Name: chromium release assay for immune cell killing
Uploaded: 2023-04-30T07:09:15.000Z
Duration: 11 min 48 s
Channel: JoVE

نظرة عامة على الإجراءات
&lt; p class = "jove_content"&gt;تتضمن الاختبار النموذجي لقياس موت الخلايا الخطوات التالية:
<ol>
	<li>أولا ، يتم تصنيف الخلايا المستهدفة ب Na2 [51Cr] O4. هذا يميزها عن الخلايا المستجيبة في الفحص.</li>
	<li>أثناء وضع العلامات على الخلايا المستهدفة ، يتم جمع الخلايا المستجيبة ، وباستخدام تقنية التخفيف التسلسلي ، يتم إنشاء معايرة متناقصة للخلايا المستجيبة في لوحة فحص مستديرة القاع 96 بئر.</li>
	<li>في نهاية وضع العلامات على الخلايا المستهدفة ، يتم غسل الخلايا أولا ثم يضاف عدد ثابت من الخلايا إلى لوحة الفحص التي تحتوي بالفعل على سلسلة من تخفيفات الخلايا المستجيبة.</li>
	<li>بعد ذلك ، يتم احتضان مزيج الخلايا المستهدفة المستجيبة لفترة زمنية محددة للسماح بتفاعل خلوي كاف مع الخلايا المستهدفة ، للتوسط في تحلل الخلية.</li>
	<li>أخيرا ، يتم حصاد المواد الطافية المزروعة وجمعها في أنابيب. يتم تحديد كمية 51Cr باستخدام عداد جاما.</li>
	<li>في النهاية ، يتم جمع البيانات واستخدامها لحساب "النسبة المئوية لتحلل الخلية المحددة" للخلايا المستهدفة.</li>
</ol>
1. تصنيف الخلايا المستهدفة ب 51كرور
<ol>
	<li>للبدء ، قم بإعداد الخلايا المستهدفة ، (هنا - خط خلية الورم الميلانيني البشري WM793) ، في معلق خلية واحدة.</li>
	<li>للقيام بذلك ، قم أولا بإزالة الوسائط من قارورة زراعة الأنسجة.</li>
	<li>ثم اغسل الخلايا ب 5 مل من 1X PBS.</li>
	<li>قم بتربسين الخلايا عن طريق إضافة 1 مل من التربسين إلى الطبق لمدة ~ 2 دقيقة.</li>
	<li>اضغط برفق على القارورة لفك الخلايا من سطح القارورة.</li>
	<li>أضف 5 مل من وسائط RPMI إلى القارورة وقم بسحب الوسائط لأعلى ولأسفل لفصل الخلايا.</li>
	<li>اجمع تعليق الخلية في أنبوب مخروطي سعة 15 مل وقم بالطرد المركزي لتعليق الخلية لمدة 5 دقائق عند 1200 دورة في الدقيقة. صب المادة الطاففة.</li>
	<li>أضف 10 مل من الوسائط إلى الحبيبات وقم بسحب الوسائط برفق لأعلى ولأسفل لتعليق الخلايا.</li>
	<li>حدد تركيز الخلية باستخدام مقياس كثافة الدم.</li>
	<li>انقل 1 × 106 خلايا إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 15 مل.</li>
	<li>قم بالطرد المركزي لتعليق الخلية لمدة 5 دقائق عند 1200 دورة في الدقيقة وصب المادة الطافية.</li>
	قم <li>بدوامة الأنبوب لفترة وجيزة لإعادة تعليق حبيبات الخلية في الحجم الصغير للوسط المتبقي وراءه.</li>
	<li>أضف 100 ميكروCi من 51كرور مباشرة إلى تعليق الخلية المستهدفة WM793. 
	ملاحظة: يجب أن يكون هناك مساحة مختبر مخصصة للنشاط الإشعاعي المعين. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن يكون هناك درع وافر من الرصاص للتخزين الآمن واستخدام 51Cr خلال جميع الخطوات بالإضافة إلى اللافتات المناسبة للإشارة إلى مكان الاحتفاظ بالعينات التي تحتوي على 51Cr. من الضروري أيضا استخدام عداد جيجر المجهز بمسبار فطيرة لمسح المساحة بحثا عن التلوث المحتمل.</li>
	<li>أضف قطعة صغيرة من الشريط المشع إلى الأنبوب للإشارة إلى أن الأنبوب مشع الآن.</li>
	<li>ضع الأنبوب في حاضنة 37 درجة مئوية مع درع رصاص واحتضانه لمدة 1 ساعة.</li>
	<li>بعد فترة الحضانة ، اغسل الخلايا المستهدفة ب 5 مل من FBS لإزالة أي 51كرور زائد.</li>
	<li>قم بالطرد المركزي للخلايا عند 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>أعد تعليق الحبيبات واغسلها مرة ثانية باستخدام FBS. تحقق من الحبيبات بحثا عن النشاط الإشعاعي المدمج باستخدام عداد جيجر.</li>
	<li>أعد تعليق الحبيبات في وسط كامل سعة 10 مل ، وتحقيق تركيز خلية يبلغ 105 خلية / مل &lt; br / &gt;
	ملاحظة: تم حذف خطوة عد الخلايا بعد وضع العلامات 51كرور هنا إلى حد كبير لأسباب تتعلق بالسلامة. يمكن افتراض أن تركيز خلية WM793 هو نفسه كما كان قبل وضع العلامات على 51كرور.</li>
</ol>
&lt; p class = "jove_title" &gt;2. تحضير الخلايا المستجيب
<ol>
	<li>يمكن استخدام مجموعة متنوعة من الخلايا المستجيبة ، مثل الخلايا التائية البشرية أو الفأرية والخلايا القاتلة الطبيعية. في هذا المثال ، تم استخدام PBMCs ، المعزولة من الدم الكامل بواسطة الطرد المركزي المتدرج القياسي الكثافة (بتركيز 5 × 106).</li>
	<li>للبدء ، أضف 100 ميكرولتر من وسط زراعة الأنسجة إلى كل بئر من أحد الصفوف (هنا الصف أ ، انظر الجدول 1) من صفيحة مستديرة القاع ذات 96 بئر. هنا ، لا تتم إضافة أي خلايا مستجيب ، وستكون بمثابة "فارغة" لتحديد "الحد الأدنى / التلقائي من إطلاق 51Cr" من الخلايا المستهدفة.</li>
</ol>
&lt; p class = "jove_content" &gt;<img alt="الشكل 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/10505/10505table1.jpg"> 
الجدول 1: تخطيط فحص إصدار 51Cr: الصف أ- الخلايا المستهدفة (104 خلايا / 100 ميكرولتر) محتضنة بالوسائط فقط (يولد" فارغة "لتحديد "الحد الأدنى / التلقائي من 51كرور "). الصفوف B إلى C- الآبار التي تحتوي على مستجيب مختلف: نسب الخلية المستهدفة (E: T) ، تتراوح من 50: 1 إلى 1.5: 1. الصف H- الخلايا المستهدفة (104 خلايا / 100 ميكرولتر) محتضنة بنسبة 1٪ NP-40 (NP-40 يحلل الخلايا المستهدفة ، مما يولد "الحد الأقصى أو الإجمالي لإطلاق 51Cr"). يتم اختبار كل نسبة E: T في ثلاث نسخ لكل حالة تجريبية. العمود 1-3- PBMCs غير المحفزة والعمود 4-6- PBMCs المحفزة CpG.
<ol start="3">
	<li>بعد ذلك ، قم بإنشاء تخفيف خلية تسلسلية 2X ل PBMCs (بثلاث نسخ لكل حالة تجريبية) ، للحصول على تركيز خلية مستجيب يتراوح من 5x105 إلى 15,625 خلية / 100 ميكرولتر من الوسائط (هنا الصفوف B إلى G). 
	ملاحظة: في هذا المثال، تكون نسبة المستجيب الأولي: الخلية المستهدفة (E: T) 50:1. ومع ذلك ، يمكن تعديل هذه النسبة اعتمادا على التفاصيل التجريبية.</li>
	<li>اترك الصف الأخير فارغا (هنا الصف H) عن طريق عدم إضافة أي خلايا مستجيب إلى هذه الآبار. (سيتم استخدام هذا الصف لإنشاء "إجمالي الأعداد / الدقيقة ، أو (c. p. m)" أو "الحد الأقصى 51Cr release").</li>
	<li>ضع اللوحة في حاضنة 37 درجة مئوية حتى تصبح الخلايا المستهدفة جاهزة للإضافة.</li>
</ol>
3. إضافة 51Cr من الخلايا المستهدفة WM793 المسماة إلى الفحص
<ol>
	<li>بعد فترة الحضانة ، قم بإزالة الخلايا المستهدفة من الحاضنة واغسلها ب 5 مل من FBS لإزالة أي فائض من 51كرور.</li>
	<li>قم بالطرد المركزي للخلايا عند 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق ، باستخدام جهاز طرد مركزي مخصص.</li>
	<li>قم بإزالة غسل FBS (المادة الطافية المشعة) في حاوية نفايات مناسبة.</li>
	<li>كرر خطوة الغسيل عن طريق تعليق الحبيبات في 5 مل من FBS.</li>
