Summary
Partiële heupzenuwligatie induceert langdurige chronische neuropathische pijn, gekenmerkt door overdreven reacties op thermische en mechanische stimuli. Dit muismodel van neuropathische pijn wordt vaak gebruikt om innovatieve therapieën voor pijnbestrijding te bestuderen. Dit artikel beschrijft in detail de chirurgische procedure om de standaardisatie en reproduceerbaarheid te verbeteren.
Abstract
Het beheer van chronische pijn blijft tot op de dag van vandaag een uitdaging en de huidige behandelingen worden geassocieerd met nadelige effecten, waaronder tolerantie en verslaving. Chronische neuropathische pijn is het gevolg van laesies of ziekten in het somatosensorische systeem. Om mogelijke therapieën met verminderde bijwerkingen te onderzoeken, zijn dierpijnmodellen de gouden standaard in preklinische studies. Daarom zijn goed gekarakteriseerde en goed beschreven modellen cruciaal voor de ontwikkeling en validatie van innovatieve therapieën.
Partiële ligatie van de heupzenuw (pSNL) is een procedure die chronische neuropathische pijn bij muizen induceert, gekenmerkt door mechanische en thermische overgevoeligheid, aanhoudende pijn en veranderingen in de temperatuur van de ledematen, waardoor dit model uitstekend geschikt is om neuropathische pijn preklinisch te bestuderen. pSNL is een voordelig model om neuropathische pijn te bestuderen, omdat het veel symptomen reproduceert die worden waargenomen bij mensen met neuropathische pijn. Bovendien is de chirurgische ingreep relatief snel en eenvoudig uit te voeren. Unilaterale pSNL van één ledemaat maakt vergelijking tussen de ipsilaterale en contralaterale poten mogelijk, evenals evaluatie van centrale sensibilisatie.
Om chronische neuropathische overgevoeligheid te induceren, wordt een 9-0 niet-absorbeerbare nylondraad gebruikt om het dorsale derde deel van de heupzenuw te ligaateren. Dit artikel beschrijft de chirurgische procedure en karakteriseert de ontwikkeling van chronische neuropathische pijn door middel van meerdere veelgebruikte gedragstests. Omdat een overvloed aan innovatieve therapieën nu wordt onderzocht om chronische pijn te behandelen, biedt dit artikel cruciale concepten voor standaardisatie en een nauwkeurige beschrijving van operaties die nodig zijn om neuropathische pijn te induceren.
Introduction
Chronische pijn is een belangrijk probleem in de gezondheidszorg over de hele wereld en is een van de duurste gezondheidsproblemen in de Verenigde Staten. Chronische pijn wordt beter beheerd wanneer zowel farmacologische als niet-farmacologische modaliteiten op een multidisciplinaire manier worden gebruikt1. Het beheer van chronische pijn is een uitdaging en behandelt in sommige gevallen de pijn niet adequaat2. Daarom zijn nieuwe en complementaire methoden nodig om chronische pijnbestrijding te verbeteren, en diermodellen zijn cruciaal om innovatieve therapieën te onderzoeken.
Chronische neuropathische pijn is het gevolg van laesies of ziekten in het somatosensorische systeem, waaronder diabetes, infecties, zenuwcompressies of auto-immuunziekten3. Neuropathische pijn is afhankelijk van zowel perifere als centrale sensibilisatiemechanismen en is afkomstig van een laesie van de zenuwen. Deze pijn kan worden gekenmerkt door zowel aanraking als thermisch opgeroepen hyperalgesie en allodynie, aanhoudende pijn en veranderingen in de temperatuur van de aangedane ledemaat4. Om de mechanismen beter te begrijpen en nieuwe behandelingen te bevorderen, zijn er verschillende modellen ontwikkeld bij knaagdieren om de symptomen en oorzaken van neuropathische pijn na te bootsen5. Neuropathische pijn kan bijvoorbeeld worden geïnduceerd met chemotherapeutische middelinjecties, spinale zenuwligatie (SNL), chronisch vernauwingsletsel (CCI) van de heupzenuw, pSNL, gespaard zenuwletsel, heupzenuwtranssectie en heupzenuwtrisectie6. Met name ligatie van de heupzenuw reproduceert meerdere kenmerken van neuropathische pijn waargenomen bij mensen, zoals mechanische en thermische overgevoeligheid, of veranderingen in temperatuur van de aangedane ledemaat, kenmerkend voor complex regionaal pijnsyndroom (CRPS)7. Dit model is dus zeer geschikt voor de studie van CRPS of andere aandoeningen van zenuwletsel die chronische neuropathische pijn veroorzaken. Het model werd voor het eerst ontwikkeld door Seltzer in 19908, en wordt veel gebruikt in pijnstudies om nieuwe pijnstillende verbindingen te onderzoeken of de cognitieve effecten van chronische pijn te evalueren 9,10,11,12,13. Het model vertoont een hoge reproduceerbaarheid en de partiële ligatie behoudt gedragsreacties op perifere stimuli6.
Veel van de momenteel gebruikte modellen hebben tekortkomingen die niet zijn waargenomen in pSNL. Het CCI-model heeft een veel hogere variabiliteit van letsel tussen elk dier, afhankelijk van de knusheid van de constrictor, en autotomie verandert de achterpootcijfers waardoor het model ongeschikt wordt voor gedragsanalyse6. Het SNL-model is een veel gecompliceerdere en langere operatie die niet alleen geavanceerde technische vaardigheden vereist, maar ook een hoog risico op ernstige motorische tekortenmet zich meebrengt 3. Deze tekortkomingen worden niet gezien in het pSNL-model. Het gemak van reproduceerbaarheid, de korte duur van de operatie en het verminderde risico op motorische tekorten na de operatie maken dit model waardevol voor het bestuderen van perifere neuropathische pijn 8,14. Niettemin kan de partiële ligatieprocedure zelf variabiliteit hebben tussen experimentatoren, wat resulteert in minder consistentie in het aantal geligeerde zenuwvezels. Het presenteren van de details van de operatie is dus cruciaal om de reproduceerbaarheid tussen studies te vergroten.
