Summary
Den nåværende protokollen utviklet en metode for å estimere utbyttet av forbindelser på TLC-platen ved hjelp av blå-LED-belysningsteknikken. Fordelene med denne tilnærmingen er at den er trygg, effektiv, billig og lar forskeren måle flere prøver samtidig.
Abstract
Tynnsjiktskromatografi (TLC) er en tilgjengelig analytisk teknikk som har blitt mye brukt i organisk kjemiforskning for å kvantifisere utbyttet av ukjente prøver. Denne studien utviklet en effektiv, billig og sikker metode for å estimere utbyttet av prøver på en TLC-plate ved hjelp av blå-LED-belysningen. Lovastatin ekstrahert fra Aspergillus terreus var eksempelforbindelsen som ble brukt i denne studien. Regresjonsmodeller basert på lovastatinstandarden ble brukt til å evaluere utbyttet av lovastatin. Tre metoder ble sammenlignet: bioassay, UV-deteksjon og blå-LED-belysning. Resultatet viste at blå-LED-belysningsmetoden er betydelig mer tidseffektiv enn UV-deteksjon og bioassay-metoder. I tillegg var blå-LED-belysningen et relativt trygt alternativ på grunn av bekymringen for biologiske farer i bioassay-metoden (f.eks. Mikrobiell infeksjon) og ultrafiolett eksponering i UV-deteksjonsmetoden. Sammenlignet med de dyre metodene som krever spesialiserte instrumenter og langsiktig opplæring før de jobber selvstendig, for eksempel GC, HPLC og HPTLC, var bruk av blå-LED-belysningen et økonomisk alternativ for å estimere utbyttet av prøver fra en TLC-plate.
Introduction
Tynnsjiktskromatografi (TLC) er mye brukt som en kvalitativ og kvantitativ teknikk innen organisk kjemi 1,2,3. De viktigste fordelene med TLC er at det gir rask deteksjon, fleksible prøvekrav, og krever ikke spesialutstyr4. Til dags dato, selv om mange avanserte tilnærminger er etablert, er TLC fortsatt den viktigste metoden for å identifisere ukjente prøver i en blanding. Utfordringen med denne tilnærmingen er imidlertid mangelen på trygt og billig utstyr for å kvantifisere prøveutbyttet, spesielt for å utvikle laboratorier med begrensede budsjetter. Den foreliggende studien hadde derfor som mål å utvikle en effektiv, sikker og billig metode kombinert med TLC for å estimere utbyttet av prøvene.
I motsetning til høyytelses TLC (HPTLC), høyytelses væskekromatografi (HPLC) og gasskromatografi (GC) med strenge prøvekrav, tidkrevende og involvering av flertrinn for prøvepreparering1,5, viste TLC flere fordeler. For det første, for prøvepreparering, kan HPLC og GC ikke oppdage råekstraktet fordi råekstraktet kan plugge kolonnen til HPLC og GC. For det andre, når prøvene ikke er UV-egnet (viktig for HPLC-analyse) eller med lav volatilitet (viktig for GC-analyse), kan TLC påføres disse prøvene, og bruken av visualiseringsreagens gjør de isolerte prøvene synlige på tynne lag 6,7,8. For det tredje, for generelle brukere, krever HPLC og GC generelt relativt lang tids forhåndsopplæring før de jobber uavhengig, sammenlignet med TLC. I tillegg kan kvantitativ TLC-analyse, kjent som høyytelses TLC (HPTLC), digitalisere informasjonen på en TLC-plate med en svært sensitiv skanner. Imidlertid er kostnaden for HPTLC-systemet relativt dyrt. Som sådan er det et viktig tema å utvikle en kostnadseffektiv og rask tilnærming for å kvantifisere prøver på TLC-platen.
Lignende metoder er utviklet for kvantifisering av TLC-utbytte; for eksempel rapporterte Johnson9 en teknikk som tillater kvantifisering av prøvene på en TLC-plate ved å bruke en planskanner festet til en datamaskin. I 2001 utviklet El-Gindy et al.10 den TLC-densitometriske metoden, som ble brukt til å oppdage forbindelsen med optisk tetthet, og teknikken ble også brukt av Elkady et al.11. I 2007 presenterte Hess2 metoden digitalt forbedret TLC (DE-TLC) som ble brukt til å oppdage utbyttet av en forbindelse på en TLC-plate ved hjelp av et digitalkamera kombinert med UV-lys. Hess sammenlignet også kostnadsforskjellene mellom HPTLC og DE-TLC-metoden og konkluderte med at DE-TLC-metoden kunne brukes i videregående og høyskolelaboratorier på grunn av den rimelige prisen2. Imidlertid var kostnaden for TLC-densitometrisk metode fortsatt dyr, og driften av ultrafiolett lys krever tilstrekkelig forhåndsopplæring i tilfelle brukerne kan bli utsatt for ultrafiolett stråling. Derfor, kompatibel med TLC, er det ønskelig å utvikle en effektiv, sikker og billig metode for å kvantifisere prøveutbyttet.
