Summary
קשירת עצבים סיאטית חלקית גורמת לכאב נוירופתי כרוני מתמשך, המאופיין בתגובות מוגזמות לגירויים תרמיים ומכניים. מודל עכברי זה של כאב נוירופתי משמש בדרך כלל לחקר טיפולים חדשניים לניהול כאב. מאמר זה מתאר בפירוט את ההליך הכירורגי לשיפור התקינה והשחזור.
Abstract
ניהול כאב כרוני נותר מאתגר עד עצם היום הזה, והטיפולים הנוכחיים קשורים לתופעות לוואי, כולל סבילות והתמכרות. כאב נוירופתי כרוני נובע מנגעים או מחלות במערכת הסומטוסנסורית. כדי לחקור טיפולים פוטנציאליים עם תופעות לוואי מופחתות, מודלים של כאב בבעלי חיים הם תקן הזהב במחקרים פרה-קליניים. לכן, מודלים מאופיינים היטב ומתוארים היטב הם קריטיים לפיתוח ותיקוף של טיפולים חדשניים.
קשירה חלקית של העצב הסיאטי (pSNL) היא הליך הגורם לכאב נוירופתי כרוני בעכברים, המאופיין ברגישות יתר מכנית ותרמית, כאב מתמשך ושינויים בטמפרטורת הגפיים, מה שהופך מודל זה למתאים מאוד לחקר כאב נוירופתי באופן פרה-קליני. pSNL הוא מודל יתרון לחקר כאב נוירופתי כפי שהוא משחזר תסמינים רבים שנצפו בבני אדם עם כאב נוירופתי. יתר על כן, ההליך הכירורגי מהיר יחסית ופשוט לביצוע. pSNL חד צדדי של גפה אחת מאפשר השוואה בין כפות ipsilateral ו contralateral, כמו גם הערכה של רגישות מרכזית.
כדי לגרום לרגישות יתר נוירופתית כרונית, חוט ניילון 9-0 שאינו נספג משמש כדי לקשור את השליש הגבי של העצב הסיאטי. מאמר זה מתאר את ההליך הכירורגי ומאפיין התפתחות של כאב נוירופתי כרוני באמצעות בדיקות התנהגותיות נפוצות רבות. מכיוון ששפע של טיפולים חדשניים נחקרים כיום לטיפול בכאב כרוני, מאמר זה מספק מושגים מכריעים לסטנדרטיזציה ותיאור מדויק של ניתוחים הנדרשים כדי לגרום לכאב נוירופתי.
Introduction
כאב כרוני הוא בעיה בריאותית משמעותית ברחבי העולם והוא אחת מבעיות הבריאות היקרות ביותר בארצות הברית. כאב כרוני מנוהל טוב יותר כאשר שיטות פרמקולוגיות ולא תרופתיות מנוצלות באופן רב-תחומי1. ניהול כאב כרוני הוא מאתגר, ובמקרים מסוימים, אינו מטפל כראוי בכאב2. לכן, יש צורך בשיטות חדשות ומשלימות לשיפור ניהול הכאב הכרוני, ומודלים של בעלי חיים חיוניים לחקר טיפולים חדשניים.
כאב נוירופתי כרוני נובע מנגעים או מחלות במערכת הסומטוסנסורית, כולל סוכרת, זיהומים, דחיסות עצביות או מחלות אוטואימוניות3. כאב נוירופתי מסתמך הן על מנגנוני רגישות היקפיים והן על מנגנוני רגישות מרכזיים ומקורו בנגע של העצבים. כאב זה יכול להיות מאופיין הן במגע והן בשיכוך כאבים ואלודיניה הנובעים ממגע ותרמית, כאבים מתמשכים ושינויים בטמפרטורה של הגפה הפגועה4. כדי להבין טוב יותר את המנגנונים ולקדם טיפולים חדשים, פותחו מספר מודלים במכרסמים כדי לחקות את הסימפטומים והגורמים לכאב נוירופתי5. לדוגמה, כאב נוירופתי יכול להיגרם באמצעות זריקות סוכן כימותרפי, קשירת עצב בעמוד השדרה (SNL), פגיעה כרונית בהתכווצות (CCI) של העצב הסיאטי, pSNL, פגיעה עצבית חסוכה, טרנססקציה עצבית סיאטית, וטריסקציה6 של עצב סיאטי. יש לציין כי קשירת העצב הסיאטי משחזרת מאפיינים רבים של כאב נוירופתי שנצפו בבני אדם, כגון רגישות יתר מכנית ותרמית, או שינויים בטמפרטורה של הגפה הפגועה, האופייניים לתסמונת כאב אזורי מורכב (CRPS)7. לפיכך, מודל זה מתאים היטב לחקר CRPS או כל פגיעה עצבית אחרת הגורמת לכאב נוירופתי כרוני. המודל פותח לראשונה על ידי זלצר בשנת 19908, והוא נמצא בשימוש נרחב במחקרי כאב כדי לחקור תרכובות משככי כאבים חדשים או להעריך את ההשפעות הקוגניטיביות של כאב כרוני 9,10,11,12,13. המודל מציג יכולת שחזור גבוהה, והקשירה החלקית משמרת תגובות התנהגותיות לגירויים היקפיים6.
לרבים מהמודלים המשמשים כיום יש חסרונות שלא נצפו ב- pSNL. למודל CCI יש שונות גבוהה בהרבה של פגיעה בין כל חיה בהתאם לנוחות של המכווץ, ואוטוטומיה משנה את ספרות הכפות האחוריות והופכת את המודל ללא מתאים לניתוח התנהגותי6. מודל SNL הוא ניתוח הרבה יותר מסובך וארוך שלא רק דורש מיומנויות טכניות מתקדמות, אלא גם נושא סיכון גבוה לליקויים מוטוריים חמורים3. חסרונות אלה אינם נראים במודל pSNL. קלות השחזור, משך הזמן הקצר של הניתוח והסיכון המופחת לליקויים מוטוריים שנצפו לאחר הניתוח הופכים מודל זה לבעל ערך לחקר כאב נוירופתי היקפי 8,14. עם זאת, הליך הקשירה החלקית עצמו יכול להיות שונה בין הנסיינים, וכתוצאה מכך פחות עקביות במספר סיבי העצב הקשורים. לכן, הצגת פרטי הניתוח חיונית להגברת יכולת השחזור בין המחקרים.