Om chronische neuropathie te induceren, wordt een 9-0 niet-absorbeerbare nylon hechting gebruikt om een derde van de breedte van de heupzenuw te ligateren. Na de operatie zijn de reacties op thermische en mechanische stimuli overdreven, beginnend op dag 1 postoperatief en langer dan 50 dagen8. Hier werden zowel thermische als mechanische gevoeligheden gedurende 28 dagen geëvalueerd met behulp van Hargreaves', hete plaat en von Frey filamenttests. Alle gedragstesten toonden de consistentie van de langdurige overgevoeligheid aan. Van dit model is aangetoond dat het dosisafhankelijke effecten heeft van zowel morfine als ibuprofen, wat bevestigt dat het zeer geschikt is voor preklinische pijnstudies. Dit artikel beschrijft met name de instructies voor een uniek handgemaakt glazen gereedschap, aangeduid als 'zenuwglashaak'. Deze tool wordt gebruikt in plaats van een tang om de zenuw te manipuleren en onbedoeld extra zenuwletsel tijdens de operatie te voorkomen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedures zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee van de Universiteit van Arizona en voldoen aan de richtlijnen voor het gebruik van proefdieren van de National Institutes of Health (NIH-publicatie nr. 80-23, 1966). Pathogeenvrije, volwassen C57Bl6/J-muizen (gewicht bij de test: 22-28 g) werden gehuisvest in standaard vivarium-muizenkooien (vijf muizen per kooi) in klimaatgecontroleerde kamers op een licht/donkercyclus van 12 uur en kregen ad libitum toegang tot voedsel en water. Alle gedragsexperimenten werden uitgevoerd door experimentatoren die blind waren voor de behandelingsomstandigheden.
1. Basislijn: de maat voor mechanische gevoeligheid
- Laat ze bij aankomst van de muizen 1 week wennen aan de dierenfaciliteit. Wen de dieren vervolgens aan het hanteren van experimentatoren gedurende ≥7 dagen daarna.
- Wen de muizen voorafgaand aan het testen gedurende 1 uur aan het von Frey-testapparaat door ze in doorzichtige plexiglasdozen te plaatsen, op een gaas, in dezelfde ruimte als de testruimte - bij voorkeur met de experimentator aanwezig in de kamer tijdens de gewenning.
- Stel de drempelwaarde voor het terugtrekken van de voorpoot vast via de "up-and-down"-methode met behulp van von Frey-filamenten beschreven in aanvullende tabel S1, te beginnen met de 3,61 (3,9 mN) gloeidraad.
- Meet de onttrekkingsreactie op het onderzoeken van de mid-plantaire achterpoot met een reeks gekalibreerde fijne (von Frey) monofilamenten. Breng elke gloeidraad eenmaal loodrecht aan op het plantaire oppervlak van de pSNL ipsilaterale achterpoot van de dieren die in hangende gaaskooien worden gehouden. Evalueer de mechanische gevoeligheid met behulp van de "up-and-down" -methode15: bepaal de onttrekkingsdrempel door de stimulussterkte achtereenvolgens te verhogen of te verlagen, overeenkomend met de grootte van de gloeidraad. Breng elk filament één keer sequentieel aan.
OPMERKING: De experimentator moet voorkomen dat een van de voetzolen wordt gestimuleerd om consistente resultaten tussen de dieren te verkrijgen. - Als het dier bijvoorbeeld niet reageert op het 3,61-filament, gebruik dan het dikkere 4,08-filament (9,8 mN) (een reactie wordt visueel opgemerkt als terugtrekken, schudden of likken van de aangetaste poot); als het dier de eerste keer reageerde, gebruik dan de dunnere 3,22 (1,6 mN) gloeidraad. Blijf afnemende of steeds dikkere filamenten gebruiken, afhankelijk van of het dier respectievelijk positieve of negatieve daaropvolgende reacties had. Rapporteer negatieve en positieve reacties in de datasheet in aanvullende tabel S1. Test dezelfde poot 4x met verschillende filamenten na de eerste positieve reactie.
- Meet de onttrekkingsreactie op het onderzoeken van de mid-plantaire achterpoot met een reeks gekalibreerde fijne (von Frey) monofilamenten. Breng elke gloeidraad eenmaal loodrecht aan op het plantaire oppervlak van de pSNL ipsilaterale achterpoot van de dieren die in hangende gaaskooien worden gehouden. Evalueer de mechanische gevoeligheid met behulp van de "up-and-down" -methode15: bepaal de onttrekkingsdrempel door de stimulussterkte achtereenvolgens te verhogen of te verlagen, overeenkomend met de grootte van de gloeidraad. Breng elk filament één keer sequentieel aan.
2. Uitgangssituatie: de meting van de thermische gevoeligheid met behulp van de Hargreaves-test
- Laat ze bij aankomst van de muizen 1 week wennen aan de dierenfaciliteit. Wen de dieren vervolgens aan het hanteren van experimentatoren gedurende ≥7 dagen daarna.
- Wen de muizen voorafgaand aan het testen gedurende 1 uur aan het Hargreaves-testapparaat door ze in doorzichtige plexiglasdozen te plaatsen, in dezelfde ruimte als de testruimte - bij voorkeur met de experimentator aanwezig in de kamer tijdens de gewenning.
OPMERKING: De Hargreaves-test vereist dat het dier een paar seconden stilstaat. Bij muizen is gewenning de sleutel tot een succesvol experiment. Dus als de muizen na 1 uur gewenning erg actief blijven, laat ze dan langer acclimatiseren als dat nodig is.- Bepaal latenties van pootterugtrekking zoals beschreven door Hargreaves et al.16. Acclimatiseer de muizen in plexiglas behuizingen op een heldere plexiglas plaat.
- Richt een stralingswarmtebron (projectorlamp met hoge intensiteit) op het plantaire oppervlak van de achterpoot ipsilateraal aan de pSNL. Pas de intensiteit van de warmtebron aan om een basislijn van de latentie van de terugtrekking van de poot van ongeveer 10 s te verkrijgen. Houd vervolgens de intensiteit constant voor de rest van het experiment.
- Wacht tot een bewegingsmelder de stimulus en timer automatisch stopt wanneer de poot wordt teruggetrokken. Gebruik een maximale cutoff van 33,5 s om weefselschade te voorkomen.
OPMERKING: De cut-off wordt bepaald op basis van eerdere experimenten en artikelen om extra huidbeschadiging te voorkomen11,17,18. Met de intensiteit die in deze studie wordt gebruikt, is 33,5 de cut-off, wat overeenkomt met een stimulusintensiteit van 30 (50 W) met behulp van het Hargreaves-apparaat. Het waargenomen gedrag is een reflexgedrag, geen vrijwillig gedrag. - Stel de baseline paw withdrawal latencies vast met behulp van het Hargreaves-apparaat en richt op het plantaire oppervlak van de pSNL ipsilaterale achterpoot. Start thermische stimulatie en registreer ontwenningslatentie. Om te voorkomen dat de temperatuur van de warmteprikkel wordt beïnvloed, moet u eventuele urine tijdens de proeven opruimen.