Denne studien beskrev en protokoll for å oppdage prøven på en TLC-plate ved hjelp av blå-LED-belysningen, og utviklet en regresjonsmodell med høy pålitelighet (høy R-kvadratverdi) for å måle dimensjonene til båndene, og deretter bestemme det sammensatte utbyttet. Til slutt ble det funnet at blå-LED-belysningsmetoden er relativt sikker (vs. UV-deteksjonsmetode), billig (vs. GC, HPLC og HPTLC), og effektiv (vs. bioassay metode) tilnærming for avkastningskvantifisering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Den nåværende protokollen er beskrevet ved hjelp av lovastatin som et eksempel. Lovastatin ble utvunnet fra en uke gammel Aspergillus terreus.
1. Sammensatt ekstraksjon
MERK: For detaljer om sammensattekstraksjon, se figur 1.
- Kultur Aspergillus terreus på potet dextrose agar (PDA, se tabell over materialer) medium ved 30 ° C.
- Tørk kulturen ved 40 °C i 24 timer. Overfør den tørkede kulturen til et 50 ml rør ved hjelp av sterilisert pinsett og tilsett 15 ml etylacetat.
- Rist blandingen kraftig ved å virvle i 1 min og inkubere i 1 time ved 40 °C med risting ved 200 o/min.
- Sonikere blandingen ved hjelp av et 40 kHz ultralydbad (se materialtabell) ved 40 ° C i 1 time.
- Sentrifuger blandingen ved 5000 x g i 1 minutt ved romtemperatur og filtrer gjennom et 11 μm filterpapir.
- Trekk ut filtratet med like mye sterilt vann i en separatorisk trakt.
- Etter faseseparasjon, samle det organiske laget, og fordamp deretter i en roterende fordamper (se materialtabell). Oppløs resten i 2 ml etylacetat.
2. Separasjon av råekstraktet ved normal fase (NP) adsorpsjonskolonne
- Pakk kolonnen med NP silikagel som stasjonær fase, og bruk n-heksan: etylacetat: trifluoreddiksyre (H: E: T; 80: 20: 0.1, v / v / v) som mobilfase.
- Legg 2 ml av ekstraktet (trinn 1) på kolonnen og tilsett det mobile faseløsningsmidlet med en strømningshastighet på 1 ml / min for å eluere ekstraktet.
MERK: Strømningshastigheten ble styrt manuelt ved hjelp av en stoppekran. - Kontroller avløpet av TLC for å bekrefte tilstedeværelsen av lovastatin, og fordamp deretter i en roterende fordamper ved 45 ° C til løsningsmidlet blir fjernet. Dette trinnet tar omtrent 20-25 minutter.
- Oppløs resten i 1 ml etylacetat, og bland deretter med et like volum på 1% trifluoreddiksyre.
- Sentrifuger blandingen ved 5000 x g i 1 min ved romtemperatur og samle det organiske laget i et nytt glassrør.
3. Fremstilling og lasting av tynnlagskromatogram (TLC) plater
- Spot 5 μL av prøver og lovastatinstandarder (se materialtabell) på grunnlinjen av TLC-platen ved hjelp av en kapillærpipette, og etterlater en kant på 1 cm på sidene av TLC-platen.
- Tørk TLC-platen i en avtrekkshette i 5 minutter ved romtemperatur.
- Plasser platen forsiktig med tang i et mettet glasskammer som inneholder det mobile faseløsningsmidlet. Dekk kammeret med et glasslokk og la platen utvikle seg fullt ut.
- Fjern platen fra kammeret når løsningsmiddellinjen når 1 cm fra toppen av platen.
4. Analyse av blå-LED-belysningen
- Merk løsningsmiddellinjen med en blyant. Tørk platen i avtrekkshetten i 10 minutter ved romtemperatur.
- Etter tørking, suge platen umiddelbart i 10% H2SO4 løsningsmiddel, og tørk deretter i avtrekkshetten i 10 minutter ved romtemperatur.