כדי לגרום לנוירופתיה כרונית, תפר ניילון 9-0 שאינו נספג משמש כדי לקשור שליש מרוחב העצב הסיאטי. לאחר הניתוח, התגובות לגירויים תרמיים ומכניים מוגזמות, החל מהיום הראשון לאחר הניתוח ונמשכות יותר מ-50 יום8. כאן, רגישויות תרמיות ומכניות כאחד הוערכו במשך 28 ימים באמצעות בדיקות נימה של Hargreaves, hot plate ו- von Frey. כל הבדיקות ההתנהגותיות הדגימו את העקביות של רגישות היתר ארוכת הטווח. מודל זה הוכח כבעל השפעות תלויות מינון הן של מורפין והן של איבופרופן, מה שמאשר שהוא מתאים היטב למחקרי כאב פרה-קליניים. יש לציין כי מאמר זה מתאר את ההוראות לכלי זכוכית ייחודי בעבודת יד, המכונה "וו זכוכית עצבים". כלי זה משמש במקום מלקחיים כדי לתפעל את העצב ולמנוע פגיעה עצבית נוספת לא מכוונת במהלך הניתוח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל הנהלים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת אריזונה ותואמים את ההנחיות לשימוש בחיות מעבדה של המכונים הלאומיים לבריאות (פרסום NIH מס '80-23, 1966). עכברי C57Bl6/J בוגרים נטולי פתוגן (משקל בבדיקה: 22-28 גרם) שוכנו בכלובי עכברי ויבריום סטנדרטיים (חמישה עכברים בכל כלוב) בחדרים מבוקרי אקלים במחזור אור/חושך של 12 שעות והותרה להם גישה למזון ומים עד ליביטום. כל הניסויים ההתנהגותיים נערכו על ידי נסיינים עיוורים לתנאי הטיפול.
1. קו בסיס: מידת הרגישות המכנית
- עם הגעתם של העכברים, לאפשר להם להתרגל למתקן בעלי חיים במשך שבוע אחד. לאחר מכן, הרגילו את בעלי החיים לטיפול בנסיינים במשך ≥7 ימים לאחר מכן.
- הרגילו את העכברים למכשיר הבדיקה של פון פריי למשך שעה אחת לפני הבדיקה על ידי הנחתם בקופסאות פרספקס שקופות, על רשת תיל, באותו חדר כמו חדר הבדיקה - רצוי עם הנסיין נוכח בחדר במהלך ההרגלה.
- קבע את סף משיכת הכפות הבסיסי באמצעות שיטת "מעלה ומטה" באמצעות חוטי פון פריי המתוארים בטבלה משלימה S1, החל מחוט הלהט 3.61 (3.9 mN).
- מדוד את תגובת הנסיגה לחיטוט בכפה האחורית האמצעית באמצעות סדרה של מונופילמנטים מכוילים עדינים (פון פריי). יש למרוח כל חוט להט בניצב פעם אחת על פני השטח הפלנטריים של הכפפה האחורית pSNL ipsilateral של בעלי החיים המוחזקים בכלובי רשת תיל תלויים. הערכת רגישות מכנית באמצעות שיטת "למעלה ולמטה"15: לקבוע את סף הנסיגה על ידי הגדלה או הקטנה ברצף של כוח הגירוי, המתאים לגודל חוט הלהט. יש למרוח ברצף כל חוט להט פעם אחת.
הערה: על הנסיין להימנע מגירוי של כריות הרגליים כדי להשיג תוצאות עקביות בין בעלי החיים. - לדוגמה, אם בעל החיים אינו מגיב לחוט הלהט 3.61, השתמש בנימה העבה יותר 4.08 (9.8 mN) (תגובה מצוינת חזותית כנסיגה, טלטול או ליקוק של הכף הפגועה); אם בעל החיים הגיב בפעם הראשונה, השתמש בנימה דקה יותר 3.22 (1.6 mN). המשך להשתמש בחוטים הולכים ופוחתים או עבים יותר ויותר, תלוי אם לחיה היו תגובות חיוביות או שליליות לאחר מכן, בהתאמה. דווח על תשובות שליליות וחיוביות בגליון הנתונים המוצג בלוח המשלים S1. בדוק את אותה כף 4x עם חוטים שונים לאחר התגובה החיובית הראשונה.
- מדוד את תגובת הנסיגה לחיטוט בכפה האחורית האמצעית באמצעות סדרה של מונופילמנטים מכוילים עדינים (פון פריי). יש למרוח כל חוט להט בניצב פעם אחת על פני השטח הפלנטריים של הכפפה האחורית pSNL ipsilateral של בעלי החיים המוחזקים בכלובי רשת תיל תלויים. הערכת רגישות מכנית באמצעות שיטת "למעלה ולמטה"15: לקבוע את סף הנסיגה על ידי הגדלה או הקטנה ברצף של כוח הגירוי, המתאים לגודל חוט הלהט. יש למרוח ברצף כל חוט להט פעם אחת.
2. קו בסיס: מדד הרגישות התרמית באמצעות מבחן Hargreaves
- עם הגעתם של העכברים, לאפשר להם להתרגל למתקן בעלי חיים במשך שבוע אחד. לאחר מכן, הרגילו את בעלי החיים לטיפול בנסיינים במשך ≥7 ימים לאחר מכן.
- הרגילו את העכברים למכשיר הבדיקה של Hargreaves למשך שעה אחת לפני הבדיקה על ידי הצבתם בקופסאות פרספקס שקופות, באותו חדר כמו חדר הבדיקה - רצוי עם הנסיין נוכח בחדר במהלך ההרגלה.
הערה: מבחן Hargreaves דורש כי בעל החיים לעמוד ללא תזוזה במשך כמה שניות. אצל עכברים, התרגלות היא המפתח לניסוי מוצלח. לכן, אם העכברים נשארים פעילים מאוד לאחר שעה של הרגלה, לאפשר להם להתאקלם במשך זמן רב יותר לפי הצורך.- לקבוע השהיות נסיגה כפות כפי שתואר על ידי Hargreaves et al.16. התאקלמו את העכברים בתוך מארזי פרספקס על צלחת פרספקס שקופה.
- מקד מקור חום קורן (מנורת מקרן בעוצמה גבוהה) על המשטח הפלנטרי של כף הרגל האחורית ל-pSNL. התאם את עוצמת מקור החום כדי לקבל חביון בסיסי של משיכת כפות של כ- 10 שניות. לאחר מכן, שמרו על עוצמה קבועה למשך שארית הניסוי.
- המתן עד שגלאי תנועה יעצור אוטומטית את הגירוי ואת הטיימר כאשר הכף נסוגה. השתמש בחיתוך מקסימלי של 33.5 שניות כדי למנוע נזק לרקמות.
הערה: החתך נקבע על סמך ניסויים ומאמרים קודמים כדי למנוע נזק נוסף לעור11,17,18. עם העוצמה המשמשת במחקר זה, 33.5 הוא החתך, המתאים לעוצמת גירוי של 30 (50 W) באמצעות מכשיר Hargreaves. ההתנהגות הנצפית היא התנהגות רפלקסיבית, לא רצונית. - קבע את השהיית נסיגת הכפות הבסיסית באמצעות מנגנון Hargreaves ומכוון למשטח הפלנטרי של הכף האחורית pSNL ipsilateral. התחל גירוי תרמי ותעד את השהיית הנסיגה. כדי למנוע השפעה על הטמפרטורה של גירוי החום, לנקות כל שתן במהלך הניסויים.