3. Uitgangssituatie: de meting van de thermische gevoeligheid met behulp van de kookplaattest
- Laat de dieren voorafgaand aan de test gedurende 1 uur wennen aan de testruimte.
OPMERKING: Aangezien kamertemperatuur belangrijk is en van invloed kan zijn op de reacties op de kookplaattest, moet u ervoor zorgen dat de temperatuur van de kamer consistent rond de 22 °C ligt tijdens de gewenningsperiode en gedurende de testperiode. - Stel de kookplaat in op 52 °C, omdat is aangetoond dat deze temperatuur idealiter een aversieve thermische respons opwekt19.
- Plaats het dier in de testkamer en start een chronometer.
- Observeer voor nocifensief gedrag (d.w.z. pootterugtrekking, likken, schudden). Aangezien de pSNL-operatie de achterpoot beïnvloedt, negeert u alle gedragingen die in de voorpoten worden waargenomen (vooral likken van de voorpoten).
- Stop de chronometer zodra nocifensief gedrag wordt waargenomen.
- Verwijder het dier uit de kamer en noteer de latentie van dit gedrag.
OPMERKING: Verwijder de dieren na maximaal 30 s uit de kamer om weefselbeschadiging te voorkomen. Bovendien is het belangrijk op te merken dat het waargenomen gedrag een reflexgedrag is, geen vrijwillig gedrag. - Reinig de testkamer met 70% ethanol tussen dieren om de gedragsimpact van geuren te verminderen. Om te voorkomen dat de temperatuur van de warmteprikkel wordt beïnvloed, reinigt u het apparaat van eventuele urine tussen elk getest dier.
- Om de resultaten te bevestigen, neemt u video's op van de dieren in de hete plaatkamer tijdens het testen voor beoordeling nadat de dieren zijn getest.
OPMERKING: Door videoreview te gebruiken om latenties te kwantificeren, kan de experimentator de test herhaaldelijk observeren en nocifensief gedrag dat mogelijk is gemist tijdens realtime observatie nauwkeurig analyseren.
4. Preoperatieve voorbereiding
OPMERKING: Zorg ervoor dat er schone kooien beschikbaar zijn voor het herstellen van de muizen na de operatie. Reinig het operatiegebied met 70% ethanol, desinfecteer de handen met 70% ethanol, gebruik steriele handschoenen, draag de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM) (laboratoriumjas, haarnetje, schoenovertrekken) en oefen steriele technieken tijdens de operatie.
- Bereid de gereedschappen (aanvullende figuur S1) en aanvullende middelen (gaas) voor op gebruik bij operaties door ze vooraf te autoclaveren.
- Induceer anesthesie met behulp van vluchtig isofluraan en pas indien nodig aan om een chirurgisch vlak te behouden. Zorg ervoor dat de zuurstof een passend debiet heeft.
- Om ervoor te zorgen dat het dier wordt verdoofd, knijpt u de tenen op een achterpoot met een pincet om de afwezigheid van een pootreflex te garanderen en controleert u de knipperreflex van het hoornvlies voordat u smerende oftalmische zalf aanbrengt.
OPMERKING: Analgetica kunnen niet worden aangeboden in deze studie omdat ze de pijnroute kunnen veranderen die bedoeld is om te worden geanalyseerd of zelfs het gedrag dat wordt gemeten in overeenstemming met pijnonderzoeksdoelen20,21,22 kunnen neutraliseren en ongeldig maken. - Bij het kiezen aan welke kant de operatie moet worden uitgevoerd (links wordt hier gedemonstreerd), scheer je het achterbeen van het dier rond het dijgebied, inferieur naar de patella, superieur naar de heup en boven het dijbeen. Veeg 3x met chloorhexidine in één richting met drie afzonderlijke gaasjes, afgewisseld met warme steriele zoutoplossing.
OPMERKING: Zorg er in de toekomst voor dat elk dier de operatie aan dezelfde kant laat uitvoeren om de consistentie te behouden. - Laat het been door een spleet van 10 cm x 10 cm glijden die is gemaakt in een steriel gordijn van 10 cm x 10 cm om een steriel veld rond het been naar keuze te creëren.
5. Chirurgische ingreep
- Maak met een fijne chirurgische schaar (aanvullende figuur S1F) een kleine snede van 2 mm van de huid in de middellijn van het laterale aspect van de dij. Schuif de schaar in een cirkelvormige beweging onder de huid om door de fascia te breken en een speling te creëren, waardoor de incisieruimte wordt vergroot.
- Maak met behulp van een bindtang (aanvullende figuur S1H) een scherpe incisie verticaal in een hoek van 90° in de dijspieren, 1 cm diep.
- Steek de fijne kleine schaar (aanvullende figuur S1G) in dezelfde incisie, ook in een hoek van 90°, en spreid ze voorzichtig open om de spieren te scheiden. Blijf dit doen totdat de heupzenuw is gevisualiseerd.
- Lokaliseer de heupzenuw, die glanzend en dun kan lijken, parallel loopt aan de verticale dij, in de richting van de heup naar de knie. Verwijder de schaar en de bindtang van het lichaam voordat u verder gaat.
- Gebruik de extra fijne tang (aanvullende figuur S1D) en de zenuwglashaak (aanvullende figuur S1E) om de zenuw van onderaf te isoleren. Bevrijd de zenuw voorzichtig van omliggende bindweefsels op een plaats in de buurt van de trochanter van het dijbeen, die het dichtst bij de heup en het verst van de knie ligt.
- Laat de zenuw op de glazen staaf rusten en zorg ervoor dat het uiteinde van de staaf voorkomt dat de zenuw eraf rolt.
- Plaats een chirurgische knoop om 1/3 van de breedte van de heupzenuw te binden met behulp van een 9-0 nylon hechting, voordat deze zich verdeelt in de gemeenschappelijke peroneale, tibiale en surale zenuwtakken3.
OPMERKING: De vertakking treedt op als de heupzenuw langs de knie loopt, weg van de heup. Omdat deze drie takken van de zenuw drie verschillende innervaties hebben, is het noodzakelijk om de chirurgische knoop voorafgaand aan de vertakking te plaatsen om dezelfde zenuwtekorten bij alle dieroperaties te garanderen. - Zorg ervoor dat u de draden dicht bij de knoop houdt wanneer u de draden strak trekt, om niet met overmatige kracht aan de zenuw te trekken om te voorkomen dat de zenuw van de glazen staaf glijdt en verder rekletsel wordt voorkomen.