- Plasser platen på varmepanelet til de brune flekkene vises. Sørg for at platen ikke er overopphetet, da dette kan gjøre visualisering av lovastatin vanskelig.
- Overfør platen til blå-LED-belysningen og skann med et kompatibelt freeware (MiBio Fluo) (se materialtabell).
5. Avkastningsestimering ved regresjonsmodellen
- Mål dimensjonen til bånd ved hjelp av ImageJ-programvaren (se Materialtabell).
- Etablere en regresjonsmodell ved hjelp av dataanalyse- og grafprogramvare (se Materialtabell) basert på de synkende konsentrasjonene av lovastatinstandarder, inkludert 1 mg/ml, 0,75 mg/ml, 0,5 mg/ml og 0,25 mg/ml.
- Bruk regresjonsmodellen til å estimere utbyttet av prøvene.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne studien presenterte blå-LED-belysningsmetoden for å estimere utbyttet av forbindelser, og denne metoden ble validert og sammenlignet med bioassay og UV-oppdagede metoder (tabell 1). Regresjonsmodellene ble utviklet basert på dimensjonene av bånd og konsentrasjon av standarder for henholdsvis tre metoder for å forutsi utbyttet av prøver. For det første, i resultatene av bioassay-metoden, var R-kvadratet mellom dimensjonene til inhiberingssonen og lovastatinstandardene 0, 99, og prøveutbyttet var 0, 56 mg spådd av regresjonsmodellen (figur 2). For det andre, i UV-deteksjonsmetoden, var R-kvadratet mellom lovastatinstandardene og dimensjonen av bånd på TLC-platen 0,97, og utbyttet av prøven forutsagt av regresjonsmodellen var 0,53 mg (figur 3). Spesielt var båndets kanter uskarpe, og relativt lave signalintensitetsbånd ble observert (figur 3A). For det tredje, i blå-LED-belysningsmetoden, var R-kvadratet mellom lovastatinstandarder og båndenes dimensjon på TLC-platen 0,98, og prøveutbyttet var 0,54 mg spådd av regresjonsmodellen (figur 4). Det forventede utbyttet ved hjelp av blå-LED-belysningen var nærmere bioassay-metoden (satt som kontroll). Dimensjonen til bandet var proporsjonal med mengden lovastatin, og de klare båndene ble oppnådd ved blå-LED-belysningsmetoden. I tillegg var arbeidstiden til bioassay, UV-oppdaget og blå-LED-belysningsmetoder henholdsvis ca. 24 timer, 2 timer og 1 time; (Merk: arbeidstid betyr den totale tiden brukt på avkastningsundersøkelsen av lovastatin).
Figur 1: Protokollens arbeidsflyt. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Bioassay-metoden. (A) Bioassay av lovastatin mot Neurospora crassa (inkubert i 24 timer ved 30 °C). På slutten av forsøket ble 90 mm agarplatene fotografert under synlig lys. (B) Konsentrasjonene av seks lovastatinstandarder var: nr. 1 (1 mg/ml), nr. 2 (0,75 mg/ml), nr. 3 (0,5 mg/ml) og nr. 4 (0,25 mg/ml). Prøve nr. 5 ble fortynnet til 0,25× (1:4). Prøve nr. 6 ble fortynnet til 0,5× (1:2). Inhiberingssonedimensjonen (mm2) ble målt av bildebehandlingsprogramvaren. (C) En regresjonsmodell ble utviklet ved hjelp av dataanalyse og grafisk programvare basert på inhiberingssonedimensjonen til standarder. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Tynnsjiktskromatogramplate (TLC) utsatt for UV-lys. (A) N-heksan: etylacetat (2: 3 v / v) ble brukt som mobilfase i TLC-analysen, og TLC-platen ble utsatt for UV-lys (365 nm) etter bløtlegging i utvikleren (10% H2SO4). (B) Konsentrasjonene av seks lovastatinstandarder var: nr. 1 (1 mg/ml), nr. 2 (0,75 mg/ml), nr. 3 (0,5 mg/ml) og nr. 4 (0,25 mg/ml). Prøve nr. 5 ble fortynnet til 0,25× (1:4). Prøve nr. 6 ble fortynnet til 0,5× (1:2). Inhiberingssonedimensjonen (mm2) ble målt av bildebehandlingsprogramvaren. (C) En regresjonsmodell ble utviklet ved hjelp av dataanalyse og grafisk programvare basert på dimensjonen til lovastatin-standardbåndene på TLC-platen. