هذه المقالة يوضح طريقتين مختلفتين جدا من الحقن : 1) في الدماغ (intracerebroventricular) و 2) جهازية (في الوريد) لإدخال العوامل العلاجية في النظام العصبي المركزي من الفئران حديثي الولادة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقديم وكلاء العلاجية من خلال Intracerebroventricular (ICV) ، وحقن في الوريد (رابعا) في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
على الرغم من دور الحماية التي حاجز الدم في الدماغ يلعب في التدريع الدماغ ، وأنه يحد من الوصول إلى الجهاز العصبي المركزي (CNS) ، الذي غالبا ما يؤدي إلى فشل العلاجات المحتملة المصممة ل1،2 الاضطرابات العصبية. الأمراض العصبية مثل ضمور العضلات الشوكي (SMA) ، والتي تتأثر الخلايا العصبية الحركية أقل ، يمكن أن تستفيد كثيرا من تقديم وكلاء العلاجية في الجهاز العصبي المركزي. الغرض من هذا الفيديو هو إظهار نموذجين حقن مختلفة لتوفير المواد العلاجية في الفئران حديثي الولادة في أقرب وقت بعد الولادة. واحد من هذه الأساليب هو عن طريق الحقن مباشرة في البطينات الدماغية الوحشي (Intracerebroventricular) الذي ينتج في تسليم المواد إلى الجهاز العصبي المركزي من خلال السائل النخاعي 3،4. الأسلوب الثاني هو حقن الوريد الصدغي (في الوريد) التي يمكن إدخال العلاجات المختلفة في نظام الدورة الدموية ، مما يؤدي إلى تسليم النظامية بما في ذلك الجهاز العصبي المركزي 5. تنبيغ على نطاق واسع في الجهاز العصبي المركزي يمكن تحقيقه إذا ما استخدمت متجه المناسبة الفيروسي والمصلي الفيروسي. التصور والاستفادة من الوريد الصدغي للحقن غير مجدية حتى اليوم ما بعد الولادة 6. ومع ذلك ، إذا كان المقصود تسليم المواد للوصول إلى الجهاز العصبي المركزي ، يجب أن تتم هذه الحقن في حين أن حاجز الدم في الدماغ هو أكثر نفاذا بسبب وضعها غير ناضجة ، وذلك قبل يوم ويفضل أن تكون فترة ما بعد الولادة 2. الدم في الدماغ وضعت بشكل كامل حاجز يحد بدرجة كبيرة من الفاعلية في التنفيذ عن طريق الوريد. نظم التوصيل على حد سواء بسيطة وفعالة عندما يتم تحقيق الكفاءة الجراحية. أنها لا تتطلب أية أجهزة جراحية واسعة النطاق يمكن أن يقوم بها شخص واحد. ومع ذلك ، فإن هذه التقنيات ليست بدون تحديات. ويمكن لصغر حجم الجراء بعد الولادة 2 اليوم وما تلاه من المناطق المستهدفة الصغيرة تجعل من الصعب تنفيذ عمليات الحقن وتحديا في البداية لتكرار.
البروتوكول
1. Intracerebroventricular الحقن
- الخطوة الأولى هي إعداد الحلول الأسهم الحقن ، وهذه الحلول هي ناقلات فيروسية ، DNA البلازميد ، والمخدرات ، وينبغي أن يتم حقنه تحت ظروف معقمة.
- مزيج من عيار المطلوب النواقل الفيروسية (مجموع ميكرولتر 5-7) مع 0.05 ٪ W / V التريبان الأزرق في برنامج تلفزيوني عن التصور لموقع الحقن.
- البلازميد حل الحمض النووي (5 لتر مجموع ميكرولتر) يحتوي على مد (+) - الجلوكوز 20 ٪ (W / V) (1 ميكرولتر) ، التريبان الأزرق (0.05 ٪) PBS (1 ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بحث باستخدام نماذج الماوس من المرض وغالبا ما يتطلب ادارة المخدرات أو المواد الأخرى لحديثي الولادة. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح خطوة خطوة من خلال إجراءات تشمل نوعين من الاستراتيجيات الحقن التي يمكن استخدامها لاستهداف الجهاز العصبي المركزي : 1) الحقن المباشر في الجهاز العصبي المركزي التي تستخدم intracerebroventricular (ICV) الحقن ، أو 2) رابعا الحقن التي تستهدف / الزمانية الوريد الوجهي. توقيت هذه الحقن هي ذات أهمية كبيرة. منذ الحقن ICV هي مرفوعة ، يجب أن تكون طيعة الجمجمة نسبيا. هذا .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر جون مارستون لخبراء تربية الحيوان ، والدكتور ماركو Passini ألف لتقديم المساعدة التقنية في المراحل الأولى من هذا المشروع. وقد تم تمويل هذا العمل عن طريق منحة من المعاهد القومية للصحة أن CLL (R01NS41584 ؛ R01HD054413).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات (اختياري) |
| الخضراء صبغ الغذاء | مكورميك | ن / أ | يجب أن تتم تصفيته |
| هاميلتون الزجاج الحقنة (100 ميكرولتر) | سيغما Aldrick | 20702 | |
| LuerMxF نايلون الموضوع نمط الابيض | قطع صغيرة ، وشركة | VPLF - LC78 - 1-25 | |
| إبر تحت الجلد قياس غرامة | بوبر | 7111 | الحجم : 33 (SWG) × ¼ "(6.35 ملم) |
| وي البصر Transilluminator | Respironics | 1017920 | |
| 2.25X العصابة المكبر | MagEyes | نموذج رقم (5) | حدد التكبير لتناسب التفضيلات الفردية |
المراجع
- Blanchette, M., Fortin, D. Blood-brain barrier disruption in the treatment of brain tumors. Methods Mol. Biol. 686, 447-463 (2011).
- Foust, K. D., Kaspar, B. K. Over the barrier and through the blood: to CNS delivery we go. Cell Cycle. 24, 4017-4018 (2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