3. בסיסי: מדד הרגישות התרמית באמצעות מבחן הפלטה החמה
- הרגילו את בעלי החיים לחדר הבדיקה למשך שעה לפני הבדיקה.
הערה: מכיוון שטמפרטורת החדר חשובה ויכולה להשפיע על התגובות לבדיקת הפלטה החשמלית, ודא שטמפרטורת החדר היא באופן עקבי סביב 22 מעלות צלזיוס במהלך תקופת ההרגלה ולאורך תקופת הבדיקה. - כוונו את הפלטה החמה ל-52°C, מכיוון שטמפרטורה זו הוכחה כמעוררת באופן אידיאלי תגובה תרמית מרתיעה19.
- הניחו את בעל החיים בתא הבדיקה והתחילו כרונומטר.
- שימו לב להתנהגויות nocifensive (כלומר, נסיגה כפות, ליקוק, רעד). מכיוון שניתוח pSNL משפיע על הגפה האחורית, התעלם מכל התנהגות שנצפתה בגפיים הקדמיות (במיוחד ליקוק הגפיים הקדמיות).
- עצור את הכרונומטר ברגע התנהגות nocifensive הוא ציין.
- הסר את החיה מהחדר ורשום את ההשהיה להתנהגות זו.
הערה: הוציאו את בעלי החיים מהחדר לאחר 30 שניות לכל היותר כדי למנוע נזק לרקמות. בנוסף, חשוב לציין כי ההתנהגות הנצפית היא התנהגות רפלקסיבית ולא רצונית. - נקו את תא הבדיקה עם 70% אתנול בין בעלי חיים כדי להפחית את ההשפעה ההתנהגותית של ריחות. כדי למנוע השפעה על הטמפרטורה של גירוי החום, לנקות את המכשיר של כל שתן בין כל בעל חיים נבדק.
- כדי לאשר את התוצאות, הקליטו סרטונים של בעלי החיים בתא הפלטה החמה במהלך הבדיקה לבדיקה לאחר שבעלי החיים נבדקו.
הערה: על ידי שימוש בסקירת וידאו כדי לכמת השהיות, הנסיין יכול לצפות שוב ושוב במבחן ולנתח מקרוב התנהגויות nocifensive שאולי הוחמצו במהלך תצפית בזמן אמת.
4. הכנה טרום ניתוחית
הערה: יש לוודא שכלובים נקיים זמינים לשיקום העכברים לאחר הניתוח. נקו את אזור הניתוח באתנול 70%, חיטאו ידיים באתנול 70%, השתמשו בכפפות סטריליות, לבשו ציוד מגן אישי מתאים (מעיל מעבדה, רשת לשיער, כיסויי נעליים) ותרגלו טכניקות סטריליות לאורך כל הניתוח.
- הכינו את הכלים (איור משלים S1) ומשאבים נוספים (גזה) שישמשו בניתוח על ידי אוטוקלאבינג שלהם מראש.
- יש להשרות הרדמה באמצעות איזופלורן נדיף ולהתאים לפי הצורך כדי לשמור על מישור ניתוחי. ודא שהחמצן נמצא בקצב זרימה מתאים.
- כדי להבטיח שהחיה מורדמת, צבטו את אצבעות הרגליים על כפה אחורית בפינצטה כדי להבטיח היעדר רפלקס כפות ובדקו את רפלקס המצמוץ של הקרנית לפני החלת משחת עיניים סיכה.
הערה: לא ניתן להציע משככי כאבים במחקר זה מכיוון שהם עשויים לשנות את מסלול הכאב המיועד לניתוח או אפילו לנטרל ולפסול את ההתנהגות הנמדדת בהתאם למטרות מחקר הכאב20,21,22. - לאחר בחירת הצד בו יש לבצע את הניתוח (משמאל מודגם כאן), יש לגלח את רגלו האחורית של בעל החיים סביב אזור הירך, בנחיתות לכיוון הפטלה, למעלה לכיוון הירך, ומעל עצם הירך. נגבו 3x עם chlorhexidine בכיוון אחד עם שלוש גזות נפרדות, לסירוגין עם מלוחים סטריליים חמים.
הערה: מעתה ואילך, ודא שכל בעל חיים עבר את הניתוח באותו צד כדי לשמור על עקביות. - החליקו את הרגל דרך חריץ העשוי מווילונות סטריליים בגודל 10X10 ס"מ ליצירת שדה סטרילי סביב הרגל הנבחרת.
5. הליך כירורגי
- בעזרת מספריים כירורגיים עדינים (איור משלים S1F), בצע חתך קטן של 2 מ"מ של העור בקו האמצע של האספקט הלטרלי של הירך. החליקו את המספריים מתחת לעור בתנועה סיבובית כדי לפרוץ את הפאשיה וליצור מרווח המגדיל את חלל החתך.
- בעזרת מלקחיים קושרים (איור משלים S1H), יוצרים חתך חד אנכית בזווית של 90° בשרירי הירך, בעומק של 1 ס"מ.
- הכניסו את המספריים הקטנים והעדינים (איור משלים S1G) לאותו חתך, גם כן בזווית של 90 מעלות, ופרשו אותם בעדינות כדי להפריד בין השרירים. המשך לעשות זאת עד שהעצב הסיאטי הוא דמיין.
- אתר את העצב הסיאטי, שיכול להיראות מבריק ודק, פועל במקביל לירך האנכית, בכיוון הירך עד הברך. הסר את המספריים ואת המלקחיים הקשירה מהגוף לפני שתמשיך.
- השתמשו במלקחיים עדינות במיוחד (איור משלים S1D) ובוו זכוכית העצב (איור משלים S1E) כדי לבודד את העצב מלמטה. שחררו בזהירות את העצב מרקמות החיבור שמסביב באתר ליד הטרוכנטר של עצם הירך, הקרוב ביותר לירך והרחוק ביותר מהברך.
- אפשרו לעצב לנוח על מוט הזכוכית וודאו שקצה המוט מונע מהעצב להתגלגל.
- מניחים קשר כירורגי לקשירת 1/3 מרוחב העצב הסיאטי באמצעות תפר ניילון 9-0, לפני שהוא מתחלק לענפי העצבים הפרוניאליים, הטיביאליים והסוראלייםהמשותפים 3.