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Tynnlagskromatogram (TLC) plate skannet av blå-LED-belysningen. (A) N-heksan:etylacetat (2:3 v/v) ble brukt som mobilfase i TLC-analysen, og TLC-platen ble skannet av blå-LED-belysningen. (B) Konsentrasjonene av seks lovastatinstandarder var: nr. 1 (1 mg/ml), nr. 2 (0,75 mg/ml), nr. 3 (0,5 mg/ml) og nr. 4 (0,25 mg/ml). Prøve nr. 5 ble fortynnet til 0,25× (1:4). Prøve nr. 6 ble fortynnet til 0,5× (1:2). Inhiberingssonedimensjonen (mm2) ble målt av bildebehandlingsprogramvaren. (C) En regresjonsmodell ble utviklet ved hjelp av dataanalyse og grafisk programvare basert på dimensjonen til lovastatin-standardbåndene på TLC-platen. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Bioassay | Blå-LED-belysning | UV-oppdaget | |
| Resultatobservasjon | Øyne | Blå-LED belysning og øyne | UV-lys og øyne |
| Bildeoppløsning | Middels | Høy | Lav (uskarpt og svakt bilde) |
| Omtrentlig tidskostnad | 24 timer | 1 time | 2 timer |
| Analyseferdighet kreves | Middels | Lav | Middels |
| Sikkerhet | Mikrobiell infeksjon | Veldig trygt | UV-lys eksponering |
| Regresjonsligning | y = 0,0019x + 0,0304 | y = 0,0399x - 0,1271 | y = 0,0657x - 0,6405 |
| R-kvadrat | 0.99 | 0.98 | 0.97 |
| Skråning | 0.0019 | 0.0399 | 0.0657 |
| Avskjære | 0.0304 | -0.1271 | -0.6405 |
| Standard hellingsfeil | 8.94E-05 | 3.54E-03 | 6.28E-03 |
| Standard feil av avskjæring | 0.03032 | 0.07115 | 0.12375 |
Tabell 1: Sammenligning av de tre deteksjonsmetodene som ble brukt i denne studien.
| TLC-densitometrisk metode | TLC-bildeanalyse | |||||||
| El-Gindy et al.10 |
Elkady et al.11 |
Musharraf et al.12 |
Johnson 9 | Hess2 | Blue-LED Illuminator metode (Denne studien) |
|||
| Eksempel | Acebutolol HCL | Ciprofloxacin HCL | Metronidazole | Danazol | Kolesterol | Vanillin | Nikotinamid | Lovastatin |
| Resultater | UV detektor |
TLC skanner |
TLC skanner |
Planskanner | Digitalkamera med UV-lampe |
Blå-LED-belysning | ||
| Bølgelengde | 230 nm | 280 nm | 280 nm | 291 nm | NA | 254 nm | NA | |
| Korrelasjonskoeffisient | 0,996a | 0,9991a | 0,9994a | 0,996a | 0,998per | 0,971b | 0,987b | 0,99a 0,98b |
| Regresjonsligning | NA | y = 5,7853x +19.9383 |
y = 1,1104x + 6.9755 |
y = 7,949x + 2460 | y = 0,96x | NA | NA | y = 0,0399x -0.1271 |
| a: Pearson korrelasjonskoeffisient | ||||||||
| b: R-kvadrat | ||||||||
Tabell 2: Sammenligning av tidligere metoder og denne studien.
Tilleggsfigur 1: Tynnsjiktskromatogramplaten (TLC) med ampicillin ble skannet med blå-LED-belysningsmetoden. (A) Etylacetat: metanol (9: 13 v / v) ble brukt som mobilfase i TLC-analysen, og TLC-platen ble skannet av den blå LED-belysningen. (B) Konsentrasjonen av fire ampicillinstandarder var: nr. 1 (100 mg/ml), nr. 2 (75 mg/ml), nr. 3 (50 mg/ml) og nr. 4 (25 mg/ml). Bandenes dimensjon ble målt av bildebehandlingsprogramvaren. (C) En regresjonsmodell ble utviklet ved hjelp av dataanalyse og grafisk programvare basert på dimensjonen til ampicillin-standardbåndene på TLC-platen. Klikk her for å laste ned denne filen.