- Laat de zenuw voorzichtig van de glazen staaf glijden zodra de knoop is voltooid en stop deze terug op de oorspronkelijke locatie ter hoogte van de gescheiden spieren.
- Hecht de spierincisie met behulp van een absorbeerbare polyglycolische 5-0 hechting. Hecht de huid afzonderlijk met een niet-absorbeerbare polypropyleen 6-0-hechting.
- Noteer de operatie- en anesthesiestoptijd. Laat de muis wakker worden, alleen in een herstelkooi, voordat je hem terugbrengt naar een nieuwe schone kooi.
OPMERKING: Knijp tijdens de operatie in de tenen van het dier om voldoende onderhoud van de anesthesie te bevestigen en controleer de ademhaling en lichaamsperfusie (rood, roze, bleek). Als de ademhaling aanzienlijk wordt verminderd of het dier bleek lijkt, overweeg dan om de anesthesiestroom te verminderen of de zuurstofstroom te verhogen en een spuit gevuld met zoutoplossing klaar te hebben om subcutaan te injecteren om het dier te rehydrateren. Te allen tijde moet het dier een warmtebron eronder hebben geplaatst om de lichaamswarmte te behouden.
6. Schijnchirurgie procedure voor controledieren
- Volg stappen 5.1-5.11 van de chirurgische procedure; Sluit stappen 5.4-5.9 uit.
7. Postoperatieve gedragstesten
OPMERKING: Zorg ervoor dat de experimentator blind is voor elke behandeling. Chronische neuropathische pijn zal zich meer dan 2 weken na de operatie ontwikkelen, waarna gedragstests kunnen worden uitgevoerd na toediening van interessante verbindingen.
- Gebruik de von Frey-, Hargreaves- of heteplaattest om zowel thermische als mechanische overgevoeligheid en de potentiële omkering ervan te evalueren.
- Verwijder elk dier uit het onderzoek als het voldoet aan de eindpuntcriteria zoals beschreven door het institutionele comité voor dierverzorging en -gebruik.
- Euthanaseer de dieren volgens procedures die zijn beschreven door de institutionele dierverzorgings- en gebruikscommissie aan het einde van de gedragstest.
8. Data-analyse
- von Frey:
- Analyseer de gegevens met behulp van de niet-parametrische methode van Dixon, zoals beschreven door Chaplan en collega's23, en druk de gegevens uit als de gemiddelde opnamedrempel.
- Selecteer op de hoofdpagina van de software waarnaar wordt verwezen (zie Materiaaltabel) alle filamenten die voor het onderzoek zijn gebruikt (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 en 4.56). Selecteer in het deelvenster Groep de gloeidraad die overeenkomt met de laatste simulatie. Rapporteer in het lege vak de positieve (X ) en negatieve (o) reacties. Noteer de drempels die worden gerapporteerd in het vak aan de linkerkant van het waargenomen reactiepatroon.
OPMERKING: Een voorbeeld van patroon en kwantificering wordt weergegeven in aanvullende figuur S2.
- Selecteer op de hoofdpagina van de software waarnaar wordt verwezen (zie Materiaaltabel) alle filamenten die voor het onderzoek zijn gebruikt (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 en 4.56). Selecteer in het deelvenster Groep de gloeidraad die overeenkomt met de laatste simulatie. Rapporteer in het lege vak de positieve (X ) en negatieve (o) reacties. Noteer de drempels die worden gerapporteerd in het vak aan de linkerkant van het waargenomen reactiepatroon.
- Analyseer de gegevens met behulp van de niet-parametrische methode van Dixon, zoals beschreven door Chaplan en collega's23, en druk de gegevens uit als de gemiddelde opnamedrempel.
- Hargreaves en hete plaat:
- Rapporteer de latenties in een spreadsheet voor verdere statistische analyse.
- Plot de resultaten als het gemiddelde van de gevoeligheden (drempels of latenties) als functie van de tijd.
9. Instructies voor het maken van de zenuwglashaak
OPMERKING: Oefen brandveiligheid tijdens dit hele proces. Draag de juiste bescherming, zoals hittebestendige handschoenen of brillen als dat nodig is.
- Zet de Bunsen-brander aan.
- Houd het ene uiteinde van de glazen staaf (A) in één hand tegen het vuur. Terwijl deze glazen staaf smelt, gebruikt u een andere glazen staaf (B) in de andere hand om het smeltglas op staaf A te geleiden en eraan te trekken. Haal glazen staaf A uit het vuur en laat het uiteinde van het gesmolten gedeelte op natuurlijke wijze naar binnen rollen om een kleine bolvorm te vormen. Gebruik de glazen staaf B om deze vorm te geleiden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Chronische neuropathische pijn werd geïnduceerd door gedeeltelijke ligatie van de heupzenuw van C57Bl6/J mannelijke muizen (figuur 1A). De mechanische gevoeligheid werd geëvalueerd met behulp van von Frey-filamenten en de "up-and-down"-methode. De thermische gevoeligheid voor warmte werd geëvalueerd met behulp van de Hargreaves- en heteplaattests. Alle gegevens werden geanalyseerd met een herhaalde meting tweerichtings-ANOVA met Geisser-Greenhouse-correctie, om het effect van pSNL-chirurgie te vergelijken met schijndieren in de loop van de tijd of de effecten van verschillende doses morfine en ibuprofen.
Muizen die een pSNL-operatie ondergingen, vertoonden lagere drempels voor mechanische stimuli in vergelijking met schijndieren gedurende 28 dagen (figuur 1B). Vergelijkbare resultaten werden verkregen met thermische overgevoeligheidsevaluatie; de latenties van de terugtrekking van de poten na blootstelling aan stralingswarmteprikkels waren verhoogd bij pSNL-dieren (figuur 1C), evenals de ontwenningslatenties wanneer dieren op een plaat van 52 °C werden geplaatst (figuur 1D).