הערה: ההסתעפות מתרחשת כאשר העצב הסיאטי עובר במורד הברך, הרחק מהירך. מכיוון שלשלושת ענפי העצב הללו יש שלושה עצבובים שונים, הכרחי למקם את הקשר הניתוחי לפני ההסתעפות כדי להבטיח את אותם ליקויים עצביים בכל ניתוחי בעלי החיים. - יש להקפיד להחזיק את החוטים קרוב לקשר בעת משיכת החוטים בחוזקה, כדי לא למשוך את העצב בכוח מוגזם כדי למנוע החלקת העצב ממוט הזכוכית ולהימנע מפגיעה נוספת במתיחה.
- החליקו בזהירות את העצב ממוט הזכוכית ברגע שהקשר הושלם ותחבו אותו בחזרה למיקום המקורי ברמה שמתחת לשרירים המופרדים.
- תפרו את חתך השריר באמצעות תפר פוליגליקולי 5-0 נספג. בנפרד, תפרו את העור באמצעות תפר פוליפרופילן 6-0 שאינו נספג.
- רשום את זמן הפסקת הניתוח וההרדמה. אפשרו לעכבר להתעורר, לבדו בכלוב התאוששות, לפני החזרתו לכלוב חדש ונקי.
הערה: במהלך הניתוח, צבטו את אצבעות רגליו של בעל החיים כדי לוודא תחזוקה נאותה של חומר ההרדמה ולעקוב אחר נשימתו וזילוח גופו (אדום, ורוד, חיוור). אם הנשימה מופחתת באופן משמעותי או שבעל החיים נראה חיוור, שקלו להפחית את זרימת ההרדמה או להגביר את זרימת החמצן והצטיידו במזרק מלא במי מלח מוכן להזרקה תת עורית כדי להחזיר לחות לחיה. בכל עת, בעל החיים צריך להיות מקור חום ממוקם מתחתיו כדי לשמור על חום הגוף.
6. הליך ניתוח דמה לבעלי חיים
- בצע את השלבים 5.1-5.11 של ההליך הכירורגי; אל תכלול שלבים 5.4-5.9.
7. בדיקות התנהגותיות לאחר ניתוח
הערה: יש לוודא שהנסיין עיוור לכל טיפול. כאב נוירופתי כרוני יתפתח במשך שבועיים לאחר הניתוח, ולאחר מכן ניתן לבצע בדיקות התנהגותיות לאחר מתן תרכובות עניין.
- השתמש במבחן פון פריי, הרגריבס או פלטה חמה כדי להעריך רגישות יתר תרמית ומכנית ואת ההיפוך הפוטנציאלי שלה.
- הסר כל בעל חיים מהמחקר אם הוא עומד בקריטריונים של נקודות קצה כפי שתוארו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים.
- יש להרדים את בעלי החיים בהתאם לנהלים המתוארים על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים בתום הניסוי ההתנהגותי.
8. ניתוח נתונים
- פון פריי:
- לנתח את הנתונים בשיטה הלא פרמטרית של דיקסון, כפי שתוארה על ידי צ'פלן ועמיתיו23, ולבטא את הנתונים כסף נסיגה ממוצע.
- בעמוד הראשי של התוכנה המוזכרת (ראה טבלת חומרים), בחר את כל החוטים ששימשו למחקר (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 ו- 4.56). בחלונית הקבוצה , בחרו בחוט הלהט המתאים להדמיה האחרונה. בתיבה הריקה , דווח על התגובות החיוביות (X) והשליליות (o). רשום את ערכי הסף שדווחו בתיבה משמאל לדפוס התגובות שנצפה.
הערה: דוגמה לדפוס וכימות מוצגת באיור משלים S2.
- בעמוד הראשי של התוכנה המוזכרת (ראה טבלת חומרים), בחר את כל החוטים ששימשו למחקר (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 ו- 4.56). בחלונית הקבוצה , בחרו בחוט הלהט המתאים להדמיה האחרונה. בתיבה הריקה , דווח על התגובות החיוביות (X) והשליליות (o). רשום את ערכי הסף שדווחו בתיבה משמאל לדפוס התגובות שנצפה.
- לנתח את הנתונים בשיטה הלא פרמטרית של דיקסון, כפי שתוארה על ידי צ'פלן ועמיתיו23, ולבטא את הנתונים כסף נסיגה ממוצע.
- Hargreaves ופלטה חמה:
- דווח על ההשהיות בגיליון אלקטרוני לצורך ניתוח סטטיסטי נוסף.
- שרטט את התוצאות כממוצע של הרגישויות (ספים או השהיות) כפונקציה של זמן.
9. הוראות כיצד להפוך את וו זכוכית העצב
הערה: הקפידו על בטיחות אש לאורך כל תהליך זה. יש ללבוש הגנה מתאימה, כגון כפפות עמידות בחום או משקפיים לפי הצורך.
- הפעל את מבער Bunsen.
- החזיקו קצה אחד של מוט הזכוכית (A) אל האש ביד אחת. כאשר מוט זכוכית זה נמס, השתמש במוט זכוכית אחר (B) ביד השנייה כדי לכוון ולמשוך את זכוכית ההיתוך על מוט A. הסר מוט זכוכית A מהאש ואפשר לקצה החלק המומס להתגלגל באופן טבעי פנימה וליצור צורת כדור קטן. השתמש במוט זכוכית B כדי להנחות צורה זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
כאב נוירופתי כרוני נגרם באמצעות קשירה חלקית של העצב הסיאטי של עכברים זכרים C57Bl6/J (איור 1A). הרגישות המכנית הוערכה באמצעות חוטי פון פריי ושיטת "מעלה ומטה". רגישות תרמית לחום הוערכה באמצעות בדיקות Hargreaves ופלטה חמה. כל הנתונים נותחו עם מדידה חוזרת ונשנית ANOVA דו-כיוונית עם תיקון Geisser-Greenhouse, כדי להשוות את ההשפעה של ניתוח pSNL על בעלי חיים מזויפים לאורך זמן או את ההשפעות של מינונים שונים של מורפין ואיבופרופן.
עכברים שעברו ניתוח pSNL הדגימו סף נמוך יותר לגירויים מכניים בהשוואה לחיות דמה במשך 28 יום (איור 1B). תוצאות דומות התקבלו עם הערכת רגישות יתר תרמית; השהיות הנסיגה של כפות הרגליים לאחר חשיפה לגירוי חום קורן גדלו בחיות pSNL (איור 1C), כמו גם השהיות הנסיגה כאשר חיות הונחו על צלחת של 52°C (איור 1D).
