. Los cambios patológicos en la HAP incluyen remodelación de la arteria pulmonar (AF), vasoconstricción, inflamación y activación y proliferación de fibroblastos. Estos cambios patológicos conducen a aumento de la resistencia vascular pulmonar y, consecuentemente, remodelación ventricular derecha, hipertrofia e insuficiencia2. La HAP es una enfermedad compleja que implica la diafonía entre varias vías de señalización. Los medicamentos actualmente aprobados para tratar la HAP se dirigen principalmente a las vías vasodilatadoras, incluida la vía del óxido nítrico-guanosina monofosfato cíclico, la vía de la prostaciclina y la vía de la endotelina. Las terapias dirigidas a estas vías se han utilizado tanto como monoterapias como en terapias combinadas 3,4. A pesar de los avances en el tratamiento de la HAP en la última década, los hallazgos del registro REVEAL con sede en los Estados Unidos muestran una tasa de supervivencia pobre a 5 años para los pacientes recién diagnosticados5. Más recientemente, las modalidades terapéuticas emergentes se han centrado en agentes modificadores de la enfermedad que pueden afectar la fisiopatología multifactorial de la remodelación vascular que ocurre en la HAP con la esperanza de interrumpir la enfermedad6.
Los modelos animales de HAP son herramientas invaluables para evaluar la eficacia de nuevos tratamientos farmacológicos. El modelo de rata HAP inducida por MCT es un modelo animal ampliamente utilizado caracterizado por la remodelación de los vasos arteriales pulmonares, lo que a su vez conduce a un aumento de la resistencia vascular pulmonar y a la hipertrofia y disfunción del ventrículo derecho 7,8. Para evaluar la eficacia de los nuevos tratamientos, los investigadores normalmente se centran en la evaluación terminal de la presión del VD sin considerar la evaluación longitudinal de la presión del PA, la morfología del VD y la función del VD. El uso de técnicas de imagen no invasivas y no terminales es crucial para un examen exhaustivo de la progresión de la enfermedad en modelos animales. La ecocardiografía transtorácica sigue siendo el enfoque estándar para evaluar la morfología y la función del corazón en modelos animales debido a su bajo costo y facilidad de uso en comparación con otras modalidades de imagen, como la resonancia magnética. Sin embargo, la evaluación ecocardiográfica del VD puede ser difícil debido al posicionamiento del VD debajo de la sombra del esternón, su trabeculación bien desarrollada y su forma anatómica, todo lo cual dificulta la delineación del borde endocárdico 9,10,11.
Este artículo tiene como objetivo describir un protocolo integral para evaluar las dimensiones, áreas y volúmenes del VD, y la función sistólica y diastólica en HAP inducida por MCT y naif en ratas Sprague Dawley (SD). Además, este protocolo detalla un método para evaluar las dimensiones ecocardiográficas en la aurícula derecha normal y dilatada.
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Protocol
Todos los experimentos en este protocolo se realizaron siguiendo las pautas de cuidado animal de la Universidad de Illinois en Chicago, Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de Chicago. Las ratas macho Sprague Dawley (SD) pesaban entre 0,200 y 0,240 kg en el momento de la inyección de MCT; Sin embargo, el protocolo descrito en este artículo se puede utilizar con un rango de peso corporal más amplio. Los animales fueron obtenidos de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales).
1. Diseño del estudio
- Animales
- Obtenga ratas SD macho y déjelas aclimatarse durante 4-7 días. Aloje a las ratas por el grupo experimental en jaulas limpias y manténgalas en una habitación mantenida a 20-26 ° C (68-79 ° F) e iluminada con luces fluorescentes programadas para dar un ciclo de luz de 14 h y 10 h de oscuridad.
- Dé a las ratas acceso ad libitum a una dieta estándar y agua del grifo durante la duración del experimento.
- Administración de MCT
- En el día 0 del estudio, administrar a las ratas una dosis subcutánea (3,0 ml/kg) de MCT (60 mg/kg en HCl/NaOH, pH 7,4; ver Tabla de materiales; MCT Group) o vehículo (agua desionizada, pH 7,4; Grupo de control).
NOTA: Debido a las precauciones de manipulación asociadas con la dosificación de MCT, todas las ratas deben ser dosificadas el Día de Estudio 0 en una sala de alojamiento de riesgo químico y alojadas allí hasta el Día de Estudio 7. - En el día 7 del estudio, transfiera las ratas a una habitación de alojamiento general durante la duración del estudio.
- En el día 0 del estudio, administrar a las ratas una dosis subcutánea (3,0 ml/kg) de MCT (60 mg/kg en HCl/NaOH, pH 7,4; ver Tabla de materiales; MCT Group) o vehículo (agua desionizada, pH 7,4; Grupo de control).
- Observaciones clínicas
- Realice observaciones del lado de la jaula para la salud general y la apariencia una vez al día. Observe a los animales para detectar la mortalidad y los signos de dolor y angustia.
- Registre cualquier observación inusual observada a lo largo de la duración del estudio en el cuaderno de datos sin procesar.
- Pesos corporales
- Registre el peso corporal el día 0 del estudio (predosis), semanalmente durante todo el estudio y el día de la ecocardiografía.
2. Ecocardiografía
- Preparación
- En el día de estudio 23 después de la dosificación de MCT, anestesiar a las ratas con isoflurano al 2% -3%, impulsado por oxígeno al 100% (1 L / min) en una cámara de inducción (ver Tabla de materiales).
- Retire las ratas de la cámara una vez que se haya perdido el conocimiento y transfiéralas a la plataforma animal de la estación de imágenes (ver Tabla de materiales) en una posición de decúbito dorsal. Administrar isoflurano usando un cono nasal conectado a un vaporizador que suministre 1% -2% de isoflurano impulsado por 100% de oxígeno (1 L/min).
- Aplique gel de electrodo a cada pata y asegure las patas en las placas de plomo del electrocardiograma de la plataforma animal.
- Retire el pelaje afeitándose el pecho y usando un agente depilatorio (consulte la Tabla de materiales). Asegure una sonda de temperatura rectal (consulte la Tabla de materiales) en su lugar. Coloque rollos de algodón en los lados derecho e izquierdo del animal y asegúrelos con cinta adhesiva para mantener la posición del animal cuando la plataforma esté inclinada.
