Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begynd med at forberede den forbindelse, der skal testes for toksicitet, og distribuere den til brønde af en analyse plade. Overfør orme af passende udviklingsmæssige fase til hver brønd, og straks starte en timer. Bemærk eventuelle orme, der er beskadiget, og ikke omfatter dem i din overlevelse beregninger.
Efter en forudbestemt tid skal du tælle antallet af orme, der stadig er i live i hver brønd. Det lyse lys af et dissektionsmikroskop eller blid tappe på pladen bør få levende orme til at bevæge sig. Gentag denne observation efter hvert tidsinterval, indtil de fleste af dyrene er døde. I den følgende protokol vil vi observere L4 larver overlevelsestid under udsættelse for paraquat, en forbindelse, der fremkalder oxidativ stress.
- I denne demonstration vil oxidativ stress blive induceret ved hjælp af paraquat. Forbered en frisk 100 millimolar paraquatopløsning som beskrevet i den ledsagende protokoltekst. Paraquat er en farlig og meget giftig forbindelse og skal håndteres i henhold til passende retningslinjer.
Pipette 40 mikroliter af paraquatopløsningen til hver brønd af en 96-brønds plade. Brug mindst 12 brønde som replikater af hver testet tilstand. Ved hjælp af en platintråd orm pick, overføre fem til otte L4 larver dyr til hver brønd.
Angiv starttidspunkt og sluttidspunkt for hver testet tilstand. Placer 96-brøndspladen ved 20 grader Celsius. En time efter starttidspunktet skal du score døde og levende dyr ved hjælp af et dissekerende mikroskop. Ryst forsigtigt pladen, før du begynder at tælle.
Orme, der ikke bevæger sig, selv efter spotting en høj intensitet lys er scoret som døde. Se på orm form, haler, og hoved bevægelse ved høj forstørrelse at skelne døde orme fra levende orme. Score overlevelse hver time, indtil de fleste orme er døde, og gentag denne analyse mindst tre uafhængige gange.
For at bestemme overlevelsesprocenten for hvert tidspunkt skal du først beregne det samlede antal dyr pr. tilstand ved at lægge det samlede antal dyr, der overføres til hver brønd. Ignorer de dyr, der blev beskadiget eller dræbt ved overførslen.
