Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begin met het voorbereiden van de te testen verbinding op toxiciteit en verdeel deze naar de putten van een testplaat. Breng wormen van de juiste ontwikkelingsfase over naar elke put en start onmiddellijk een timer. Noteer eventuele wormen die beschadigd zijn en neem ze niet op in uw overlevingsberekeningen.
Tel na een vooraf bepaalde tijd het aantal wormen dat nog in elke put leeft. Het felle licht van een dissectiemicroscoop of zachtjes tikken op de plaat moet ervoor zorgen dat levende wormen bewegen. Herhaal deze observatie na elk tijdsinterval, totdat de meeste dieren dood zijn. In het volgende protocol zullen we de overlevingstijd van L4-larven observeren tijdens blootstelling aan paraquat, een verbinding die oxidatieve stress veroorzaakt.
- In deze demonstratie zal oxidatieve stress worden veroorzaakt met paraquat. Bereid een verse 100 millimolar paraquat oplossing zoals beschreven in de begeleidende protocoltekst. Paraquat is een gevaarlijke en zeer giftige verbinding en moet worden behandeld volgens de juiste richtlijnen.
Pipet 40 microliter van de paraquatoplossing op elke put van een 96-put plaat. Gebruik ten minste 12 putten als replica's van elke geteste conditie. Breng met behulp van een platina draadwormpriem vijf tot acht L4-larven over naar elke put.
Geef de starttijd en de eindtijd aan voor elke geteste aandoening. Plaats de 96-putplaat op 20 graden Celsius. Scoor een uur na de starttijd dode en levende dieren met behulp van een ontleedmicroscoop. Schud de plaat voorzichtig voordat u begint te tellen.
Wormen die niet bewegen, zelfs niet na het spotten van een hoge intensiteit licht worden gescoord als dood. Kijk naar wormvorm, staarten en hoofdbeweging bij hoge vergroting om dode wormen te onderscheiden van levende wormen. Scoor elk uur overleving totdat de meeste wormen dood zijn, en herhaal deze test minstens drie onafhankelijke keren.
Om het overlevingspercentage voor elk tijdspunt te bepalen, berekent u eerst het totale aantal dieren per toestand door het totale aantal dieren op te tellen dat naar elke put is overgebracht. Negeer de dieren die zijn beschadigd of gedood bij overdracht. Bereken vervolgens voor elk tijdstip het totale aantal dode dieren per aandoening. Bereken het percentage van de dood en het percentage overleving.