- Monitorización
- Controle la temperatura corporal y la frecuencia cardíaca (FC) a través del sistema de imágenes de ultrasonido (consulte la Tabla de materiales) durante todo el procedimiento.
- Mantenga la temperatura corporal a 37 ± 0,5 °C y mantenga la FC a 350 lpm o más, si es posible. Use la mesa de calentamiento y una lámpara de calor para mantener la temperatura.
- Adquisición de imágenes
- Realice una ecocardiografía transtorácica utilizando un sistema de imágenes de ultrasonido de alta frecuencia equipado con un transductor de ultrasonido de matriz de estado sólido (consulte la Tabla de materiales).
NOTA: Todas las instrucciones indicadas en los métodos ecocardiográficos se refieren a la derecha o izquierda del ecografista. - Vista del eje largo paraesternal (PLAX) del ventrículo izquierdo (VI)
- Con las ratas en la posición de decúbito dorsal, incline la plataforma hacia la izquierda y llévela caudalmente hacia abajo aproximadamente 10°.
- Coloque el transductor en el soporte en una posición semi-lock con la muesca apuntando en la dirección caudal. Mueva el transductor de modo que apunte hacia la línea paraesternal izquierda. Gire el transductor en sentido contrario a las agujas del reloj aproximadamente 30°-45° e incline ligeramente cranealmente a lo largo del eje y (eje del transductor lateral).
- Aplique gel de ultrasonido tibio (consulte la Tabla de materiales) en el pecho de la rata y baje el transductor hasta que esté en contacto con el gel.
- Mueva la plataforma hacia la derecha o hacia la izquierda para obtener una vista de todo el LV en el centro de la pantalla. Ajuste la profundidad de la imagen si es necesario y mueva la zona focal a la pared posterior.
- Realice ajustes finos en la posición de la plataforma para asegurarse de que la aorta y el ápice estén en el mismo plano horizontal, y que el tracto de salida del VI sea visible.
- Presione Cine Store para registrar los datos. En la Figura 1A se muestran ejemplos de vistas PLAX de las imágenes LV.
NOTA: Las imágenes del VI permiten familiarizarse con la posición del corazón en el pecho. Un RV dilatado puede desplazar el VI.
- Vista PLAX modificada del tracto de salida del ventrículo derecho
- Incline la plataforma hacia la derecha aproximadamente 10°-15° y llévela caudalmente hacia abajo aproximadamente 5°.
- Mueva el transductor para que apunte a la línea paraesternal derecha de la rata. Gire el transductor en sentido contrario a las agujas del reloj a aproximadamente 30°.
- Aplique gel de ultrasonido en el pecho de la rata y baje el transductor hasta que esté en contacto con el gel.
- Mueva la plataforma hacia la izquierda o hacia la derecha hasta que el RV esté a la vista. En esta vista PLAX modificada, la pared del VD y el tabique interventricular (IVS) son claramente visibles, como se muestra en la Figura 1B.
- Gire el transductor en sentido contrario a las agujas del reloj si es necesario para asegurarse de que la aorta y la válvula mitral estén visibles.
- Mueva la zona focal a la región de la pared libre del RV para mejorar la definición del borde endocárdico y ajustar la ganancia si es necesario.
- Presione Cine Store para registrar los datos.
- Coloque la línea de volumen de muestra en modo M en la región donde el RV es más ancho y ajuste la puerta para abarcar el RV y el LV. La línea de volumen de muestra generalmente se coloca entre la sombra de dos vértebras contiguas en ratas.
- Presione Actualizar y, a continuación, presione Cine Store para registrar los datos. En la Figura 1C se muestran ejemplos del modo M en las imágenes de la vista PLAX modificada, y estas imágenes se utilizan para analizar el diámetro interno del VD durante la diástole (RVIDd), el diámetro interno del VD durante la sístole (RVID) y el espesor de la pared libre del RV (RVFWT).
- Levante el transductor y reposicione de modo que esté ligeramente inclinado hacia la línea paraesternal derecha de la rata. Mueva la plataforma a una posición que esté ligeramente inclinada hacia la derecha.
- Baje el transductor hasta que esté en contacto con el gel.
- Mueva la plataforma caudalmente y hacia la derecha o hacia la izquierda hasta que la pista de salida del RV esté a la vista y la válvula pulmonar (PV) esté enfocada y sea claramente visible.
- Presione Cine Store para registrar los datos. En la Figura 2A se muestran ejemplos de modo B en la vista PLAX modificada a nivel de las imágenes del tracto de salida del ventrículo derecho; estas imágenes se utilizan para analizar el diámetro fotovoltaico.
- Manteniendo la misma ubicación de imagen en modo B, pulse Color para ayudar a identificar el flujo a través del PV. Ajuste la velocidad para optimizar el aliasing, de modo que el punto de velocidad más alto sea visible. Aumente la velocidad de fotogramas, si es necesario, disminuyendo el tamaño del cuadro de imagen Doppler color.
- Presione PW (onda pulsada) para cuantificar el espectro de flujo sanguíneo. Aumente el tamaño de la puerta de volumen de muestra al máximo.
- Ajuste la velocidad de referencia y la ganancia Doppler, si es necesario, para que el flujo sea visible.
- Alinee el ángulo PW paralelo a la dirección del flujo a través del PV. Coloque el volumen de muestra a la velocidad más alta (punto de aliasing) o en las puntas del folleto PV.
- Pulse Actualizar para ver las velocidades pulmonares.
- Presione Cine Store para registrar los datos. En la Figura 2B se muestran ejemplos de imágenes Doppler PV PW; estas imágenes se utilizan para analizar el tiempo de eyección pulmonar (TEP), el tiempo de aceleración pulmonar (PAT), la velocidad sistólica máxima pulmonar (PV PSV), el gasto cardíaco (PV CO), el volumen sistólico (PV SV), la FC y la duración del ciclo cardíaco (CL).
- Vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV
- Incline la plataforma hacia la esquina izquierda y hacia abajo cranealmente hasta donde pueda.