Supplerende figur 2: Tynnlagskromatogram (TLC) plate med apramycin skannet med blå-LED-belysningsmetoden. (A) Metanol: vann (6: 5 v / v) ble brukt som mobilfase i TLC-analysen, og TLC-platen ble skannet av blå-LED-belysningen. (B) Konsentrasjonen av fire apramycinstandarder var: nr. 1 (50 mg/ml), nr. 2 (40 mg/ml), nr. 3 (30 mg/ml) og nr. 4 (20 mg/ml). Bandenes dimensjon ble målt av bildebehandlingsprogramvaren. (C) En regresjonsmodell ble utviklet ved hjelp av dataanalyse og grafisk programvare basert på dimensjonen av apramycinstandardbåndene på TLC-platen. Klikk her for å laste ned denne filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne studien beskrev en ny tilnærming, blå-LED-belysningen, for å kvantifisere forbindelser uten å bruke dyrt og spesialisert utstyr, som HPTLC, HPLC og GC-metoden, og metoden ble sammenlignet med bioassay og UV-oppdagede metoder for å evaluere kvantifiseringsytelsen. Som et resultat ble det konkludert med at blå-LED-belysningsmetoden er en relativt sikker og effektiv protokoll som brukes til å kvantifisere utbyttet av målrettede forbindelser på TLC-platen.
Tidligere studier har rapportert flere kvantitative metoder uten bruk av spesialisert kvantitativt utstyr, og alle studiene viste at nøyaktigheten av kvantifiseringen var nær bruken av spesialutstyr 2,9,10,11,12 (tabell 2). For eksempel sammenlignet El-Gindy et al.10 nøyaktigheten av estimert avkastning basert på HPLC- og TLC-densitometriske metoder, og resultatene viste at det ikke var noen signifikante forskjeller mellom de to metodene (p-verdi < 0,05). Sammenlignet med blå-LED-belysningsmetoden i denne studien, krevde TLC-densitometrisk metode utviklet av El-Gindy et al.10 en spesiell bølgelengdedetektor, mens blå-LED-belysningsmetoden krevde en enkel og billig blå-LED-skanner. I mellomtiden kunne den blå LED-skanneren også brukes til andre formål, for eksempel gelelektroforeseskanning, men den spesialiserte TLC-skanneren utviklet av Elkady et al.11 ble bare brukt til TLC-densitometrisk metode.
I tillegg til den TLC-densitometriske metoden10,11 ble planskanneren og digitalkamerametoden utviklet for å oppdage utbyttet av prøver. For eksempel etablerte Johnson9 en rask TLC-deteksjonsmetode ved hjelp av planskanneren, og målte deretter absorpsjonen ved hjelp av kommersiell bildeprogramvare. Imidlertid var bildeprogramvaren som ble brukt i blå-LED-belysningsmetoden gratis og enkel å bruke. Hess2 utviklet programvaren "TLC analyzer" for å estimere dimensjonen av bånd på TLC-platebilder tatt av et digitalkamera, som lignet UV-oppdaget metode i denne studien. Imidlertid kan begge metodene samhandle potensielt med UV-lysfarer.
Regresjonsmodellene basert på dimensjonen til standardbåndene ble utviklet for bioassay, blue-LED-belysning og UV-oppdaget metode, og R-kvadratverdien var henholdsvis 0,99, 0,98 og 0,97 (tabell 1). Da høy linearitet (R-kvadrat) ble oppnådd, foreslås det at regresjonsmodellen kunne måle utbyttet av prøver. X-verdien i regresjonsmodellen ble erstattet av dimensjonen til standardbåndene, og det estimerte utbyttet (predikert Y-verdi i regresjonsmodellen) var ca. 5,6, 5,4 og 5,3, bestemt av henholdsvis bioassay, blue-LED og UV-deteksjonsmetoder. Resultatene indikerte at R-kvadratet og estimert utbytte ved bruk av blå-LED-belysningen var nærmere bioassay-metoden (satt som kontroll) enn den UV-oppdagede metoden (tabell 1).
For å forstå begrensningene i denne tilnærmingen ble tilnærmingen også brukt til å oppdage to andre forbindelser, inkludert ampicillin og apramycin; resultatene er vist i supplerende figur 1 og supplerende figur 2. To viktige trinn må noteres i denne tilnærmingen: (1) etter tørking må platen visualiseres umiddelbart; forsinket visualisering kan påvirke spotdeteksjonen; (2) Overeksponering av platen anbefales ikke, da det skannede bildet fra platen kommer med høy bakgrunn og gjør det vanskelig å måle områdene på flekkene.
