MALDI تحضير العينة : الترا أسلوب طبقة رقيقة

Summary

هذا الفيديو يوضح إعداد طبقة مصفوفة / الحليلة رقيقة جدا لتحليل الببتيدات والبروتينات التي كتبها ماتريكس بمساعدة الليزر المج التأين طيف الكتلة (MS - MALDI).

Abstract

هذا الفيديو يوضح إعداد طبقة مصفوفة / الحليلة رقيقة جدا لتحليل الببتيدات والبروتينات التي كتبها ماتريكس بمساعدة الليزر المج التأين مطياف الكتلة (MS - MALDI) ^{1 ، 2.} الأسلوب طبقة رقيقة جدا ينطوي على إنتاج طبقة من البلورات الركيزة المصفوفة (ألفا cyano - 4 - hydroxycinnamic حامض) على لوحة عينة ، التي هي بمثابة بذر الأرض لبلورة اللاحقة من خليط المصفوفة / الحليلة. مزايا الأسلوب طبقة رقيقة جدا اكثر من غيرها من الأساليب ترسيب العينة (الحبرية المجففة مثلا) هو أنه يقدم (ط) لمزيد من التسامح الشوائب مثل الأملاح والمنظفات ، (ب) تحسين القرار ، و (ج) التوحيد أعلى المكاني. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص لتحديد كتلة دقيقة من البروتينات. وقد وضعت في البداية البروتوكول والأمثل لتحليل البروتينات والأغشية المستخدمة لتحليل بنجاح القنوات الأيونية والناقلين المستقلب ، والمستقبلات ، التي تتضمن بين المجالات عبر الغشاء 2 و 12 ^2. منذ نشر الأصلي ، وقد أظهرت أيضا أن يكون مفيدا أيضا لتحليل البروتينات القابلة للذوبان. في الواقع ، لقد اعتدنا عليه لعدد كبير من البروتينات وجود مجموعة واسعة من الخصائص ، بما فيها تلك الجماهير الجزيئية تصل إلى 380 كيلو دالتون ^3. وهو حاليا لدينا وسيلة لاختيار لتحليل الكتلة الجزيئية لجميع البروتينات. ووصف الإجراء ينتج باستمرار الأطياف عالية الجودة ، وأنها حساسة وقوية ، وسهلة التنفيذ.

Protocol

من المهم جدا ارتداء قفازات مسحوق خالية أثناء إعداد طبقة رقيقة.

تنظيف لوحة عينة

1. استخدام الفولاذ المقاوم للصدأ أو الذهب لوحة عينة MALDI.
2. يغسل مع MeOH ويمسح برفق مع Kimwipe. لا تفرك أو فرك السطح مع Kimwipe ، لمنع خدش السطح.
3. يغسل مع H ₂ O ويمسح برفق مع Kimwipe.
4. يغسل مع MeOH ويمسح برفق مع Kimwipe.

Materials