לאחר התבססות כאב נוירופתי כרוני, 14 יום לאחר הניתוח, הערכנו את ההשפעות האנטינוסיצפטיביות של מינונים שונים של מורפין או איבופרופן. לעכברים הוזרקו תוך צפקית תמיסת מלח או שתי מנות שונות של מורפיום (1 ו-5 מ"ג/ק"ג). שתי הקבוצות שקיבלו הזרקת מורפיום הראו היפוך של רגישות יתר הנגרמת על-ידי pSNL, שנמשכה מ-1 (1 מ"ג/ק"ג) עד שעתיים (5 מ"ג/ק"ג) (איור 2A). רגישות יתר מכנית חזרה לקו הבסיס 4 שעות לאחר הזרקת מורפיום. כאשר שני מינונים שונים של איבופרופן (10 ו-30 מ"ג/ק"ג) ניתנו תוך צפקית לעכברים, התוצאות הדגימו רגישות יתר מכנית מופחתת בהשוואה לעכברים שהזריקו מי מלח (איור 2B). ההשפעות האנטינוסיספטיביות של איבופרופן נמשכו עד 2 שעות. בסך הכל, התוצאות הראו כי ניתוח pSNL גורם לכאב נוירופתי כרוני מתמשך. יתר על כן, הצלחנו להראות כי מודל זה רגיש למינונים שונים של משככי כאבים.
איור 1: רגישות יתר תרמית ומכנית מתמשכת בעכברים עקב קשירה חלקית של העצב הסיאטי. רגישות תרמית לחום (Hargreaves ובדיקת פלטה חמה) ורגישות מכנית לחוטי פון פריי הוערכו כדי לבחון את ההשראות וההתמדה של רגישות יתר במודל של כאב נוירופתי כרוני (pSNL). ערכי הבסיס נמדדו לפני קשירת העצב הסיאטי, ורגישות יתר הוערכה במשך 28 ימים לאחר הניתוח. (A) האיור מייצג את הקשירה החלקית של העצב הסיאטי. (B) ספי נסיגה מכניים הושוו בין עכברי דמה ועכברי pSNL בכל נקודת זמן. מדידות חוזרות ונשנות ANOVA דו-כיווניות עם תיקון Geisser-Greenhouse חשפו השפעה משמעותית של pSNL (F(1, 10) = 222.3, p < 0.0001, n = 5-7 לכל מצב). בדיקת ההשוואות המרובות של סידאק הראתה עלייה משמעותית ברגישות היתר בין הימים 1 ל-28 (עמ' 0.05 <). (C) השהיות נסיגה תרמית, שנמדדו במבחן Hargreaves, הושוו בין עכברי דמה ועכברי pSNL. מדידות חוזרות ונשנות ANOVA דו-כיווניות עם תיקון Geisser-Greenhouse חשפו השפעה משמעותית של pSNL (F(1, 8) = 113.8; p < 0.0001, n = 4-6 לכל תנאי). בדיקת ההשוואות המרובות של סידאק הראתה עלייה משמעותית ברגישות היתר בימים 2 ו-14 (עמ' 0.05 <). (D) השהיות נסיגה תרמיות, שנמדדו על ידי מבחן הפלטה החמה, הושוו בין עכברי דמה לעכברי pSNL. ANOVA דו-כיווני רגיל גילה השפעה משמעותית של pSNL (F(1, 32) = 19.10, p = 0.0001, n = 4-6 לכל תנאי). בדיקת ההשוואות המרובות של סידאק הראתה רגישות מוגברת משמעותית לחום לאחר 4 שבועות לאחר ניתוח pSNL (p = 0.0026). הנתונים מוצגים כממוצע ± S.E.M. קיצורים: pSNL = קשירה חלקית של העצב הסיאטי; BL = קו בסיס. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: היפוך תלוי מינון של רגישות יתר מכנית הנגרמת על-ידי pSNL על-ידי הזרקה תוך-צפקית של מורפין או איבופרופן. רגישות יתר מכנית (באמצעות חוטי פון פריי) הוערכה כדי לבחון את ההשפעות האנטינוסיצפטיביות האפשריות של מורפין או איבופרופן במודל עכברי של pSNL. ערכי הבסיס (pre-pSNL) נרכשו לפני קשירת העצבים הסיאטיים. לאחר התבססות כאב נוירופתי כרוני, ביום ה-14 בעלי חיים התבססו בפעם השנייה כדי להבטיח רגישות יתר הנגרמת על ידי pSNL (פוסט-pSNL). לאחר מכן, שתי מנות של מורפין (1/5 מ"ג / ק"ג) או איבופרופן (10/30 מ"ג / ק"ג) הוזרקו תוך צפקית. היפוך אפשרי של רגישות יתר מכנית הוערך במשך 4 שעות לאחר הזרקות. (A) ספי נסיגה מכניים הושוו בין מצב המלח לבין שתי מנות המורפיום. מדידות חוזרות ונשנות של ANOVA דו-כיווני עם תיקון Geisser-Greenhouse גילו השפעה משמעותית של 1 מ"ג/ק"ג מורפין (F(1, 11) = 11.16, p = 0.0066, n = 6-7 לכל מצב) והשפעה משמעותית של 5 מ"ג/ק"ג מורפין (F(1, 10) = 21.78, p = 0.0009, n = 6 לכל מצב). בדיקת ההשוואות המרובות של סידאק הראתה ירידה משמעותית ברגישות יתר מכנית שעה לאחר ההזרקה עבור שתי המנות, אך רק השפעה משמעותית על מצב של 5 מ"ג/ק"ג לאחר שעתיים (*p < 0.05). (B) ספי נסיגה מכניים הושוו בין מצב המלח לבין שתי המנות של איבופרופן. מדידות חוזרות ונשנות ANOVA דו-כיווניות עם תיקון Geisser-Greenhouse חשפו השפעה משמעותית של 10 מ"ג / ק"ג איבורופן (F(1, 11) = 7.788, p = 0.0176, n = 6-7 לכל מצב) והשפעה משמעותית של 30 מ"ג / ק"ג איבופרופן (F(1, 10) = 18.79, p = 0.0015, n = 6 לכל מצב). בדיקת ההשוואות המרובות של סידאק הדגימה ירידה משמעותית ברגישות יתר מכנית שעה ושעתיים לאחר ההזרקה עבור שתי המנות (*p < 0.05). הנתונים מוצגים כממוצע ± S.E.M. קיצורים: pSNL = קשירה חלקית של העצב הסיאטי; IP = intraperitoneal. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור משלים S1: כלים כירורגיים. שתי התמונות ממחישות את הכלים השונים ששימשו לניתוח. (א) מחזיק מחטים משובח Castroviejo; (ב) מחזיק מחט Castroviejo; (ג) מלקחיים מיקרו אדסון; (ד) מלקחיים דקים במיוחד; (E) וו זכוכית עצבי; (F) מספריים עדינים (11.5 ס"מ); (G) מספריים עדינים (9 ס"מ); (ח) קשירת מלקחיים; (I) מלקחיים של הקשתית. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