- Gire el transductor en sentido contrario a las agujas del reloj 30°-45°, y mueva el transductor de modo que apunte hacia el hombro/oreja derecha del animal.
- Baje el transductor hasta que esté en contacto con el gel. Esta posición permite una vista típica de cuatro cámaras donde el VI y las aurículas izquierdas (LA) son visibles, pero la sombra del esternón está sobre la pared libre del RV.
- Ajuste la vista apical de cuatro cámaras para adquirir la vista enfocada de RV colocando el transductor ligeramente lateral al vértice verdadero. Haga ajustes finos hasta obtener el plano máximo. Mueva la plataforma ligeramente caudalmente si es necesario. En esta vista, la sombra del esternón se coloca en el tabique, y la pared libre de RV es claramente visible.
- Asegúrese de que el RV, las aurículas derechas (AR) y la válvula tricúspide (TV) sean visibles en la ventana acústica.
NOTA: Si la cámara del VD está muy dilatada, la cámara del VI puede no ser completamente visible. Sostener el transductor manualmente permite un ajuste fino del ángulo del transductor para mejorar la visualización de RV. - Asegúrese de que el RV no esté acortado y que el tracto de salida del VI no esté abierto.
- Presione Cine Store para registrar los datos. En la Figura 3A, B se muestran ejemplos de imágenes de vista apical de cuatro cámaras enfocadas en RV; estas imágenes se utilizan para analizar el área auricular derecha (RAA), el área diastólica final del VD (RVEDA) y el área sistólica final del VD (RVESA).
- Coloque el cursor en modo M a través del anillo tricúspide en la pared libre de RV. Asegúrese de tener una orientación de imagen óptima para evitar la subestimación de las velocidades. Presione Actualizar y Cine Store para registrar los datos.
NOTA: En la figura 4A,B se muestran ejemplos de imágenes del movimiento del anillo tricúspide; estas imágenes se utilizan para analizar la excursión sistólica del plano anular tricúspide (TAPSE). - Presione B-Mode y luego presione Color para ayudar a la identificación del flujo a través del televisor. Ajuste la velocidad para optimizar el aliasing, de modo que el punto de velocidad más alto sea visible. Aumente la velocidad de fotogramas disminuyendo el tamaño del cuadro de imagen Doppler color.
- Presione PW para cuantificar el espectro de flujo sanguíneo. Aumente el tamaño de la puerta de volumen de muestra al máximo.
- Ajuste la velocidad de referencia y la ganancia Doppler si es necesario.
- Alinee el ángulo PW paralelo a la dirección de entrada del RV. Coloque el volumen de muestra a la velocidad más alta (punto de aliasing) o en las puntas de la valva tricúspide.
NOTA: Obtener imágenes de las velocidades de entrada tricúspide puede ser un desafío; Puede ser necesario ajustar bien la posición del transductor. - Pulse Actualizar para ver las velocidades de entrada tricúspide.
- Presione Cine Store para registrar los datos. En la figura 5A,B se muestran ejemplos de imágenes Doppler PW tricúspide; estas imágenes se utilizan para analizar la velocidad del flujo sanguíneo a través del televisor durante el llenado diastólico temprano (E), la velocidad del flujo sanguíneo a través del televisor durante el llenado diastólico tardío (A), el tiempo abierto del cierre tricúspide (TCO) y el tiempo de eyección (ET).
- Vuelva al modo B y pulse Tejido. Ajuste ligeramente la plataforma para asegurarse de que el anillo tricúspide sea claramente visible y coloque la puerta de volumen de la muestra Doppler tisular en el anillo tricúspide en la pared libre del RV. Aumente la puerta de volumen de muestra a la anchura máxima.
- Ajuste la velocidad de referencia y la ganancia Doppler si es necesario.
- Pulse Actualizar para ver la imagen Doppler tisular.
- Presione Cine Store para registrar los datos. En la figura 6A,B se muestran ejemplos de imágenes Doppler tisulares; estas imágenes se utilizan para analizar la velocidad anular tricúspide en la diástole temprana (E'), la velocidad anular tricúspide en la diástole tardía (A') y la velocidad anular tricúspide en la sístole (S').
NOTA: El TAPSE y el doppler tisular siempre se miden en la pared libre del VD y no en el tabique interventricular.
- Realice una ecocardiografía transtorácica utilizando un sistema de imágenes de ultrasonido de alta frecuencia equipado con un transductor de ultrasonido de matriz de estado sólido (consulte la Tabla de materiales).
- Análisis de imágenes
- Realice análisis de imágenes sin conexión utilizando el software compatible con el instrumento (consulte Tabla de materiales).
- Evite las áreas en las que se produce inspiración para todas las mediciones y siempre tome al menos tres mediciones para cada parámetro a analizar.
- Vista paraesternal modificada de eje largo del modo M del ventrículo derecho
- Seleccione una imagen obtenida de la vista de eje largo paraesternal modificada del modo M del ventrículo derecho y analice el RVIDd (mm), los RVID (mm) y el RVFWT (mm).
- Seleccione Profundidad en las herramientas de medición genéricas.
- Trace el diámetro interno de la cámara del VD en la diástole y la sístole (Figura 1C) y etiquete las mediciones como RVIDd y RVIDs, respectivamente.
- Seleccione la herramienta Profundidad para medir el grosor de la pared libre de RV. Alinee el cursor con el pico de la onda R del ECG y trace la pared en la diástole final (Figura 1C). Excluya las trabeculaciones del VD y el músculo papilar del borde endocárdico del VD, si está presente, para medir con precisión el grosor de la pared del VD. También excluya la grasa epicárdica, si está presente, para evitar el aumento erróneo de las mediciones.
NOTA: Las trabeculaciones del VD y el músculo papilar se muestran como líneas discontinuadas que siguen el movimiento de la pared del VD. Las mediciones de RVIDd, RVID y RVFWT se mostrarán en el informe en la sección de paquete genérico. Cuando hay un engrosamiento significativo del pericardio, la medición de la pared del VD puede ser difícil; Por lo tanto, seleccione el área de análisis cuidadosamente.
- PV Modo B
- Seleccione una imagen obtenida del modo PV B y analice el diámetro PV (mm).