	<li>الطرد المركزي للخلايا مرة أخرى عند 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>أخيرا, أعد تعليق الحبيبات في 10 مل من الوسط الكامل.</li>
	<li>صب معلق الخلية WM793 الذي يحمل علامة 51Cr (105 خلايا / مل) في خزان كاشف يمكن التخلص منه.</li>
	<li>بعد ذلك، أضف 100 ميكرولتر من هذه الخلايا المستهدفة المصنفة، إلى كل بئر من لوحة الخلية المستجيب المكونة من 96 بئرا، باستخدام ماصة متعددة القنوات.</li>
	<li>بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من 1٪ NP-40 (في الماء) إلى صف الآبار الخالية من أي خلايا مستجيبة (هنا الصف H). 1٪ NP-40 سوف يحلل الخلايا المستهدفة ، وبالتالي ستعمل هذه الآبار كعناصر تحكم لتحديد "إجمالي العدد / الدقيقة ، أو (c. p. m)" أو الحد الأقصى لإطلاق 51Cr.</li>
	<li>قم بتأمين الغطاء على اللوحة عن طريق إضافة قطعة صغيرة من الشريط اللاصق المنفذ للغاز على كل جانب من جوانب اللوحة وضع قطعة من الشريط المشع على الغطاء للإشارة إلى احتوائه على 51كرور.</li>
	<li>باختصار ، قم بالطرد المركزي للوحة عند 1200 دورة في الدقيقة. إذا تم استخدام لوحة تجريبية واحدة فقط ، فأضف لوحة توازن إلى جهاز الطرد المركزي. 
	ملاحظة: من المهم استخدام جهاز طرد مركزي مميز للتعامل مع العينات المشعة.</li>
	<li>قم بإزالة اللوحة من جهاز الطرد المركزي.</li>
	<li>ضع اللوحة في حاضنة 37 درجة مئوية مع قطعة صغيرة من درع الرصاص فوق اللوحة لمزيد من الأمان. احتضان لمدة 16 ساعة للسماح بتحلل الخلية المستهدفة. 
	ملاحظة: يمكن أن تختلف فترة الحضانة من 4 إلى 18 ساعة اعتمادا على الخلايا المستجيبة المستخدمة وآلية القتل المحتملة المستخدمة.</li>
</ol>
&lt; p class = "jove_title" &gt;4. حصاد المواد الطفية
<ol>
	<li>في نهاية فترة الحضانة ، قم بإزالة الشريط اللاصق بعناية حول حافة اللوحة وإزالة الغطاء.</li>
	<li>بعد ذلك ، ضع إطار الحصاد على اللوحة ، وتأكد من التأكد من وجود أقراص المرشح الصغيرة في مكانها لكل سدادة قطنية. سيضمن ذلك جمع مادة طافية خالية من الخلايا.</li>
	<li>الآن ، اضغط ببطء وبلطف على سدادات القطن في الآبار.</li>
	<li>بعد حوالي 10 ثوان ، حرر الضغط على سدادات القطن ثم انقل المقابس القطنية إلى شرائط الأنبوب.</li>
	<li>ضع كل من هذه الأنابيب في أنبوب FACS ثانوي.</li>
	<li>أخيرا ، قم بتحميل أنابيب FACS على عداد جاما وقم بتشغيل العينات لتقدير كمية 51Cr التي تم إطلاقها في كل حالة. يتم قياس العينات عادة لمدة دقيقة واحدة ، مما يسمح بتحديد "العدد / الدقيقة" بسهولة.</li>
	<li>بعناية ، سجل الترتيب الذي تم به تحميل الأنابيب في العداد.</li>
</ol>
&lt; p class = "jove_title" &gt;5. تحليل البيانات
<ol>
	<li>هنا ، تمت إضافة PBMCs غير المحفزة إلى الأعمدة الثلاثة الأولى ، وأضيفت PBMCs المحفزة CpG (CpG ODN ، (1 ميكروغرام / مل) لمدة 24 ساعة) إلى الأعمدة 4-6. انظر الجدول 2.</li>
</ol>
<border fo: keep-together.within-page="1" keep-with-next.within-page="دائما">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>3</td>
			<td>4</td>
			<td>5</td>
			<td>6</td>
			<td>7</td>
			<td>8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>أ</td>
			<td>1251</td>
			<td>1157 [1157</td>] [م]
			<td>1086</td>
			<td>917</td>
			<td>1118</td>
			<td>1140</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ب</td>
			<td>1832</td>
			<td>1986</td>
			<td>1971</td>
			<td>7629</td> ريال
			<td>7913</td>
			<td>8180</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ج</td>
			<td>1677</td>
			<td>1739</td>
			<td>1428</td>
			<td>5454</td> ريال
			<td>5055</td>
			<td>5268</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>د</td>
			<td>1638</td>
			<td>1552</td>
			<td>1734</td>
			<td>4239</td>
			<td>3582</td>
			<td>3786</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ه</td>
			<td>1658</td>
			<td>1580</td>
			<td>1339</td>
			<td>2818</td>
			<td>2623</td>
			<td>2750</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ويف</td>
			<td>1579</td>
			<td>1472</td>
			<td>1483</td>
			<td>2028</td>
			<td>1779</td>
			<td>1769</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ز</td>
			<td>1326</td>
			<td>1325</td>
			<td>1184</td>
			<td>1801</td>
			<td>1654</td>
			<td>1565</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ح</td>
			<td>9220</td>
			<td>9367</td>
			<td>8067</td>
			<td>8774</td>
			<td>9647</td>
			<td>8236</td> ريال
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>أنا</td>
			<td colspan="2">متوسط A1 ، A2 ، A3 -&gt;</td>
			<td>1164.67</td>
			<td>c.p.m التلقائي</td>
			<td></td>
			<td>1058.33</td> دولار
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ي</td>
			<td colspan="2">متوسط B1 ، B2 ، B3 -&gt;</td>
			<td>1929.67</td>
			<td>9.91٪</td>
			<td></td>
			<td>7907.33</td>
			<td>87.50٪</td>
			<td>50:1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ك</td>
			<td colspan="2">متوسط C1 ، C2 ، C3 -&gt;</td>
			<td>1614.67</td> دولار
			<td>5.83٪</td>
			<td></td>
			<td>5259</td> م
			<td>53.67٪</td>
			<td>25: 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ل</td>
			<td colspan="2">متوسط D1 ، D2 ، D3 -&gt;</td>
			<td>1641.33</td> دولار
			<td>6.17٪</td>
			<td></td>
			<td>3869</td>
			<td>35.91٪</td>
			<td>12.5:1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>م</td>
			<td colspan="2">متوسط E1 ، E2 ، E3 -&gt;</td>
			<td>1525.67</td> دولار
			<td>4.68٪</td>
			<td></td>
			<td>2730.33</td>
			<td>21.36٪</td>
			<td>6.25:1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ن</td>
			<td colspan="2">متوسط F1 ، F2 ، F3 -&gt;</td>
			<td>1511.33</td> دولار
			<td>4.49٪</td>
			<td></td>
			<td>1858.67</td> [ا]
			<td>10.22٪</td>
			<td>3.12:1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O</td>
			<td colspan="2">متوسط G1 ، G2 ، G3 -&gt;</td>
			<td>1278.33</td> دولار
			<td>1.47٪</td>
			<td></td>
			<td>1673.33</td> [إ]
			<td>7.86٪</td>
			<td>1.56:1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ص</td>
			<td colspan="2">متوسط H1 ، H2 ، H3 -&gt;</td>
			<td>8884.67</td>
			<td>الحد الأقصى للحساب في الدقيقة</td>
			<td></td>
			<td>8885.67</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Unstim PBMC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CpG-stim PBMC</td>
			<td>نسبة E: T</td>
		</tr>
	</tbody>