איור משלים S2: דפוס מייצג של תגובות משיכת כפות כפי שנמדד במבחן נימה פון פריי. בניסוי זה, העכבר לא הגיב לשלושת הגירויים הראשונים אלא משך את כפו בגירוי הרביעי עם חוט הלהט 4.56. בעקבות תגובה חיובית (x), נעשה שימוש בנימה דקה יותר (4.31), ואחריה חוטים בגדלים קטנים יותר עד שהעכבר לא הגיב לחוט נימה אחר (במקרה זה, 4.08). על הנסיין להקטין את גודל החוטים, אחד אחד, עד להיעדר תגובה (o). לאחר היעדר תגובה, הנסיין השתמש בנימה עבה יותר עד שקיבל תגובה חיובית והקטין את גודלם בעקבות התגובה החיובית (שהתקבלה כאן עם חוט 4.31). ארבעה גירויים נערכו לאחר התגובה החיובית הראשונה; התבנית הכרונולוגית של כל גירוי מסומנת במספרים באדום בלוח A. במקרה זה, חוטים 2.44 עד 3.22 מעולם לא שימשו מכיוון שהחיה לא הראתה תגובה חיובית עם חוט הלהט 3.61. (B) תבנית התגובות מולאה לאחר מכן בתוכנת Allodynia, שדווחה באותו סדר שבו הוחלו החוטים (000xx0x0), בתיבה המודגשת בלבן. הסף שהתקבל חושב לאחר מכן על ידי התוכנה (2.60839). אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
טבלה משלימה S1: גיליון איסוף נתונים לבדיקות פון פריי. טבלה זו מאפשרת לנסיינים למלא דפוסים של תגובות בעת שימוש בחוטי פון פריי. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
טיפול בכאב כרוני דורש לעתים קרובות טיפול תרופתי לטווח ארוך, מה שהופך את ניהול הכאב למאתגר. לפיכך, מודלים פרה-קליניים הם כלי חיוני להערכת היתרונות הפוטנציאליים של טיפולים חדשניים המסתמכים על גישות פרמקולוגיות או לא פרמקולוגיות. המודלים הרבים של כאב נוירופתי כרוני מביאים אתגרים עקב שונות מוגברת בטכניקות הניתוח בין חוקרים שונים, מה שמוביל לירידה ביכולת השחזור. לכן, חיוני לאפיין את ההשפעות האנטינוסיצפטיביות הפוטנציאליות של טיפולים חדשים במודלים מרובים המאופיינים היטב וסטנדרטיים.
דו"ח זה מראה כי קשירה חלקית של העצב הסיאטי גורמת להתפתחות כאב נוירופתי כרוני מתמשך בעכברים בשיטות זולות יחסית. pSNL מגזים בתגובות לגירויים תרמיים ומכניים, והמודל מגיב לניהול משככי כאבים נפוצים באופן תלוי מינון. לכן, מודל pSNL נראה כמודל נוח ורגיש להערכת היתרונות הפוטנציאליים של תרופות חדשות. המאפיינים העיקריים של כאב נוירופתי הם hyperalgesia ו allodynia. דו"ח זה מדגים כיצד אלודיניה מכנית והיפראלגזיה תרמית מושפעות. עם זאת, hyperalgesia מכני לא נמדדה. יש שטח אפור גדול של חפיפה בין allodynia ו hyperalgesia. שתי התחושות נופלות תחת המטריה של רגישות יתר כללית לגירוי חושי24. לכן, התחושה המגורה עשויה להיתפס כתחושה אחרת, כגון חום ככאב קר או מגע כתחושת צריבה. לכן, hyperalgesia ו allodynia הם לעתים קרובות קשה להבחין, במיוחד מודלים כאב בעלי חיים.
מודל pSNL שימש במספר מחקרים על כאב כרוני כדי להעריך את ההשפעה של תרכובות משככי כאבים, את המנגנונים הבסיסיים של כאב כרוני, או אפילו את ההשפעה הקוגניטיבית של כאב נוירופתי מתמשך. ההתמדה של רגישות יתר מכנית עד 70 יום מאפשרת ללמוד השפעות ארוכות טווח של תרופות חדשות25. חשוב לציין כי התקופה האופטימלית לבדיקות התנהגותיות מקיפה את השבוע הראשון, השני והשלישי לאחר הניתוח, כאשר הכאב הכרוני נקבע 8,11,26,27. כדי להעריך את העוצמה והיעילות של תרופה או טיפול לא תרופתי, יש לשקול טיפולי בקרה חיוביים כגון מורפין או איבופרופן, בהתאם לתכנון הניסוי. בניגוד למבחן תנועת הזנב, מבחן הפלטה החמה מפעיל גירוי על הכף המשלב מסלולים על-ספינליים19. בדיקת פלטה חמה נמצאת בשימוש נרחב כדי לאפיין תכונות אנטינוסיצפטיביות תרופתיות במודלים של כאב נוירופתי כרוני במחקרים אחרונים 19,28,29,30,31,32,33.
מודל זה שימש לאפיון טיפולים חדשים שאינם אופיואידים ולזיהוי מסלול כאב חדש המערב קולטן נוירוטנסין מסוג 211,13. הוא שימש גם כדי להדגים את מעורבותם של מודולציות גליצינרגיות בכאב כרוני12 ופיתוח טיפולים ומסלולים חדשים בצומת של שינה וכאב10. עם זאת, עד היום לא הוצגו בכתבות הסבר מפורט על הניתוח בליווי סרטון תיאורי.
ביקורת נפוצה על pSNL ומודלים דומים היא האמינות של עקביות מידת הנזק שנגרם על ידי פגיעה עצבית נוירופתית בקרב בעלי חיים6. מאמר זה מתאר הליך להתכה ולעצב באופן ידני מוט זכוכית כדי ליצור וו זכוכית עצבי מיוחד לטיפול בבעיה זו. רוב הניתוחים בבעלי חיים משתמשים במלקחיים כדי להרים עצבים או כלי דם עדינים. כלי קרס זכוכית העצב מאפשר שיטה בטוחה יותר ופחות מועדת לפציעות לטיפול בעצב. למרות שמטרת מודל זה היא ליצור פגיעה עצבית, כדאי להימנע מנזק נוסף לעצב מלבד זה שנגרם על ידי התפר הממוקם דרך שליש מרוחב העצב הסיאטי. וו זכוכית העצב הוא משטח חלק, לא מזיק עבור העצב לנוח על; בנוסף, הכדור/וו בקצה מאפשר איסוף וייצוב קלים. יתר על כן, בעת תפירת העצב, הטכניקה שתוארה לעיל (סעיף פרוטוקול הערה 5.7) ממליצה להחזיק את החוטים עמוק בתוך חלל הגוף, הקרוב ביותר למקום בו יופיע הקשר. פעולה זו מונעת משיכה בקצה התפרים ומקדמת הפעלת מתח על התפר הקרוב ביותר לעצב בעת הידוק הקשר. טכניקה זו מונעת פגיעה נוספת במתיחה אם העצב היה נשלף בשוגג מוו זכוכית העצב, לכיוון החלק החיצוני של החלל בתהליך של קשירת הקשר חזק יותר. יתרון נוסף הוא השימוש במספריים עדינים לביצוע החיתוך הראשוני. זה מאפשר אתר חתך קטן בהרבה ובכך ריפוי מהיר יותר, בניגוד לחתכים גדולים יותר שנעשו עם להבי אזמל.