- Seleccione RV and PV Function ( Función de RV y PV ) en el menú desplegable del paquete cardíaco.
- Seleccione PV diam y elija un marco en el que la válvula esté abierta. A nivel de la válvula, trace la distancia de pared a pared, evitando el anillo de la válvula (Figura 2A).
NOTA: Las mediciones se mostrarán en el informe en la sección de función RV y PV.
- PV PW Doppler
- Seleccione una imagen obtenida del Doppler PW PV para analizar el PET (ms), PAT (ms), PV PSV (mm/s), HR (latidos por minuto), CL (ms), relación PAT/PET, gasto cardíaco (PV CO; mL/min), volumen sistólico (PV SV; μL) y relación PAT/CL.
- Seleccione RV and PV Function ( Función RV y PV ) en el menú desplegable del paquete cardíaco y elija al menos tres velocidades de PA representativas.
- Seleccione PAT y trace la velocidad de flujo de PA comenzando en el punto de aceleración y terminando en el pico de velocidad.
- Seleccione PET y comience la medición desde el punto de aceleración y finalice cuando la señal alcance la línea de base.
- Seleccione PV peak vel, coloque el cursor en el punto de velocidad más alto y haga clic izquierdo.
- Para obtener la medición integral de tiempo de velocidad fotovoltaica (PV VTI), elija la opción negativa debajo de la herramienta Vevo pico.
NOTA: La sensibilidad de detección se puede cambiar, pero se debe mantener un valor constante durante todo el estudio. - Seleccione PV VTI en el menú desplegable. Comience la medición haciendo clic izquierdo en el inicio del pico y termine haciendo clic derecho al final del pico para completar la medición. Ajuste el contorno del pico moviendo las líneas según sea necesario.
- Coloque el cursor en una medición PV VTI y haga clic con el botón derecho para seleccionar Propiedades, luego habilite la medición HR en la opción parámetros. Repita este paso para las tres mediciones PV VTI.
- Seleccione Tiempo de las herramientas de medición genéricas y trace el tiempo desde el punto de aceleración de un ciclo hasta el punto de aceleración del siguiente ciclo para calcular el CL (Figura 2B).
NOTA: Las mediciones se mostrarán en el informe en la sección de función RV y PV. La relación PAT/PET, PV CO y PV SV son calculadas por el software del instrumento.
- Vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV Modo B
- Seleccione una imagen obtenida del modo B de vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV para analizar el cambio de área fraccionaria de RAA (mm 2), RVEDA (mm 2), RVESA (mm2) y RV [RVFAC = (RVEDA-RVESA)/RVEDA, %].
- Seleccione SAX (eje corto paraesternal) en el menú desplegable del paquete cardíaco.
- Elija una imagen en modo B en la diástole final de la vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV. Asegúrese de que todo el RV esté a la vista, incluido el vértice y la pared lateral.
- Seleccione ENDOarea;d y trace el endocardio del VD desde el anillo, a lo largo de la pared libre hasta el ápice, y luego de nuevo al anillo a lo largo del tabique interventricular, excluyendo las trabeculaciones si están presentes.
- Elija una imagen en modo B al final de la sístole, seleccione ENDOarea;s en la ventana desplegable SAX B-mode y repita el rastro del RV. Usando la misma imagen, seleccione el área 2D de las herramientas de medición genéricas y rastree la AR siguiendo el endocardio y excluyendo la vena cava y el apéndice de la AR. También se excluye el área entre las valvas de la válvula tricúspide y el anillo (Figura 3).
- Repita la medición del área ENDO en la diástole y la medición del área de sístole y AR en dos imágenes adicionales.
NOTA: Las mediciones del área del VD en la diástole y la sístole se mostrarán en el informe en la sección del modo SAX-B. El área RA se mostrará bajo las medidas genéricas del paquete. RVFAC se calcula utilizando la fórmula RVFAC = (RVEDA-RVESA)/RVEDA10.
- Modo M en la parte lateral del anillo tricúspide
- Seleccione una imagen en modo M obtenida de la parte lateral del anillo tricúspide para analizar el TAPSE (mm).
- Seleccione Profundidad en las herramientas de medición genéricas y elija una región de al menos tres sitios cardíacos consecutivos libres de interferencias inspiratorias.
- Trazar la distancia desde la diástole final hasta la sístole máxima del segmento anular del VD en tres ciclos cardíacos consecutivos (Figura 4).
NOTA: Las mediciones se mostrarán en el informe en la sección paquete genérico.
- TV PW Doppler
- Seleccione una imagen obtenida del doppler PW de TV para analizar el índice de rendimiento miocárdico E (mm/s), A (mm/s), TCO (ms), ET (ms) y RV [RVMPI = (TCO-ET)/ET]11.
- Seleccione TV Flow en el menú desplegable del paquete cardíaco y elija al menos tres velocidades de TV representativas.
- Seleccione TV E (llenado temprano tricúspide), coloque el cursor en el punto de velocidad más alto de la onda E y haga clic izquierdo; Se dibuja una línea desde la velocidad más alta hasta la línea de base. Del mismo modo, seleccione TV A (relleno tardío tricúspide), coloque el cursor a la velocidad más alta de la onda A y haga clic izquierdo; se dibuja otra línea desde la velocidad más alta hasta la línea de base (Figura 5).
- Para medir el tiempo de eyección (TE), seleccione la herramienta Tiempo de las herramientas de medición genéricas y mida el tiempo desde el inicio (borde de ataque) hasta el cese (borde de salida) del flujo tricúspide (un área donde se expulsa el flujo). Etiquete las mediciones como ET (Figura 5).
- Para medir el tiempo TCO, seleccione la herramienta Tiempo y trace el tiempo desde el final de la onda tricúspide A de un ciclo hasta el comienzo de la onda E tricúspide del ciclo siguiente. Etiquete las mediciones como TCO (Figura 5).
NOTA: Las mediciones de TV E y TV A se mostrarán en el informe en la sección Flujo de TV. Las mediciones ET y TCO se mostrarán en las medidas genéricas del paquete. RVMPI se calcula como (TCO-ET)/ET11. E, ET y TCO se miden con un intervalo R-R constante para minimizar el error. Las mediciones de ET también se pueden realizar desde el borde medio hasta el borde posterior; La consistencia en cómo se adquiere la medición a lo largo del análisis es lo más importante.