 الجدول 2: 51بيانات فحص إصدار Cr: قيم بيانات "العدد في الدقيقة" / "c. p. m" ، ومتوسط قيم c. p. m ، وقيم التحلل المحددة المحسوبة.
<ol start="2">
	<li>تم إدخال البيانات التي تم جمعها (التعداد في الدقيقة ، أي c.p.m) في خلايا جدول البيانات بنفس الطريقة التي تم بها وضع العينات في اللوحة الأصلية.</li>
	<li>أولا ، تم حساب متوسطات النسخ الثلاثية. الجدول 2 - الخلايا I3 إلى P3 ، للخلايا PBMCs غير المحفزة والخلايا I6 إلى P6 ، ل PBMCs المحفزة ب CpG.</li>
	<li>بمجرد تحديد المتوسطات ، تم حساب النسبة المئوية للتحمس النوعي لكل حالة باستخدام الصيغة التالية- 
	&lt; / &gt;
	<img src="/files/ftp_upload/10505/10505eq1.jpg"></li>
	<li>تم حساب النسبة المئوية للتحلل المحدد لكل حالة (الجدول 2 - الخلايا J4 إلى O4 ، ل PBMCs غير المحفزة و J7 إلى O7 ، ل PBMCs غير المحفزة).</li>
</ol>

يتمتع الاختبار الموصوف هنا بمرونة كبيرة ، حيث يمكن استخدام مجموعة متنوعة من الخلايا المستجيبة والمستهدفة اعتمادا على السؤال المطروح. على سبيل المثال ، يمكن تحديد خصوصية الخلية المستجيبة باستخدام خلايا مستهدفة مختلفة أو يمكن تحديد آلية قتل الخلايا المستجيبة باستخدام الخلايا التي تعاني من نقص في بروتينات معينة أو باستخدام مثبطات خاصة بالبروتين. تتمثل المشكلة الرئيسية في اختبار إطلاق 51Cr في إمكانية حدوث معدلات إطلاق تلقائية عالية من قبل الخلايا المستهدفة. عند زراعتها بمفردها (بدون خلايا مستجيبة) ، يجب ألا يزيد ا...