Na de vaststelling van chronische neuropathische pijn, 14 dagen na de operatie, evalueerden we de antinociceptieve effecten van verschillende doses morfine of ibuprofen. Muizen werden intraperitoneaal geïnjecteerd met een zoutoplossing of twee verschillende doses morfine (1 en 5 mg / kg). Beide morfine-geïnjecteerde groepen vertoonden een omkering van pSNL-geïnduceerde overgevoeligheid, die duurde van 1 (1 mg/kg) tot 2 uur (5 mg/kg) (figuur 2A). De mechanische overgevoeligheid keerde 4 uur na de injectie van morfine terug naar de uitgangswaarde. Wanneer twee verschillende doses ibuprofen (10 en 30 mg/kg) intraperitoneaal aan de muizen werden toegediend, toonden de resultaten een verminderde mechanische overgevoeligheid in vergelijking met met zoutoplossing geïnjecteerde muizen (figuur 2B). De antinociceptieve effecten van ibuprofen duurden tot 2 uur. Over het algemeen toonden de resultaten aan dat pSNL-chirurgie langdurige chronische neuropathische pijn induceert. Bovendien konden we aantonen dat dit model gevoelig is voor verschillende doses pijnstillers.
Figuur 1: Langdurige thermische en mechanische overgevoeligheid bij muizen als gevolg van gedeeltelijke ligatie van de heupzenuw. Thermische gevoeligheid voor warmte (Hargreaves en hete plaat test) en mechanische gevoeligheid voor von Frey filamenten werden beoordeeld om de inductie en persistentie van overgevoeligheid in een model van chronische neuropathische pijn (pSNL) te onderzoeken. Baselinewaarden werden gemeten vóór ligatie van de heupzenuw en overgevoeligheid werd geëvalueerd gedurende 28 dagen na de operatie. (A) De afbeelding geeft de partiële ligatie van de heupzenuw weer. (B) Mechanische ontwenningsdrempels werden vergeleken tussen schijn- en pSNL-muizen op elk tijdstip. Herhaalde metingen tweerichtings ANOVA met Geisser-Broeikascorrectie toonden een significant effect van pSNL (F(1, 10) = 222,3, p < 0,0001, n = 5-7 per aandoening). De meervoudige vergelijkingstest van Sidak toonde een significante toename van overgevoeligheid tussen dag 1 en 28 (p < 0,05). (C) Thermische ontwenningslatenties, gemeten met de Hargreaves-test, werden vergeleken tussen schijn- en pSNL-muizen. Herhaalde metingen tweerichtings ANOVA met Geisser-Broeikascorrectie toonden een significant effect van pSNL (F(1 , 8) = 113,8; p < 0,0001, n = 4-6 per aandoening). De meervoudige vergelijkingstest van Sidak toonde een significante toename van overgevoeligheid op dag 2 en 14 (p < 0,05). (D) Thermische ontwenningslatenties, gemeten met de hete plaattest, werden vergeleken tussen schijn- en pSNL-muizen. Gewone tweerichtings-ANOVA toonde een significant effect van pSNL (F(1, 32) = 19,10, p = 0,0001, n = 4-6 per aandoening). De meervoudige vergelijkingstest van Sidak toonde een significant verhoogde gevoeligheid voor warmte aan 4 weken na pSNL-chirurgie (p = 0,0026). Gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± S.E.M. Afkortingen: pSNL = partiële ligatie van de heupzenuw; BL = basislijn. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Dosisafhankelijke omkering van pSNL-geïnduceerde mechanische overgevoeligheid door intraperitoneale injectie van morfine of ibuprofen. Mechanische overgevoeligheid (met behulp van von Frey-filamenten) werd beoordeeld om de potentiële antinociceptieve effecten van morfine of ibuprofen in een muismodel van pSNL te onderzoeken. Baselinewaarden (pre-pSNL) werden verkregen vóór ligatie van de heupzenuw. Na de vaststelling van chronische neuropathische pijn werden op dag 14 dieren een tweede keer gebaselineerd om pSNL-geïnduceerde overgevoeligheid (post-pSNL) te garanderen. Vervolgens werden twee doses morfine (1/5 mg/kg) of ibuprofen (10/30 mg/kg) intraperitoneaal geïnjecteerd. Potentiële omkering van mechanische overgevoeligheid werd beoordeeld gedurende 4 uur na injecties. (A) Mechanische ontwenningsdrempels werden vergeleken tussen de zouttoestand en de twee doses morfine. Herhaalde metingen tweerichtings ANOVA met Geisser-Broeikascorrectie toonden een significant effect van 1 mg/kg morfine (F(1, 11) = 11,16, p = 0,0066, n = 6-7 per aandoening) en een significant effect van 5 mg/kg morfine (F(1, 10) = 21,78, p = 0,0009, n = 6 per aandoening). De meervoudige vergelijkingstest van Sidak toonde een significante afname van mechanische overgevoeligheid 1 uur na injectie voor beide doses, maar slechts een significant effect voor de toestand van 5 mg/kg na 2 uur (*p < 0,05). (B) Mechanische ontwenningsdrempels werden vergeleken tussen de zouttoestand en de twee doses ibuprofen. Herhaalde metingen tweerichtings ANOVA met Geisser-Greenhouse correctie toonden een significant effect van 10 mg/kg iburofen (F(1, 11) = 7,788, p = 0,0176, n = 6-7 per aandoening) en een significant effect van 30 mg/kg ibuprofen (F(1, 10) = 18,79, p = 0,0015, n = 6 per aandoening). De meervoudige vergelijkingstest van Sidak toonde een significante afname van mechanische overgevoeligheid 1 en 2 uur na injectie voor beide doses (*p < 0,05). Gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± S.E.M. Afkortingen: pSNL = partiële ligatie van de heupzenuw; IP = intraperitoneaal. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Aanvullende figuur S1: Chirurgische hulpmiddelen. De twee foto's illustreren de verschillende hulpmiddelen die voor de operatie worden gebruikt. A) fijne Castroviejo-naaldhouder; B) Castroviejo-naaldhouder; (C) Micro Adson tang; D) extra fijne Graefe-tang; E) zenuwglashaak; F) fijne schaar (11,5 cm); (G) fijne schaar (9 cm); H) het vastbinden van een tang; I) iristitang. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende figuur S2: Representatief patroon van de ontwenningsreacties van de poten zoals gemeten met de von Frey-filamenttest. Voor deze proef reageerde de muis niet op de eerste drie stimulaties, maar trok zijn poot terug op de vierde stimulatie met de 4,56-gloeidraad. Na positieve respons (x) werd een dunner filament gebruikt (4.31), gevolgd door filamenten van kleinere afmetingen totdat de muis niet reageerde op een ander filament (in dit geval 4.08). De experimentator moet de grootte van de filamenten één voor één verkleinen tot een afwezigheid van respons (o). Na een afwezigheid van respons gebruikte de experimentator een dikker filament totdat ze een positieve respons verkregen en hun grootte verminderden na de positieve respons (hier verkregen met de 4.31 filament). Na de eerste positieve respons werden vier stimuli uitgevoerd; het chronologische patroon van elke stimulatie is geannoteerd met rode cijfers in paneel A. In dit geval werden filamenten 2,44 tot 3,22 nooit gebruikt omdat het dier geen positieve respons vertoonde met de 3,61 filament. (B) Het patroon van reacties werd vervolgens ingevuld in allodynia-software, gerapporteerd in dezelfde volgorde waarin de filamenten werden aangebracht (000xx0x0), in het wit gemarkeerde vak. De resulterende drempel werd vervolgens door de software berekend (2,60839). Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende tabel S1: Gegevensverzamelingsblad voor von Frey-tests. Met deze tabel kunnen experimentatoren patronen van reacties invullen bij het gebruik van von Frey-filamenten. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Chronische pijnbehandeling vereist vaak langdurige medicatie, waardoor pijnbestrijding een uitdaging wordt. Preklinische modellen zijn dus een essentieel hulpmiddel om de potentiële voordelen van innovatieve therapieën te evalueren die gebaseerd zijn op farmacologische of niet-farmacologische benaderingen. De talrijke modellen van chronische neuropathische pijn brengen uitdagingen met zich mee als gevolg van verhoogde variabiliteit in de chirurgische technieken tussen verschillende onderzoekers, wat leidt tot verminderde reproduceerbaarheid. Het is dus essentieel om de potentiële antinociceptieve effecten van nieuwe therapieën te karakteriseren in meerdere modellen die goed gekarakteriseerd en gestandaardiseerd zijn.