- Doppler del tejido del anillo tricúspide lateral del VD
- Seleccione una imagen obtenida del Doppler del tejido del anillo tricúspide lateral del VD para analizar la relación E' (mm/s), A' (mm/s), S' (mm/s) y E/E'.
- Seleccione TV Flow en el menú desplegable del paquete cardíaco y elija al menos tres velocidades representativas de tejido de pared libre.
- Seleccione TV LW E, coloque el cursor en el punto de velocidad más alto de la onda E' y haga clic izquierdo; Se dibuja una línea desde la velocidad más alta hasta la línea de base. Del mismo modo, seleccione TV LW A, coloque el cursor en el punto de velocidad más alto de la onda A' y haga clic izquierdo; se dibuja otra línea desde la velocidad más alta hasta la línea de base (Figura 6).
- Seleccione MV Flow en el menú desplegable del paquete cardíaco y seleccione S WAVE.
- Coloque el cursor a la velocidad sistólica más alta durante la fase de eyección, sin sobrepasar la envoltura Doppler, y haga clic izquierdo; se traza una línea desde la velocidad más alta hasta la línea de base (Figura 6).
NOTA: Las mediciones se mostrarán en el informe en las secciones Flujo de TV y Flujo de MT. La relación E/E' se calcula manualmente.
- Necropsia
- Eutanasia a las ratas por exanginación bajo sobredosis de isoflurano en el Día de Estudio 24 post-MCT dosificación siguiendo el protocolo aprobado institucionalmente.
- Retire el bloqueo corazón-pulmón e infunda suavemente a través de la vasculatura con solución salina helada hasta que el perfundido salga claro. Separe el corazón y los pulmones y elimine el exceso de solución salina.
- Pese cada órgano por separado.
- Retire las aurículas y deséchelas.
- Separe el VI con el tabique (VI + S) del VD y pese los ventrículos por separado.
- Retire la tibia izquierda y sepárela del tejido blando.
- Obtenga una medida longitudinal de la tibia usando un calibrador digital (ver Tabla de materiales).
- Deseche el corazón, los pulmones y la tibia disecados con el resto de la carcasa.
NOTA: El peso del corazón (HW), el peso pulmonar (LW), el peso de LV+S y el peso del VD se normalizan por la longitud de la tibia (TL). La hipertrofia del VD se evalúa mediante el Índice de Fulton, donde el peso del VD se normaliza mediante el peso del VI+S [índice de Fulton = VD/(LV+S)]12.
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Representative Results
En este estudio, se utilizaron ratas tratadas con MCT como modelo de HAP. El análisis ecocardiográfico se realizó el día de estudio 23 después de la administración de MCT, y todas las mediciones y cálculos representaron promedios de tres ciclos consecutivos. Los parámetros ecocardiográficos obtenidos de ratas control (vehículo: agua desionizada) y tratadas con MCT (60 mg/kg) se muestran en la Tabla 1.
En la Figura 1A se muestran imágenes representativas de la vista PLAX en ratas controladas y tratadas con MCT. Estas imágenes se utilizan como una evaluación inicial de la posición del corazón y la morfología del VI. Las evaluaciones cuantitativas del RV se obtienen en una vista PLAX modificada, ya que esto permite la visualización del RV (Figura 1B). En la vista PLAX modificada, las ratas tratadas con MCT muestran un ventrículo derecho agrandado y el ventrículo izquierdo parece desplazado de su posición en comparación con las ratas control (Figura 1B). El modo M se obtiene en la vista PLAX modificada en el área más ancha del RV y se utiliza para medir RVIDd, RVID y RVFWT (Figura 1C). Se miden RVIDd, RVID y RVFWT, excluyendo la trabeculación en la pared, y RVFWT se obtiene en el pico de la onda R del ECG. Como era de esperar, se observa un aumento significativo en RVIDd, RVID y RVFWT en las ratas tratadas con MCT (Figura 1C y Tabla 1), lo que indica dilatación del RV y engrosamiento de la pared libre del RV.
Las imágenes Doppler se utilizan para medir las velocidades de flujo de PA (Figura 2B). En ratas control, el flujo pulmonar exhibe una forma de V simétrica, con una velocidad máxima que ocurre en la sístole media (Figura 2B, panel superior). En contraste, en ratas tratadas con MCT, la velocidad máxima es más lenta y ocurre antes en la sístole, lo que resulta en un PAT significativamente más corto y relaciones PAT/PET y PAT/CL más pequeñas (Tabla 1). Además, las ratas tratadas con MCT exhiben una muesca en la sístole tardía (Figura 2B, panel inferior). PV PW Doppler se utiliza para medir el PV VTI (Figura 2B); PV CO y PV SV se calculan utilizando las mediciones PV VTI y PV de diámetro, respectivamente. PV CO y PV SV son significativamente menores en las ratas tratadas con MCT (Tabla 1), lo que indica una función sistólica deteriorada. La FC se obtiene a partir de las mediciones PV PW Doppler y es comparable entre las ratas control y tratadas con MCT (Tabla 1).
La vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV se utiliza para medir RVEDA, RVESA y RAA (Figura 3), y RVFAC se calcula a partir de RVEDA y RVESA. Como se indicó anteriormente, las trabeculaciones en la pared, si están presentes, deben excluirse de estas mediciones. RVFAC está significativamente disminuido en ratas tratadas con MCT (Tabla 1), lo que sugiere disfunción sistólica del VD. Las ratas tratadas con MCT también exhiben dilatación de la AR debido al aumento de la presión de PA (Figura 3A, B, paneles derechos y Tabla 1). En condiciones normales, la cavidad del VI tiene una presión más alta que la del VDI, lo que resulta en una curvatura septal del VI a lo largo del ciclo cardíaco (Figura 3A, B, paneles izquierdos). Cuando la presión del VD aumenta patológicamente en la HAP, esta curvatura normal se pierde y el tabique interventricular aparece "aplanado"13, como se muestra en la Figura 3A,B (paneles derechos). La vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV también se usa para medir TAPSE a partir del interrogatorio en modo M del anillo tricúspide (Figura 4). TAPSE se reduce significativamente en ratas tratadas con MCT (Figura 4B y Tabla 1), lo que sugiere una función de RV comprometida.
