استخدام البروتين عكس صالحة المرحلة (RPPA) لاستكشاف البروتين في التعبير التغير فردية سرطان الخلايا الكلوية

Fiach C. O'Mahony; Jyoti Nanda; Alexander Laird; Peter Mullen; Helen Caldwell; Ian M. Overton; Lel Eory; Marie O'Donnell; Dana Faratian; Thomas Powles; David J. Harrison; Grant D. Stewart

doi:10.3791/50221

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

استخدام البروتين عكس صالحة المرحلة (RPPA) لاستكشاف البروتين في التعبير التغير فردية سرطان الخلايا الكلوية

33.2K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/50221

⸱

يناير 22, 2013

Fiach C. O'Mahony¹ , Jyoti Nanda¹ , Alexander Laird¹ , Peter Mullen² , Helen Caldwell³ , Ian M. Overton⁴ , Lel Eory⁴ , Marie O'Donnell¹^,⁵ , Dana Faratian⁶ , Thomas Powles⁷ , David J. Harrison¹^,² , Grant D. Stewart¹

¹Edinburgh Urological Cancer Group, University of Edinburgh, ²School of Medicine, University of St Andrews, ³Division of Pathology, University of Edinburgh, ⁴MRC Human Genetics Unit, MRC IGMM, University of Edinburgh, ⁵Department of Pathology, Western General Hospital, ⁶Breakthrough Breast Cancer Research Unit, University of Edinburgh, ⁷St Bartholomew's Cancer Institute, Experimental Cancer Medicine Centre, Queen Mary University of London

في هذه المقالة

ملخص

RPPA تمكن من التعبير البروتين مئات العينات، وطبع على الشرائح النيتروسليلوز لاستجوابه في وقت واحد، وذلك باستخدام الأجسام المضادة fluorescently المسمى. وقد تم تطبيق هذه التقنية لدراسة تأثير عدم التجانس العلاج من تعاطي المخدرات داخل الخلايا الكلوية سرطان واضحة.

الملخص

حاليا لا يوجد علاج العلاجية لسرطان الخلايا المتنقل الخلايا الكلوية واضحة، أشيع البديل من هذا المرض. ويعتقد أن العامل الرئيسي في هذه المقاومة العلاج ليكون التعقيد الجزيئي للمرض ^1. وقد تم استخدام العلاج الموجه مثل مثبط التيروزين كيناز (TKI)-sunitinib، ولكن فقط 40٪ من المرضى سوف تستجيب، والغالبية العظمى من هؤلاء المرضى الانتكاس بعد 1 ² سنة. على هذا النحو مسألة المقاومة الذاتية والمكتسبة في مرضى السرطان الكلوي الخليوي هي وثيقة الصلة ^3.

من أجل دراسة مقاومة TKIs، مع الهدف النهائي المتمثل في تطوير فعالية وعلاجات شخصية، مطلوب الأنسجة متتابعة بعد فترة محددة من العلاج المستهدف، وهو نهج قد أثبتت نجاحها في ⁴ سرطان الدم النخاعي المزمن. لكن معقد تطبيق مثل هذه الاستراتيجية في سرطان الخلايا الكلوية من مستوى عال من بعدم التجانس بين أوراسكوم تليكوم القابضة وintratumoral، الذي هو سمة من سمات سرطان الخلايا الكلوية ^5،6 وكذلك الأورام الصلبة الأخرى ^7. راسخة عدم التجانس Intertumoral بسبب الخلافات transcriptomic والجينية حتى في المرضى الذين يعانون من عرض مماثل، ومرحلة الصف من الورم. وبالإضافة إلى ذلك فإنه من الواضح أن هناك شيء عظيم المورفولوجية (intratumoral) عدم التجانس في RCC، التي من المرجح أن تمثل عدم التجانس الجزيئية أكبر. رسم خرائط تفصيلية وتصنيف الأورام من قبل مجلس قيادة الثورة التحليل الصرفي والدرجات المجمعة فورمان يسمح للاختيار المناطق ممثل للتحليل البروتين.

تحليل البروتين على أساس من RCC ⁸ هو جذابة نظرا لتوفر على نطاق واسع في مختبرات علم الأمراض، إلا أن تطبيقها يمكن أن يكون مشكلة بسبب محدودية توافر الأجسام المضادة المحددة ^9. ونظرا لطبيعة طخة نقطة صالحة للبروتين عكس المرحلة (RPPA)، والنوعية الأجسام المضادة يجب أن به قبل التحقق من صحة، على هذا النحو رقابة صارمة على الجودة من الأجسام المضادة المستخدمة هي ذات أهمية قصوى. على الرغم من هذا القيد الشكل طخة نقطة لا تسمح التصغير الفحص، مما يسمح لطباعة مئات العينات على شريحة واحدة النيتروسليلوز. ويمكن بعد ذلك يتم تحليل الشرائح المطبوعة بطريقة مماثلة لتحليل الغربية مع استخدام الأجسام المضادة المحددة الهدف الرئيسي والأجسام المضادة الثانوية fluorescently المسمى، والسماح لمضاعفة. ويمكن بعد ذلك الفرق التعبير البروتين في عينات جميع على شريحة يتم تحليلها في وقت واحد من خلال مقارنة المستوى النسبي للمضان بطريقة أكثر فعالية من حيث التكلفة وعالية الإنتاجية.