Dit rapport toont aan dat de gedeeltelijke ligatie van de heupzenuw resulteert in de ontwikkeling van langdurige chronische neuropathische pijn bij muizen met behulp van relatief goedkope methoden. pSNL overdrijft de reacties op thermische en mechanische stimuli en het model reageert op de toediening van veelgebruikte analgetica op een dosisafhankelijke manier. Daarom lijkt het pSNL-model een handig en gevoelig model om de potentiële voordelen van nieuwe geneesmiddelen te evalueren. De primaire kenmerken van neuropathische pijn zijn hyperalgesie en allodynie. Dit rapport laat zien hoe mechanische allodynie en thermische hyperalgesie worden beïnvloed. Mechanische hyperalgesie werd echter niet gemeten. Er is een groot grijs gebied van overlap tussen allodynie en hyperalgesie. Beide sensaties vallen onder de paraplu van algemene overgevoeligheid voor een zintuiglijke prikkel24. Het gestimuleerde gevoel kan dus worden waargenomen als een andere sensatie, zoals warmte als koude pijn of aanraking als het gevoel van branden. Daarom zijn hyperalgesie en allodynie vaak moeilijk te onderscheiden, vooral in dierlijke pijnmodellen.
Het pSNL-model is gebruikt in meerdere chronische pijnstudies om het effect van pijnstillende verbindingen, de onderliggende mechanismen van chronische pijn of zelfs de cognitieve impact van langdurige neuropathische pijn te evalueren. De persistentie van mechanische overgevoeligheid tot 70 dagen maakt de studie van langetermijneffecten van nieuwe geneesmiddelen mogelijk25. Belangrijk is dat de optimale periode voor gedragstesten de eerste, tweede en derde week na de operatie omvat, zodra chronische pijn is vastgesteld 8,11,26,27. Om de potentie en werkzaamheid van een geneesmiddel of een niet-farmacologische therapie te evalueren, moeten positieve controlebehandelingen zoals morfine of ibuprofen worden overwogen, afhankelijk van het experimentele ontwerp. In tegenstelling tot de staart-flick-test, past de hete plaattest een stimulus toe op de poot die supraspinale padenintegreert 19. De hete plaattest is op grote schaal gebruikt om antinociceptieve eigenschappen van geneesmiddelen te karakteriseren in modellen van chronische neuropathische pijn in recente studies 19,28,29,30,31,32,33.
Dit model werd gebruikt om nieuwe niet-opioïde behandelingen te karakteriseren en een nieuwe pijnroute te identificeren met neurotensinereceptor type 211,13. Het werd ook gebruikt om de betrokkenheid van glycinerge modulaties bij chronische pijnaan te tonen 12 en de ontwikkeling van nieuwe therapieën en paden op het snijvlak van slaap en pijn10. Niettemin zijn er tot op de dag van vandaag geen artikelen met een gedetailleerde uitleg van de operatie, aangevuld met een beschrijvende video.
Een veelgehoorde kritiek op de pSNL en soortgelijke modellen is de betrouwbaarheid van de consistentie van de mate van schade veroorzaakt door het neuropathische zenuwletsel bij dieren6. In dit artikel wordt een procedure beschreven voor het handmatig smelten en vormen van een glazen staaf om een speciale zenuwglashaak te maken om dit probleem aan te pakken. De meeste dierenoperaties gebruiken een tang om fijne zenuwen of bloedvaten op te pikken. Het zenuwglas haakgereedschap zorgt voor een veiligere, minder blessuregevoelige methode om de zenuw te hanteren. Hoewel het doel van dit model is om zenuwletsel te creëren, is het verstandig om extra schade aan de zenuw te voorkomen, anders dan die veroorzaakt door de hechting geplaatst door een derde van de breedte van de heupzenuw. De zenuwglashaak is een glad, niet-beschadigend oppervlak waarop de zenuw kan rusten; Bovendien zorgt de bal / haak aan het einde voor een gemakkelijke oppakking en stabilisatie. Bovendien beveelt de hierboven beschreven techniek (protocolsectie noot 5.7) bij het hechten van de zenuw aan om de draden diep in de lichaamsholte te houden, het dichtst bij waar de knoop zal verschijnen. Dit voorkomt trekken aan het einde van de hechtingen en bevordert het uitoefenen van spanning op de hechtdraad die zich het dichtst bij de zenuw bevindt bij het aanspannen van de knoop. Deze techniek voorkomt extra rekletsel als de zenuw per ongeluk van de zenuwglashaak zou worden getrokken, naar de buitenkant van de holte tijdens het strakker binden van de knoop. Een bijkomend voordeel is het gebruik van een fijne schaar om de eerste knip te maken. Dit zorgt voor een veel kleinere incisieplaats en dus snellere genezing, in tegenstelling tot de grotere sneden gemaakt met scalpelbladen.