La función diastólica se evalúa a partir de la evaluación Doppler PW del flujo de TV y Doppler lateral del tejido anular lateral de TV. Las ratas tratadas con MCT muestran una onda E y RVMPI significativamente más altas y una tendencia hacia una mayor relación E / E '(Figura 5 y Tabla 1), lo que sugiere una función diastólica deteriorada. La vista Doppler tisular del anillo de TV también se utiliza para medir E' y S' (Figura 6B). Las ratas tratadas con MCT exhiben S 'significativamente más lenta, lo que confirma la disminución de la función sistólica del VD (también demostrada por una reducción en PV CO y PV SV). No se observan cambios significativos en E' en ratas tratadas con MCT. A y A' también se pueden obtener del Doppler PW de flujo de TV y del Doppler de tejido anular lateral de TV, respectivamente. Estos parámetros no se tratan en este artículo.
Las mediciones de masa de tejido cardíaco en la cosecha terminal y los análisis ecocardiográficos apoyan la hipertrofia del VD en ratas tratadas con MCT en comparación con ratas control. Como se muestra en la Tabla 2, el índice de Fulton y la relación RV/TL aumentan significativamente en ratas tratadas con MCT en comparación con las ratas control. Además, las ratas tratadas con MCT muestran un aumento de la relación LV + S / TL, lo que indica hipertrofia del VI. Las ratas tratadas con MCT también exhiben un aumento de la relación LW / TL, lo que sugiere edema pulmonar.
Figura 1: Vistas paraesternales de eje largo (PLAX). (A) Imágenes representativas del PLAX convencional para visualizar el flujo de salida del ventrículo izquierdo (VI), las aurículas izquierdas (LA), las aurículas derechas (AR) y la válvula aórtica (AV) en una rata control (panel izquierdo) y una rata tratada con monocrotalina (MCT) (panel derecho). (B) Imágenes representativas de la vista PLAX modificada para visualizar el tracto de salida del ventrículo derecho (VD), el tabique interventricular (IVS), el VI y el AV en una rata control (panel izquierdo) y una rata tratada con MCT (panel derecho). En ratas, la línea de volumen de muestra en modo M generalmente se coloca entre la sombra de dos vértebras contiguas (que se muestran con flechas azules). (C) Ejemplos de mediciones en modo M en una rata control (panel superior) y rata tratada con MCT (panel inferior). Las mediciones incluyen el espesor de la pared libre de RV (RVFWT), el diámetro interno de RV durante la diástole (RVIDd) y el diámetro interno de RV durante la sístole (RVIDs). Para facilitar la visualización, se muestran las mediciones de un solo ciclo cardíaco. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: diámetro PV y velocidades de flujo de la arteria pulmonar. (A) Imágenes representativas de la vista PLAX modificada para visualizar la arteria pulmonar y medir el diámetro de la válvula pulmonar (PV) en una rata control (panel izquierdo) y una rata tratada con monocrotalina (MCT) (panel derecho). (B) El tiempo de eyección pulmonar (PET) se mide comenzando en el punto de aceleración hasta el punto de retorno a la línea de base en una rata control (panel superior) y rata tratada con MCT (panel inferior). El tiempo de aceleración pulmonar (PAT) es el intervalo de tiempo entre el punto de aceleración y el pico de velocidad. La velocidad sistólica máxima de la válvula pulmonar (PV PSV) se mide en el pico del flujo Doppler. La integral de tiempo de velocidad fotovoltaica (PV VTI) se traza en azul utilizando la opción de software. La duración del ciclo cardíaco (CL) se mide desde el punto de aceleración de un ciclo hasta el punto de aceleración del siguiente ciclo. Se observa muesca de sístole tardía en ratas tratadas con MCT. Las flechas indican los tres ciclos consecutivos que se consideraron para los cálculos. Las mediciones representativas se muestran en diferentes ciclos para facilitar la visualización, pero todas las mediciones se tomaron en cada uno de los tres ciclos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: Vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV. (A) Imágenes representativas del área sistólica final del ventrículo derecho (RVESA) y el área auricular derecha (RAA) en una rata control (panel izquierdo) y una rata tratada con monocrotalina (MCT) (panel derecho). Los paneles superiores muestran imágenes sin trazar, y los paneles inferiores muestran áreas trazadas. Las mediciones se tomaron utilizando las herramientas de área ENDOarea y 2D para calcular RVESA y RAA, respectivamente. (B) Imágenes de muestra del área diastólica final del ventrículo derecho (RVEDA) utilizando la herramienta de software ENDOarea;d en una rata control (panel izquierdo) y rata tratada con MCT (panel derecho). Los paneles superiores muestran imágenes sin trazar, y los paneles inferiores muestran áreas trazadas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: Excursión sistólica del plano anular tricúspide (TAPSE). (A) Panel superior: vista apical de cuatro cámaras enfocada en el ventrículo derecho en una rata control. Se visualizan el ventrículo derecho (VD), las aurículas derechas (AR) y la válvula tricúspide (TV). Panel inferior: interrogatorio en modo M del anillo tricúspide para medir TAPSE en ratas control. (B) Panel superior: vista de cuatro cámaras apicales enfocadas en el ventrículo derecho en una rata tratada con monocrotalina (MCT). Panel inferior: