Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Toksisite test edilecek bileşiği hazırlayarak başlayın ve bir test plakasının kuyularına dağıtın. Uygun gelişim aşamasındaki solucanları her kuyuya aktarın ve hemen bir zamanlayıcı başlatın. Hasar gören ve hayatta kalma hesaplamalarınıza dahil etmeyen solucanlara dikkat edin.
Önceden belirlenmiş bir süreden sonra, her kuyuda hala hayatta olan solucanların sayısını sayın. Diseksiyon mikroskopunun parlak ışığı veya plakaya hafifçe dokunmak, herhangi bir canlı solucanın hareket etmesine neden olmalıdır. Bu gözlemi her zaman aralığından sonra, hayvanların çoğu ölene kadar tekrarlayın. Aşağıdaki protokolde, oksidatif strese neden olan bir bileşik olan paraquat'a maruz kalma sırasında L4 larvalarının hayatta kalma süresini gözlemleyeceğiz.
- Bu gösteride, paraquat kullanılarak oksidatif stres indüklenecektir. Eşlik eden protokol metninde açıklandığı gibi taze bir 100 milimolar paraquat çözeltisi hazırlayın. Paraquat tehlikeli ve oldukça toksik bir bileşiktir ve uygun yönergelere göre ele alınmalıdır.
Pipet 40 mikrolitresi 96 kuyulu bir plakanın her kuyusuna paraquat çözeltisi. Test edilen her durumun kopyaları olarak en az 12 kuyu kullanın. Platin tel solucan toplama kullanarak, beş ila sekiz L4 larva hayvanını her kuyuya aktarın.
Test edilen her durum için başlangıç saatini ve bitiş saatini belirtin. 96 kuyu plakasını 20 santigrat dereceye yerleştirin. Başlangıç saatinden bir saat sonra, bir diseksiyon mikroskobu kullanarak ölü ve canlı hayvanları puanlayın. Saymaya başlamadan önce plakayı hafifçe sallayın.
Yüksek yoğunluklu bir ışığı tespit ettikten sonra bile hareket etmeyen solucanlar ölü olarak puanlanır. Ölü solucanları canlı solucanlardan ayırt etmek için yüksek büyütmede solucan şekline, kuyruklarına ve kafa hareketine bakın. Çoğu solucan ölene kadar her saat hayatta kalma puanı ve bu tahlilleri en az üç bağımsız kez tekrarlayın.
Her zaman noktası için hayatta kalma yüzdesini belirlemek için, önce her kuyuya aktarılan toplam hayvan sayısını ekleyerek durum başına toplam hayvan sayısını hesaplayın. Transfer sırasında zarar gören veya öldürülen hayvanları görmezden gelin. Sonraki, her zaman noktası için, durum başına toplam ölü hayvan sayısını hesaplayın. Ölüm yüzdesini ve hayatta kalma yüzdesini hesaplayın.