De methoden die in dit artikel worden beschreven, hebben ook enkele beperkingen. De ontwikkeling van chronische pijn in het pSNL-model wordt beïnvloed door het geslacht van de dieren34. Daarom is het essentieel dat onderzoeksstudies beide geslachten in hun analyse opnemen. Het doel van dit rapport was om zich te concentreren op een chirurgische ingreep en karakteriseerde geen seksueel dimorfisme van het pijnmodel. Het is vermeldenswaard dat metingen van thermische gevoeligheid bij muizen met behulp van de Hargreaves-test een uitdaging zijn; Dieren moeten een paar seconden stilstaan in een klein verblijf terwijl de stimulus wordt toegepast. Het wennen van de muizen aan de plexiglas behuizing is dus een belangrijke factor voor het verkrijgen van succesvolle resultaten. Het meten van opgewekte pijn vereist ook zorgvuldige experimenteertraining. Zowel opgeroepen als spontane gedragstests worden aanbevolen om de thermische en mechanische gevoeligheid te evalueren, evenals de functionaliteit van de ledemaat. Bovendien werden in deze studie morfine en ibuprofen gebruikt als positieve controles voor antinociceptief effect. Deze twee geneesmiddelen werden gekozen omdat ze vaak worden gebruikt als positieve controles in meerdere pijnmodellen en een betere vergelijking tussen de verschillende modellen mogelijk maken. Niettemin is het belangrijk om te vermelden dat pregabaline en gabapentine vaak worden voorgeschreven om neuropathische pijn te behandelen, en studies gericht op neuropathische pijnbestrijding moeten deze geneesmiddelen als positieve controles omvatten.
Dit rapport beschrijft met precisie een operatie die vaak wordt gebruikt voor de studie van chronische neuropathische pijn. Door onderzoekers en stagiairs te laten profiteren van een visuele beschrijving van dit muismodel, wordt de ontwikkeling van onderzoeksprojecten die zich richten op het begrijpen van de mechanismen van chronische pijn of gericht op de karakterisering van innovatieve therapieën vergemakkelijkt. Bovendien is het gebruik van meerdere pijnmodellen essentieel om de reproduceerbaarheid te verbeteren, en dit rapport zal de implementatie van het pSNL-model in nieuwe laboratoria vergemakkelijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben geen belangenverstrengeling te melden. Geen van de auteurs van het manuscript ontving enige vergoeding of enige vergoeding of honorarium op enige andere wijze. De auteurs zijn niet gelieerd aan een leverancier of farmaceutisch bedrijf dat aan deze studie is verbonden.
Acknowledgments
Dit onderzoek werd ondersteund door het National Center for Complementary and Integrative Health [R01AT009716, 2017] (M.M.I.), het Comprehensive Chronic Pain and Addiction Center-University of Arizona (M.M.I.), en het Medical Scientist Training Program (MSTP) aan de Universiteit van Arizona, College of Medicine, Tucson.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5/0, FS-2, 30" Undyed PGA Braided Polyglycolic Acid Synthetic Absorbable Suture | CP Medical | 421A | https://cpmedical.com/suturesearch/product/421a-visorb-50-fs-2-30/ |
| 6/0, P-1, 18" Blue Polypropylene Monofilament Non-Absorbable Suture | CP Medical | 8697P | https://cpmedical.com/suturesearch/product/8697p-polypro-60-p-1-18/ |
| 9/0 (0.3 metric) Nylon Black Monofilament Suture | Crestpoint Ophthalmics | MANI 1407 | https://crestpointophthalmics.com/mani-1407-suture-trape-spatula-nylon-black-mono-box-of-12.html |
| Allodynia Software | National Instruments, LabView 2015 | Quantification of mean withdrawal thresholds (Von Frey data) | |
| C57Bl6/J mice | The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | 000664 | https://www.jax.org/strain/000664 |
| Castroviejo needle holder | Fine Science Tools | 12565-14 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Wound-Closure/Needle-Holders/Castroviejo-Needle-Holder/12565-14 |
| Cold Hot Plate Test | Bioseb | BIO-CHP | https://www.bioseb.com/en/pain-thermal-allodynia-hyperalgesia/563-cold-hot-plate-test.html |
| Elevated metal mesh stand for Von Frey | Bioseb | BIO-STD2-EVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1689-elevated-metal-mesh-stand-30-cm-height-to-fit-up-to-2-pvf-cages.html |
| Extra fine Graefe forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-curved-medium-point-general-purpose-forceps/16100110 |
| Fine Castroviejo needle holder | Simovision/Geuder | 17565 | https://simovision.com/assets/Uploads/Brochure-Geuder-Ophthalmic-Surgical-Instruments-EN2.pdf |
| Fine scissors (11.5 cm) | Fine Science Tools | 14558-11 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-11 |
| Fine scissors (9 cm) | Fine Science Tools | 14558-09 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-09 |
| Iris forceps | Fine Science Tools | 11064-07 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Fine-Forceps/Iris-Forceps/11064-07 |
| Micro Adson forceps | Fine Science Tools | 392487 | https://www.fishersci.com/shop/products/micro-adson-tissue-forceps-1x2-teeth-german-steel/13820072#?keyword=adson%20forceps |
| Modular holder cages for rats and mice | Bioseb | BIO-PVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1206-modular-holder-cages-for-rats-and-mice.html |
| Moretti/Effetre #240 Light Cobalt Blue glass rods 4 mm | Ebay | N/A | https://www.ebay.com/itm/402389491328?hash=item5db0485e80:g:agYAAOS w9CtfnIVJ&amdata=enc %3AAQAHAAAAwCoqvgWRo NTe5Vq8PWOgfE4ygWeW4tL k81J1AFu%2Fkcbsk6pxYtJi6 digE5TL9SzlgMzYUMNDr%2B dku2%2B%2FEvB1qXqFmebE 020SGs9LPDXLL5w21un7jrM0 9xfWYvIzBYQYh6FRWyUJngC uuA9Bkjb9lxtZoYlg5y6PyFR2P 34xFk5xaNC5ib65M1%2Fr%2F 4w2Iw45QqsSyXH2cuUKRom0 AGBoBaIr%2BbJw1VnlMjGuc9dtx 4fbPbqoBNSWjj3RbZPOPTYS8Q %3D%3D%7Ctkp%3ABk9SR4q6- 6LfYA |
| Plantar Test for Thermal Stimulation - Hargreaves Apparatus | Ugo Basile | 37570 | https://ugobasile.com/products/categories/pain-and-inflammation/plantar-test-for-thermal-stimulation |
| Touch-Test Sensory Evaluators, Set of 20 Monofilaments | North Coast Medical | NC12775-99 | https://www.ncmedical.com/products/touch-test-sensory-evaluators_1278.html |
| Tying forceps | Duckworth & Kent | 2-504ER8 | https://duckworth-and-kent.com/product/tying-forceps-9/ |
References
- Hassett, A. L., Gevirtz, R. N. Nonpharmacologic treatment for fibromyalgia: patient education, cognitive-behavioral therapy, relaxation techniques, and complementary and alternative medicine. Rheumatic Disease Clinics of North America. 35 (2), 393-407 (2009).