فحص موت الخلايا: فحص إطلاق الكروم للقدرة السامة للخلايا

Assay for Cell Death: Chromium Release Assay of Cytotoxic Ability

المصدر: فرانسيس ف. سجاستاد1،2 ، ويتني سوانسون2،3 ، وتوماس س. جريفيث1،2،3،4 
1 برنامج الدراسات العليا في علم الأحياء الدقيقة والمناعة وبيولوجيا السرطان ، جامعة مينيسوتا ، مينيابوليس ، مينيسوتا 55455 
2 مركز علم المناعة ، جامعة مينيسوتا ، مينيابوليس ، مينيسوتا 55455 
3 قسم جراحة المسالك البولية ، جامعة مينيسوتا ، مينيابوليس ، مينيسوتا 55455 
4 المركز الماسوني للسرطان ، جامعة مينيسوتا ، مينيابوليس ، مينيسوتا 55455
تتمثل إحدى الوظائف الرئيسية لخلايا الجهاز المناعي في إزالة الخلايا المستهدفة المصابة بالفيروسات أو التي خضعت للتحول إلى خلية سرطانية. كانت المقايسات في المختبر لقياس القدرة السامة للخلايا للخلايا عنصرا أساسيا في المختبرات لسنوات عديدة. تم استخدام هذه المقايسات لتحديد قدرة الخلايا التائية أو الخلايا القاتلة الطبيعية أو أي خلية مناعية أخرى على قتل الخلايا المستهدفة بطريقة خاصة بالمستضد أو بطريقة غير محددة. روابط الموت (على سبيل المثال ، ترابط Fas أو TRAIL) ، أو السيتوكينات (على سبيل المثال ، IFNg أو TNF) ، أو الحبيبات السامة للخلايا (أي البيرفورين / الجرانزيم B) التي تعبر عنها الخلايا المستجيبة هي بعض الطرق التي يمكن من خلالها إحداث موت الخلايا المستهدفة. مع الانفجار في أبحاث العلاج المناعي للورم في السنوات الأخيرة ، هناك اهتمام متزايد بإيجاد عوامل لزيادة النشاط السام للخلايا للخلايا لتحسين نتائج المرضى. على العكس من ذلك ، تتميز بعض الأمراض بالنشاط المفرط للنشاط السام للخلايا المناعية ، مما يؤدي إلى بذل جهود لتحديد العوامل لتهدئة هذه الاستجابات. وبالتالي ، فإن وجود اختبار يمكن للمستخدم من خلاله دمج أي عدد من الخلايا المستجيبة المختلفة و / أو الخلايا المستهدفة و / أو معدلات الاستجابة في التصميم التجريبي يمكن أن يكون بمثابة وسيلة قيمة لتقييم القدرة السامة للخلايا للخلايا و / أو استجابة الخلية المستهدفة بسرعة.
تتضمن هذه المقايسات في المختبر خلط مجموعات مختلفة من الخلايا ، بالإضافة إلى استخدام عدد منخفض نسبيا من كل من المستجيب والخلايا المستهدفة. وبالتالي ، فإن إحدى ضرورات الاختبار هي تسمية الخلايا المستهدفة بطريقة يمكن اكتشافها وتحديدها بسهولة ، مما يسمح للمستخدم بعد ذلك بتحديد "النسبة المئوية للتحلل المحدد" بوساطة الخلايا المستجيبة. النشاط الإشعاعي - خاصة الكروم 51 (51Cr) في شكل Na251CrO4 - هو طريقة غير مكلفة لتسمية البروتينات الخلوية بسرعة وبشكل غير محدد داخل الخلايا المستهدفة (1). يقلل وضع العلامات القصيرة وأوقات الفحص الإجمالية من احتمالية حدوث تغييرات كبيرة في عدد و / أو النمط الظاهري للخلايا المستهدفة ، مما قد يؤثر على نتيجة الفحص. عند فقدان سلامة الغشاء للخلايا المستهدفة نتيجة للنشاط السام للخلايا للخلايا المستجيبة ، يتم إطلاق 51بروتينات خلوية تحمل علامة Cr داخل الخلايا المستهدفة في المادة الطافية للثقافة ، وتصبح متاحة للقياس الكمي. كما هو الحال مع أي اختبار يفحص وظيفة الخلايا المناعية في المختبر ، هناك عدد من الاعتبارات المهمة التي يجب مراعاتها لتحسين أداء التجربة. تتمثل إحدى أهم الميزات في استخدام مستجيب صحي (لأقصى نشاط سام للخلايا) واستهداف الخلايا (لتحقيق أقصى قدر من الاستجابة والحد الأدنى من الموت التلقائي / إطلاق 51كرور). مطلوب ملامسة المستجيب والخلية المستهدفة (مما يؤدي إلى الاستخدام الشائع لألواح مستديرة القاع المكونة من 96 بئرا لتشجيع الاتصال بالخلية الخلوية) (2). أخيرا ، يعتمد تحليل البيانات على إدراج مجموعات الخلايا المستهدفة للتحكم الإيجابي والسلبي.
سيحدد البروتوكول التالي خطوات إجراء اختبار إطلاق 51Cr القياسي لقياس القدرة السامة للخلايا لمجموعة من الخلايا المستجيبة ، على الرغم من تطوير نسخة غير مشعة باستخدام Europium مؤخرا. 51الكروم هو باعث قوي للإشعاع γ. وبالتالي ، فإن استخدام هذا الاختبار يتطلب تدريبا مناسبا على السلامة من الإشعاع ، ومساحة مختبرية مخصصة ، وعداد جاما ، والتخلص من العينات المشعة.
التسلسل العام للأحداث في هذا الاختبار هو: 1) إعداد 51هدفا مسمى Cr ؛ 2) تحضير الخلايا المستجيبة وإضافتها إلى اللوحة أثناء وضع العلامات على الخلايا المستهدفة ؛ 3) إضافة أهداف مصنفة إلى اللوحة ؛ 4) احتضان اللوحة. 5) حصاد المواد الطاففة. و 6) تحليل البيانات بعد تشغيل العينات على العداد. عادة ما يتم تحضير العينات في ثلاث نسخ، ثم يتم حساب متوسطها لحساب أي اختلافات طفيفة في سحب العينات.
معدات الوقاية الشخصية المناسبة مهمة لهذا الفحص. على وجه التحديد ، يجب على المستخدم ارتداء معطف مختبر وقفازات. قد تكون هناك حاجة إلى نظارات السلامة بناء على المختبر أو المؤسسة. يجب أن يكون هناك درع وافر من الرصاص للتخزين الآمن واستخدام 51Cr خلال جميع الخطوات. أخيرا ، يجب أن تكون هناك مساحة مختبرية مخصصة ومعدات مخصصة لاستخدام 51كرور ، بما في ذلك جميع اللافتات المناسبة للإشارة إلى مكان الاحتفاظ بالعينات التي تحتوي على 51كرور وعداد جيجر مجهز بمسبار جاما لمسح المساحة بحثا عن تلوث محتمل.
 في هذا التمرين المعملي ، سنحدد قدرة الخلايا أحادية النواة للدم المحيطي البشري (PBMCs) ، (تحفيز CpG مقابل غير محفز) على قتل خلايا الورم الميلانيني ، باستخدام خط خلية الورم الميلانيني البشري WM793 كنموذج ومقايسة إطلاق الكروم.