interrogatorio en modo M del anillo tricúspide para medir TAPSE en una rata tratada con MCT. Las flechas indican las tres mediciones consecutivas que se consideraron para los cálculos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5: Doppler de onda pulsada del flujo tricúspide. Ejemplo de registros Doppler pulsados del flujo tricúspide para medir la velocidad de entrada de sangre a través de la válvula tricúspide durante el llenado diastólico temprano (E, en azul), el llenado diastólico tardío (A, en azul), el tiempo de cierre abierto tricúspide (TCO) y el tiempo de eyección (ET) en (A) una rata control y en (B) una rata tratada con monocrotalina (MCT). Las flechas indican los tres ciclos consecutivos que se consideraron para los cálculos. Las mediciones representativas se muestran en un ciclo para facilitar la visualización, pero todas las mediciones se tomaron en cada uno de los tres ciclos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 6: Doppler tisular del anillo tricúspide lateral. Imágenes de muestra Doppler tisular de la velocidad miocárdica sistólica máxima en el anillo tricúspide lateral (S', en azul) y la velocidad máxima de relajación miocárdica en la diástole temprana (E', en azul) y la diástole tardía (A', en azul) en (A) una rata control y en (B) una rata tratada con monocrotalina (MCT). Las flechas indican los tres ciclos consecutivos que se consideraron para los cálculos. Las mediciones representativas se muestran en un ciclo para facilitar la visualización, pero todas las mediciones se tomaron en cada uno de los tres ciclos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| Parámetros ecocardiográficos | Grupos experimentales | ||||
| Control (vehículo) | MCT (60 mg/kg) | ||||
| media ± SD | n | media ± SD | n | ||
| Rango de peso de Boby (kg) | 0.352-0.431 | 8 | 0.231-0.296 | 9 | |
| Morfología | RVIDd (mm) | 2,72 ± 0,43 | 8 | 5,04 ± 1,68* | 9 |
| RVIDs (mm) | 1,77 ± 0,52 | 8 | 4,04 ± 1,58* | 9 | |
| RVFWT (mm) | 0,59 ± 0,13 | 8 | 1,38 ± 0,30* | 9 | |
| Diámetro PV (mm) | 3,72 ± 0,38 | 8 | 3,50 ± 0,24 | 9 | |
| RAA (mm2) | 17,97 ± 3,14 | 5 | 34,46 ± 12,15* | 8 | |
| RVEDA (mm2) | 37,97 ± 6,57 | 5 | 52,78 ± 7,41* | 8 | |
| RVESA (mm2) | 21,68 ± 8,41 | 5 | 44,40 ± 5,04* | 8 | |
| Función sistólica | RVFAC (%) | 44,16 ± 16,55 | 5 | 15,49 ± 5,07* | 8 |
| PET (ms) | 70,78 ± 5,89 | 8 | 74,52 ± 7,65 | 9 | |
| PAT (ms) | 32,56 ± 6,01 | 8 | 20,23 ± 4,21* | 9 | |
| Relación PAT/PET | 0,46 ± 0,10 | 8 | 0,27 ± 0,05* | 9 | |
| PV PSV (mm/s) | 1032.35 ± 100.76 | 8 | 605,85 ± 170,29* | 9 | |
| PVCO (ml/min) | 179,03 ± 39,92 | 8 | 73,04 ± 36,57* | 9 | |
| PVSV (μL) | 505,53 ± 114,04 | 8 | 215,97 ± 99,58* | 9 | |
| FC (bpm) | 358,52 ± 43,14 | 8 | 324,69 ± 42,35 | 9 | |
| CL (ms) | 169,86 ± 22,60 | 8 | 185,84 ± 22,56 | 9 | |
| Relación PAT/CL | 0,20 ± 0,05 | 8 | 0,11 ± 0,02* | 9 | |
| TAPSE (mm) | 3,33 ± 0,63 | 7 | 1,47 ± 0,49* | 8 | |
| ET (ms) | 77,83 ± 11,16 | 7 | 78,52 ± 7,82 | 8 | |
| TCO (ms) | 92,93 ± 9,58 | 7 | 107,96 ± 11,77* | 8 | |
| RVMPI | 0,20 ± 0,09 | 7 | 0,39 ± 0,19* | 8 | |
| S' (mm/s) | 62,62 ± 12,78 | 6 | 25,90 ± 8,26* | 7 | |
| Función diastólica | E (mm/s) | 460,33 ± 82,90 | 7 | 684,89 ± 177,53* | 8 |
| E' (mm/s) | 53,07 ± 26,35 | 6 | 40,82 ± 23,34 | 7 | |
| E/E' | 9,79 ± 3,18 | 6 | 23.79 ± 17.34 | 7 | |
Tabla 1: Parámetros ecocardiográficos del ventrículo derecho en el día 24 después de la administración de MCT (Grupo MCT) o vehículo (Grupo Control) en ratas Sprague Dawley. Los datos presentados como media ± DE. Se utilizó la prueba t de Student para analizar los datos. *p < 0,05. Abreviaturas: monocrotalina (MCT), diámetro interno del VD durante la diástole (RVIDd), diámetro interno del VD durante la sístole (RVIDs), espesor de la pared libre del VD (RVFWT), área auricular derecha (RAA), área diastólica final del ventrículo derecho (RVEDA), área sistólica final del ventrículo derecho (RVESA), cambio del área fraccional del VD (RVFAC), tiempo de eyección pulmonar (PET), tiempo de aceleración pulmonar (PAT), velocidad sistólica máxima pulmonar (PV PSV), gasto cardíaco (PV CO), volumen sistólico (PV SV), frecuencia cardíaca (FC), duración del ciclo cardíaco (CL), excursión sistólica del plano anular tricúspide (TAPSE), tiempo de eyección (TE), tiempo abierto de cierre tricúspide (TCO), índice de rendimiento miocárdico del VD (RVMPI), velocidad anular tricúspide en sístole (S'), velocidad del flujo sanguíneo a través del televisor durante el llenado diastólico temprano (E) y velocidad anular tricúspide en la diástole temprana (E').
| Parámetros de necropsia | Grupos experimentales | |
| Control (Vehículo, n = 6-8) |
MCT (60 mg/kg, n = 7-9) |
|
| HW/TL (mg/mm) | 29,4 ± 2,40 | 30,8 ± 3,22 |
| LW/TL (mg/mm) | 40,3 ± 2,03 | 55,8 ± 6,75* |
| (LV+S)/TL (mg/mm) | 20,6 ± 1,81 | 16,1 ± 1,00* |
| RV/TL (mg/mm) | 5,76 ± 0,53 | 10,6 ± 2,39* |
| RV/(LV+S) | 0,28 ± 0,03 | 0,66 ± 0,16* |
| TL (mm) | 39,3 ± 1,03 | 38,7 ± 1,74 |
Tabla 2: Mediciones de órganos en el día 24 después de la administración de MCT (Grupo MCT) o vehículo (Grupo Control) en ratas Sprague Dawley. Los datos presentados como media ± DE. Se utilizó la prueba t de Student para analizar los datos. *p < 0,05. Abreviaturas: monocrotalina (MCT), peso cardíaco (HW), peso pulmonar (LW), ventrículo derecho (RV), ventrículo izquierdo (LV) y longitud de la tibia (TL).