לשיטות המדווחות במאמר זה יש גם כמה מגבלות. התפתחות כאב כרוני במודל pSNL מושפעת ממין בעלי החיים34. לכן, חיוני שמחקרים יכללו את שני המינים בניתוח שלהם. מטרת דו"ח זה הייתה להתמקד בהליך כירורגי ולא לאפיין דימורפיזם מיני של מודל הכאב. ראוי להזכיר כי מדידות של רגישות תרמית בעכברים באמצעות מבחן Hargreaves הוא מאתגר; בעלי חיים נדרשים לעמוד ללא תזוזה במתחם קטן למשך מספר שניות בזמן הפעלת הגירוי. לפיכך, הרגלת העכברים למארז פרספקס היא גורם מפתח בהשגת תוצאות מוצלחות. מדידה של כאב מעורר דורשת גם אימון נסיינים זהיר. בדיקות התנהגותיות מעוררות וספונטניות מומלצות כדי להעריך את הרגישות התרמית והמכנית, כמו גם את הפונקציונליות של האיבר. בנוסף, במחקר זה, מורפין ואיבופרופן שימשו כבקרות חיוביות להשפעה אנטינוסיצפטיבית. שתי תרופות אלה נבחרו מכיוון שהן משמשות בדרך כלל כבקרות חיוביות במודלים מרובים של כאב ומאפשרות השוואה טובה יותר בין המודלים השונים. עם זאת, חשוב להזכיר כי pregabalin ו gabapentin הם לעתים קרובות prescribed לטיפול בכאב נוירופתי, ומחקרים המתמקדים בניהול כאב נוירופתי צריך לכלול תרופות אלה כמו בקרות חיוביות.
דו"ח זה מתאר בדייקנות ניתוח המשמש בדרך כלל לחקר כאב נוירופתי כרוני. מתן אפשרות לחוקרים ולמתאמנים להפיק תועלת מתיאור חזותי של מודל עכבר זה יקל על פיתוח פרויקטים מחקריים המתמקדים בהבנת מנגנוני הכאב הכרוני או מכוונים לאפיון טיפולים חדשניים. יתר על כן, השימוש במודלים מרובים של כאב חיוני לשיפור יכולת השחזור, ודו"ח זה יקל על יישום מודל pSNL במעבדות חדשות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין ניגוד עניינים לדווח. אף אחד ממחברי כתב היד לא קיבל כל גמול או החזר או כבוד בכל דרך אחרת. המחברים אינם קשורים לאף ספק או חברת תרופות הקשורים למחקר זה.
Acknowledgments
מחקר זה נתמך על ידי המרכז הלאומי לבריאות משלימה ואינטגרטיבית [R01AT009716, 2017] (M.M.I.), המרכז המקיף לכאב כרוני והתמכרות - אוניברסיטת אריזונה (M.M.I.), והתוכנית להכשרת מדענים רפואיים (MSTP) באוניברסיטת אריזונה, המכללה לרפואה, טוסון.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5/0, FS-2, 30" Undyed PGA Braided Polyglycolic Acid Synthetic Absorbable Suture | CP Medical | 421A | https://cpmedical.com/suturesearch/product/421a-visorb-50-fs-2-30/ |
| 6/0, P-1, 18" Blue Polypropylene Monofilament Non-Absorbable Suture | CP Medical | 8697P | https://cpmedical.com/suturesearch/product/8697p-polypro-60-p-1-18/ |
| 9/0 (0.3 metric) Nylon Black Monofilament Suture | Crestpoint Ophthalmics | MANI 1407 | https://crestpointophthalmics.com/mani-1407-suture-trape-spatula-nylon-black-mono-box-of-12.html |
| Allodynia Software | National Instruments, LabView 2015 | Quantification of mean withdrawal thresholds (Von Frey data) | |
| C57Bl6/J mice | The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | 000664 | https://www.jax.org/strain/000664 |
| Castroviejo needle holder | Fine Science Tools | 12565-14 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Wound-Closure/Needle-Holders/Castroviejo-Needle-Holder/12565-14 |
| Cold Hot Plate Test | Bioseb | BIO-CHP | https://www.bioseb.com/en/pain-thermal-allodynia-hyperalgesia/563-cold-hot-plate-test.html |
| Elevated metal mesh stand for Von Frey | Bioseb | BIO-STD2-EVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1689-elevated-metal-mesh-stand-30-cm-height-to-fit-up-to-2-pvf-cages.html |
| Extra fine Graefe forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-curved-medium-point-general-purpose-forceps/16100110 |
| Fine Castroviejo needle holder | Simovision/Geuder | 17565 | https://simovision.com/assets/Uploads/Brochure-Geuder-Ophthalmic-Surgical-Instruments-EN2.pdf |
| Fine scissors (11.5 cm) | Fine Science Tools | 14558-11 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-11 |
| Fine scissors (9 cm) | Fine Science Tools | 14558-09 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-09 |
| Iris forceps | Fine Science Tools | 11064-07 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Fine-Forceps/Iris-Forceps/11064-07 |
| Micro Adson forceps | Fine Science Tools | 392487 | https://www.fishersci.com/shop/products/micro-adson-tissue-forceps-1x2-teeth-german-steel/13820072#?keyword=adson%20forceps |
| Modular holder cages for rats and mice | Bioseb | BIO-PVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1206-modular-holder-cages-for-rats-and-mice.html |
| Moretti/Effetre #240 Light Cobalt Blue glass rods 4 mm | Ebay | N/A | https://www.ebay.com/itm/402389491328?hash=item5db0485e80:g:agYAAOS w9CtfnIVJ&amdata=enc %3AAQAHAAAAwCoqvgWRo NTe5Vq8PWOgfE4ygWeW4tL k81J1AFu%2Fkcbsk6pxYtJi6 digE5TL9SzlgMzYUMNDr%2B dku2%2B%2FEvB1qXqFmebE 020SGs9LPDXLL5w21un7jrM0 9xfWYvIzBYQYh6FRWyUJngC uuA9Bkjb9lxtZoYlg5y6PyFR2P 34xFk5xaNC5ib65M1%2Fr%2F 4w2Iw45QqsSyXH2cuUKRom0 AGBoBaIr%2BbJw1VnlMjGuc9dtx 4fbPbqoBNSWjj3RbZPOPTYS8Q %3D%3D%7Ctkp%3ABk9SR4q6- 6LfYA |
| Plantar Test for Thermal Stimulation - Hargreaves Apparatus | Ugo Basile | 37570 | https://ugobasile.com/products/categories/pain-and-inflammation/plantar-test-for-thermal-stimulation |
| Touch-Test Sensory Evaluators, Set of 20 Monofilaments | North Coast Medical | NC12775-99 | https://www.ncmedical.com/products/touch-test-sensory-evaluators_1278.html |
| Tying forceps | Duckworth & Kent | 2-504ER8 | https://duckworth-and-kent.com/product/tying-forceps-9/ |
References
- Hassett, A. L., Gevirtz, R. N. Nonpharmacologic treatment for fibromyalgia: patient education, cognitive-behavioral therapy, relaxation techniques, and complementary and alternative medicine. Rheumatic Disease Clinics of North America. 35 (2), 393-407 (2009).