في هذا المثال ، قتلت الخلايا المستجيبة المحفزة باستخدام CpG (الشكل 1 ، الدوائر السوداء ) الخلايا المستهدفة بشكل أكثر فعالية ، حيث زادت نسبة الخلايا المستجيبة إلى الخلايا المستهدفة. لم تلاحظ هذه الزيادة في PBMCs غير المحفزة ( الدوائر البيضاء ) ، مما يشير إلى أن تحفيز CpG ضروري للزيادة الملحوظة في تحلل الخلية المستهدفة. 
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/10505/10505fig1.jpg"> 
<strong...

Source: Frances V. Sjaastad1,2, Whitney Swanson2,3, and Thomas S. Griffith1,2,3,4
1 Microbiology, Immunology, and Cancer Biology Graduate Program, ...

في هذا الفيديو ، ستلاحظ كيفية إجراء فحص إطلاق الكروم وتحديد الإمكانات السامة للخلايا للخلايا المستجيبة. الخلايا المناعية مسؤولة عن تحديد وإزالة الخلايا التي يحتمل أن تكون ضارة ، مثل الخلايا السرطانية أو المصابة بالفيروسات ، من الجسم ، والتي تعد جزءا لا يتجزأ من الاستجابة المناعية. تمتلك العديد من الخلايا المناعية ، مثل الخلايا التائية والخلايا الطبيعية ، خاصية تعرف باسم الإمكانات السامة للخلايا ، وهي القدرة على تحديد الخلايا المستهدفة وإفراز البروتينات التي تحفز تدهور البروتين وتحللها وموت تلك الخلايا المستهدفة. يعد تحديد إمكانات السامة للخلايا أمرا بالغ الأهمية لقياس تنشيط الخلايا المناعية وفعاليتها ، ويستخدم اختبار إطلاق الكروم بشكل شائع لهذا الغرض. تمكن هذه الطريقة المستخدمين من مقارنة السمية الناجمة عن أنواع معينة من الخلايا المناعية في ظل ظروف مختلفة ، وهو أمر ذو قيمة لدراسة العلاج المناعي للسرطان والأمراض المرتبطة بالمناعة. للبدء ، يتم تحضين الخلايا المستهدفة ، مثل الخلايا السرطانية ، بنظير مشع ، الكروم 51 ، الذي تمتصه الخلايا. بعد ذلك ، يتم زراعة هذه الخلايا ذات العلامات الراديوية بشكل مشترك مع الخلايا المناعية المعزولة ذات الأهمية ، والتي تسمى أيضا الخلايا المستجيبة ، في قاع دائري ، 96- صفيحة بئر لتسهيل التفاعل بين نوعي الخلايا. يتضمن الإعداد العام للاختبار احتضان عدد محدد من الخلايا المستهدفة بتركيزات مختلفة من الخلايا المناعية ، جنبا إلى جنب مع الضوابط المناسبة. تسمح الزراعة المشتركة للخلايا المستجيبة بالحث على موت الخلايا المبرمج والتحلل في الخلايا المستهدفة ، مما يؤدي إلى إطلاق الكروم داخل الخلايا 51 في المادة الطافية. بعد ذلك ، في نقطة زمنية محسنة مسبقا ، يتم حصاد المادة الطافية التي تحتوي على الكروم المنبعث من جميع الآبار. الكروم 51 ، كونه مشعا ، يخضع تلقائيا للاضمحلال الإشعاعي لإصدار إشعاع جاما. تمثل مستويات إشعاع جاما في المواد الطافية من جميع الآبار الموجودة في لوحة الفحص ناتجا قابلا للقياس الكمي لتحلل الخلايا المستهدفة. يتم قياس ذلك باستخدام عداد جاما ، والذي يستخدم بعد ذلك لتحديد الإمكانات السامة للخلايا للخلايا المناعية. للبدء ، يتم تحضير الخلايا المستهدفة ، خط خلية الورم الميلانيني البشري WM793 في هذا المثال ، في معلق خلية واحدة. للقيام بذلك ، قم أولا بإزالة الوسائط من قارورة زراعة الأنسجة وغسل الخلايا بخمسة ملليلتر من 1X PBS. صب PBS ثم أضف ملليلتر واحد من التربسين إلى الطبق لمدة دقيقتين تقريبا. اضغط برفق على القارورة لفك الخلايا من سطح القارورة ثم أضف خمسة ملليلتر من وسائط RPMI إلى القارورة. قم بضرب الوسائط لأعلى ولأسفل لجمع الخلايا وإضافة هذا التعليق إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مل. ضع الأنبوب في جهاز الطرد المركزي لمدة خمس دقائق عند 1200 دورة في الدقيقة. بعد ذلك ، قم بإزالة الوسائط من الأنبوب مع التأكد من عدم تعطيل حبيبات الخلية. قم بنفض الغبار برفق في الجزء السفلي من الأنبوب لتعطيل حبيبات الخلية وإضافة 10 مل من الوسائط إلى الأنبوب. بعد ذلك، قم بسحب الوسائط برفق لأعلى ولأسفل لتعليق الخلايا. بعد ذلك ، حدد تركيز الخلية باستخدام مقياس كثافة الدم وانقل ملليلترين من تعليق الخلية الأصلي إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 15 مل. ضع الأنبوب في جهاز طرد مركزي وحبيبات الخلايا بسرعة 12 مائة دورة في الدقيقة لمدة خمس دقائق. بعد الطرد المركزي ، اسكب الوسائط الزائدة من الأنبوب في حاوية النفايات. قم بدوامة الأنبوب لفترة وجيزة لإعادة تعليق حبيبات الخلية في الحجم الصغير للوسط المتبقي وراءه. بعد ذلك ، استعد لاستخدام Chromium 51 عن طريق الانتقال إلى مساحة مختبر مخصصة لهذا النشاط الإشعاعي المعين. يجب أن يكون هناك درع وافر من الرصاص للتخزين الآمن واستخدام Chromium 51 أثناء جميع الخطوات ، بالإضافة إلى لافتات مناسبة للإشارة إلى مكان الاحتفاظ بالعينات التي تحتوي على Chromium 51. من الضروري أيضا استخدام عداد جيجر المجهز بمسبار فطيرة للعمل في الفضاء للتلوث المحتمل. بمجرد إعداده للاستخدام السليم للنشاط الإشعاعي ، أضف 100 ميكروكوري من الكروم 51 مباشرة إلى تعليق الخلية المستهدفة. بعد ذلك ، أضف قطعة صغيرة من الشريط المشع إلى الأنبوب للإشارة إلى أن العينة والأنبوب مشعا الآن. ضع الأنبوب في حاضنة 37 درجة مئوية مع درع من الرصاص واحتضنه لمدة ساعة ، مع تحريك الأنبوب كل 15 إلى 20 دقيقة. أثناء وضع العلامات على الخلايا المستهدفة ، قم بإعداد معلق خلية واحدة من الخلايا المستجيبة. في هذا المثال ، تم عزل الخلايا النووية الأحادية للدم المحيطي البشري ، أو PDMCs ، من الدم الكامل عن طريق الطرد المركزي المتدرج الكثافة القياسية إلى تركيز 5 في 10 إلى 6. انقل تعليق الخلية المستجيب هذا إلى خزان كاشف يمكن التخلص منه ثم أضف 200 ميكرولتر من هذا التعليق في كل بئر من الصف B في صفيحة دائرية القاع سعة 96 بئرا. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من RPMI إلى كل بئر في الصف C إلى G من اللوحة. الآن ، ابدأ في إجراء التخفيفات التسلسلية ل PBMCs للحصول على مجموعة من أرقام الخلايا المستجيبة عن طريق إزالة 100 ميكرولتر من الخلايا في الآبار في الصف B وإضافتها إلى الصف C. بعد ذلك ، قم بتخفيف الخلايا المستجيبة عن طريق نقل 100 ميكرولتر من الخلايا من الصف C إلى الصف D. استمر في التخفيف التسلسلي. بمجرد الوصول إلى الصف G ، انقل 100 ميكرولتر من الآبار لترك حجم نهائي يبلغ 100 ميكرولتر في كل بئر في هذا الصف. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من وسط زراعة الأنسجة إلى الآبار الموجودة في الصف A لتكون بمثابة عنصر تحكم في الإطلاق التلقائي للكروم 51 من الخلايا المستهدفة ، حيث لا ينبغي إضافة خلايا مستجيبة إلى هذا الصف. بعد ذلك ، ضع صفيحة في حاضنة 37 درجة مئوية حتى تصبح الخلايا المستهدفة جاهزة للإضافة. بعد فترة الحضانة ، قم بإزالة الخلايا المستهدفة من الحاضنة واغسلها ب 5 مل من FBS لإزالة أي فائض من الكروم 51. بعد ذلك ، ضع الأنبوب في جهاز طرد مركزي مخصص وقم بالدوران بسرعة 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. قم بإزالة غسل FBS المشع في حاوية نفايات مناسبة وكرر خطوة الغسيل عن طريق تعليق الحبيبات في 5 مل من FBS الطازجة. ضع الأنبوب في جهاز طرد مركزي مخصص وقم بتدوير الخلايا مرة أخرى عند 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. قم بإزالة الغسيل الثاني وتحقق من الحبيبات بحثا عن النشاط الإشعاعي المدمج باستخدام عداد جيجر. أخيرا ، قم بتعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من الوسط الكامل واسكب تعليق الخلية المستهدفة بالكروم 51 في خزان كاشف يمكن التخلص منه. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من هذه الخلايا المستهدفة المصنفة إلى كل بئر من لوحة الخلية المستجيب المكونة من 96 بئر. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من 1٪ NP-40 في الماء إلى الآبار الموجودة في الصف H لتحلل جميع الخلايا المستهدفة في كل صف. سيتم استخدام هذه الآبار كعنصر تحكم لتحديد إجمالي الأعداد في الدقيقة ، أو التكلفة لكل ألف ظهور. الآن بعد أن تم تحضير اللوحة ، قم بتأمين الغطاء عن طريق إضافة قطعة صغيرة من الشريط اللاصق إلى كل جانب من جوانب اللوحة وضع قطعة من الشريط المشع على الغطاء للإشارة إلى احتوائه على الكروم 51. بعد ذلك ، ضع اللوحة في جهاز طرد مركزي محدد للتعامل مع العينات المشعة. إذا تم استخدام لوحة تجريبية واحدة فقط ، فأضف لوحة توازن إلى جهاز الطرد المركزي. اضبط جهاز الطرد المركزي على 1200 دورة في الدقيقة ، وارفع اللوحة إلى السرعة. بمجرد الوصول إلى السرعة ، أوقف الجهاز. قم بإزالة اللوحة من جهاز الطرد المركزي. بعد ذلك ، ضع اللوحة في حاضنة 37 درجة مئوية مع قطعة صغيرة من درع الرصاص فوق اللوحة لمزيد من الأمان. احتضان لمدة 16 ساعة للسماح للخلايا المستهدفة بالتحلل. في نهاية فترة الحضانة ، قم بإزالة الشريط بعناية حول حافة اللوحة ، وقم بإزالة الغطاء. بعد ذلك ، ضع إطار الحصاد على اللوحة مع التأكد من وجود أقراص المرشح الصغيرة في مكانها لكل سدادة من المقابس القطنية. الآن ، اضغط ببطء وبلطف على سدادات القطن في الآبار. بعد حوالي عشر ثوان ، حرر الضغط على سدادات القطن ، ثم انقل المقابس القطنية إلى شرائط الأنبوب. ضع كل من هذه الأنابيب في أنبوب FACS ثانوي. أخيرا ، قم بتحميل أنابيب FACS على عداد جاما وقم بتشغيل العينات لتقدير كمية الكروم 51 المنبعثة في كل حالة. سجل بعناية الترتيب الذي تم به تحميل الأنابيب في العداد. هنا ، تمت إضافة PBMCs غير المحفزة إلى أول 3 ممرات وأضيفت PMBCs المحفزة CPG إلى الممرات من 4 إلى 6. في هذا المثال ، تم إدخال الأعداد في الدقيقة في خلايا جدول البيانات بنفس الطريقة التي تم بها وضع العينات في اللوحة الأصلية وتم حساب متوسطات النسخ الثلاثية. على سبيل المثال ، بالنسبة للحالة الأولى ، تم حساب متوسط الخلايا A1 و A2 و A3 في الخلية I3. بمجرد تحديد المتوسطات ، يمكن حساب النسبة المئوية للتحلل المحدد لكل حالة باستخدام هذه الصيغة. على سبيل المثال ، لحساب النسبة المئوية للتحلل المحدد للخلايا غير المحفزة التي كانت نسبة 50 إلى 1 من الخلايا المستجيبة لاستهداف الخلايا ، تم طرح CPM التلقائي ، والذي في هذا المثال ، 1164.67 ، من CPM التجريبي ، 1129. 67. يمكن بعد ذلك قسمة هذا الرقم على الفرق بين الحد الأقصى للتكلفة لكل ألف ظهور والتكلفة لكل ألف ظهور تلقائي ، ثم ضربه في 100 لإعطاء النسبة المئوية للتحلل المحدد. ثم يتم حساب هذا لكل شرط. يمكن بعد ذلك رسم هذه البيانات بيانيا لإظهار مقارنة نسبة E إلى T مع النسبة المئوية للتحلل المحدد لكل من PBMCs غير المحفزة ، و PBMCs المحفزة CPG. في هذا المثال ، قتلت الخلايا المستجيبة المحفزة باستخدام CPG الخلايا المستهدفة بشكل أكثر فعالية مع زيادة نسبة الخلايا المستجيبة إلى الخلايا المستهدفة. لم تلاحظ هذه الزيادة في PBMCs غير المحفزة ، مما يشير إلى أن تحفيز CPG ضروري للزيادة الملحوظة في تحلل الخلايا المستهدفة.