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Discussion
La evaluación ecocardiográfica del VD es una valiosa herramienta de descubrimiento para el cribado de la eficacia de nuevos tratamientos en modelos animales de HAP. La caracterización en profundidad de la estructura y función del VD es necesaria como dianas novedosas en el tratamiento de la remodelación del RV de abordajede HAP 4,14. Este estudio describe un protocolo detallado que permite la caracterización exitosa de la estructura y función del VD.
La compleja geometría estructural y el posicionamiento detrás del esternón dificultan la caracterización ecocardiográfica del VD; por lo tanto, las vistas ecocardiográficas modificadas se utilizan para facilitar la visualización del VD y para ayudar en la identificación precisa de los bordes endocárdicos del VD durante los análisis. En este sentido, el PLAX modificado se utiliza para una mejor visualización y para obtener las velocidades de flujo pulmonar y las mediciones morfológicas del VD. Otros protocolos han descrito el uso de vistas paraesternales de eje corto para medir el flujo pulmonar y el grosor de la pared del VD15; sin embargo, el uso de PLAX modificado permite obtener vistas representativas consistentes de las velocidades del flujo pulmonar, y también mejora la definición de la pared libre del VD. Además, la vista apical de cuatro cámaras enfocada en RV se utiliza para mejorar la visualización de las paredes de la cámara RA y RV y obtener consistentemente mediciones de los parámetros sistólicos y diastólicos de RV.
Se recomiendan los siguientes parámetros para evaluar la función sistólica del RV: TAPSE, RVFAC, RIMP y S'. TAPSE es una medida de la contracción longitudinal del VD y se ha informado que se correlaciona con el grado de disfunción del VD16; sin embargo, TAPSE sólo evalúa la contracción longitudinal sin tener en cuenta el componente radial de la contracción que se vuelve relevante en una VD dilatada11. A pesar de su limitación, TAPSE sigue siendo un parámetro obtenido de forma rutinaria, ya que es más fácil de adquirir en comparación con RVFAC y RIMP; sin embargo, una evaluación completa del grado de disfunción sistólica debe incluir la evaluación de S', RIMP y RVFAC. S' es fácil de medir, confiable y reproducible, sin embargo, solo evalúa la función sistólica longitudinal. En humanos, RVFAC se correlaciona bien con la fracción de eyección del VD (EF)10 y es una medida más precisa de la función del VD que TAPSE. RIMP, definido como [TCO-ET]/ET, es un índice de rendimiento global del VD, refleja tanto la función sistólica como diastólica del VD, y es un marcador pronóstico en pacientes con HAP17. RIMP se mide a partir de TV PW Doppler ya que se puede obtener más fácilmente, aunque también se puede medir a partir del Doppler tisular del anillo tricúspide lateral. Es importante utilizar varios índices de función sistólica del VD al evaluar la efectividad del tratamiento farmacológico en modelos animales de HAP para superar la limitación de cada medición. No se recomienda el uso de la FEVR como medida de la función sistólica debido a la complejidad de la geometría del VD, lo que lleva a volúmenes muy subestimados10.
La función diastólica del VD en ratas es un área poco estudiada debido a las dificultades técnicas para obtener las velocidades de flujo de TV y el Doppler tisular anular lateral de TV. Mediante el uso de la vista apical de cuatro cámaras centrada en RV como se indica en este protocolo, se pueden obtener vistas ecocardiográficas consistentes con una buena definición del borde endocárdico. La relación E/E' y el RAA deben usarse como una medida de la función diastólica del VD en la disfunción temprana del VD. El análisis de la tensión se ha convertido en una herramienta poderosa para acceder a la disfunción sistólica del VI en las etapas iniciales de la disfunción del VI; sin embargo, pocos estudios utilizan este tipo de análisis para evaluar el VD14,18, debido a las dificultades encontradas en la visualización de toda la pared y en la obtención de imágenes ecocardiográficas de alta calidad que son necesarias para el análisis de la tensión. Aunque en este estudio no se realizaron análisis de cepas, la calidad de las imágenes obtenidas siguiendo este protocolo es suficiente para realizar este tipo de análisis, si es necesario.
Finalmente, este protocolo proporciona una descripción detallada de las vistas ecocardiográficas necesarias para evaluar la morfología de RV y AR, así como para caracterizar la función sistólica y diastólica de RV. Estos datos proporcionan una evaluación mejorada de la eficacia de los nuevos compuestos para interrumpir el desarrollo de HAP en modelos animales de roedores.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue apoyado por NHLBI K01 HL155241 y AHA CDA849387 otorgado al autor P.C.R.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% sodium cloride injection USP | Baxter | 2B1324 | |
| Braided cotton rolls | 4MD Medical Solutions | RIHD201205 | |
| Depilating agent | Wallgreens | Nair Hair Remover | |
| Electrode gel | Parker Laboratories | 15-60 | |
| High frequency ultrasound image system and imaging station | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Vevo 2100 | |
| Isoflurane | MedVet | RXISO-250 | |
| Male sprague Dawley rats | Charles River Laboratories | CD 001 | CD IGS Rats (Crl:CD(SD)) |
| Monocrotaline (MCT) | Sigma-Aldrich | C2401 | |
| Rectal temperature probe | Physitemp | RET-3 | |
| Sealed induction chambers | Scivena Scientific | RES644 | 3 L size |
| Solid-state array ultrasound transducer | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Vevo MicroScan transducer MS250S | |
| Stainless steel digital calipers | VWR Digital Calipers | 62379-531 | |
| Ultrasound gel | Parker Laboratories | 11-08 | |
| Vevo Lab software | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Verison 5.5.1 |
References
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