For å konkludere er blå-LED-belysningsmetoden en relativt sikker, tidsbesparende, billig og mindre arbeidskrevende tilnærming for å øke kvantifiseringen av utbyttet av prøver sammenlignet med andre kvantitative kromatografiske metoder; Derfor er denne tilnærmingen en ideell protokoll for bruk i utvikling av laboratorier med begrensede budsjetter. I mellomtiden var TLC-platebildene hentet fra blå-LED-belysningsmetoden mye klarere enn de fra UV-deteksjonsmetoden (figur 3A vs. Figur 4A), som også bidro til å nøyaktig bestemme dimensjonen av båndene på TLC-platen, og også å estimere utbyttet av prøvene.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfatterne oppgir at de ikke har noen interessekonflikter.
Acknowledgments
Denne studien ble støttet av departementet for vitenskap og teknologi, Taiwan (MOST 108-2320-B-110-007-MY3).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| American bacteriological Agar | Condalab | 1802.00 | |
| Aspergillus terreus | ATCC 20542 | ||
| Blue-LED illuminator | MICROTEK | Bio-1000F | |
| Centrifuge | Thermo Scientific | HERAEUS Megafuge 8 | |
| Compact UV lamp | UVP | UVGL-25 | |
| Ethyl Acetate | MACRON | MA-H078-10 | |
| Filter Paper 125mm | ADVANTEC | 60311102 | |
| ImageJ | NIH | Freeware | https://imagej.nih.gov/ij/download.html |
| Lovastatin standard | ACROS | A0404262 | |
| MiBio Fluo | MICROTEK | V1.04 | |
| n-Hexane | C-ECHO | HH3102-000000-72EC | |
| OriginPro | OriginLab | 9.1 | https://www.originlab.com/origin |
| Potato dextrose broth H | STBIO MEDIA | 110533 | |
| Rotary evaporator | EYELA | SB-1000 | |
| Sulfuric acid | Fluka | 30743-2.5L-GL | |
| TLC silica gel 60 F254 | MERCK | 1.05554.0001 | |
| Trifluoroacetic acid | Alfa Aesar | 10229873 | |
| Ultrasonic vibration machine | DELTA | DC600 |
References
- Pyka, A. Detection progress of selected drugs in TLC. BioMed Research International. 2014, 732078 (2014).
- Hess, A. V. I. Digitally enhanced thin-layer chromatography: An inexpensive, new technique for qualitative and quantitative analysis. Journal of Chemical Education. 84 (5), 842-847 (2007).
- Ullah, Q., Mohammad, A. Vitamins determination by TLC/HPTLC-a mini-review. Journal of Planar Chromatography - Modern TLC. 33 (5), 429-437 (2020).
- Chen, Z., Tao, H., Liao, L., Zhang, Z., Wang, Z. Quick identification of xanthine oxidase inhibitor and antioxidant from Erycibe obtusifolia by a drug discovery platform composed of multiple mass spectrometric platforms and thin-layer chromatography bioautography. Journal of Separation Science. 37 (16), 2253-2259 (2014).
- Duncan, J. D. Chiral separations: A comparison of HPLC and TLC. Journal of Liquid Chromatography. 13 (14), 2737-2755 (1990).
- Sherma, J. Thin-layer chromatography in food and agricultural analysis. Journal of Chromatography A. 880 (1-2), 129-147 (2000).
- Bocheńska, P., Pyka, A., Bocheńska, P., Bocheńska, B. Determination of acetylsalicylic acid in pharmaceutical drugs by TLC with densitometric detection in UV. Journal of Liquid Chromatography. 35 (10), 1346-1363 (2012).
- Poole, C. F. Planar chromatography at the turn of the century. Journal of Chromatography A. 856 (1-2), 399-427 (1999).
- Rapid Johnson, M. E. simple quantitation in thin-layer chromatography using a flatbed scanner. Journal of Chemical Education. 77 (3), 368-372 (2000).
- El-Gindy, A., Ashour, A., Abdel-Fattah, L., Shabana, M. M. First derivative spectrophotometric, TLC-densitometric, and HPLC determination of acebutolol HCL in presence of its acid-induced degradation product. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24 (4), 527-534 (2001).
- Elkady, E. F., Mahrouse, M. A. Reversed-phase ion-pair HPLC and TLC-densitometric methods for the simultaneous determination of ciprofloxacin hydrochloride and metronidazole in tablets. Chromatographia. 73 (3-4), 297-305 (2011).
- Musharraf, S. G., Ul Arfeen,, Shoaib, Q., M, Development and validation of TLC-densitometric method for the quantification of a steroidal drug, danazol in its pharmaceutical formulations. Journal of Planar Chromatography - Modern TLC. 25 (4), 331-337 (2012).