assay-for-cell-death-chromium-release-assay-of-cytotoxic-ability

Education

JoVE Science Education

Advanced Biology

الأحياء المتقدمة

Immunology

علم المناعة

chromium release assay for immune cell killing

The chromium release assay measures how well immune cells kill target cells in the lab. It is used to test the cytotoxic ability of T cells, NK cells, and other effector cells against infected cells or tumor cells.

This assay works by labeling target cells with chromium-51, a radioactive tracer called Na2 51CrO4. The label quickly marks cellular proteins inside the target cells. When effector cells damage the target-cell membrane, the labeled proteins are released into the culture supernatant and can be measured.

Researchers use this setup to study antigen-specific and nonspecific killing. It is also useful in tumor immunotherapy research, where scientists may look for agents that boost immune cell killing. In other cases, the assay can help test ways to reduce overly strong immune cytotoxic activity.

Several practical points matter for a good result. Healthy effector cells give stronger killing, and healthy target cells help keep spontaneous death and background chromium release low. Because cell-to-cell contact is needed, round-bottom 96-well plates are often used. Proper data analysis also requires positive and negative control target cell groups.

The standard protocol includes preparing 51Cr-labeled targets, preparing effector cells, adding both cell groups to the plate, incubating, harvesting supernatants, and then analyzing the samples on a counter. Samples are often run in triplicate and averaged to reduce the effect of small pipetting differences. A nonradioactive Europium-based version is also available.

Because 51Cr is a powerful gamma radiation emitter, the assay requires radiation safety training, dedicated lab space, a gamma counter, and proper waste disposal. Users should wear a lab coat and gloves, and safety glasses may also be required. Lead shielding, clear signage, and a Geiger counter with a gamma probe are important for safe handling and contamination checks. In this lab exercise, human peripheral blood mononuclear cells, or PBMCs, are tested as CpG-stimulated or unstimulated effector cells against WM793 human melanoma cells.

Chromium Release Assay for Immune Cell Killing

chromium-release-assay-for-immune-cell-killing

flow cytometry and fluorescence-activated cell sorting (facs): isolation of splenic b lymphocytes

flow-cytometry-fluorescence-activated-cell-sorting-facs-isolation

Sorting B Cells from Spleen with FACS

Flow cytometry and FACS can be used to separate B lymphocytes from a mixed spleen cell sample. The immune system protects the body from infectious organisms and other invaders. White blood cells, also called leukocytes, are the main cells involved in this defense. Leukocytes can be grouped into subpopulations such as myeloid cells, lymphocytes, and dendritic cells. These groups can be distinguished by biological, physical, and functional features. Cell size, granularity, and secretion are...

magnetic activated cell sorting (macs): isolation of thymic t lymphocytes

magnetic-activated-cell-sorting-macs-isolation-of-thymic-t-lymphocytes

Enriching Thymic T Cells with Magnetic Sorting

Thymic T cell enrichment with magnetic sorting helps isolate a targeted immune cell group from a mixed sample. The immune system relies on many cell types, and lymphocytes are a major part of adaptive immunity. B cells usually respond to extracellular infections, such as bacterial infections, while T cells usually respond to intracellular infections, such as viral infections. Magnetic sorting enriches selected cells by using magnetic beads and antibodies against cell surface proteins. First,...