- Hylands-White, N., Duarte, R. V., Raphael, J. H. An overview of treatment approaches for chronic pain management. Rheumatology International. 37 (1), 29-42 (2017).
- Campbell, J. N., Meyer, R. A.
- Colloca, L., et al.
- Colleoni, M., Sacerdote, P. Murine models of human neuropathic pain. Biochimica et Biophysica Acta. 1802 (10), 924-933 (2010).
- Challa, S. R. Surgical animal models of neuropathic pain: Pros and cons. International Journal of Neuroscience. 125 (3), 170-174 (2015).
- Bennett, G. J., Xie, Y. K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33 (1), 87-107 (1988).
- Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury. Pain. 43 (2), 205-218 (1990).
- Hasnie, F. S., Wallace, V. C., Hefner, K., Holmes, A., Rice, A. S. Mechanical and cold hypersensitivity in nerve-injured C57BL/6J mice is not associated with fear-avoidance-and depression-related behaviour. British Journal of Anaesthia. 98 (6), 816-822 (2007).
- Ito, H., et al. Suvorexant and mirtazapine improve chronic pain-related changes in parameters of sleep and voluntary physical performance in mice with sciatic nerve ligation. PLoS One. 17 (2), 0264386 (2022).
- Martin, L., et al. Conotoxin contulakin-G engages a neurotensin receptor 2/R-type calcium channel (Cav2.3) pathway to mediate spinal antinociception. Pain. 163 (9), 1751-1762 (2021).
- Peiser-Oliver, J. M., et al. Glycinergic modulation of pain in behavioral animal models. Frontiers in Pharmacology. 13, 860903 (2022).
- Ramiro, I. B. L., et al. Somatostatin venom analogs evolved by fish-hunting cone snails: From prey capture behavior to identifying drug leads. Science Advances. 8 (12), (2022).
- Chung, J. M. Encyclopedia of Pain. Schmidt, R. F., Willis, W. D. , Springer. Berlin Heidelberg. 1299-1300 (2007).
- Zahn, P. K., Brennan, T. J. Primary and secondary hyperalgesia in a rat model for human postoperative pain. Anesthesiology. 90 (3), 863-872 (1999).
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
- Yeomans, D. C., Proudfit, H. K. Characterization of the foot withdrawal response to noxious radiant heat in the rat. Pain. 59 (1), 85-94 (1994).
- Cheah, M., Fawcett, J. W., Andrews, M. R. Assessment of thermal pain sensation in rats and mice using the Hargreaves test. Bio-Protocol. 7 (16), 2506 (2017).
- Hook, M. A., et al. The impact of morphine after a spinal cord injury. Behavioural brain research. 179 (2), 281-293 (2007).
- Loram, L. C., et al. Prior exposure to repeated morphine potentiates mechanical allodynia induced by peripheral inflammation and neuropathy. Brain, behavior, and immunity. 26 (8), 1256-1264 (2007).
- Green-Fulgham, S. M., et al. Oxycodone, fentanyl, and morphine amplify established neuropathic pain in male rats. Pain. 160 (11), 2634-2640 (2019).
- Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284 (2017).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
- Jensen, T. S., Finnerup, N. B. Allodynia and hyperalgesia in neuropathic pain: clinical manifestations and mechanisms. Lancet Neurology. 13 (9), 924-935 (2014).
- Malmberg, A. B., Gilbert, H., McCabe, R. T., Basbaum, A. I. Powerful antinociceptive effects of the cone snail venom-derived subtype-selective NMDA receptor antagonists conantokins G and T. Pain. 101 (1-2), 109-116 (2003).
- Nakamura, Y., et al. Neuropathic pain in rats with a partial sciatic nerve ligation is alleviated by intravenous injection of monoclonal antibody to high mobility group box-1. PLoS One. 8 (8), 73640 (2013).
- Sherman, K., et al. Heterogeneity in patterns of pain development after nerve injury in rats and the influence of sex. Neurobiology of Pain. 10, 100069 (2021).
- Ba, X., et al. Cinobufacini protects against paclitaxel-induced peripheral neuropathic pain and suppresses TRPV1 up-regulation and spinal astrocyte activation in rats. Biomedicine Pharmacotherapy. 108, 76-84 (2018).
- Hao, Y., et al. Huachansu suppresses TRPV1 up-regulation and spinal astrocyte activation to prevent oxaliplatin-induced peripheral neuropathic pain in rats. Gene. 680, 43-50 (2019).
- Guo, J., et al. Effects of resveratrol in the signaling of neuropathic pain involving P2X3 in the dorsal root ganglion of rats. Acta Neurologica Belgica. 121 (2), 365-372 (2021).
- Ni, W., Zheng, X., Hu, L., Kong, C., Xu, Q. Preventing oxaliplatin-induced neuropathic pain: Using berberine to inhibit the activation of NF-kappaB and release of pro-inflammatory cytokines in dorsal root ganglions in rats. Experimental and Therapeutic Medicine. 21 (2), 135 (2021).
- Wang, J., et al. Selective activation of metabotropic glutamate receptor 7 blocks paclitaxel-induced acute neuropathic pain and suppresses spinal glial reactivity in rats. Psychopharmacology. 238 (1), 107-119 (2021).
- Sun, C., Wu, G., Zhang, Z., Cao, R., Cui, S. Protein tyrosine phosphatase receptor type D regulates neuropathic pain after nerve injury via the STING-IFN-I pathway. Frontiers in Molecular Neuroscience. 15, 859166 (2022).
- Coyle, D. E., Sehlhorst, C. S., Mascari, C. Female rats are more susceptible to the development of neuropathic pain using the partial sciatic nerve ligation (PSNL) model. Neuroscience Letters. 186 (2-3), 135-138 (1995).