- Hylands-White, N., Duarte, R. V., Raphael, J. H. An overview of treatment approaches for chronic pain management. Rheumatology International. 37 (1), 29-42 (2017).
- Campbell, J. N., Meyer, R. A.
- Colloca, L., et al.
- Colleoni, M., Sacerdote, P. Murine models of human neuropathic pain. Biochimica et Biophysica Acta. 1802 (10), 924-933 (2010).
- Challa, S. R. Surgical animal models of neuropathic pain: Pros and cons. International Journal of Neuroscience. 125 (3), 170-174 (2015).
- Bennett, G. J., Xie, Y. K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33 (1), 87-107 (1988).
- Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury. Pain. 43 (2), 205-218 (1990).
- Hasnie, F. S., Wallace, V. C., Hefner, K., Holmes, A., Rice, A. S. Mechanical and cold hypersensitivity in nerve-injured C57BL/6J mice is not associated with fear-avoidance-and depression-related behaviour. British Journal of Anaesthia. 98 (6), 816-822 (2007).
- Ito, H., et al. Suvorexant and mirtazapine improve chronic pain-related changes in parameters of sleep and voluntary physical performance in mice with sciatic nerve ligation. PLoS One. 17 (2), 0264386 (2022).
- Martin, L., et al. Conotoxin contulakin-G engages a neurotensin receptor 2/R-type calcium channel (Cav2.3) pathway to mediate spinal antinociception. Pain. 163 (9), 1751-1762 (2021).
- Peiser-Oliver, J. M., et al. Glycinergic modulation of pain in behavioral animal models. Frontiers in Pharmacology. 13, 860903 (2022).
- Ramiro, I. B. L., et al. Somatostatin venom analogs evolved by fish-hunting cone snails: From prey capture behavior to identifying drug leads. Science Advances. 8 (12), (2022).
- Chung, J. M. Encyclopedia of Pain. Schmidt, R. F., Willis, W. D. , Springer. Berlin Heidelberg. 1299-1300 (2007).
- Zahn, P. K., Brennan, T. J. Primary and secondary hyperalgesia in a rat model for human postoperative pain. Anesthesiology. 90 (3), 863-872 (1999).
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
- Yeomans, D. C., Proudfit, H. K. Characterization of the foot withdrawal response to noxious radiant heat in the rat. Pain. 59 (1), 85-94 (1994).
- Cheah, M., Fawcett, J. W., Andrews, M. R. Assessment of thermal pain sensation in rats and mice using the Hargreaves test. Bio-Protocol. 7 (16), 2506 (2017).
- Hook, M. A., et al. The impact of morphine after a spinal cord injury. Behavioural brain research. 179 (2), 281-293 (2007).
- Loram, L. C., et al. Prior exposure to repeated morphine potentiates mechanical allodynia induced by peripheral inflammation and neuropathy. Brain, behavior, and immunity. 26 (8), 1256-1264 (2007).
- Green-Fulgham, S. M., et al. Oxycodone, fentanyl, and morphine amplify established neuropathic pain in male rats. Pain. 160 (11), 2634-2640 (2019).
- Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284 (2017).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
- Jensen, T. S., Finnerup, N. B. Allodynia and hyperalgesia in neuropathic pain: clinical manifestations and mechanisms. Lancet Neurology. 13 (9), 924-935 (2014).
- Malmberg, A. B., Gilbert, H., McCabe, R. T., Basbaum, A. I. Powerful antinociceptive effects of the cone snail venom-derived subtype-selective NMDA receptor antagonists conantokins G and T. Pain. 101 (1-2), 109-116 (2003).
- Nakamura, Y., et al. Neuropathic pain in rats with a partial sciatic nerve ligation is alleviated by intravenous injection of monoclonal antibody to high mobility group box-1. PLoS One. 8 (8), 73640 (2013).
- Sherman, K., et al. Heterogeneity in patterns of pain development after nerve injury in rats and the influence of sex. Neurobiology of Pain. 10, 100069 (2021).
- Ba, X., et al. Cinobufacini protects against paclitaxel-induced peripheral neuropathic pain and suppresses TRPV1 up-regulation and spinal astrocyte activation in rats. Biomedicine Pharmacotherapy. 108, 76-84 (2018).
- Hao, Y., et al. Huachansu suppresses TRPV1 up-regulation and spinal astrocyte activation to prevent oxaliplatin-induced peripheral neuropathic pain in rats. Gene. 680, 43-50 (2019).
- Guo, J., et al. Effects of resveratrol in the signaling of neuropathic pain involving P2X3 in the dorsal root ganglion of rats. Acta Neurologica Belgica. 121 (2), 365-372 (2021).
- Ni, W., Zheng, X., Hu, L., Kong, C., Xu, Q. Preventing oxaliplatin-induced neuropathic pain: Using berberine to inhibit the activation of NF-kappaB and release of pro-inflammatory cytokines in dorsal root ganglions in rats. Experimental and Therapeutic Medicine. 21 (2), 135 (2021).
- Wang, J., et al. Selective activation of metabotropic glutamate receptor 7 blocks paclitaxel-induced acute neuropathic pain and suppresses spinal glial reactivity in rats. Psychopharmacology. 238 (1), 107-119 (2021).
- Sun, C., Wu, G., Zhang, Z., Cao, R., Cui, S. Protein tyrosine phosphatase receptor type D regulates neuropathic pain after nerve injury via the STING-IFN-I pathway. Frontiers in Molecular Neuroscience. 15, 859166 (2022).
- Coyle, D. E., Sehlhorst, C. S., Mascari, C. Female rats are more susceptible to the development of neuropathic pain using the partial sciatic nerve ligation (PSNL) model. Neuroscience Letters. 186 (2-3), 135-138 (1995).