elisa assays: indirect, sandwich, and competitive

elisa-assays-indirect-sandwich-and-competitive

ELISA Methods for Detecting Antigens

ELISA methods detect antigens, antibodies, proteins, hormones, peptides, and other biomolecules in biological samples. Enzyme-linked immunosorbent assay is highly sensitive because it can detect very low antigen levels. It works by using an antigen-antibody interaction, then an enzyme-linked antibody turns a colorless substrate into a colored or fluorescent signal that a plate reader can measure. Different ELISA formats are used for different sample types and antibody setups. Indirect ELISA is...

elispot assay: detection of ifn-&#947; secreting splenocytes

elispot-assay-detection-of-ifn-secreting-splenocytes

ELISPOT Assay for Single-Cell Immune Detection

ELISPOT is a sensitive assay for detecting immune cells that release a specific protein. It is based on an ELISA, or enzyme-linked immunosorbent assay, but it shows single-cell responses as visible spots. The method was first described in 1983 by Czerkinsky to count B cell hybridomas that produce antigen-specific immunoglobulins. The assay was later adapted to measure cytokine-producing T lymphocytes. Because of that, ELISPOT is now a gold standard for measuring antigen-specific T cell...

immunohistochemistry and immunocytochemistry: tissue imaging via light microscopy

immunohistochemistry-immunocytochemistry-tissue-imaging-via-light

Antibody Staining of Tissue and Cells

Antibody staining of tissue and cells lets scientists see where a specific antigen is located. Immunohistochemistry, or IHC, uses thin tissue sections. Immunocytochemistry, or ICC, uses isolated cells or cells grown in culture. Both methods rely on antibodies that carry a chemical or fluorescent tag, such as peroxidase or rhodamine, so the target antigen can be detected under a light microscope. IHC keeps the structure of the whole tissue in place while the sample is stained. That makes it...

antibody generation: producing monoclonal antibodies using hybridomas

antibody-generation-producing-monoclonal-antibodies-using-hybridomas

Hybridoma Cell Culture for Monoclonal Antibodies

Hybridoma cell culture is used to produce monoclonal antibodies, or mAbs, with a known antigen specificity. Monoclonal antibodies come from a single clone of cells, so they recognize one target more precisely than polyclonal antibodies, which are a mixed group of antibodies against different antigenic determinants. That difference matters when similar molecules share epitopes, or antigen sites, that can confuse an antibody test. Polyclonal antisera can react with more than one related antigen.

immunofluorescence microscopy: immunofluorescence staining of paraffin-embedded tissue sections

immunofluorescence-microscopy-immunofluorescence-staining-paraffin

Fluorescent Antibody Staining of Tissue Slides

Fluorescent antibody staining lets scientists see specific proteins in thin tissue sections on glass slides. It is used to study normal tissue structure and to better understand how disease works. In many cases, the tissue comes from patient biopsies or from experimental in vivo models. The tissue is usually fixed in formalin or paraformaldehyde and embedded in paraffin wax before it is cut. This preservation method supports long-term storage and makes sectioning possible. A microtome is used...

confocal fluorescence microscopy: a technique to determine the localization of proteins in mouse fibroblasts

confocal-fluorescence-microscopy-technique-to-determine-localization

Confocal Microscopy for Protein Localization

Confocal fluorescence microscopy is used to show where proteins are located inside cells with better detail than wide-field epifluorescence microscopy. It improves image clarity by scanning the sample with lasers and using a pinhole to block out-of-focus light. This makes it easier to see whether a signal comes from the cell surface or from inside the cell. The method relies on fluorescence, which happens when a molecule absorbs light and then gives off a new photon. A fluorophore is a...

immunoprecipitation-based techniques: purification of endogenous proteins using agarose beads

immunoprecipitation-based-techniques-purification-endogenous-proteins

Protein Pull-Down with Antibodies and Beads

Immunoprecipitation uses antibodies and Protein A/G agarose beads to isolate a specific protein from a cell lysate. It is also called a pull-down assay. The term "immuno" refers to the antibody, and "precipitation" means pulling a substance out of solution. The target protein can be endogenous or recombinant. Recombinant proteins often carry epitope tags such as myc or flag, which makes purification easier because antibodies against these tags are usually strong and effective. Antibodies...

cell cycle analysis: assessing cd4 and cd8 t cell proliferation after stimulation using cfse staining and flow cytometry

cell-cycle-analysis-assessing-cd4-cd8-t-cell-proliferation-after

Tracking T Cell Division with CFSE and Flow Cytometry

Tracking T cell division with CFSE and flow cytometry shows how immune cells respond after stimulation. The cell cycle is a normal process of life. During it, a cell changes step by step and divides into two daughter cells. This happens throughout life when the body needs new cells for growth and repair. Cells that are not cycling are in the G0 phase, which means they are quiet. Once a cell enters the cycle, it moves through G1, S, G2, and M phases. G1 is a checkpoint for the resources needed...

adoptive cell transfer: introducing donor mouse splenocytes to a host mouse and assessing success via facs

adoptive-cell-transfer-introducing-donor-mouse-splenocytes-to-host

Tracking Transferred Mouse Splenocytes by FACS

Adoptive cell transfer is a method for moving cells into a host animal to study biology or help treat disease. Researchers can use it to follow cell movement and distribution, or to test how transferred cells behave in a mouse model. Tracking systems such as cell surface markers and CFSE staining can help show where the cells go after transfer. This approach has several uses in mouse studies. It can support cancer research by transferring specific cell populations as an experimental treatment...

assay for cell death: chromium release assay of cytotoxic ability

The chromium release assay measures how well immune cells kill target cells in the lab. It is used to test the cytotoxic ability of T cells, NK cells, and other effector cells against infected cells or tumor cells. This assay works by labeling target cells with chromium-51, a radioactive tracer called Na2 51CrO4. The label quickly marks cellular proteins inside the target cells. When effector cells damage the target-cell membrane, the labeled proteins are released into the culture supernatant...

immunology

This collection covers many staple techniques of immunology labs, including the labeling and sorting of immune cells. It also demonstrates proliferation methods for immune cells and antibodies, as well as common assays for immune activity including ELISA. Finally, it demonstrates staining and imaging of immune tissue and cell samples.

Measure immune cell killing with the chromium release assay. Learn how 51Cr-labeled target cells, PBMCs, and melanoma cells are used to assess cytotoxicity.

Chromium Release Assay for Immune Cell Killing

Description

Transcript